PRACTICA Nº 11

INTEGRACION Y REGULACION DEL METABOLISMO

RELACION DE EXPERIMENTOS

1. Producción de Diabetes Experimental

2. Determinación de glucosa en sangre
3. Determinación de glucosa en orina
4. Determinación de cuerpos cetónicos en orina

INTRODUCCION.
El metabolismo intermediario de cada clase de sustrato por lo general es considerado
por separado; sin embargo, estos procesos ocurren en nuestro organismo en forma
concertada, donde las diferentes vías metabólicas se hallan enlazadas, formando una
verdadera red metabólica controlada rigurosamente por diferentes mecanismos
regulatorios.

Esta integración exquisitamente regulado, es la que permite a cada célula llevar a

cabo sus funciones bioquímicas y sin duda, de esta intima y armoniosa organización
dependerá la función integrada de todas las células que conforman un organismo, caso
contrario sobrevendrá una enfermedad.

Un aspecto muy interesante en la regulación del metabolismo celular corresponde a

la participación de las hormonas que son sintetizadas en tejidos específicos (Glándulas)
secretadas a al sangre y luego transportadas hasta alcanzar sus células “blanco”, donde
previa interacción con sus receptores ejercerán sus efectos regulatorios
fundamentalmente a través de :
- Activación o desactivación de enzimas ya existentes en las células “blanco”,
a través de segundos mensajeros
- Inducción de la síntesis de enzimas o alguna otra proteína.

En esta práctica centraremos nuestra atención en algunas acciones metabólicas de la

insulina usando como modelo experimental el estado diabético.
 La diabetes Mellitus es una enfermedad producida por la carencia absoluta o relativa
de insulina en el organismo, se conoce dos tipos de esta enfermedad: La diabetes tipo I
o insulino dependiente y la diabetes tipo II o insulino no dependiente.
Hay varias

PROTEINAS GLUCOSA TRIGLICERIDOS

NADPH2 Glucosa 6 P Glicerol

Glucógeno
Aminoácidos
Ribosa 5 Ac. Grasos
P GA 3 P Di OH A P Albúmina

NH4
Ac. 3 PG VLDL Ac. Grasos
Serina
Albúmina

Glicina
A. Grasos TG
Piruvato Albúmina
 Ceto ácidos
Colesterol
Ac. Grasos
Acetil CoA
Alanina Acetil CoA

Oxalacetato Acetil CoA

Cuerpos Acetil CoA
Aspartato CK Cetónicos
Acetil CoA

Asparragina

Figura Nº 10.1.- Integración CADENA RESPIRATORIA

de las vías metabólicas de carbohidratos, lípidos y
proteínas

diferencias en cuanto a la etiología y alteraciones metabólicas entre los dos tipos

mencionados; pero lo que caracteriza a cada uno de ellas y les da el nombre es el hecho
de que en la diabetes tipo I, la causa primaria es un defecto o destrucción de las células
beta del páncreas, productores de insulina, y el paciente solo se alivia con la
administración de insulina. En tanto que en la diabetes tipo II la causa primaria es un
defecto en la respuesta a la insulina, aquí el paciente alivia sus síntomas por
administración de antidiabéticos que estimulan la secreción de insulina por las células
beta del páncreas y raramente hacen cetosis.

Además la diabetes tipo II aparece en épocas tardías de la vida (Después de lo

cuarenta años ) y la herencia juega un rol importante. En cambio en la Diabetes tipo I
La cetosis es común y aparece en etapas tempranas de la vida niñez o juventud. La tabla
I resume las características más importantes de ambos tipos de diabetes.
TABLA I. Características distintivas entre la diabetes mellitus insulino dependiente
(Tipo I) y la diabetes mellitus no dependiente de insulina (Tipo II).

CARACTERÌSTICAS TIPO I TIPO II

Edad de inicio Menos de 30 años Mas de 40 años
Cetosis Común Raro
Peso corporal No obeso Obeso (80%)
Prevalencia 0,2- 0,3% 2-4%
Presencia de anticuerpos contra SI NO
islotes
Complicaciones Frecuentes Frecuentes
Secreción de insulina Casi nula o nula Normal o casi normal
Tratamiento con insulina Siempre necesaria No es necesario
Resistencia a la insulina Ocasional Usual

Hay muchas sustancias que pueden producir los síntomas diabéticos cuando son
administrados al organismo debido a que pueden producir un deterioro o destrucción de
las células beta del páncreas, con la consiguiente ausencia parcial o total de insulina.

Una de las sustancias que produce diabetes es el aloxano (2,4,5,6 tetraoxipirimidina

o pirimina tetrona). Causa un daño permanente de las células beta de los islotes de
Langerhans, produciéndose un cuadro de diabetes mellitus humana. Esta sustancia
también es tóxica y hepatotóxica pero a dosis mayores.
O
La estreptozotocina es otra sustancia que causa
HN O diabetes, es un antibiótico de amplio espectro obtenido
de Streptomyces achromogenes produce necrosis de las
O
N células beta y su acción es más selectiva sobre dichas
H células que el aloxano razón por la cual ahora se el usa
Aloxano
mas en diabetes experimental.
 Otras sustancias con capacidad de producir diabetes por afectar a las células beta de
los islotes de Langerhans son el ácido dehidroascórbico, la 8-hidroxiquimolina, la
ditizona y otras quimolinas; pero su acción diabetogénica es menos pronunciada y
menos específica que el aloxano y estreptozotocina.

EXPERIMENTO 1
Métodos de medición de glucosa en líquidos corporales

La glucosa puede medirse con 3 tipos de métodos: oxidación – reducción,

condensación y medición enzimática.

1. Métodos de Oxidación – Reducción: se basan en que la forma enediol de glucosa

es muy reactiva y se oxida fácilmente.
2 Métodos de Condensación: la glucosa (y otras aldosas) puede condensarse con
diversos compuestos aromáticos en solución ácida caliente dando productos
coloreados.

3 Métodos Enzimáticos: el más usado es el método de la glucosa oxidasa, puesto

que el método de la hexoquinasa es más costoso por que trabaja con factores de
magnesio, NADP y ATP.
Curva de Tolerancia a la Glucosa

- Esta curva mide la capacidad de liberación de insulina.

- Esta prueba se realiza cuando existen dudas referentes al diagnóstico de una
diabetes, para diferenciar una diabetes sacarina y la glucosuria renal, o para
determinar una tendencia hacia la diabetes mellitus en los hijos de padres
diabéticos, o bien se efectúa en personas que desean asegurarse de padecer la
enfermedad en forma latente o potencial.
- Consiste en someter al paciente (en ayunas) a que ingiera de glucosa anhidra de
1.75 g/ Kg de peso, disueltos en 100 ml. de agua hervida, y con jugo de limón en
un lapso de 5 minutos. Esta primera toma constituye la muestra basal, luego se
toman muestras a los 60, 120 y 180 minutos.

Ejemplos de curvas de pruebas de tolerancia a la glucosa (PTG). El diagrama

muestra la relación entre la glucosa plasmática (en mg/litro) y las horas
transcurridas después de la carga oral de glucosa en pacientes diabéticos (línea
 segmentada); personas con disminución de la tolerancia a la glucosa (línea de
puntos) y personas normales (línea entera).

Curva Post – Prandial

Consiste en darle al paciente una carga de alimentos que contengan una carga de
carbohidratos; esta carga consiste en una dieta de leche, plátano y biscocho.

OBJETIVOS
1. Realizar algunas determinaciones de laboratorio que verifiquen el estado
diabético.
2. Conocer el funcionamiento general de los métodos usados en esta práctica.
3. Aprender a realizar la curva de tolerancia para dar un mejor diagnóstico.

PARTE EXPERIMENTAL

1. EXPERIMENTO 1
METODO ENZIMATICO: Reacción de la Glucosa Oxidasa (Método
Colorimétrico)
La enzima glucosa oxidasa (de levadura) cataliza la oxidación de la -D–
glucosa por el oxígeno molecular formando ácido glucónico y peróxido de
hidrógeno. En una segunda reacción la enzima peroxidasa cataliza la
oxidación de un aceptor incoloro de oxígeno (cromógeno reducido) por el
peróxido de hidrógeno producido, formando un producto coloreado
(cromógeno oxidado). La cantidad de producto coloreado que se forma es
proporcional a la cantidad de glucosa presente inicialmente.

Procedimiento
Se trabaja una muestra estándar, un blanco, una muestra basal y 3 muestras
tomadas en lapsos de 1 hora, de la siguiente manera:

Blanco Std M basal M 1hr M 2hrs M 3hrs

Estándar 100mg/dl --- 5 µL --- --- --- ---

Suero basal --- --- 5 µL --- --- ---

Muestra 1 hora --- --- --- 5 µL --- ---
Muestra 2 horas --- --- --- --- 5 µL ---
 Muestra 3 horas --- --- --- --- --- 5 µL
Reactivo 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL 500 µL
Mezclar a 37º C a BM x 10 minutos; Luego leer a 505 nm

1.1 Resultados Obtenidos

Muestra Absorbancia Concentración

Blanco de reactivo 0.039 ---
Estándar 0.344 100
Muestra Basal 0.630 100
Muestra 1 horas 1.026 100
Muestra 2 horas 0.864 99.99
Muestra 3 horas 0.795 100

1.2 Cálculos
a) Hallar el factor de calibración:
________327.87_____

b) Hallar la concentración de glucosa basal:

______100mg%______

1.3 Gráfica de la curva de tolerancia a la glucosa obtenida

EXPERIMENTO 2
DETERMINACION DE GLUCOSA EN ORINA

Objetivo :
Determinar la concentración de glucosa en orina utilizando la prueba de Benedict

Fundamento :
Esta reacción redox ocurre más rápidamente en medio alcalino; así cuando se
calienta una suspensión de hidróxido cúprico en medio alcalino y en presencia de una
sustancia reductora, como algunos carbohidratos (glucosa) , el hidróxido cúprico se
reduce a oxido cuproso (precipitado de color rojo ladrillo)

Procedimiento :
- Colocar 5 ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo
- Añadir 8 gotas de muestra de orina. Mezclar bien
 - Hervir durante 3 minutos
- Anotar el resultado explicando lo observado
Resultados :
Llene el espacio en blanco escribiendo (+) cuando hay precipitado o coloración rojo
ladrillo y (-) cuando no lo hay.

ORINA N _______________ DIAGNOSTICO: ___________________

ORINA P _______________ DIAGNOSTICO: ___________________

EXPERIMENTO 3
DETERMINACIÒN CUALITATIVA DE CUERPOS CETÒNICOS EN ORINA

Objetivo:
Identificar la presencia de cuerpos cetónicos en orina utilizando la reacción del
nitroprusiato en medio alcalino

Fundamento:
El método se basa en que al acetona y el acetoacetato al reaccionar con el
nitroprusiato de sodio en medio alcalino forman un complejo de color violeta indicando
la positividad de dicha reacción.

Procedimiento:
- Colocar unas gotas de orina sobre el reactivo nitroprusiato de sodio en medio
alcalino
- Mezclar bien y esperar unos minutos para observar la aparición de color
Resultados:
Anotar el resultado, explicando lo observado
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________

INTERROGANTES
1.- Por qué razón se produce cetonuria en el estado diabético
Se producen cuando el cuerpo utiliza las grasas en lugar de los azúcares para generar
energía. En una persona con diabetes se producen cuando no hay suficiente insulina
para meter la glucosa dentro de las células. Las células creerán entonces que no hay
azúcar y utilizarán las grasas como fuente de energía.

Cuando una persona sin diabetes está en ayunas durante muchas horas o está vomitando
mucho, también se pueden producir cetonas. En este caso se producen por falta de
glucosa. Al faltar el azúcar las células quemarán las grasas para obtener la energía que
necesitan.

2.- Qué tipo de dieta le daría Ud. a un diabético insulino no dependiente?

 Alimentos de todos los grupos

 Menos calorías

 Aproximadamente la misma cantidad de carbohidratos en cada comida y refrigerio

 Grasas saludables
3.- Mediante un esquema señale las principales rutas de señalización para el
mecanismo de acción de la insulina.
4.- Cómo se explica la hiperglicemia y glucosuria que presentan los diabéticos de
tipo II
Cuando el azúcar no puede entrar en las células, se acumula un nivel alto de este en la
sangre, lo cual se denomina hiperglucemia. El cuerpo es incapaz de usar la glucosa
como energía. Esto lleva a los síntomas de la diabetes tipo 2.

Por lo general, la diabetes tipo 2 se desarrolla lentamente con el tiempo. La mayoría de

las personas con esta enfermedad tienen sobrepeso o son obesas en el momento del
diagnóstico. El aumento de la grasa le dificulta al cuerpo el uso de la insulina de la
manera correcta.

glucosuria
E n condiciones normales no se encuentra glucosa en la orina. La glucosa sanguínea
filtra a través del glomérulo y es reabsorbida por los túbulos renales. La capacidad
máxima de esa reabsorción es de 300 a 350 mg. por minuto. La glucosa aparece en
la orina cuando sus cifras sobrepasan determinado nivel en la sangre, al cual se
designa umbral renal de eliminación. Este umbral es variable, aun en condiciones
normales y oscila entre 1,40 y 2 g. so. En la etapa en que la diabetes se manifiesta
sólo por trastornos humorales, la glucosuria es poco importante y aparece casi
siempre en los períodos inmediatos a las comidas. En esta etapa la glucemia en
ayunas puede ser normal.

5.- Cómo se encontraran los ciclos alanina – glucosa y Cori en un diabético no

tratado

Cuando el organismo mantiene una falta de insulina constante, la cantidad de glucosa

que debe realizar el ciclo de Cori es mayor (la tasa de la glucólisis aumenta) y, en
cambio, la cantidad de ácido láctico transformado otra vez en glucosa es notablemente
menor (la tasa de la gluconeogénesis disminuye). El ciclo de Cori no se realiza con
normalidad dada la acumulación de lactato en el hígado.
Actualmente, más del 80 % de la energía producida por el cuerpo es derivada de la
combustión de carbohidratos lo que muchas veces termina en una "falta de insulina".

6.- En qué casos se indica la prueba de tolerancia a la glucosa?

Las personas cuya glucemia basal se sitúa entre 111 y 125 mg/dl son las que deben
someterse a esta prueba para comprobar si presentan diabetes o han sufrido un pico
de glucosa debido a la alimentación.

7.- Cuál es la razón de emplear fluor en la mezcla anticoagulante para la sangre

cuando se va a determinar glucosa en la muestra
 La adición de fluoruro de sodio y oxalato de potasio a un tubo ayuda a prevenir la
descomposición de la glucosa en la sangre (un proceso llamado glicólisis) y a
mantener su nivel en una muestra de sangre. El fluoruro de sodio y el oxalato de potasio

actúan como anticoagulantes, uniendo los iones de Ca2+; además, el fluoruro de

sodio estabiliza los niveles de glucosa. La glucosa se descompone en piruvato y
lactato con la implementación secuencial de varias reacciones enzimáticas. El
fluoruro de sodio inhibe algunas reacciones enzimáticas, incluida la conversión de
fosfoglicerato en fosfoenolpiruvato, y evita la glicólisis.

8.- Considerando los tipos de diabetes I y II, la diabetes causado por aloxano, a
cuál de ellos se asemeja. Por qué?
Los niveles elevados de glucosa sanguínea observados a las 24 horas de la
administración de aloxano son indicativos de un cuadro de hiperglicemia por daño
selectivo de las células beta pancreáticas causado por el aloxano (Murillo et al.,
2006), provocando una diabetes mellitus insulino-dependiente progresiva (TIPO
I ).El aloxano posee una similitud molecular con la estructura de la glucosa (Elsner
et al., 2000) y es captado por la célula B vía transportador de glucosa GLUT-2,
generando radicales hidroxilos, facilitando de esta forma la acción tóxica y
diabetogénica (Ojewole, 2002).

9.- Qué es la hemoglobina glicosilada, y qué importancia tiene en el estudio de la

diabetes
La prueba de hemoglobina glicosilada (HbA1c) es un examen de sangre para la diabetes
tipo 2 y prediabetes. Mide el nivel promedio de glucosa o azúcar en la sangre durante
los últimos tres meses. Los médicos pueden usar la prueba HbA1c sola o en
combinación con otras pruebas de diabetes para hacer un diagnóstico. 

10.- ¿Cómo se encontrará la gluconeogénesis en una persona con Diabetes tipo I no

tratada? ¿Por qué?
La diabetes tipo 1 suele presentarse de forma más progresiva, a veces a lo largo de
varios meses, siendo excepcional el coma diabético aún en presencia de cetoacidosis. La
hiperglucemia aparentemente leve pero persistente a lo largo de años, como en el caso
de la diabetes LADA, favorece el desarrollo insidioso de complicaciones crónicas.
11.- ¿Por qué en un paciente diabético insulino dependiente, uno de los problemas
que se le presenta es la hipoglicemia?
La hormona insulina reduce los niveles de glucosa en la sangre cuando es demasiado
alto. Si tienes diabetes tipo 1 o tipo 2 y necesitas insulina para controlar la glucosa en la
sangre, usar más insulina de la que necesitas puede hacer que el nivel de glucosa en la
sangre baje demasiado y provocar hipoglucemia.