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ABIERTO
Ejercicio rescata madres obesas sensibilidad a la
insulina, la hipoxia placentaria y la sensibilidad a la
insulina descendencia masculina
Recibido: 19 Octubre el año 2016

Aceptado: 09 Febrero 2017

Publicado: 14 Marzo 2017

Denise S. Fernández-Twinn 1, Geraldine Gascoin 2, Barbara Musial 3, Sarah Carr 1,
Daniella Duque-Guimaraes 1, Heather L. Blackmore 1, Maria Z. Alfaradhi 1, Elena Loche 1,
Amanda N. Sferruzzi-Perri 3, Abigail L. Fowden 3 & Susan E. Ozanne 1

La prevalencia de la obesidad durante el embarazo sigue aumentando a un ritmo alarmante. Esto es preocupante ya que además de los efectos
inmediatos sobre el bienestar materno, la obesidad durante el embarazo tiene efectos perjudiciales en la salud a largo plazo de la descendencia a
través de mecanismos no genéticos. Un gran vacío de conocimiento que limita nuestra capacidad para desarrollar estrategias de intervención es la
falta de comprensión de los factores de la madre obesa que median estos efectos epigenéticos en la descendencia. Se utilizó un modelo de ratón de la
obesidad inducida por la dieta materna para definir correlaciones predictiva entre factores maternos y la resistencia a la descendencia insulina.
hiperinsulinemia materna (independiente del peso corporal materno y composición) fuertemente asociada con la resistencia a la descendencia insulina.
Para probar la causalidad, se implementó una intervención de ejercicios que la mejora de sensibilidad a la insulina materno sin cambiar el peso
corporal materno o composición. Esta intervención materna impide el exceso de depósito de lípidos y la hipoxia placentaria (independiente del sexo) y
la resistencia a la insulina en la descendencia masculina. Llegamos a la conclusión de que la hiperinsulinemia es un factor clave de la programación y
por lo tanto un importante objetivo de intervención durante el embarazo son obesos, y proponemos un ejercicio moderado como una estrategia
prometedora para mejorar el resultado metabólica tanto en la madre obesa y su descendencia.

La obesidad es una epidemia que afecta a más de 1,4 mil millones de adultos en todo el mundo. En 2014, se registraron más de 300 millones de mujeres como
obesos (OMS La obesidad y el sobrepeso hoja informativa n.º: 311, Actualizado en agosto de 2014). La evidencia reciente suge- huéspedes un entorno acogedor
que el 50% de mujeres en edad reproductiva y 20-25% de las mujeres embarazadas en Europa son obesos o con sobrepeso en su primera visita prenatal 1. La
obesidad en mujeres en edad fértil es especialmente preocupante ya que hay exceso de evidencia abrumadora que el haber nacido de una madre obesa no sólo
tiene efectos negativos inmediatos sobre la madre y el recién nacido, sino que también aumenta el riesgo para el niño de desarrollar trastornos metabólicos en la
edad adulta 2. Aunque algo de esto se puede explicar por la transmisión de los genes de susceptibilidad con la obesidad de la madre al niño, fuerte confianza evi- a
partir de estudios en humanos 3-5 y modelos animales 6 sugiere que los mecanismos epigenéticos programados por en el útero el desarrollo de un entorno propicio a la
obesidad juega un papel importante. Por ejemplo, la cirugía bariátrica para reducir el peso en mujeres obesas se ha demostrado para reducir la prevalencia de la
obesidad 3-5, resistencia a la insulina 4,5 y presión arterial elevada 5 en los niños nacidos después de la cirugía en comparación con sus hermanos nacidos antes de la
cirugía. Estos estudios revelaron claramente que existe un riesgo desproporcionado de la enfermedad en los hijos nacidos de la misma madre y que ahora vive en el
mismo ambiente postnatal actual, pero que fueron expuestos a diferentes en el útero condiciones. Se destaca la conciencia de que la optimización del ambiente fetal
es importante si queremos evitar que la transmisión epigenéticos de la obesidad de la madre al niño y para detener la epidemia de obesidad.

Una limitación importante en nuestra capacidad para diseñar estrategias de intervención para prevenir los efectos perjudiciales de la obesidad materna sobre la
salud de la descendencia es que todavía no está claro cuál de las muchas posibles variables asociadas con la obesidad es el factor clave de la programación de la
mediación de los efectos sobre la descendencia. Hay una serie de candidatos poten- ciales que incluyen hiperinsulinemia, hiperglucemia y la hiperlipidemia 6. Algunos
de estos factores (por ejemplo,

1 Universidad de Cambridge Research Laboratories enfermedades metabólicas y MRC Unidad metabólicos, Wellcome Trust-MRC Instituto de Ciencia
Metabólica, Cambridge, Reino Unido. 2 Departamento de Medicina Neonatal, Hospital de la Universidad de Angers, Angers, Francia. 3 Departamento de
Fisiología, Desarrollo y Neurociencia de la Universidad de Cambridge, Reino Unido. La correspondencia y las solicitudes de materiales deberán dirigirse a
DSF-T. (e-mail: df220@cam.ac.uk )

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glucosa) puede moverse libremente a través de la placenta, mientras que otros (como la insulina) no pueden cruzar la placenta, por lo tanto sería mediar sus
efectos a través de acciones en la placenta. La obesidad materna durante el embarazo resulta en un aumento de la acumulación de lípidos de la placenta 7,8 y
también conduce a un entorno placentario lipotoxic que se asocia con un aumento de los marcadores de inflamación y el estrés oxidativo y la disminución de los
reguladores de la angiogénesis 9-11. Aunque hay una serie de estudios en curso de intervención aleatorizados en humanos dirigidos a los diferentes factores de
programación potenciales asociados con la obesidad materna, incluyendo la intervención dietética, farmacológicos y ejercicio 12-14, que va a ser muchos años
antes de que se obtiene información sobre los efectos a largo plazo de la intervención materna en la descendencia.

Los modelos animales son excelentes herramientas para estudios de intervención destinados a definir los factores de programación y han dado una
información inestimable sobre los mecanismos subyacentes de programación, por ejemplo, se encontró libre de rueda para correr para normalizar la
hiperinsulinemia, hiperglucemia, hiperleptinemia, hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia observado en madres obesas al final de la lactancia, mientras que los
efectos sobre la descendencia masculina joven fueron una reducción de la grasa de acreción y plasma leptina dos semanas después del destete 15.

resistencia a la insulina es una de las consecuencias perjudiciales tempranos de desarrollo dentro de un generador de obesidad
en el útero medio ambiente y se observa en la adultez temprana, antes de los cambios en la composición corporal de la cría dieciséis.
El análisis molecular ha mostrado que toda la resistencia a la insulina cuerpo se asocia con cambios en la expresión de la proteína aling insulina de la muestra de,
sobre todo en el tejido adiposo. Al menos algunos de estos cambios epigenéticos tales como la reducción de la insulina del receptor del sustrato 1 (IRS-1) de
expresión son células autónomas y son retenidos en programados pre-adipocitos primarios que se diferencian in vitro dieciséis.

El primer objetivo de este estudio fue identificar los factores de programación de obesidad materna a través de análisis de correlación entre la resistencia a la
insulina y la descendencia índices maternos incluyendo el peso corporal, la masa grasa y metabolitos en suero y las hormonas. Las presas obesos desarrollaron
hiperinsulinemia, hiperlipidemia hiperleptinemia y como era de esperar, sin embargo, surgió la insulina como el único factor que estudió correlacionó significativamente
con la hiperinsulinemia descendencia. Tener la insulina materna identificado como el factor de programación, nuestro segundo objetivo era desarrollar una estrategia
de intervención para demostrar la causalidad y para ayudar a definir los mecanismos subyacentes.

resultados
las concentraciones de insulina en suero materno se correlacionan con la insulina en suero descendencia a las 8 semanas de edad. Figura S1
representa esquemáticamente el protocolo experimental utilizado. se encontraron niveles de insulina en suero en ayunas materna para correlacionar significativamente
con descendencia insulina en ayunas de suero a las 8 semanas de edad (Spearman r = 0,54, p = 0,009; Fig. 1a). Sin embargo no había correlación entre los niveles
maternos de leptina (Fig. 1B), el peso corporal materno (Fig. 1c), o masa grasa materna (Fig. 1d) con niveles de descendencia de insulina. También hubo ninguna
correlación entre los triglicéridos maternas o colesterol con niveles descendencia de insulina (Fig. 1e, f). Esto sugiere que sulinemia hyperin- materna es un factor clave
de la programación que media los efectos de la nutrición materna sobre-sobre la sensibilidad a la insulina descendientes.

Ejercicio restaura la obesidad asociada resistencia a la insulina materna sin reducir el peso corporal o la grasa corporal total. Después
de haber demostrado que la hiperinsulinemia materna es un factor potencial de conducir el fenotipo de resistencia a la insulina, se desarrolló un régimen de
ejercicio perigestacional a la madre dirigida a improv- ing su sensibilidad a la insulina. Los tres grupos experimentales y la manera en que se implementó el
régimen de ejercicio para los estudios gestacional E19 se describe en el métodos y como se representa en la Figura S2. En E18 de gestación, 4 horas de
glucosa en sangre en ayunas fue comparable en los 3 grupos de presas (control 8.7 ± 0,8, obeso 8,6 ± 0,5, obeso-EX 8.3 ± 0,5 mmol / L). A continuación, se
realizó una prueba de tolerancia a la glucosa y después de una dosis de bolo intraperitoneal de 1 g / kg de glucosa, el área de glucosa bajo la curva (AUC)
fue significativamente mayor en el grupo de obesos en comparación con los otros dos grupos (Fig. 2A). No hubo diferencias en el AUC de la glucosa entre el
grupo trol con- y el grupo-obesos ejercido. Los niveles de glucosa fueron significativamente (p <0,0001) elevada en el grupo de obesos en comparación con
el grupo de control a los 15 minutos después de la administración-glucosa (Figura S3), y permaneció significativamente mayor que el grupo control (p
<0,0001) en 30 minutos después de la administración de glucosa. En el punto de tiempo de 30 min, los niveles de glucosa en el grupo de obesos eran
también significativamente mayor (p = 0,0109) que el grupo obesos ejercido (Figura S3). Ayunas concentraciones de insulina también fueron
significativamente elevados en el grupo de obesos en comparación con los controles y se redujeron a los valores de control en el grupo de obesos ejercido
(Fig. 2b). La obesidad materna también dio lugar a hiperleptinemia, sin embargo, los niveles se mantuvo alta en las presas obesos ejercido en comparación
con los controles (Control 2171 ± 171, 6064 Obesos ± 568, Obeso-EX 5910 ± 388 pg / ml; Controles vs. obeso p <0,0001, controles vs. p obeso-ejercido
<0,0001, las comparaciones por ANOVA de una vía). Esto fue consistente con la falta de efecto de la intervención de ejercicios sobre la masa grasa
corporal. Tanto al principio (día 1) y al final del embarazo (día 19), las presas en ambos grupos obesos eran más pesados ​que los controles (Tabla 1). Esta
diferencia en el peso corporal se atribuye a un aumento de la masa grasa en los grupos de obesos en comparación con los controles (Tabla 1). Al comparar
el grupo de obesos al grupo-obesos ejercido, las masas de grasa ni magras fueron alterados por el ejercicio, por lo tanto, en el día 19 (al final de la
intervención de ejercicio), no hubo diferencias en la composición corporal entre estos 2 grupos. (Tabla 1).

Ejercicio rescata el aumento de la deposición de lípidos asociada a la placenta sidad obe- materna. pesos placentarios no
fueron diferentes entre los 3 grupos (control, 81,5 ± 1,2; Obesos, 87,7 ± 3,8; Ex-obesos,
85.0 ± 2,3 mg). Tampoco hubo diferencias en el peso de la placenta cuando sólo se consideraron prematuro de placenta masculinos (Control, 83 ± 2,9; Obesos, 87 ±
1,5; Ex-obesos, 85,7 ± 4,9 mg). El contenido total de lípidos como se evaluó por el método de Folch se aumentó en las placentas obesos, pero esto se evita
mediante la intervención de ejercicios materna (Fig. 3a). contenido de lípidos también se evaluó por aceite de color rojo-O tinción de placenta en sección
transversal y cuantificación reveló que el área manchada como un porcentaje del área total de la placenta se aumentó significativamente en las placentas obesos
en comparación con los controles con-, y trajo hacia abajo ligeramente, pero significativamente por ejercicio materno [control, 0,52 ± 0,13; Obesos, 1,47 ± 0,21;
Ex-obesos, 0,82 ± 0.28 unidades relativas; Control vs. obeso p = 0,009; Obesos vs. obeso-Ex p = 0,045]. Un similar

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Figura 1. la insulina descendencia masculina se correlaciona con ( una) materna insulina en ayunas, pero no a ( segundo) leptina materna, ( do) peso corporal materno,
( re) materna masa grasa, ( mi) triglicéridos maternas o ( F) materna colesterol total. Dams (n = 11 control y n = 11 obesos) se aparearon, se permitió que la basura y
camadas de ambos grupos estandarizados a 6 crías por camada (igual razón hombre-mujer). Al destete, las presas se pesaron y la composición corporal evaluados
por TD-NMR. Las presas fueron entonces ayunas durante la noche y mataron a la mañana siguiente, cuando se recogió sangre para el análisis de suero.
descendencia Hombre de los grupos de control y de la presa obesos se mantuvieron a 8 semanas de edad, cuando fueron asesinados y sangre recogida para el
análisis de suero. Los datos se analizaron por 2- cola de correlación de Spearman (alfa = 0,05), y presentado como círculos rellenos para presas de control
emparejados y la descendencia y círculos como abiertas para presas obesos emparejados y descendencia.

se observó patrón de contenido de lípidos cuando sólo se analizaron placenta macho [Control, 0,74 ± 0,31; Obesos, 1,82 ±
0,14; Ex-obesos, 0,99 ± 0,45 unidades relativas; De control Vs, obeso p = 0,033; Obesos vs. obeso-Ex p = 0,154]. El gía histol- de este análisis también
sugirió que los lípidos acumula principalmente en las zonas deciduales / de unión (Fig. 3b).

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Figura 2. prueba de tolerancia a la glucosa a D18 del embarazo y las concentraciones de insulina alimentados en D19. En el día 18 de la gestación, de control
(barras blancas), obesos (barras negras) y (barras grises) obesos ejercido presas se mantuvieron en ayunas durante 4 horas, se pesaron y se les dio una dosis
intraperitoneal de glucosa (1 g / kg). Tail glucosa en sangre se midió en el tiempo 0 (antes de la inyección) y luego de nuevo a intervalos de tiempo desde el momento
de la inyección. mediciones de glucosa en sangre de la cola durante el GTT fueron analizados y presentados como ( una) área bajo las mediciones curva calculada por
suma de trapezoides y ( segundo) las concentraciones de insulina en suero alimentó a E19 como medidos por ELISA. Los datos se presentan como media + / - SEM, n =
6 por grupo. Los efectos de la obesidad y el ejercicio fueron analizados por ANOVA de una vía seguido por la prueba de comparación múltiple de Tukey.

Control frente a control de Obeso Obeso vs-Ex Obeso Obeso vs-Ex

Controlar Obeso Ex-obesos p-valor de comparaciones múltiples

Peso corporal

Día 1 27.56 ± 0,71 36,39 ± 1.19 33.12 ± 1.36 0,0006 0,0130 0.2123

día 19 43.38 ± 0,71 50,12 ± 2,44 47,38 ± 1.52 0,0383 0.2558 0.5050

Composición corporal

Día 1 12,05 ± 0,58 37,17 ± 2,80 32,14 ± 3.21 0,0001 0,0017 0.2617
Grasa corporal
día 19 12.81 ± 0,50 31,16 ± 1,58 28,57 ± 0.98 < 0,0001 < 0,0001 0.1132

Día 1 70.80 ± 1,28 54,83 ± 1,69 59,17 ± 2.79 0,0003 0,0042 0.3181
La masa magra
día 19 80.11 ± 0,81 63,29 ± 1,21 59,42 ± 4.21 0,0016 0,0003 0.5532

Tabla 1. El peso corporal y la composición corporal de Control, presas obesos y-ejercido obesos a D1 y D19 de la gestación. Los datos se expresan
como medias ± SEM; n = 6 presas por grupo. Los efectos de la obesidad y el ejercicio fueron analizados por ANOVA de una vía seguido por la prueba de
comparación múltiple de Tukey y efectos significativos de las comparaciones múltiples se informó.

La obesidad materna está asociada con la hipoxia placentaria que se restaura por el ejercicio. transferencia de Western mostró proteína
placentaria factor inducible por hipoxia 1 subunidad alfa (HIF1A) a ser elevados por la obesidad materna (Control vs. obeso p = 0,009), y restaurado para
controlar los niveles con el ejercicio (Obeso vs. p ejercido obesos = 0,034) ( Fig. 4a). Esto sugiere que la placenta en los ratones obesos experimentó la
hipoxia, que fue Ame- liorated por el ejercicio. Se observó un patrón similar cuando sólo se consideraron placentae masculinos, con la obesidad que resulta
en niveles significativamente elevados de HIF1A, y la intervención de ejercicio que resulta en una tendencia para controlar los niveles (controles, 1,1 ± 0,424;
Obesos, 3,93 ± 0,691; Ex-obesos, 1.633 ± 0,994 unidades relativas; Control vs. obeso p = 0,013; Obesos vs. obeso-Ex p = 0,107). Luego investigó si las
concentraciones de insulina maternas se asociaron con hipoxia placentaria, utilizando niveles HIF1A como un proxy, y parecieron ser correlacionado
significativamente (Fig 4b, Pearson r = 0,68;. p = 0,002), con un análisis sólo para hombres revelando una correlación entre la insulina materna y los niveles
de HIF1A placentarios macho (Pearson r = 0,711, p = 0,014) correspondiente. los niveles de transcripción de HIF1A sin embargo, no se vieron afectados, ya
sea por obesidad materna o la intervención de ejercicios (Control 1.0 ± 0,06, 1,02 obeso ± 0,15, obeso-Ex

0.94 ± 0,09; expresión relativa), con única expresión masculina también ser de manera similar no afectado (Control, 1,0 ± 0,07, 0,92 obeso ± 0,24; Ex-obesos, 0,97 ± 0,07),
lo que implica que los cambios observados en los niveles de proteína HIF1A no eran un resultado de aumento de la transcripción en este locus.

Ejercicio rescata hiperinsulinemia descendencia y adiposo resistencia a la insulina de los tejidos. En una previ-
ous estudio, hemos demostrado que los hijos de madres obesas presentaron hiperinsulinemia y que los niveles de proteína IRS1 fueron marcadamente suprimida en
su tejido adiposo del epidídimo dieciséis, un potencial marcador de resistencia a la insulina en esta grasa

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Figura 3. La acumulación de lípidos en la placenta ( una) El contenido total de lípidos de placenta de control (barras blancas), obesos (barras negras) y (barras grises)
obesos ejercido presas se determinaron por el método y los datos presentados como medios Folch + / - SEM, n = 6 por grupo. Los efectos de la obesidad y el ejercicio
se analizaron ANOVA de una vía seguido por prueba de comparación múltiple de Tukey; ( segundo) Aceite rojo placentae O-manchado seccionada de espectáculo
tejido congelado aumento de la deposición de lípidos dentro de la decidual (Db) / zona de unión (Jz), pero no en la zona laberíntica (Lz) de placentas obesos en
comparación con los controles, que se normalizó por el ejercicio, Escala bar = 100 μ METRO.

depot a esta temprana edad. Por lo tanto, los efectos de la intervención ejercicio materno fueron examinados en la descendencia masculina de los 3 grupos
maternos. los niveles de insulina sérica en ayunas se midieron en 8 semanas de edad la descendencia y, en consonancia con nuestros hallazgos anteriores, la
descendencia de presas obesos eran hiperinsulinemia en comparación con la descendencia de las presas de control (figura 5a;. p = 0,0052), y de manera
importante, la intervención ejercicio en las presas obesos impedido el desarrollo de esta hiperinsulinemia programado en la descendencia masculina (Fig 5a;. obeso
vs. p ejercido obesos = 0,0249). Además, esto fue acompañado de una restauración significativa de IRS-1 los niveles de proteína en su epidídimo Adi plantean
tejido a casi niveles de control (Obeso-ejercido vs. obeso p = 0,0004; Fig. 5b), en comparación con una pérdida del 50% en el descendencia de presas obesos
(obeso vs. controles p <0,0001; Fig. 5b).

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Figura 4. HIF1A placenta está regulada positivamente por la obesidad materna, pero atenuada por el ejercicio. (una) los niveles de proteína HIF1A en las
placentas de control (barras blancas), obesos (barras negras) y (barras grises) obesos ejercido presas, con borrones representativo mostrado anteriormente. Los
datos se presentan como media + / - SEM, n = 6 por grupo y los efectos de la fueron analizados por ANOVA de una vía seguido de la prueba de comparación múltiple
de Tukey la obesidad y el ejercicio; ( segundo) de correlación de Pearson entre la insulina materna y los niveles de proteína HIF1A placentarios, 2-tailed p = 0,002 (alfa
= 0,05) y r = 0.68, con los datos de grupos emparejados representada para los controles como círculos rellenos, obeso como cuadrados rellenos y obesidad-ejercido
como triángulos abiertos .

Figura 5. sensibilidad a la insulina en los hijos de madres obesas se restaura para controlar los niveles de ejercicio materno.
( una) La insulina en ayunas de suero en la descendencia masculina a las 8 semanas de edad ( segundo), En ayunas los niveles de proteína IRS1 en epidídimo tejido
adiposo de 8 semanas de edad la descendencia masculina del control (barras blancas), obesos (barras negras) y (barras grises) obesos ejercido presas con blots
representativos se muestran arriba. Los datos se presentan como media + / - SEM, n = 8 por grupo. Los efectos de la obesidad y el ejercicio se analizaron ANOVA de
una vía seguido por la prueba de comparación múltiple de Tukey.

Discusión
El objetivo de este estudio fue determinar el factor de programación de la llave que media los efectos de la obesidad materna sobre la sensibilidad a la
descendencia a la insulina, con el fin de identificar posibles estrategias de intervención racional para detener la epidemia aumento de las enfermedades
metabólicas como la diabetes tipo 2, tanto en el mundo desarrollado como en desarrollo. Hemos demostrado aquí que la hiperinsulinemia en mujeres
obesas se correlaciona directamente con la hiperinsulinemia y la resistencia a la insulina descendientes. Por otra parte, nuestra estrategia de
intervención ejercicio materno, lo que mejoró la sensibilidad a insulina materna sin alterar el peso materno corporal, composición corporal, los niveles de
lípidos o los niveles de leptina gestas fuertemente cias que la insulina materna es un factor importante que contribuye en el desarrollo de la resistencia a
la insulina y la descendencia pueden mediar epigenética efectos. 15 dónde

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se adoptó voluntaria rueda libre funcionamiento, cuando además de los niveles de insulina ser reducido, también se observaron reducciones en los niveles de
glicéridos, glucosa y colesterol tri-. Se observa sin embargo que, con carácter voluntario rueda de marcha libre, es probable que los animales se están ejecutando por
períodos mucho más largos y las distancias que en nuestro estudio actual, lo que explicaría por qué no todos los parámetros metabólicos fueron afectados de manera
similar aquí.
Las vías por las que la insulina materna media sus efectos de programación sobre el feto no se conocen. La insulina no se piensa para cruzar la
placenta, sin embargo, la placenta expresa los receptores de insulina y es sive respon- a la insulina con respecto al metabolismo de los lípidos, puesto que
han demostrado altos niveles de insulina para aumentar la acumulación de lípidos 17,18. A continuación, se observó el aumento de contenido de lípidos en las
placentas de madres obesas, consistente con los hallazgos en placentas humanas obesos donde ha sido localizada en el estroma de las vellosidades y
sincitio 8. En nuestro modelo, así como en ratas propensas a la obesidad, se encontró que los lípidos a ser localizados predominantemente en la decidua 19. Un
estudio en ratones knockout Fatp2 y Fatp4 20 observado un aumento de la deposición de lípidos en las zonas deciduales / unión de la placenta, lo que
sugiere estos transportadores de ácidos grasos son esenciales para el tráfico de lípidos a través de la placenta. Todavía no se sabe por qué los lípidos
deben acumularse en la barrera decidual / unión, pero se podría especular que esto podría, estructuralmente, al menos, interfiere con la angiogénesis y la
capacidad de los vasos maternos para invadir el trofoblasto laberíntica y por lo tanto poner en peligro el intercambio de nutrientes y gases entre la madre y
el feto. La observación de que ejercicio materno impedido un aumento en la deposición de lípidos de la placenta en paralelo con una reducción en los
niveles de insulina maternos sugiere que la hiperinsulinemia y por lo tanto una mayor acción de la insulina en la placenta pueden contribuir al aumento de la
deposición de lípidos de la placenta. 21 que investigó el impacto de la obesidad materna sobre los genes del metabolismo de lípidos en la placenta humana.
Aquí, los autores observaron un aumento de dos veces en la abundancia de proteínas de un regulador maestro de la hidrólisis de triglicéridos, CGI-58, en
las placentas de mujeres obesas comparado a inclinarse placentae, que positivamente correlacionada con los niveles de insulina maternas. Además,
demostraron que in vitro tratamiento de las células trofoblásticas cultivadas con insulina indujo la expresión de CGI-58.

La obesidad materna también se asoció con el aumento de expresión de la proteína HIF1A placentaria. HIF1A es un sensor molecular impor- tante de los
niveles de oxígeno en la placenta y se induce cuando la tensión de oxígeno es baja 22. Por lo tanto, un aumento en la abundancia de proteínas HIF1A apoya la
hipótesis de que la obesidad durante el embarazo da lugar a la hipoxia placentaria. La hipoxia se ha demostrado que aumenta directamente la acumulación de
lípidos en los trofoblastos humanos 23, por lo tanto, también puede contribuir al aumento de la acumulación de lípidos placentaria. Otros factores que pueden
contribuir a un estado de hipoxia incluyen la inflamación 24,25 y la disfunción mitocondrial 26 que se observan preferentemente en placentae hembra, mientras que otros
factores tales como el estrés oxidativo 27 y el estrés ER 28 parecen ser el sexo-independiente.

Si bien existen diferencias en el ratón y la gestación humana y la estructura de la placenta, hay muchas características comunes funcionales entre las
dos especies, la transferencia de nutrientes particularmente, tanto en normal y patológico situaciones lógicas 29. Estructuralmente, la alimentación de una dieta
propicio a la obesidad durante el embarazo se ha demostrado que el resultado en un volumen capilar fetal reducida 30 que está asociado con la entrega de
oxígeno alterada 31. Esto apoya la idea de una respuesta a la hipoxia mediada a la obesidad materna en la placenta. Más apoyo a esta proviene de la
observación de que los niveles de proteína placentaria HIF1A son llevados de vuelta a los niveles de control como consecuencia del ejercicio materno.

Hay varias vías mecánicas mediante el cual la insulina materna puede estar induciendo hipoxia placento-fetal. En primer lugar, la insulina es un óxido nítrico
(NO) vasodilatador dependiente 32 y endotelial vasodilatación mediada por la insulina se ha demostrado ser mediada por óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS) 33. Los
estudios en humanos y modelos animales enlazan fuertemente resistencia a la insulina con una disminución de la biodisponibilidad de NO: En los seres humanos,
mediada por NO-vasodilatación inducida por la insulina está deteriorada en los estados resistentes a la insulina 34; y la biodisponibilidad de NO es conocido por ser
reducido tanto en modelos animales de obesidad y diabetes 35 y en los seres humanos obesos y diabéticos 36. Además, una deleción en NOS3, una de las tres isoformas
de la enzima de óxido nítrico, provoca resistencia a la insulina, intolerancia a la glucosa, hiperlipidemia e hipertensión 37. Se postula, por tanto, que la resistencia a la
hiperinsulinemia / insulina materna puede afectar negativamente a la cantidad disponible de NO, perjudicando de este modo la vasodilatación uteroplacental, dando
lugar a disminución de la perfusión de la placenta y en última instancia resulta en hipoxia placentaria-fetal 38.

hiperinsulinemia materna también puede afectar directamente los niveles de HIF1A placentarios. Los efectos de la obesidad materna y la intervención de
ejercicio en los niveles de proteína HIF1A se produjo sin ningún cambio en HIF1A mRNA lo que sugiere que podría ser mediada a través de un mecanismo
post-transcripcional.
Un hallazgo central de nuestro estudio fue que los niveles de insulina maternos eran el predictor más fuerte de la resistencia a la insulina descendencia
masculina y que esto ocurrió de forma independiente de la madre o de sus hijos dieciséis peso. Diseño de una inter- vención que mejoró específicamente sensibilidad
a la insulina materna, sin impactar en otros factores potenciales, tales como el peso materno, la composición corporal, lípidos o los niveles de leptina, nos
permitió demostrar una relación causal entre la insulina materna y la resistencia a la descendencia insulina. La mejora en la sensibilidad a la insulina materna
impidió el desarrollo de resistencia a la insulina en la descendencia y una pérdida de la proteína IRS-1 en el tejido adiposo de epidídimo, un depósito que ha
sido documentado como representante de la grasa visceral humana 39, un depósito asociado con resistencia a la insulina en los seres humanos. También
demostramos previamente que los preadipocitos primarios aislados de este depósito y luego se diferencian in-vitro, mantener esta pérdida de proteína IRS-1 y
por lo tanto están programados epigenéticamente por la obesidad materna de una manera de células autónomas dieciséis. Nuestros estudios también han
demostrado que los adipocitos maduros en este depósito son de mayor tamaño y demostrar un fenotipo de la inflamación 40. Estas observaciones son muy
coherentes con el trabajo de otros 15 y subraya que los efectos metabólicos perjudiciales de la obesidad perigestacional tanto de la madre y su descendencia
pueden ser rescatados por el ejercicio moderado.

En conclusión, hemos demostrado que la insulina materna es un factor clave de la programación de la mediación de los efectos de la obesidad inducida por la
dieta materna sobre la sensibilidad a la insulina descendientes. Así como proporcionar una visión mecanicista, nuestros hallazgos tienen importantes implicaciones
traslacionales como proponen que en situaciones de obesidad materna, puede ser mejor centrarse en las intervenciones que mejoran la condición metabólica en
lugar de controlar el peso corporal materno. Esto es importante a la luz de los estudios en humanos recientes que han demostrado que es posible modular el
comportamiento en embarazadas obesas 14,41, a pesar de que pasarán muchos años antes de las pruebas de los posibles efectos a largo plazo de

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estas intervenciones se observan en la descendencia. Nuestros hallazgos sugieren que proporcionar a las mujeres las herramientas y la información sobre los
beneficios de la incorporación de un estilo de vida activo antes y durante el embarazo podría tener enormes beneficios potenciales a largo plazo en la prevención de la
transmisión de la obesidad de la madre al niño.

Métodos Animales y dietas. Todos los protocolos fueron aprobados por el proceso de revisión ética bienestar de los animales de la Universidad de Cambridge
y llevan a cabo bajo licencia de los Animales (Procedimientos Científicos del Reino Unido) Act 1986. hembra C57BL / 6 ratones J fueron asignados al azar a uno de dos
dietas alimentado ad libitum a lo largo, es decir, ya sea una dieta stand- ard Chow RM1 (aprox. 7% de azúcares simples, 3% de grasa, 50% de polisacáridos, 15% de
proteína [w / w], 10,74 kJ / g) o una energía rica en semi-sintético altamente dieta obesógeno palatable (aprox. 10% de azúcares simples, 20% de manteca de cerdo
animales, 28% de polisacáridos, 23% de proteína [w / w], 28,43 kJ / g) suplementado con leche condensada azucarada (Nestle, Reino Unido) (aprox. de grasa 16% ,
33% de azúcares simples, 15% de proteína, 13,7 kJ / g) que fue fortificada con AIN93G mineral y vitamina mezcla. Ambas dietas fueron adquiridos de Servicios
Regímenes Especiales (Witham, Reino Unido). Después de tres semanas en las dietas respectivas, las hembras se aparean con machos Chow-alimentado por su
primer embarazo. Las presas se mantuvieron en sus respectivas dietas durante todo el embarazo y la lactancia y la primera camada fue sacrificados después del
destete. La primera Nancy embara- garantizarse la fertilidad y el cuidado en los ratones experimentales. Una semana después del destete, la composición corporal de
las mujeres presas se analizó mediante Resonancia Magnética Nuclear de dominio temporal (TDNMR). A partir de estudios anteriores, se había establecido que para
un fenotipo consistente para ser observada en la descendencia de las presas obesos, la composición corporal de las presas obesos debe estar alrededor de 30-35%
de grasa y que el peso corporal no debe exceder de 35 g antes del apareamiento por segundo el embarazo. La composición corporal de las presas de control que
habían sido alimentados con el pienso estándar largo de la vida se midió también y la grasa corporal en este caso no se le permitió exceder de 10-12% antes del
apareamiento por segundo embarazo. la composición corporal de las presas obesos debe estar alrededor de 30-35% de grasa y que el peso corporal no debe exceder
de 35 g antes del apareamiento por segundo embarazo. La composición corporal de las presas de control que habían sido alimentados con el pienso estándar largo de
la vida se midió también y la grasa corporal en este caso no se le permitió exceder de 10-12% antes del apareamiento por segundo embarazo. la composición corporal
de las presas obesos debe estar alrededor de 30-35% de grasa y que el peso corporal no debe exceder de 35 g antes del apareamiento por segundo embarazo. La
composición corporal de las presas de control que habían sido alimentados con el pienso estándar largo de la vida se midió también y la grasa corporal en este caso no se le permitió e

correlaciones descendencia - materna. Para los estudios de correlación, las presas (n = 11 control y n = 11 réplicas biológicas obesos, donde cada madre presa
se define como la unidad estadística) se establecieron como anteriormente y se aparearon para un segundo embarazo, a continuación se dejó camada. A las 48 horas
post-parto, camadas de todas las presas se estandarizaron a 6 crías por presa (igual relación hombre: mujer). Al destete, las presas se mantuvieron en ayunas durante
la noche y al día siguiente se murieron y sangre recogida para el análisis de suero. crías destetadas se mantuvieron en la comida estándar desde el destete hasta las 8
semanas de edad. A las 8 semanas de edad, 1 descendencia masculina de cada camada fue seleccionado al azar para el estudio, ayunó un día para otro y mató al día
siguiente. a continuación, se recogió sangre para el análisis de suero.

Los estudios gestacional. Una cohorte independiente de n = 6 de control y n = 12 presas obesos se utilizaron en los estudios del
embarazo. Como antes, la composición corporal de las presas se controló antes del apareamiento. La mitad del grupo obesos (n = 6) que
no se ejerció fueron colocados en una cinta estática para controlar las diferencias ambientales tiempo y la otra mitad (n = 6) se introdujeron
en un régimen de ejercicio físico como se describe a continuación. apareamiento temporizado para todos los 3 grupos de presas (n = 6
repeticiones biológica, donde cada madre presa se define como la unidad estadística) se llevaron a cabo utilizando el mismo conjunto de
tacos macho y día 1 del embarazo fue definido por la aparición de un tapón de copulador. Dams se mantuvieron en su respectivo control o
dietas obesogénicos (grupos obesos y obesos ejercido) en todo ambos embarazos y períodos de lactancia.

intervención de ejercicios. Se utilizó una estrategia de ejercicio en lugar de un enfoque farmacológico, ya que es probable que sea más
traducible 41, con estudios recientes que demuestran que el ejercicio durante el embarazo obesas pueden mejorar la sensibilidad insu- lin y
reducir la prevalencia de la diabetes gestacional 42. A pesar de Standford et al. 43 mostró recientemente que el ejercicio de ratones
embarazadas que fueron alimentados con una dieta alta en grasas durante 2 semanas antes del apareamiento llevado a una mejora en la
salud metabólica de la descendencia, es importante señalar las principales diferencias entre los dos modelos. En su modelo, los ratones
fueron alimentados simultáneamente una dieta alta en grasa, mientras que se ejerce 2 semanas antes del apareamiento, de forma que el
peso corporal de las presas, la masa grasa y la tolerancia a la glucosa en ese estudio no era en cualquier momento diferente a sus
controles. Por el contrario, nuestro modelo es uno de la obesidad materna perigestacional, como las presas se mantienen en una dieta
obesógeno durante 6 semanas antes de la gestación y las presas obesos acumulan tres veces la masa de grasa de una presa de control
magra, incluso antes de entrar en la gestación, de manera de modelar más con precisión el problema de la obesidad humana. Tomando
este modelo para- Ward,

Desde una semana antes del apareamiento para el segundo embarazo, las presas obesas bajo protocolo de intervención de ejercicio (n = 6) fueron entrenados
para correr 20 minutos todos los días en una cinta, a partir de 5 m / min en el primer día y con diarias aumentos incrementales en velocidad hasta que estaban
corriendo a una velocidad final de 12,5 m / min en el día 5. represas fueron luego descansó durante 2 días durante el fin de semana cuando eran tiempo-acoplado y
día 1 del embarazo se definió por la aparición de un tapón de copulador. entonces Ejercicio se mantuvo a la velocidad final de funcionamiento y después de una
rutina de 5 días de ejercicio diario (lunes a viernes) seguido de 2 días de descanso (fines de semana), hasta el día 17. La duración de funcionar a la velocidad
máxima de 12,5 m / min era reducido en los últimos 3 días para adaptarse a las limitaciones físicas de embarazo.

tolerancia a la glucosa materna. En el día 18 de la gestación, las presas ratones de los tres grupos (control, obesos y obesos ejercido) se mantuvieron en
ayunas durante 4 horas entre 0730 y 1130, y la sangre extraída de la cola para las mediciones de glucosa basal (AlphaTRAK, Abbot Logistics BV, Países
Bajos) . Las presas fueron inyectados por vía intraperitoneal con 1 g / kg de glucosa y otras mediciones de glucosa en sangre de la cola se realizaron a
intervalos de tiempo. AUC se calculó mediante la suma de los trapecios (Prism, GraphPad, La Jolla, EE.UU.).

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La sangre materna y la recogida de tejidos. Las presas fueron re-alimentados después del GTT y la mañana siguiente (día 19 gesta- ción) que fueron asesinados por el
aumento de CO 2 concentración. La sangre se muestreó mediante punción cardiaca y el suero obtenido y almacenado a - 80 ° C para su posterior análisis.

Los análisis de la placenta. Total de placenta se obtuvieron de cada feto y se asigna a diversos experimentos como se muestra a continuación. Placentario de peso
alrededor de la mediana de toda la camada fueron seleccionados para a) El análisis de aceite rojo O; b) el contenido de lípidos total y c) el análisis molecular
(proteínas, ARN). 3 hombres y 3 mujeres de placenta todo en los tres grupos se utilizaron para descartar cualquier contribución que surgen de las diferencias de sexo.
Los fetos fueron sexados mediante inspección visual de los testículos, y saco de la yema de ADN se sometieron a PCR para Sry, donde una amplificación de Sry gen
confirmó el feto y la placenta asociado como varón.
Para la tinción O de aceite rojo, congelado secciones placenta enteros de 7 μ m de espesor se tiñeron con Oil Red O (Sigma-Aldrich, UK) y se contratiñeron
con hematoxilina de Mayer (Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.) para detectar la acumulación de lípidos dentro de las diversas estructuras. Las imágenes fueron
capturadas en un microscopio de luz invertida (Olympus BX41, Olympus UK Ltd, Southend-on-Sea, Reino Unido). análisis simple ciego se llevó a cabo usando
Adobe Photoshop Elements (Adobe Systems Inc., San Jose, EE.UU.) en dos campos de visión a partir de dos secciones por muestra (n = 7 por grupo). Se
seleccionaron las gotitas de lípidos (rojo) usando la herramienta de la varita mágica y cuantificarse como un porcentaje de píxeles positivamente teñidas en el
campo de visión. lípido total se cuantificó mediante un método de Folch modificado 44.

Para los análisis de expresión de genes, el ARN total fue aislado a partir de placenta utilizando DirectZol (zimógeno, Cambridge Biosciences, UK). Se
generó ADNc usando una alta capacidad de cDNA de transcripción inversa Kit (Applied Biosystems, Reino Unido) y la PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR)
se realiza en una StepOnePlus ™ Sistema de PCR en tiempo real (Applied Biosystems), utilizando 400 nm concentraciones de cebador, (Sigma-Aldrich,
Reino Unido), 1 × SYBR mezcla maestra Green (Applied Biosystems, UK) y una dilución 1:10 de cDNA de la muestra. La cuantificación de los niveles de ARNm
se realizó con respecto a una curva estándar que se genera utilizando series de dilución de las muestras de cDNA agrupados. la expresión de ARNm de HIF1A se
normalizó a la media geométrica de los genes de referencia seleccionados B-Ley, Ppia, Pabp1 y

HPRT. Las secuencias de cebadores usados ​en el análisis de PCR se listan en la Tabla Suplementaria 1.
Para los análisis de proteína, uno de placenta entera de cada camada (cerca de la mediana del peso) se procesó para el Western Blot como se
describe más adelante.

Los estudios descendencia. Una tercera cohorte de control, obesos y presas obesos ejercido (n = 8 por grupo presas; repeticiones iCal biolog-,
donde cada madre presa se define como la unidad estadística) se permitió a la basura y camadas de los 3 grupos se estandarizaron a 6 cachorros (3
machos y 3 hembras) a las 48 horas post-parto. Descendencia de los 3 grupos fueron destetados en comida estándar hasta las 8 semanas de edad.
Una sola descendencia masculina de cada camada fue seleccionado al azar a las 8 semanas de edad, en ayunas durante la noche y mató a la
mañana siguiente. Se recogió sangre y se dejó coagular. a continuación, se obtuvo el suero para el análisis de ayuno las concentraciones de insulina y
el tejido adiposo del epidídimo se recogió para el análisis de transferencia de western de sustrato-1 (IRS-1) los niveles de proteína del receptor de
insulina, lo que nos permitió investigar los efectos de ejercicio materno sobre estos parámetros descendencia.

Western Blot. El tejido se rompe por homogeneización mecánica (TissueRuptor, Qiagen, Manchester, Reino Unido) en tampón de lisis (50 mmol / l de
HEPES, pH 8; / l de cloruro de sodio 150 mmol; 1% de Triton X100; vanadato orto- 1 mmol / l de sodio; 30 fluoruro mmol / l de sodio; 10 mmol / l de
pirofosfato de sodio;. 10 mmol / l de EDTA y un cóctel inhibidor de proteasa (conjunto III, Calbiochem Novabiochem Biosciences, Nottingham, Reino Unido)
el material nuclear se sedimentó por centrifugación a 12.000 g y la clara sobrenadante eliminado a un tubo nuevo. las concentraciones totales de proteína
en el lisado aclarado se midieron usando un cobre / ensayo bicinconínico (Sigma-Aldrich, UK). las muestras de los 3 grupos (20 μ

g de proteína total) se sometieron a SDS-PAGE y se transfirió a una membrana de PVDF (Immobilon-P, Millipore, Billerica, MA, EE.UU.). Para asegurar la
linealidad de la señal, 20 μ g y 10 μ g de una muestra combinada (de los 3 grupos) se cargaron en cada gel. Una proporción de 2: 1 de la densidad óptica en las
bandas de interés confirmó que los análisis estaban dentro de la gama dinámica. Después de una etapa de bloqueo en 5% de albúmina de suero bovino (Sigma,
Reino Unido), 1 × solución salina tamponada con Tris (TBS), 0,1% de Tween 20, la membrana de PVDF se incubó durante la noche con los anticuerpos primarios de
interés. Esto fue seguido por ING solidez al lavado con 1 × TBS, 0,1% Tween 2, después de lo cual las membranas se incubaron con peroxidasa de rábano
conjugada anti-conejo o anticuerpo anti-ratón (Jackson ImmunoResearch, Stratech, UK). La unión del anticuerpo se detectó usando el Super Señal West Pico
quimioluminiscente sustrato (Thermo Scientific, Reino Unido) y las bandas quimioluminiscentes se cuantificaron directamente con ImageQuant LAS4000 (GE
Healthcare Life Sciences, UK). Se utilizaron los siguientes anticuerpos: (R & D Systems, Reino Unido) IRS-1 (Upstate Biotechnology, Millipore, Lake Placid,
EE.UU.), HIF1A. Cada experimento de inmunotransferencia se realizó tres veces para un total de 3 repeticiones técnica por anticuerpo.

Análisis del suero. las concentraciones de insulina en suero descendencia materna y macho se midieron usando un ELISA kit insulina Ultrasensible
Mouse (Crystal Chem, EE.UU.). las concentraciones de leptina maternos eran ured medi- utilizando un kit de ratón leptina ELISA (Crystal Chem, EE.UU.).
Las muestras se ensayaron en los coeficientes de duplicados e intra e inter-ensayo de variación de menos del 10,0% se consideró aceptable para ambos
ensayos.

Análisis estadístico. Los cálculos para tamaño de la muestra se obtuvieron mediante la factorización en un valor de p de nivel de significación del 5%, 90% de
potencia y la desviación estándar de la diferencia entre los grupos (StatMate, GraphPad, La Jolla, EE.UU.). El protocolo aceptado en los estudios de programación es
que sólo una descendencia de cada camada se representa como el norte
y la presa es la unidad estadística. De dos caras pruebas se realizaron para todas las evaluaciones estadísticas (Prism, GraphPad). Unidireccional ANOVA, seguido de
la corrección de Tukey para comparaciones múltiples se utilizaron para probar las diferencias entre los tres grupos de presas para identificar en primer lugar los efectos
significativos de la obesidad y los efectos de la intervención de ejercicios sobre la obesidad. Los cambios entre el día 1 y el día 19 del embarazo dentro de los mismos
grupos se analizaron mediante pruebas t pareadas. los datos de la placenta se promediaron para cada camada antes del cálculo de los valores medios para cada edad
gestacional.

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Expresiones de gratitud
Este trabajo recibió fondos del Séptimo Programa Marco de la Unión Europea [FP7 / 2007-2013, EarlyNutrition proyecto, acuerdo de subvención
n ° 289346]; la MRC metabólico Enfermedades Unidad premio [MC_UU_12012 / 4]; la Biotecnología y Ciencias Biológicas de Investigación [BB /
M001636 / 1]; la British Heart Foundation (PG / 14/20/30769) y la Fundación para la Investigación de Sao Paulo (número de proceso: 2014 /
20380-5).

Contribuciones de autor
DSF-T. y SEO destinadas a la investigación y escribió el manuscrito; DSF-T., GG, BM, SC, DD-G., HLB,
MZA, EL y ASN-P. experimentos llevados a cabo, datos adquiridos y analizaron los datos; SEO y ALF criticadas e interpretados los datos; Todos los
autores interpretan los datos y la revisión crítica del manuscrito.

Información Adicional
Información suplementaria acompaña a este trabajo en http://www.nature.com/srep

Conflicto de intereses: Los autores declaran no tener intereses financieros en competencia.

Cómo citar este artículo: Fernández-Twinn, DS et al. Ejercicio rescata sensibilidad a la insulina madres obesas, hipoxia placentaria y la sensibilidad a
la insulina descendencia masculina. Sci. Reps. 7, 44650; doi: 10.1038 / srep44650 (2017).

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Científico Informes | 7: 44650 | DOI: 10.1038 / srep44650 11