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SESIÓN DE APRENDIZAJE 03

EQUIPOS E INSTRUMENTOS DE HEMATOLOGÍA. CARGADO DE PIPETA Y CÁMARA

1. EQUIPOS E INSTRUMENTOS DE HEMATOLOGÍA.

La hematología es una rama de la medicina la cual es de gran importancia en el diagnóstico de
la patología a nivel sanguíneo y nos brinda información antes de emitir un tratamiento.
Dentro del área de hematología se realiza las siguientes pruebas básicamente: Hemograma
completo que consta de recuento de blancos, Hto, Hb y diferenciación celular.

A continuación, se mencionan los siguientes equipos y materiales utilizados en dicha área:

MATERIAL DE VIDRIO:
El tipo de vidrio más utilizado es el de borosilicato de Na y Al Alto grado de resistencia térmica
Las marcas comerciales tipo Pyrex, Kimax… Al trabajar con vidrio hay que tener una serie de
precauciones: No someterlos a cambios bruscos de temperatura ni de presión No aplicar
fuerzas sobre llaves etc. No conservar soluciones concentradas de álcalis en vidrio de
borosilicato, ya que destruyen la calibración En los últimos años el vidrio ha sido sustituido,
en gran parte, por el plástico, debido fundamentalmente a: Ventajas: Su resistencia a la rotura,
su bajo peso y precio Inconvenientes: Están hechos de monómeros orgánicos, por lo que
pueden ser atacados por disolventes orgánicos y ácidos o bases fuertes.

MATRACES
 Matraz Erlenmeyer: Recipiente de forma cónica con boca cilíndrica, Contiene una escala
volumétrica orientativa. Se utiliza para contener soluciones.
 Matraz Aforado: Recipiente de forma ovalada y fondo plano, con una boca acabada en un
largo y estrecho tubo cilíndrico donde se encuentra el anillo de enrase. Se utiliza para hacer
mediciones volumétricas exactas
 Matraz de fondo redondo: Matraz de vidrio de fondo redondeado, que se usa cuando
queremos calentar una sustancia de forma homogénea.

PIPETAS
Se utilizan normalmente para transferir un volumen determinado de líquido. Las hay de muy
diversas capacidades (desde 1 a 50 ml) y llevan grabadas sobre sus paredes, la capacidad y
la temperatura a la que deben ser utilizadas.
 Pipetas aforadas (volumétricas): Están diseñadas para medir un solo volumen de líquido.
Son tubos largos de vidrio con un ensanchamiento en su parte central donde generalmente
viene indicada su capacidad y temperatura de uso. Las hay de doble aforo.
 Pipetas graduadas: Son tubos de vidrio de sección uniforme que terminan en una punta
fina y tienen grabada en las paredes de cristal una graduación que divide su volumen total
en mililitro y en décimas o centésimas de mililitro, según la capacidad de las mismas.

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 Micropipetas: Son pipetas que se utilizan para transferir cantidades muy pequeñas de
líquidos (entre 1 y 500 microlitros). Las más utilizadas actualmente son automáticas con
las puntas desechable.

AUXILIARES DE PIPETEADO
Utensilios de goma o plástico que se usan para succionar líquidos, y permiten dosificarlos.
 Pera de succión: Pera de goma con 3 válvulas. Válvula A: expulsión de aire. Válvula S:
aspiración de líquido. Válvula E: vaciado de líquido
 Aspirador de pipetas: El aspirador lleva rueda de carga y válvula de vaciado

PIPETAS ESPECIALES
 Pipeta Westergreen: Para la sedimentación de sangre.
 Pipeta Pasteur: Puede ser de cristal o de plástico. No calibrada, pero si graduada que se
utiliza apretando la boquilla de arriba.
 Pipeta de Thoma: Pipeta graduada de cristal para contar células sanguíneas.

PROBETAS
Son tubos cilíndricos calibrados con una base de apoyo. Se utilizan para medir volúmenes
que requieren poca precisión

PORTAOBJETOS (PORTAS)
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Pequeña lámina de vidrio rectangular, donde se coloca la muestra para ser examinada al
microscopio. Existen portas excavados que poseen una cavidad semiesférica de distinto
diámetro de profundidad, que se utilizan para técnicas de observación in vivo.

CUBREOBJETOS (CUBRES)
Fina lámina de vidrio de unos 0,17 mm de espesor que se recubren las muestras que se
quieren examinar al microscopio. Los más corrientes son de 18x18mm 22x22 mm 22x32 mm

CÁMARAS DE NEUBAUER (CUENTAGLÓBULOS)

Constan de una placa de vidrio con una excavación en forma de H, en la que llevan grabadas
distintos modelos de cuadrículas, según el tipo de cámara. Se utilizan en el recuento de
células.

CENTRÍFUGA
Son aparatos que constan de un dispositivo giratorio donde se colocan los tubos. Por acción
de la fuerza centrífuga se separan sus componentes o fases (generalmente una sólida y una
líquida), en función de su densidad Se utilizan para separar los elementos formes de la sangre.
Su velocidad y tiempo de giro son regulables.

MICROCENTRÍFUGA Y LECTOR DE HEMATOCRITO

La Centrífuga de microhematocrito se diferencia de la anterior, en que no está diseñada para
tubos, sino para capilares. Consta de una especie de plato horizontal con unos surcos para
colocar los capilares, y permite aplicar una fuerza centrífuga de 12.000 a 15.000g. durante un
tiempo controlado automáticamente. El lector de microhematocrito sirve para leer el valor del
hematocrito.

TUBOS CAPILARES MICROHEMATOCRITO

Tubos capilares para determinación del microhematocrito.

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CONTADORES DE CÉLULAS
Un contador electrónico de células es un instrumento capaz de contar y medir partículas en
suspensión. El dispositivo de medida consiste en un pequeño orificio, a través del cual se hace
pasar la sangre diluida. Dicho orificio tiene colocados un electrodo a su entrada y otro a su
salida. A través de ese mismo orificio también se hace pasar una corriente eléctrica constante.
Si el orificio es atravesado solamente por líquido diluyente: la resistencia eléctrica medida es
mínima y constante, cuando el orificio es atravesado por una célula sanguínea se produce un
aumento de la resistencia eléctrica y un cambio de potencial entre los electrodos que es
registrado y contado. El pulso eléctrico generado es proporcional al tamaño de la célula.

2. CARGADO DE PIPETA DE THOMA Y CÁMARA DE NEUBAUER

El recuento de células de la sangre es una práctica habitual en el laboratorio clínico, en el cual
se determina el número de eritrocitos, leucocitos y plaquetas por mm3 de sangre, con la ayuda
de la cámara de Neubauer o hemocitómetro.
Cualquier método de recuentos de células incluye 3 fases:
1) Dilución de la sangre.
2) Muestreo de la sangre diluida en un volumen determinado.
3) Recuento de las células en ese volumen.

A. CARGADO DE LA PIPETA DE THOMA

Se trata de una pipeta de vidrio diseñada especialmente para diluir una pequeña muestra de
sangre. Lleva grabadas divisiones en su superficie y consta de un bulbo en cuyo interior se
encuentra una pequeña perla de vidrio de color rojo para facilitar la homogeneización de la
sangre con el diluyente.

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Para cargar la pipeta de Thoma, se debe proceder de la siguiente manera:

 Debemos aspirar la sangre hasta la señal de 0,5 o hasta la de 1 (para obtener diluciones
al 1/200 o al 1/100 respectivamente); limpiar la punta con una gasa.

 Continuar aspirando con el líquido de dilución correspondiente hasta la señal de 101 o

11 según el modelo de la pipeta empleada. Para estos procesos nos ayudamos del
sistema de aspiración, el cual lo conectaremos a la pipeta.

 Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto.

 Finalmente descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la
cámara, depositándola entre la meseta y el cubrehematímetro y dejarla difundir por

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capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el líquido

hacia los surcos.

B. CARGADO DE LA CÁMARA DE NEUBAUER

B.1 CÁMARA DE NEUBAUER

A pesar del enorme desarrollo tecnológico que ha tenido lugar en los laboratorios
científicos, el conteo visual con hematocitómetro sigue siendo el método de conteo
más extendido desde el siglo XIX.

La cámara de recuento es un aparato de precisión hecho de vidrio óptico especial. Se

utiliza para contar células u otras partículas en suspensiones bajo el microscopio. Las
cámaras de recuento se utilizan principalmente para el análisis de sangre. Esta cámara
de recuento está adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases.
Se cubre la cámara con un cubre-cámaras que se adhiere por simple tensión
superficial.
Cuando se coloca un cubreobjetos sobre los soportes exteriores, se crea un espacio
capilar entre la cara inferior del cubreobjetos y el soporte central de la cámara de
recuento. Entre campo central y cubreobjetos ya colocado existe por tanto una ranura
de 0,1mm.

4mm

En caso de recuento de sangre, los cuadrados de las esquinas son los destinados al
recuento de leucocitos y se dividen en 16 partes denominados Terciarios. Al existir
estos en menor número que los hematíes, se necesitan menos líneas de referencia
para realizar el conteo.
El cuadrado central (que se puede ver en su totalidad con el objetivo 10X) es el
destinado al recuento de hematíes y plaquetas.

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B.2 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA CARGADO DE LA CÁMARA

Para realizar el recuento celular, por lo general se parte de una dilución previa.
Ejemplo: para contar glóbulos blancos se prepara una dilución 1:20 con líquido de
Turk. Se mezcla bien la dilución antes de cargar la pipeta y montar la cámara de
Neubauer.
Existen ocasiones en que una dilución 1:20 no es suficiente para poder contar. Por
ejemplo, en pacientes que sufren ciertos tipos de leucemias crónicas. En estos
casos se deben hacer diluciones más altas como 1:100.
Si por el contrario el contaje es muy bajo, como en las leucopenias severas, se
pueden hacer diluciones más pequeñas para concentrar la muestra. Ejemplo: se
puede hacer una dilución 1:10.
Los cambios que se realicen influyen en los cálculos.

B.3 MONTAJE DE LA CÁMARA DE NEUBAUER

La cámara de Neubauer se arma colocando en la zona central la laminilla
hematimétrica. Ambas deben estar muy limpias y secas. Para colocar la laminilla
esta, se toma por los bordes y se deja caer suavemente sobre la cámara.
Esta se llena colocando la punta de una pipeta automática o pipeta de Thoma en
un ángulo de 35° en el borde de la zona de carga. Se va descargando el líquido
suavemente y la zona de carga se llena por capilaridad. Esto se realiza por ambos
lados para cargar los dos retículos.

No se deben sobrecargar los retículos y tampoco se les debe negar líquido. La carga
debe quedar exacta. Es importante que el llenado se realice homogéneamente, es
decir, no deben quedar burbujas.
Una vez montada la cámara se deja en reposo por 2 minutos para que las células
precipiten al fondo y sea más fácil su visualización y conteo.
Pasado el tiempo del reposo se monta en la platina del microscopio de luz para su
observación. Primero se enfoca con objetivo de 10X y si es necesario luego se pasa
a 40X.
Para mejorar su visualización se disminuye el paso de la luz del microscopio. Para
ello se baja el condensador y se cierra un poco el diafragma.

B.4 ERRORES
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 Si al cargar la cámara esta queda rebasada o sobrepasada de líquido, la altura

de la cámara variará. Esto trae como consecuencia que el contaje dé más alto
de lo real. Si se intenta quitar el exceso con una gasa o algodón, esto
representa un error garrafal. Esta acción hará que las células se concentren,
aumentando el contaje.
 Si se carga deficientemente, el contaje dará por debajo de lo real.
 En caso de que se monte la cámara y se deje secar, ya no es posible realizar
el contaje debido a que emitirá resultados erróneos.
 Si antes de cargar la cámara no se mezcla bien la dilución de la muestra, se
corre el riesgo de que exista error en la lectura, pues las células no estarán
distribuidas de forma homogénea. Por tanto, habrá menor o mayor
concentración de células, dependiendo si la muestra es tomada de la superficie
del líquido o del fondo del tubo respectivamente.
 La presencia de burbujas disminuye la cantidad de líquido que debe entrar al
retículo, interfiriendo con la correcta visualización y distribución de las células.
Todo ello afecta significativamente los resultados.
 Durante el contaje, no levante la mirada del microscopio hasta culminar cada
cuadrado grande para evitar perderse.
 Un motivo de error es inclinar la cámara después de montada. Por ello se debe
subir con cuidado a la platina del microscopio.

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