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GUA DE PRCTICA

Unidad acadmica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ANLISIS CLNICOS I

Autor: Dr. Juan Manuel Parreo Tipian

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Rev. Junio 2007

INTRODUCCIN
El laboratorio clnico dispone de los mtodos de anlisis clnicos, que estudia los diversos procesos utilizados en la exploracin clnica y hace la interpretacin bioqumica y patolgica de los resultados. Por su amplitud y por la evolucin vertiginosa de especializacin se ha dividido en: hematologa, inmunohematologa, bioqumica clnica, microbiologa clnica, parasitologa clnica y lquidos biolgicos. Es por ello que para fines didcticos se desarrollar dichos campos en los 2 semestres acadmicos que corresponden a los anlisis clnicos I y II.

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I. PRCTICA No. 1: TOMA DE MUESTRA PARA LOS DIVERSOS LQUIDOS BIOLGICOS. SANGRE TOTAL, SUERO, PLASMA, SANGRE DESFIBRINADA. RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES EN SANGRE FRESCA Y COLOREADA. RESISTENCIA GLOBULAR
1.1 Marco Terico La toma de muestra de sangre o de cualquier fluido biolgico tiene importancia en la buena determinacin de los anlisis clnicos ya que constituyen el primer paso en todo el proceso dependiendo de una serie de factores. El reconocimiento de los elementos formes nos informa acerca de las caractersticas y diferenciaciones en una muestra de sangre fresca y sangre coloreada. Lquidos Biolgicos: 1. Sangre 2. Orina 3. Esputo 4. Jugo Gstrico 5. Contenido Duodenal 6. Lquido Cefalorraqudeo 7. Liquido sinovial 8. Lquidos serosos (pleural, peritoneal, articular) 9. Lquido amnitico y seminal 10. Heces Las determinaciones hematolgicas y bioqumicas pueden realizarse en sangre total, suero o plasma. 1.2 Competencias 1.-Distingue los diversos mtodos para la toma de muestra de los diversos lquidos biolgicos 2. Explica las diferencias entre los lquidos de sangre total, plasma y suero sanguneo. 3. Identifica los diversos elementos formes 4. Diferencia los elementos formes en sangre fresca y coloreada. 1.3 Materiales y Equipos 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Materiales Agujas descartables 20 G x 1 Algodn Alcohol Tubos de ensayo Viales con anticoagulantes Perlas de vidrio Matraz Pipetas Rev. Junio 2007

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Reactivos a. Anticoagulantes: De Wintrobe: Oxalato de Amonio ------ 1.2 gr. Oxalato de Potasio ------ 0.8 gr. Agua destilada ------ 100 mL. Formol al 40% ------ 1 mL. Haskins Trotman: Oxalato de potasio al 2% Citrato Trisdico al 3.8% Oxalato de Sodio al 1.34% Heparina al 0,75% EDTA 1.4 Procedimiento A. Toma de muestra. SANGRE VENOSA: 1. El paciente permanecer sentado con el brazo extendido reposando sobre la mesa apoyado sobre una almohadilla. 2. Se colocar una ligadura de goma a unos 7 cm. por encima del codo, teniendo la precaucin de no comprimir fuertemente. Esta ligadura colocada ms de 2' provoca una hemoconcentracin con acumulaciones subproductos metablicos. Se elige la vena ms prominente sobre la superficie de flexin del codo (VENA MEDIANA CEFALICA) 3. Se desinfecta la regin con una torunda de algodn empapada al alcohol yodado. 4. Se atraviesa la piel con la aguja manteniendo el bisel hacia arriba directamente sobre la vena penetrando en ella. 5. Una vez lograda la cantidad de sangre necesaria se afloja la ligadura mientras la aguja permanece aun en la vena. 6. Se saca la aguja y se aplica una torunda ligeramente humedecida en alcohol flexionando el codo. 7. Para efectuar los frotises se tomar una gota de sangre tomada directamente de la aguja antes de mezclarla con el anticoagulante sobre para objetos desengrasados y secos. En nios que no son muy palpables las venas se tomar la sangre de la vena yugular. SANGRE CAPILAR: Se obtiene por puncin cutnea y se utiliza cuando se requieren pequeas cantidades de sangre. Debe utilizarse una lanceta En la yema del dedo. En los nios en el lbulo de la oreja o bien en el taln dilatado y la sangre fluya espontneamente. Obtener los siguientes componentes:

1.

SANGRE TOTAL Y PLASMA En une vial con anticoagulante colocar 5 ml. de sangre, Mezclar Colocar en un tubo de ensayo y centrifugar 10 minutos a 1500 rpm. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

2.

SUERO En un tubo de ensayo colocar 5 mL. de sangre Centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.

3.

SANGRE DESFIBRINADA En un vaso pequeo o matraz que contiene perlas de vidrio, colocar 3 a 5 mL. de sangre sin anticoagulante. Se agita durante 15 minutos. La FIBRINA se deposita sobre estos cuerpos en forma de filamentos elsticos y blancos. El lquido que queda se denomina sangre desfibrinada y est constituida por suero y glbulos que se puede confirmar por centrifugacin. La fibrina es de color blanco y se observa lavando con agua destilada. RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES: a. EN MUESTRA FRESCA b. EN MUESTRA COLOREADA 1. Colocar 1 gota de sangre en un porta-objeto se coloca un cubreobjeto y observar. Elementos de forma discoidea de color amarillo: eritrocitos unidos formando pilas por el fenmeno de la tensin superficial, estos discos se observan de color rosado. Elementos transparentes e incoloros: Leucocitos. Plaquetas: no se visualizan por ser muy pequeos. Tamao: eritrocitos: 7.2 u leucocitos: 5 a 20 u plaquetas: 2a4u 2. Otro portaobjeto: 1 gota en uno de los extremos y con otro portaobjeto haciendo un ngulo de 45 grados hacer un frotis. Secar al medio ambiente. Se lleva a colorear con colorante Wright: con 10 a 12 gotas cubriendo el frotis. Mezclar soplando por 30 segundos. Se adhiere agua destilada, nuevamente se sopla mezclando. Dejar en reposo por 10 minutos. Lavar con agua de cao escurrir la lmina en forma vertical. Una vez seco se coloca 1 gota de aceite de cedro, elevar el condensador y observa con objetivo de inmersin. Se observa: Eritrocitos en forma discoidea con un halo en la parte central Leucocitos: Mononucleares: Monocito 16 a 22 u Linfocito 7 a 10 u Polimorfonucleares: Neutrofilos, Eosinfilos, Basfilos: 9 a 12 u 1.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 1.6 Cuestionario

1. Qu diferencia encuentra Ud. entre sangre capilar, sangre venosa y sangre arterial?
2.

3. Cul es la composicin qumica del anticoagulante de Wintrobe y como actua en la sangre


evitando la coagulacin de la misma? 4. Qu diferencias existen entre suero y plasma? 5. Cmo se observan los elementos formes en sangre fresca y sangre coloreada? Dibuje utilizando colores. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Cmo se obtiene la sangre desfibrinada?

1.7

Fuentes de informacin

1. Bernard J, Lvy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001.
2. Guerci A. Laboratorio mtodos de anlisis clnicos y su interpretacin. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985. 3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patologa estructural y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999. 4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematologa clnica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.

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II. PRCTICA No.2: HEMATIMETRIA. RECUENTO DE GLBULOS ROJOS.DOSAJE DE HEMOGLOBINA. A. HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLBULOS ROJOS.
2.1 Marco terico La hematimetra es un mtodo para contar los glbulos rojos de la sangre. La hemoglobina es una protena que se encuentra en el interior de estos elementos y su funcin fundamental es la de transportar el O2 y el CO2. El concepto de anemia descansa sobre la determinacin de estos componentes. Estas pruebas se realizan habitualmente como parte del hemograma completo. 2.2 Competencias 1. Reconoce la cmara de Neubauer y los campos donde se efectan los contajes correspondientes de los elementos formes. 2. Opera con destreza el proceso del recuento de glbulos rojos. 2.3 Materiales y equipos Materiales Camara de Neubauer Pipeta de Thoma para glbulos rojos Reactivos LIQUIDO DE DILUCIN: Las ms conocidas son las de HAYEM, GOWER y MARCANO SOLUCIN DE GOWER: Sulfato de Sodio ........ 12.5 gr. Cloruro de Sodio ......... 1 g. Bicloruro de Mercurio..... 0,5 g. Agua destilada csp ....... 200 ml. 2.4 Procedimiento 1. Aspirar sangre hasta 0.5 1 segn la dilucin 1 en 200 1 en 100. 2. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia rpidamente con papel especial o con gasa. 3. Si la sangre pasa la marca de 0.5 1 se retira por capilaridad tocando la punta de la pipeta con gasa o algodn. 4. Completar con el lquido de dilucin hasta la marca de 1.1. 5. Mientras se aspira el lquido de dilucin, se hace girar la pipeta entre el pulgar y el ndice de la mano derecha. 6. Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 2 minutos.

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7. Desechar las primeras gotas y sin perdida de tiempo tocar con una gota pequea el borde de la superficie pulimentada en que estn en contacto la cuadricular de la cmara y el portaobjeto. 8. Esta gota se insina por debajo del cubreobjeto por capilaridad. 9. La suspensin no debe escurrirse en los surcos laterales ni debe formarse burbujas de aire. 10. Dejar transcurrir 3 minutos para que se depositen los glbulos. 11. Llevar la cmara a la platina del microscopio. Iluminar bien. Comprobar si hay uniforme distribucin de hemates. 12. Efectuar el recuento con el objetivo de gran aumento, manteniendo el condensador bajo y el diafragma parcialmente cerrado, nunca se tocara el cubreobjeto con la lente, ello induce a groseros errores al modificar la posicin de los corpsculos. Para evitar toda confusin al contar los glbulos, se incluyen los hemates que tocan las lneas divisorias izquierda y superior como i estuviera dentro de los cuadrados, los que tocan los lados derecho e inferior no se toman en cuenta. No debe haber diferencia de ms de 18 unidades de nmero de glbulos rojos entre los 5 cuadrados. Clculos: Con la dilucin al 1 en 200 contar los glbulos comprendidos en 5 grupos de 16 luego se aplica la siguiente frmula: (Clculo razonado) N x 10 x 200 x 400 ------------------------- = Hemates por mm3 de sangre. 80 De donde: N: nmero total de hemates en 80 cuadraditos. 10: altura de la cmara. Para referir a 1mm3 de sangre diluida. 200: dilucin de la pipeta para referir al 1 m3 de sangre sin diluir. 400: nmero total de cuadraditos. 80: para referir al nmero de cuadraditos en el que se ha llevado acabo el recuento. O tambin: los glbulos rojos de los 5 cuadrados se le agregan 4 ceros Cifras normales: En estado de salud existe aproximadamente 5000,000 de hemates por mm3 de sangre. El nmero es un poca menor en las mujeres 4500,000 por mm3. Interpretacin: La disminucin de hemates se denomina ANEMIA u OLIGOCITEMIA y se da tambin en leucemia y despus de hemorragias. El aumento se denomina POLICITEMIA o POLIGLOBULIA. Hay poliglobulia en el recin nacido hasta 7!000,000 y va descendiendo gradualmente para llegar al del adulto hacia los 15 aos. La policitemia carece de importancia y en patologa es infrecuente. 2.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 2.6 Cuestionario 1. Cul es el fundamento del proceso de la hematimetria? 2. Cul es la composicin qumica de los lquidos de dilucin utilizados en hematimetra? F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

3.

4.

Explique mediante un esquema el reticulo de Thoma Explique la frmula utilizada en el recuento de glbulos rojos.

2.7 Fuentes de informacin 1. Bernard J, Lvy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001. 2. Guerci A. Laboratorio mtodos de anlisis clnicos y su interpretacin. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985. 3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patologa estructural y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999. 4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematologa clnica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.

B. DOSAJE DE HEMOGLOBINA
2.1 Marco terico La Hemoglobina es una molcula formada por 2 estructuras el grupo Hemo y la Globina. Todas las molculas de Hb se encuentran en el interior de los glbulos rojos y su funcin fundamental es la de transportar el O2 y el CO2. La determinacin de Hb en sangre es un parmetro que nos ayuda en el diagnstico de una anemia. 2.2 Competencias 1. Explica bioqumicamente el proceso para la determinacin de la hemoglobina. 2. Determina en el laboratorio el dosaje de hemoglobina. 2.3 Materiales y equipos Materiales Pipeta de Sahli Tubos de ensayos Equipos Espectrofotometro

Reactivos a. REACTIVO DE DRABKIN: o Bicarbonato de Sodio 1 gr. o Cianuro de Potasio 50 mg. o Ferricianuro de potasio 200 mg. o Agua destilada csp 1000ml. o Guardar en frasco oscuro, la solucin de es de color amarillo plido. Es un reactivo txico. b. SOLUCIN STANDARD: o Solucin de cianometahemoglobina titulada segn las recomendaciones del Comit Internacional para Estandarizar de Hematologa. Contiene preservantes. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

2.4 Procedimiento METODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA: 1. Rotular dos tubos con Problema y banco. Deben estar bien secos. 2. Agregar a cada uno de ellos 5ml de reactivo de Drabkin. 3. Adicionar al tubo Problema con la Pipeta de Sahl 20l de sangre (capilar o venosa) 4. Mezclar y dejar en reposo por espacio de 10 minutos. 5. Realizar la lectura del tubo Problema ajustando el instrumento a 0 de densidad ptica o el tubo Blanco. 6. La lectura obtenida llevar a la curva de calibracin o multiplicar por el factor para hallar la concentracin de hemoglobina. 7. Leer al espectrofotmetro con filtro verde 540 nm. CALCULOS: FACTOR= 15 / Absorbancia del Standard Hb (g/100ml) = Absorbancia de la muestra x FACTOR FACTOR DE CALIBRACION: Se sigue el siguiente cuadro: TUBO# STANDARD SOL. DRABKIN (mL) (mL) 1 6.0 2 4.5 3 3.0 4 1.5 Blanco 0.0

0.0 1.5 3.0 4.5 6.0

CONCENTRACIN (gr %) 20 15 10 5 0

El quinto tubo sirve para llegar a 0 con el espectrofotmetro. Aplicando la frmula de concentracin sobre lectura para cada tubo y sacando el promedio tenemos el factor % en vista de que el standard viene en g %. SE realizan 4 divisiones y luego se obtiene el factor promedio, que en este caso es factor por 100. VALORES NORMALES: Nacimiento 3 meses Adulto 14 - 24 g/100 mL 10.5 - 14.5 g/100 mL sexo femenino 12-16 g/100 mL sexo masculino 14-18 g/100 mL

INTERPRETACIN: AUMENTO: hipercromemia: nios recin nacidos, personas que viven en altura, procesos hematopoyticos. DISMINUCION: Hipocromemia u oligocromemia: anemias 2.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

2.6 Cuestionario 1. Explique el fundamento del dosaje de Hemoglobina 2. Qu importancia clnica tiene la determinacin de la hemoglobina? 3. Cmo se puede hallar el valor del hematocrito a partir de la determinacin de la hemoglobina? 2.7 Fuentes de informacin 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 7 ed. Buenos Aires: Panamericana; 1997. 2. Gradwhol. Mtodos y diagnstico del laboratorio clnico. 8 ed. Buenos Aires: Mdica Panamericana; 1986. 3. Guerci A. Laboratorio. Mtodos de anlisis clnicos y su interpretacin. 3 ed. Buenos Aires: Librera El Ateneo; 1985. 4. Krupp M. Manual de diagnstico clnico y de laboratorio. Mxico DF: Manual Moderno S.A.; 1986.

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III. PRCTICA No. 3: VELOCIDAD DE HEMATOCRITO. MICROHEMATOCRITO A. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR

SEDIMENTACIN

GLOBULAR.

3.1 Marco terico Prueba de laboratorio inespecfico importante para evaluar el curso de una enfermedad; es inespecfico porque no sirve para el diagnstico etiolgico de una enfermedad. Esta sencilla prueba es utilizada como ndice de la presencia activa de enfermedades diversas 3.2 Competencias 1. Utiliza con precisin el tubo de Wintrobe para la lectura del hematocrito y la eritrosedimentacin. 2. Realiza la lectura de la velocidad de sedimentacin utilizando la escala adecuada. 3.3 Materiales y equipos Materiales Tubo de Wintrobe Reactivos Anticoagulante de Wintrobe

3.4 Procedimiento A. METODO DE WINTROBE Y LANDSBERG La eritrosedimentacin se determina con el tubo de Wintrobe en la siguiente forma: Recoger 5 mL. de sangre con anticoagulante. Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca "O" de sangre utilizando la pipeta de Wright y antes de que la muestra tenga ms de dos horas de extrada. Mantener el tubo en posicin vertical tapar con un capuchn de goma y esperar UNA HORA para hacer una sola lectura o con intervalos frecuentes para expresar en grficas. VALORES NORMALES: Hombre: 1 - 11 mm Mujeres 1 - 15 mm Determinada la velocidad de sedimentacin puede centrifugarse a 3000 rpm durante 30 minutos para comprobar el volumen globular. En esta forma se corrige la eritrosedimentacin si existen alteraciones ocasionadas por anemia. En el mismo tubo puede medirse el volumen de leucocitos, plaquetas y el ndice ictrico. B. METODO DE CUTLER F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Se emplea el tubo de sedimentacin de Cutler que tiene 1 ml. de capacidad, 5mm de dimetro interno y est graduado en 40 divisiones con el "O" a nivel del "Y que representan milmetros. Procedimiento: Llenar el tubo con sangre con anticoagulante. Colocar en posicin vertical y hacer la lectura a la hora, cada 5 minutos para construir la grfica. Es mejor trabajar con sangre citratada en la siguiente forma: Con una jeringa de 2 mL. aspirar 0.1 mL. de solucin de citrato de sodio al 3.8 g % y completar a 1 mL con sangre venosa. Mezclar llenar el tubo de Cutler, tapar con un tapn de goma y mantener en posicin vertical. En el nuevo tubo modificado de Cutler, se deposita 0.5 ml de anticoagulante citrato de sodio 3.8% y se completa a 5ml con sangre venosa en la marca "O". la cantidad insuficiente de citrato aumenta la VSG y un exceso disminuye o retarda. Valores normales: Las cifras normales a la hora de lectura son de: 2 - 10 mm para mujeres 2 8 mm para hombres. Estas cifras deben estar en lneas casi horizontal cuando se grfica a intervalos de 5 minutos. El carcter de la curva en estado patolgico se interpreta segn su forma: Si la lnea es diagonal, apartndose ligeramente de la curva normal, indica proceso leve o en quietud. Cuando la curva sigue diagonal con gran descenso indica estado morboso activo o recadas de mucho cuidado. Si la curva es caso vertical se trata de una enfermedad muy grave. Se debe indicar el mtodo, tiempo en minutos, ndice de sedimentacin en mm y el carcter de la grfica. INTERPRETACION CLINICA: Prescindiendo del embarazo, la determinacin de la VSG. Est aumentada en los estados patolgicos mas dispares, sin ser esto especfico de ninguno en particular. La VSG aumenta sobre todo, cuando existe un foco inflamatorio en estrecha conexin con el rbol vascular; por ello son especialmente aceleradores los focos vecinos a las serosas (Infarto al miocardio, focos pulmonares, etc.) Todas las infecciones generales de cierta intensidad, salvo raras excepciones evolucionan con VSG aumenta principalmente cuando coinciden los perodos de fiebre y anemia. En las inflamaciones locales agudas (por ej. apendicitis) la velocidad no esta alterada, sobre todo en las fases iniciales. Las neoplasias malignas al principio no modifican la eritrosedimentacin, pero si la aceleran cuando hay lsis de los tejidos derivados de la proliferacin neoplsica. La VSG est ms o menos aumentada en todos los tipos de anemias. En el curso del embarazo la VSG se acelera, debido a una hemodilucin de la sangre circulante. En la mujer normal la menstruacin produce variaciones muy ligeras de la velocidad. Por ltimo los focos spticos muy aislados del torrente sanguneo (caries dentarias, sinusitis, amigdalitis crpticas) apenas aumentan la VSG. 3.5 Resultados F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 3.6 Cuestionario 1.- Cul es la importancia clnica de la determinacin de la velocidad de sedimentacin? 2.- Qu diferencias existen en la utilizacin de los diversos mtodos para determinar la eritrosedimentacin? 3.- Cul es la importancia clnica de la velocidad de sedimentacin? 4. Por qu la diferencia de valores en la eritrosedimentacin en varones y en mujeres? 3.7 Fuentes de informacin 1. Bernard J, Lvy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001. 2. Guerci A. Laboratorio mtodos de anlisis clnicos y su interpretacin. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985. 3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patologa estructural y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999. 4. 4.Wintrobe M, Maxwell M. Hematologa clnica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.

B. HEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO
3.1 Marco terico El hematocrito es otra de las pruebas de laboratorio que ayuda en el diagnstico de las anemias corroborando los otros parmetros como el recuento de glbulos rojos y la hemoglobina. 3.2 Competencias 1.- Determina los valores del hematocrito por el mtodo correspondiente. 2.- Realiza el procedimiento en el laboratorio del hematocrito. 3.3 Materiales y equipos Materiales Tubo de Wintrobe Equipos Centrifuga para capilares Reactivos Anticoagulante de Wintrobe

3.4 Procedimiento A. Toma de muestra. SANGRE VENOSA: La Sangre venosa obtenida y que se encuentra mezclada con el anticoagulante de Wintrobe llenar con la pipeta capilar el tubo de Hematocrito hasta la marca 10. Centrifuga a 3,000 rpm durante 30 minutos. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Clculos: Para calcular el Hc la altura de la columna de hemates sedimentados dado en mm se multiplica por 10. Valores normales: Mujeres: 42 mL% Hombres: 45 mL% Interpretacin Estn disminuidas en las anemias, en los casos de hemodilucin tales como la hidremia fisiolgica (exceso de agua en la sangre) del embarazo. Es alto en las poliglobulias genuina a una hemoconcentracin debida a considerables perdida de agua como en la deshidratacin, quemaduras y schock. SANGRE CAPILAR: MICROHEMATOCRITO: En pediatra se esta difundiendo el uso del microhematocrito que utiliza sangre obtenida por puncin digital. Se emplea el mtodo DE GUEST-WICHSEBAUN: se llena con sangre capilar. MATERIALES Y REACTIVOS Tubos capilares de 7 cm de largo por 1mm de dimetro interior cubiertos interiormente con heparina al 1/1000 se tapona con arcilla moldeable (plastilina). PROCEDIMIENTO: 1. Se llena con sangre por capilaridad las tres cuartas partes del capilar. 2. Centrifugar y leer sobre los normogramas que viene en cada equipo. Cuando no se dispone de centrifugadora de microhematocrito se pone el tubo dentro de un tubo de ensayo y se centrifuga por 10 minutos a 2000 rpm. Luego se aplica la siguiente formula: a - x 100 = ml% b a= longitud de la columna roja en ml b= longitud total de sangre que llena el tubo capilar 100= para referirse al Hc en ml% 3.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 3.6 Cuestionario 1. Qu diferencias en los valores se pueden dar entre el microhematocrito y el hematocrito de Wintrobe? 2. Qu diferencias existen entre la eritrosedimentacin y el hematocrito? 3. Cmo se hallan las constantes corpusculares. Explique las frmulas correspondientes? 3.7 Fuentes de informacin 1. Bernard J, Lvy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001. 2. Guerci A. Laboratorio mtodos de anlisis clnicos y su interpretacin. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patologa estructural y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999. 4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematologa clnica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.

IV. PRACTICA No. 4: LEUCOMETRIA: RECUENTO DE GLBULOS BLANCOS


4.1 Marco terico La leucometra es una de las tcnicas para realizar el recuento de los leucocitos, que corresponde al nmero de elementos celulares por unidad de volumen presente en una muestra de sangre despus de provocar la lisis de los hemates. Diversas son las causas o patologas que pueden aumentar (Leucocitosis) o disminuir (Leucopenia) los glbulos blancos e influenciar en el diagnostico clnico. 4.2 Competencias 1. Conoce el procedimiento para el recuento de glbulos blancos. 2. Diferencia los recuentos de glbulos blancos y rojos. 3. Aplica formulas para el recuento de glbulos blancos. 4.3 Material y equipos Materiales Pipeta de Thoma para el recuento de Leucocitos Reactivos Lquido de Turck: Violeta de genciana cido Actico glacial Agua destilada csp.

...1 mL. .. 3 mL. ...100 mL.

4.4 Procedimiento 1. Aspirar sangre hasta 0.5 1 (1:20 1:10) segn la dilucin en la pipeta de Thoma. Limpiar la punta para eliminar el exceso de sangre. 2. Completar con diluyente hasta 11, haciendo 9 girar la pipeta. 3. Dejar en reposo de 5 a 15 minutos para la completa destruccin de los hemates y perfecta tincin de los ncleos leucocitarios. 4. Cargar la cmara cuenta glbulos, esperar 5 minutos para que se depositen los leucocitos sobre el retculo. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

5. Llevar a la platina del microscopio, comprobar con dbil aumento la uniforme distribucin celular y verificar el recuento. Con el objetivo de menor aumento contar los leucocitos contenidos en los 4 campos cuadrados situados en las esquinas de retculo. Se consideran los elementos que se encuentran en los interiores de la derecha y de arriba, pero se omiten las que se hallan sobre la lnea de izquierda. Se volver a repetir el procedimiento si la diferencia entre 2 cuadrados sea mayor de 8 clulas. Clculos: La cantidad encontrada en los 4 cuadrados se divide entre 2 y al resultado se aade 2 ceros (o se multiplica por 50) Tambin: N x 10 x 20 = Leucocitos por mm3 de sangre N = Total de leucocitos en 4 cuadrados dividido entre 4 10 = par referir al mm3 20 =.dilucin cuando se aspira sangre hasta 0.5 Valores normales: 6,000 a 9.000 por mm3 de sangre. Interpretacin: La disminucin de leucocitos se denomina LEUCOPENIA y se presenta en algunas enfermedades infecciosas como ocurre en la angina agranuloctica o granulocitopenia idioptica, anemia perniciosa, clorosis, mala nutricin, fiebre tifoidea, malta, virales: rubola, sarampin, hepatitis, parotiditis, etc. El aumento de denomina LEUCOCITOSIS: Existe una leucocitosis fisiolgica con neutrofilia entre 12,000 y 14,000 en el recin nacido, durante el embarazo en el 9 mes, durante el parto, durante la digestin. De orden patolgico: la leucocitosis se debe a la quimiotaxis y al estimulo de los rganos hematopoyticos (la quimiotaxis es la propiedad que tiene ciertos agentes de atraer o repeler clulas vivas) Una inflamacin tiene poder quimiotctico de atraer muchos leucocitos, lo mismo ocurre con las bacterias y alguno txico se que atraen leucocitos a la circulacin general. 4.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 4.6 Cuestionario 1. Cul es el fundamento del reactivo de Turck en el recuento de leucocitos? Indique que otros lquidos de dilucin se emplean para el recuento de leucocitos y su composicin qumica. 3. Qu importancia clnica tendra el recuento de leucocitos?

2.

4.7 Fuentes de informacin 1. Bernard J, Lvy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001. 2. Guerci A. Laboratorio mtodos de anlisis clnicos y su interpretacin. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985. 3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patologa estructural y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999. 4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematologa clnica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

V.

PRCTICA No. 5: FRMULA LEUCOCITARIA. HEMOGRAMA DE SCHILLING

5.1 Marco terico Es el mtodo analtico ms frecuentemente solicitado en la prctica mdica diaria, no solo para el diagnstico, valoracin y seguimiento de las diversas patologas hematolgicas, sino tambin de las que no lo son, pero que curan con alguna alteracin valorable del mismo. Su facilidad de realizacin y rpida modificacin en muy diversas circunstancias fisiolgicas y patolgicas hacen tambin de l un mtodo analtico de prctica casi obligada. El hemograma incluye la cuantificacin de los elementos formes que contiene la sangre por unidad de volumen, recuento porcentual de los leucocitos(habitualmente compuestos slo por linfocitos, monocitos, y granulocitos, neutrfilos, eosinfilos y basfilos), adems informa sobre valores o ndices relacionados con el contenido hemoglobnico de los glbulos rojos y el tamao de stos y el de las plaquetas. La formula leucocitaria indica la presencia relativa de los diferentes tipos de leucocitos en la sangre perifrica y se expresa en porcentajes sobre el total. 5.2 Competencia 1. Utiliza el colorante adecuado para la identificacin de los elementos formes en sangre coloreada. 2. Identifica los diversos tipos de leucocitos de acuerdo a su forma, tamao y color. 3. Aplica el mtodo ms conveniente para el recuento de los diversos tipos de leucocitos. 5.3 Materiales y equipos Materiales Laminas portaobjetos Reactivos Colorantes: En general los colorantes hematolgicos que ms se utilizan son los derivados de Rowanowsky, entre los que tenemos el de Giemsa, Leishman, Wright y Hastings. Colorante de Wright: Es una combinacin especial a base de azul de metileno y eosina que, para los trabajos de rutina da excelentes resultados. Rev. Junio 2007

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Pesar 0,4g. de colorante Wright en polvo, agregar 194 mL de alcohol metlico libre de acetona, aadir 6 ml. de glicerina. Agitar enrgicamente. Conservar en frasco oscuro agitando un minuto diario durante una semana. Finalmente filtrar cada vez que ha de usarse, despus de cumplida la semana. Dura seis meses. 5.4 Procedimiento ESTUDIO CITOMORFOLOGICO DE EXTENDIDOS COLOREADOS: Mtodos para el examen del extendido sanguneo en el recuento diferencial: a. Observacin reglada en 4 campos b. Observacin reglada en dos campos En indispensable para obtener el porcentaje de cada tipo de leucocito que estos se hallen uniformemente distribuidos en el extendido sanguneo. Como los granulocitos generalmente estn en los mrgenes del extendido y los linfocitos en el centro, se recomienda el mtodo aconsejado por Schilling, que consiste en tomar 4 puntos marginales distintos recorriendo el campo en zigzag desde el borde hacia la parte central y contar 25 o 50 elementos en cada uno de los 4 puntos. Debe anotarse el tamao celular; en el ncleo: forma, posicin, color, estructura de la cromatina, membrana nuclear, presencia o ausencia de nucleolos; en el citoplasma: cantidad relativa(cociente ncleo citoplasma), color, presencia o ausencia de zona perinuclear clara y caractersticas de los grnulos: nmero, color, tamao y distribucin, granulacin txica, vacuolas o degeneracin del citoplasma. FORMULA LEUCOCITARIA La formula leucocitaria permite conocer la cantidad de cada tipo de clula, y para ello se procede a contar un nmero determinado de leucocitos (100-200 ms), en un frotis bien coloreado, anotando por separado cada variedad celular. Procediendo en estar forma, la llamada FORMULA RELATIVA, o sea el porcentaje de cada tipo de leucocitos. La condicin indispensable para justipreciar el porcentaje de cada tipo de leucocitos ms bien en la mitad de la extensin la tcnica ms recomendable para obviar el inconveniente anotado, es de recorrer el preparado en la forma que aconseja SCHILLING, siguiendo el mtodo serpenteando los cuatro campos. HEMOGRAMA DE SCHILLING Schilling clasifica a los neutrfilos en dos grupo fundamentales: neutrfilos no lobulados e incompletamente lobulados neutrfilos completamente lobuladados (2 ms lbulos) En el primer grupo incluye: los mielocitos, las formas juveniles o metamielocitos y las formas en banda o cayado. El hemograma normal segn Schilling es el siguiente: Tipo de leucocitos Neutrfilos Mielocito Metamielocito Ncleo en cayado Ncleo segmentado Porcentajes 0 0-1 3-5 55-65 2-4 0-1 20-30 4-8 Rev. Junio 2007

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Eosinfilos Basfilos Linfocitos Monocitos F-CV3-3B-2

INTERPRETACION: Se habla de desviacin hacia la izquierda del hemograma cuando aumentan las formas no segmentadas o inmaduras de los neutrfilos; y se dice que hay desviacin hacia la derecha, cuando aumentan las clulas maduras o adultas. As mismo se determinaran los posibles aumentos de los dems leucocitos denominndose eosinofilia, basofilia, linfocitosis, monocitosis. 5.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 5.6 Cuestionario: 1. Esquematice a travs de dibujos los diferentes tipos de leucocitos. 2. En que patologas se presentan linfocitosis, monocitosis, neutrofilia, eosinofilia y basofilia? 3. Cual es la diferencia entre el Hemograma de Schilling y el Esquema de Arneth? 5.7 Fuente de informacin: 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos Aires: Mdica panamericana; 1999. 2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005. 3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid: Masson; 2005. 4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007. 5. Turgeon ML. Hematologa clnica. Teora y procedimientos. Mxico D.F.: Manual moderno, 2006. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

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VI.PRCTICA No. 6: RECUENTO DE PLAQUETAS, RETICULOCITOS Y RECUENTO DE EOSINFILOS A. RECUENTO DE PLAQUETAS

RECUENTO

DE

6.1 Marco terico El recuento de plaquetas es el nmero de esos elementos (Trombocitos) por milmetro cbico de sangre. La actividad plaquetaria esencial es la de conformar el tapn hemosttico primario en los mecanismos de la coagulacin (Hemostasia). La visualizacin de una extensin de sangre permite descubrir ciertas alteraciones de la serie plaquetaria y su cuantificacin para determinar si existe una disminucin (Trombocitopenia) un aumento (Trombocitosis). 6.2 Competencias 1.- Distingue los mtodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas 2.- Aplica el mtodo ms conveniente para el recuento de plaquetas 6.3 Materiales y equipos Materiales Pipeta de Thoma para glbulos rojos Camara de Neubauer Laminas portaobjetos Reactivos 1. Reactivo de Sulfato de Magnesio al 14% 2. Colorante de Wright 3. Reactivo de Rees-Ecker: Citrato de sodio 3.8 gr. Formaldehdo al 40% 0.2 mL. 4. Azul brillante de cresil 0.05 gr. Rev. Junio 2007

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Los mtodos para el recuento se pueden clasificar en: METODOS INDIRECTOS: Se basa en determinar la relacin entre plaquetas y eritrocitos M. de Fonio M de Clef M. de Demeshek METODOS DIRECTOS: Se basa en contar directamente las plaquetas de la sangre diluida en una cmara hemocitomtrica. M. Rees - Ecker M. Wright 6.4 Procedimiento METODO DE FONIO: 1. Sobre la yema del dedo limpio, seco y desinfectado colquese una gota grande de solucin esterilizado de sulfato de magnesio al 14% para que la sangre no tome contacto con el aire. A travs de la gota puncionar la piel con una lanceta de tal manera que salga espontneamente una pequea gota de sangre a razn de 1:5 aproximadamente. 2. Mezclar con el borde de un portaobjeto para homogeneizar e impedir la aglutinacin de las plaquetas. 3. Con la misma lanceta llevar una gota de la suspensin sobre un portaobjetos y verificar el frotis como si tratara de sangre sola. Al sacar la preparacin toma un brillo aterciopelado y casi incoloro al trasluz, teir con Whright en la forma habitual dejando actuar el colorante un tiempo mayor de dedicado a la formula leucocitaria. 4. Con objetivo de inmersin y aceite de cedro contar en varios campos simultneamente los glbulos rojos y las plaquetas hasta completar 1000 a 2000 hemates. CALCULOS Para los clculos se multiplica el nmero de plaquetas, contadas en el frotis, por el nmero de hemates por mmc. y dividir entre el nmero de eritrocitos contadas en la extensin. Hematimetria: 4'8000,0000 por mm.c. 50 x 4'800,000 ----------------- = 240,000 plaquetas por mm3. 1000 METODO DE REES-ECKER: Se debe operar con suma rapidez y limpieza para evitar la aglutinacin y para no confundir impurezas con los trombocitos. 1. Aspirar lquido de dilucin hasta la marca de 0.5 con la pipeta para glbulos rojos 2. Llenar con sangre capilar hasta completar con lquido de dilucin hasta la marca de 101. 3. Dejar en reposo por espacio de 5 minutos. 4. Cargar la cmara cuenta glbulos y dejar en reposo de 15 a 20 minutos para que sedimente las plaquetas. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

5. Con el objetivo potente contar en todo el cuadrado central de retculo para hemates (25 cuadrados de 16 cuadraditos cada uno) CALCULOS: N X 10 x 200 = plaquetas por mm3. N : numero de plaquetas en el mm central de retculo 10 : para referir al 1 mm3 200 : dilucin cuando se toma sangre hasta 0.5 Las plaquetas se presentan redondeadas, ovales, alargadas, en forma de cono o polidricas e irregulares. Se las ve muy refringentes, plateada, veces de color lila. CIFRAS NORMALES: 50,000 a 400,000 plaquetas por mm3 de sangre INTERPRETACION: Las variaciones fisiolgicas se presentacin la ingestin de alimentos, actividad muscular, menstruacin, etc. TROMBOPENIAS: Por debajo de 30,000 dan manifestaciones hemorrgicas. Estados alrgicos, anemia aplstica, leucemia linftica, intoxicaciones crnicas, atrofia de la medula sea, prpura trombopnica esencial. TROMBOSIS O TROMBOCITOSIS: (escasa significacin clnica) hemorragias copiosas, anemia poshemorrgica, despus de las intervenciones quirrgicas, anemia hemoltica, policitemia genuina, leucemia mieloide crnica, traumatismo, esplenomegalia, infecciones crnicas, fiebre reumtica. 6.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 6.6 Cuestionario: 1. Mencione los principales mtodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas. 2. Explique el fundamento del mtodo de fonio y mencione los valores normales. 3. Explique el fundamento del mtodo de Rees-Ecker 6.7 Fuentes de informacin: 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos Aires: Mdica panamericana; 1999. 2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005. 3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid: Masson; 2005. 4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007. 5. Turgeon ML. Hematologa clnica. Teora y procedimientos. Mxico D.F.: Manual moderno, 2006. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

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B. RECUENTOS DE RETICULOCITOS
6.1 Marco terico Son hemates jvenes inmaduros pero de tamao superior (macrocitos), reconocibles en las extensiones de sangre por tincin especial, se observa en las anemias hemorrgicas y hemolticas. 6.2 Competencias 1. Utiliza el mtodo en forma conveniente para el recuento de reticulocitos 2. Realiza el recuento de reticulocitos y aplica los clculos correspondientes. 6.3 Materiales y equipos Materiales Laminas portaobjetos Reactivos Segn el mtodo humedo en tubo: Azul brillante de cresil 0.25 gr. Citrato de Sodio 0.1 gr. Formol al 40% 0.05 mL. Soluc. Fisiolgica cps. 25 mL. Segn El mtodo de Wolfer: Azul cresil brillante.... 0.5 gr. Alcohol absoluto........... 100 mL

6.4 Procedimiento METODO HUMEDO EN TUBO: En un tubo de Kahan se mezclan 2 gotas de sangre venosa o capital y 2 gts del reactivo. Se tapa el tubo y se mantiene a la temperatura ambiente por el trmino de 2 a 30 minutos. Luego se extrae 1 gota de la mezcla y se hace un frotis delgado, se seca al aire y se prctica el recuento. Clculos: F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Se cuentan 1000 hemates anotando todos los que reticulos. Dividir por 10 para obtener el porcentaje. Ej. 20/10 = 2%

tienen filamentos azules de

METODO DE WOLFER Procedimiento: 1. Sobre portaobjetos hace extensiones de la solucin de azul cresil brillante. Secar al aire. 2. Depositar 1 gota de sangre capilar y hacer un frotis sobre el cresil, cuyo alcohol se ha evaporado. Dejar en reposo 10 minutos. 3. La sustancia retculo grnulo filamentoso de los reticulocitos se tie de azul claro con este colorante supravital y ofrece el aspecto de madeja. 4. Mientras mas tenues son las capas de la solucin alcohlica y de las sangres mejor ser la lectura. 5. Despus del desecado las muestras son ligeramente teidas por Wright 6. Se observa con objetivos de inmersin. Valores Normales Adultos: 0.5 -2.5% Nios: 5-10% Interpretacin: Aumento: Recin nacidos hasta 2 a 5 das despus del nacimiento. Anemias hemolticas constitucionales Anemias que evoluciona con regeneracin por tratamiento especfico de vit. B 12 en la anemia perniciosa, Acido flico en anemia megaloblsticas del sprue Hierro, anemia microctica e hipocrmica ferroprivas. Anemia hemoltica hereditaria (10-20%). Cuando la sangre se regenera rpidamente despus de una hemorragia (aumenta hasta constituir el 50% de hemates) Disminucin Anemia aplstica (falta absoluta) anemias que evolucionan con insuficiencia e hiperactividad funcional de la medula sea (anemia perniciosa muy avanzada) 6.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 6.6 Cuestionario 1. Cul es la importancia clnica del recuento de reticulocitos? 2. Cules son los clculos para el recuento de reticulocitos? 3. Mencione y explique los mtodos para el recuento de reticulocitosis. 6.7 Fuentes de informacin: 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 7 ed. Buenos Aires: Panamericana; 1997. 2. Gradwhol. Mtodos y diagnstico del laboratorio clnico. 8 ed. Buenos Aires: Mdica Panamericana; 1986. 3. Guerci A. Laboratorio. Mtodos de anlisis clnicos y su interpretacin. 3 ed. Buenos Aires: Librera El Ateneo; 1985. Krupp M. Manual de diagnstico clnico y de laboratorio. Mxico DF: Manual Moderno S.A.; 1986. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

C. RECUENTO DE EOSINOFILOS
6.1 Marco terico Serie celular que pasa por las mismas etapas que la serie neutrfila polimorfonuclear. El recuento es de importancia clnica para determinar las eosinofilias caractersticas en enfermedades alrgicas y parasitarias. 6.2 Competencias 1. Desarrolla el mtodo de Dunger para el recuento de eosinfilos. 2. Efecta los clculos correspondientes para el recuento de eosinfilos 6.3 Materiales y equipos Materiales Cmara de Neubauer Pipeta de Thoma para glbulos blancos Reactivos REACTIVO DE DUNGER Solucin acuosa de Eosina al 2% ------------- 15 mL. Acetona -------------------------- 10 mL. Agua destilada csp. ----------------------- 100 mL. Debe conservarse bien tapado y a baja temperatura. La solucin de Dunger lisa los hemates y leucocitos pero los eosinfilos son ms resistentes. La eosina tie de amarillo brillante los grnulos eosinfilos y la acetona disminuye la tendencia de los eosinfilos a romperse. El lquido puede conservarse durante dos semanas en la nevera. 6.4 Procedimiento METODO DE DUNGER: F-CV3-3B-2

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Seguir la misma tcnica que para el recuento de Leucocitos con dilucin 1/20 (marca 0.5) y los clculos son iguales. CIFRAS NORMALES: Hasta 500 eosinfilos EOSINOFILIA: En infestaciones parasitarias y afecciones alrgicas, asma bronquial, urticarias se llegan a contar hasta 3000 eosinfilos raramente puede encontrarse cifras mayores de 10,000 por mm3. EOSINOPENIA: Provocada por la hormona adrenocorticotrofica (ACTH), ciertosesteroides de la corteza suprarrenal y la adrenalina. La misin exacta de los eosinfilos en la reaccin inmunolgica alrgica no est determinada. Se supone que los complejos Ag-Ac o la histamina que estn implicados en estas reacciones, atraen los eosinfilos por quimiotactismo. 6.5 Resultados: Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 6.6 Cuestionario 1. Explique el fundamento del recuento de eosinfilos? 2. Cul es la interpretacin clnica de los eosinfilos? 3. En que casos se solicita un recuento de eosinfilos por parte del profesional mdico? 6.7 Fuentes de informacin: 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos Aires: Mdica panamericana; 1999. 2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005. 3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid: Masson; 2005. 4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007. 5. Turgeon ML. Hematologa clnica. Teora y procedimientos. Mxico D.F.: Manual moderno, 2006. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

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PRCTICA No. 7: TIEMPO DE COAGULACIN, TIEMPO DE SANGRIA, TIEMPO DE PROTROMBINA, DOSAJE DE FIBRINGENO
7.1 Marco terico Debido a la enorme complejidad de todos los procesos que intervienen en el hecho hemosttico, resulta imposible determinar la verdadera capacidad hemosttica in vivo de un individuo mediante la realizacin de pruebas en el laboratorio, llevada acabo, adems bajo condiciones artificiales. Sin embargo, la realizacin y valoracin de unas cuantas tcnicas puede ser suficientes muchas veces para presuponer, con un alto margen de seguridad, la existencia, o no de un riesgo hemorrgico. Atendiendo a los puntos fundamentales de la fisiologa de la coagulacin de la sangre, se deduce que la valoracin rutinaria de la hemostasia debe englobar por lo menos la prueba de Quick, el tiempo de coagulacin sangunea, cuantificacin del fibringeno y de las plaquetas. 7.2 Competencias 1. Aplica las tcnicas apropiadas para determinar el tiempo de coagulacin, tiempo de sangra y de protrombina. 2. Hace la interpretacin clnica y correlacionar las coagulopatias. 3. Utiliza el mtodo espectrofotomtrico para el dosaje de fibringeno. 7.3 Materiales y equipos Materiales Laminas portaobjetos Cronometro Tubos capilares Tira de papeles secantes Tubos pequeos Tubo cnico graduado Equipos Espectrofotometro Reactivos Anticoagulante de Wintrobe Reactivo de Tromboplastina Rev. Junio 2007

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7.4 Procedimiento 1. TIEMPO DE COAGULACIN: A. METODO DE BURKER: 2' - 8' 1. En una lmina portaobjeto colocar 2 gotas de sangre 2. Dejar en reposo 3'. Con el estilete a la 1ra. gota levantar c/ 30". Hasta formar la FIBRINA. 3. Luego de 30" pasar a las 2da gota. Levantar hasta formar la FIBRINA. 4. Anotar dicho tiempo. NOTA: El ndice de coagulacin est dado por el tiempo trascurrido entre colocar la gota y la formacin de fibrina B. METODO DE SABRAZE: 3' - 8' 1. 3 tubos capilares (8 en. de largo) 2. Obtener sangre capilar detectar la 2 primeras gotas en la 3ra cargar los capilares. 3. Se deja en reposo 3'. Luego romper su trozo c/ 30' hasta que al romper se forme un filamento de FIBRINA. Toma el tiempo. C. METODO DE LEE Y WHITE: 5' - 10' 1. Sangre venosa (3,5 ml) verter en 2 tubos 1 mL de sangre. 2. Anotar el tiempo cuando la sangre entra en la jeringa. 3. La indica uno de los tubos c/ minuto. ngulo de 45 hasta que la sangre coagulada no se desplace. Anotar el tiempo. 4. Para el otro tubo hacer la misma operacin. Anotar el tiempo, se recomienda reportar la lectura del 2do tubo, porque la agitacin y manipulacin aceleran la coagulacin. 2. TIEMPO DE SANGRIA O DE HEMORRAGIA METODO DE DUKE: 1' - 3' 1. Desinfectar el lbulo de la oreja y pinche con una profundidad de 3 mm. 2. C/30" lmpiese con papel de filtro la gota de sangre que fluye el papel no debe rozar la piel. 3. Cuando ya no haya hemorragia toma el tiempo no debe haber menos de 2 manchas ni ms de 6. 4. Se recomienda hacer 2 determinaciones. NOTA: El lapso transcurrido entre la aparicin de la 1ra. gota y la toma de la ltima es el tiempo de sangra. 3. TIEMPO DE PROTOMBINA METODO ORTHO-BRAIN 1. En un tubo de prueba de 13 x 100 mm colocar 0,5 ml de solucin de oxalato de sodio 0.1 M y adicionar 4.5 mL de sangre venosa recin obtenida, mezclar y separar el plasma mediante centrifugacin. 2. En otro tubo de 13 x 100 mm depositar 0.2 ml de tromboplastina activada + cloruro de calcio 0.02 M. 3. Incubar los tubos del plasma y del reactivo a 37oC por 2'. 4. Con una pipeta terminal de un mL graduada en dcimos, medir 0.1 mL de plasma oxalatada y agregar rpidamente al tubo que contiene el reactivo de tromboplastina, el agregado debe hacer desde una distancia de 2 cm. soplando el contenido, simultneamente poner en marcha el cronmetro, el contenido debe mezclarse por movimientos laterales del tubo dentro del agua a 37oC. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

5. Observar la formacin de una masa de coagulo que es el final de la reaccin de protombina. Valores normales: 10 segundos a 12 segundos 4. VALOR PROTOMBINICO O INDICE PROTROMBINICO Se obtiene dividiendo el Tiempo de Protrombina Normal entre el tiempo de Protombina encontrado y multiplicado por 100. V.P. = T.P.N. x 100 T.P.E.

4. TIEMPO DE RETRACCION DEL COAGULO La retraccin del coagulo es la contraccin espontnea de la sangre total, obtenindose una masa slida con todo los componentes sanguneos y la exudacin de suero; dicha actividad es funcin retrctil de las plaquetas y del Fibringeno para formar fibrina. METODO DE MAC FARLAND. El mtodo utiliza un tubo de centrfuga graduada en divisiones de 0.1 mL; un alambre de 1 mm de espesor, 12 cm. de longitud con un ensanchamiento en forma de botn de 1.2 cm. de dimetro en un extremo; un corcho que se adapta a la boca del tubo, el corcho debe tener un orificio para dar paso al alambre del extremo opuesto al botn. 1. En un tubo de centrfuga graduado depositar 5 mL de sangre venosa recin extrada. 2. Colocar la varilla de alambre de modo que quede el ensanchamiento dentro de la sangre, adopte el corcho en la boca del tubo. 3. Llevar el tubo a un bao de agua a 37 oC y observar de tiempo la coagulacin de la sangre. 4. Permanezca el tubo dentro del agua a 37oC por una hora despus de la formacin del coagulo. 5. Con cuidado retirar el alambre con el coagulo hacia arriba, dejar escurrir el suero dentro del tubo por 1 2 minutos. 6. Leer el volumen del suero que ha quedado en el tubo sobre la escala graduada. Clculos: El tiempo de retraccin del coagulo se expresa en funcin del volumen del suero obtenido, multiplicado por 100 y dividido entre el volumen de sangre total obtenido. Ejemplo: Se ha obtenido 5 ml de sangre venosa y despus de coagular ha dejado 3 ml de suero, la retraccin porcentual ser: 3 x 100 = 60% 5 Valores normales: De 44 - 67% Interpretacin Clnica: Est aumentada en las anemias por disminucin del volumen celular, en la trombocitopenia, eritremia y en enfermos con defectos en la coagulacin. 5. DOSAJE DE FIBRINOGENO Constituye el 5% de las protenas plasmticas. Es una protena soluble en el plasma sanguneo muy lbil debido a su punto isoelctrico (pH 6,6 - 7). Un litro de plasma contiene 4 g de fibringeno. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Precipita por el calor de 52 a 56 oC y por solucin de cloruro de sodio al 0,85% a semisaturacin. El fibringeno se origina en el hgado y en todo el sistema reticuloendotelial Se relaciona estrechamente con todo el proceso de la coagulacin de la sangre. METODO DE GORNALL - BARDAWILL Y DAVID Fundamento: Por este mtodo se determina dosando protenas totales sricas en el plasma y el suero, la diferencia de ambas protenas totales corresponde a la cantidad de fibringeno. 1. Reactivo de Gornall: (Biuret) Sulfato de cobre con 5H2O . . . . . . . . . . . . . 1,5 g. Tartrato de sodio y potasio . . . . . . . . . . . . 6.0 g. Disolver en 500 mL de agua destilada, agregar 300 mL de hidrxido de sodio al 10%, enfriar y completar a 1000 mL con agua destilada. 2. Solucin del Cloruro de sodio al 0.85% PROCEDIMIENTO:

En tres tubos de prueba limpios y secos membretar y colocar:


S P B Suero Problema 0.1 mL Plasma Problema 0.1 mL Cloruro de Sodio al 0.85% 1.9 mL 1.9 mL 2 mL. Reactivo de Gornall 8 mL 8 mL 8 mL. Mezclar por inversin y dejar en reposo por 20 minutos a temperatura ambiente. Leer a 540 nm. contra el blanco del reactivo. Clculos. Por ejemplo si las lecturas para protena totales en el plasma es de 130 y para el suero de 125, ambos se multiplican por el factor de protenas (0.060), luego los resultados obtenidos se restan obtenindose mg. % de fibringeno. Protenas totales en el plasma: 130 x 0.060 = 7.80 g Protenas totales en el suero: 125 x 0.060 = 7.50 g = 0.30 g O sea: 300 mg. % Valores normales: 200 - 400 mg. % METODO DE STIRLAND: FUNDAMENTO: Se basa en la propiedad del fibringeno de coagular a 56 oC mientras que las demas protenas plasmticas solo coagulan por encima de los 60 oC El fibringeno se precipita con solucin de Cloruro de Sodio al 0.85% La intensidad del enturbamiento es proporcional a la concentracin de fibringeno. PROCEDIMIENTO: 1. En un vial con anticoagulante obtener 5mL de sangre venosa. 2. Transferir a un tubo y centrifugar por 5 minutos a 3000rpm 3. En 2 tubos P y B depositar 0.6ml de plasma y agregar 6ml de ClNa al 0.85% 4. Mezclar ambos tubos. 5. El tubo P se pone en Bao Mara a 56 C por 15 minutos 6. el tubo B se deja a temperatura ambiente y sirve para llevar a O de D.O. 7. Retirar el tubo del bao y enfriar a temperatura ambiente. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

8. Lectura: Se lee el enturbamiento al espectrofotometro a 660 nm. 9. Dicha lectura se lleva a la curva de enturbamiento del Timol. Cada unidad de
enturbamiento equivale a 29.5mg% de Fibringeno. INTERPRETACIN: Cifras altas: Hiperhinosis: Neumona, Embarazo normal, TBC pulmonar, hepatitis txica, fiebre reumtica, artritis reumatoidea, nefritis, tumores malignos, septicemia. Disminucin: Fibrinopenia: desnutricin, fiebre tifoidea, Anemia intensa, lesiones difusas de las clulas hepticas, intoxicaciones por fsforo y cloroformo. 7.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 7.6 Cuestionario 1. Cul es el fundamento 2. Cul es el fundamento 3. Cul es el fundamento 4. Cul es el fundamento

del tiempo de coagulacin? del tiempo de sangra? bioqumico del proceso de retraccin del coagulo? del dosaje de fibringeno?

7.7 Fuentes de informacin: 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos Aires: Mdica panamericana; 1999. 2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005. 3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid: Masson; 2005. 4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007. 5. Turgeon ML. Hematologa clnica. Teora y procedimientos. Mxico D.F.: Edit. Manual moderno, 2006. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

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VIII.

PRCTICA No. 8: DETERMINACIN DE GRUPOS SANGUNEOS: SISTEMA ABO, VARIANTE DU y PRUEBA DE COOMBS. A. DETERMINACIN DE GRUPOS SANGUNEOS: SISTEMA ABO Y FACTOR RH.
8.1 Marco terico: El polimorfismo mas significativos de los eritrocitos depende de las caractersticas inmunolgicas, basndose en la presencia o ausencia de las propiedades qumicas en la superficie de los hemates que permiten diferenciarlos y clasificarlos en un gran nmero de grupos sanguneos bien definidos por sus reacciones con las hemaglutininas especficas. 8.2 Competencias: 1.-Distingue los diversos grupos sanguneos del sistema ABO 2.- Diferencia el Rh positivo del negativo 3.-Aplica la Variante Du para la comprobacin del Rh negativo. 8.3 Materiales y equipos Materiales Laminas de porcelana Tubos de ensayo Reactivos Anticoagulante de Wintrobe

8.4 Procedimiento Mtodo Indirecto de Beth Vincent: 1. Colocar una gota de sangre en un portaobjeto. 2. Agregar 1 gt. del suero tipificado anti-A y 1 gt. del suero tipificado anti-B, mezclar y observar. Si no hay aglutinacin el grupo ser CERO. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Si hay aglutinacin en la gota de sangre con el suero anti-A ser GRUPO A Si hay aglutinacin en la gota de sangre con el suero anti-B: grupo B. Si hay aglutinacin en ambos el grupo ser AB. FACTOR Rh .En un porcentaje se coloca 1 gota de sangre mas 1 gto. del anti-Rho (D). Mezclar y observar. Si hay aglutinacin es Rh positivo. 8.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica.

B. VARIANTE Du DETERMINACION DEL ANTIGUO Rho DEBIL O D


8.1 Marco terico El trmino Du se refiere a la expresin dbil del antgeno D normal es decir, la menor concentracin del antgeno D por glbulo rojo esta es una caracterstica heredada. Como entre los anti-D existen ligeras diferencias la potencia de la reaccin de los eritrocitos Du varia con el suero utilizado. 8.2 Competencias 1. Aplicar la variante Du para la comprobacin del Rh negativo. 2. Realiza el proceso para la determinacin de la variante Du 8. 3 Materiales y equipos

Materiales Tubos de ensayo Reactivos Suero antihumano de Coombs

8.4 Procedimiento 1. Hacer una suspensin globular al 2% en SSF. 2. En un tubo pequeo depositar: 1 gota de suero anti-Rh + 2 gotas de la suspensin globular al 2%. 3. Incubar a 37 oC por 60 minutos para sensibilizar a las clulas. 4. Sacar el tubo de la incubadora y lavar las clulas 3 veces en tubo de ensayo llenos de solucin salina hasta cerca del borde del tubo. Decantar completamente despus del ltimo lavado, acercando a la boca del tubo un papel de filtro para absorber el lquido. (centrifugacin a 2,000rpm por 5 minutos) 5. Agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. Agitar bien el tubo para homogenizar. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

6. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto. 7. Retirar el tubo y suspender nuevamente las clulas empaquetas mediante agitacin moderada y examinar si existe aglutinacin o no. Si hay aglutinacin: Du es Rh positivo Si no hay aglutinacin: Du es Rh negativo

C. PRUEBA DE COOMBS
8.1 Marco terico Se basa en que los dos anticuerpos llamados incompletos pueden encontrarse revistiendo los eritrocitos o bien estar en suspensin en el plasma,. Como corresponden a la fraccin gammaglobulnica de las protenas sricas, un suero antigamaglobulina humana de conejo (suero de Coombs) aglutinan directamente los eritrocitos cuando estn revestidos, pero no cuando los anticuerpos estn en suspensin. De esta diferencia surgen dos tipos de pruebas de Coombs: la directa y la indirecta. 8.2 Competencias 1. Diferencia las pruebas de Coombs directa e indirecta 2. Emplea las tcnicas adecuadas para determinar los anticuerpos incompletos. 8.3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Equipos Centrifuga Reactivos 1. Suspensin globular al 2% 2. Solucin salina fisiolgica 3. Suero antihumano de Coombs

8.4 Procedimiento A. PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA: Se emplea para detectar isoanticuerpo circulantes en el suero que cubren pero no aglutinan a los glbulos suspendidos en solucin Salina fisiolgica. La aglutinacin solo se produce al tratar los glbulos recubiertos con suero de Coombs. 1. Prepara suspensin globular al 2% en solucin salina fisiolgica de la sangre del grupo O Rh positivo. 2. En un tubo de ensayo: 2 gotas de la solucin preparada + 2 gotas del suero de la madre 3. Incubar en B.M. a 37 oC por 60 minutos. 4. Llenar con solucin salina fisiolgica. Mezclar. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos. 5. Decantar el sobrenadante. Repetir por 3 veces dicho lavado. Absorber con papel filtro. 6. Al sedimento que queda agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. 7. Mezclar. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

8. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto. 9. Retirar el tubo y agitar moderadamente a las clulas. Examinar el Tubo: Si hay aglutinacin POSITIVO (contiene anticuerpos anti-Rh incompleto o bien anticuerpos cuya especificidad y nombre est determinado por la calidad de glbulos empleados). No hay aglutinacin NEGATIVO. B. PRUEBA DE COOMBS PRUEBA DIRECTA: Es empleada para detectar anticuerpos que se han fijado en los glbulos del paciente in vivo, por ejemplo en la eritroblastosis hemoltica del recin nacido, en ciertas anemias hemolticas auto-inmunes y pacientes que hay recibido transfusiones incompatibles. En los nios no tratados de eritoblastosis fetal, la reaccin positiva persiste durante varias semanas, mientras que en las exanguineo - transfusin va seguida de una negativizacin a los pocos das. 1. En un tubo de ensayo se colocan 5 gotas de la sangre en estudio y se llena con solucin fisiolgica. 2. Mezclar invirtiendo el tubo varias veces, y centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos. Decantar el lquido sobrenadante. 3. Repetir el lavado dos veces, retirando cada vez todo el lquido remanente. 4. Luego se prepara una suspensin de hemates al 2% en SSF. 5. En un tubo se coloca: 1 gota de susp. Globular + 1 gota del suero antiglobulnico 6. Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm y observar si hay aglutinacin. La aglutinacin en el tubo contenido los hemates problemas y su ausencia en el tubo testigo evidencia su sensibilizacin. Esta prueba es utilizada para el diagnstico de la eritroblastosis fetal (ictericia hemoltica del recin nacido). Se estudia la sensibilizacin de los eritrocitos de la sangre umbilical.

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Como profilaxis de la enfermedad, se buscan los Anticuerpos antes del parto en el suero de la madre mediante la prueba indirecta. Tambin se emplea para el diagnstico de algunos tipos de anemias hemolticas. 8.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 8.6 Cuestionario 1. Cul es la importancia clnica de los sistemas ABO y Rh-Hr? 2. Porque es importante la determinacin de la Variante Du? 3. Explique el fundamento bioqumico de la prueba de Coombs Directa. 4. Explique el fundamento bioqumico de la prueba de Coombs Indirecta. 8.7 Fuentes de informacin 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos Aires: Mdica panamericana; 1999. 2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005. 3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid: Masson; 2005. 4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007. 5. Turgeon ML. Hematologa clnica. Teora y procedimientos. Mxico D.F.: Manual moderno, 2006. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

PRACTICA No 9: PRUEBAS SEROLGICAS: DETERMINACIN DE FIEBRE TIFOIDEA, PARATIFOIDEA, MALTA, SIFILIS A. AGLUTINACIONES
9.1 Marco terico Las pruebas inmunolgicas son muy tiles para el diagnstico de muchas patologas a travs de los mtodos cualitativos y cuantitativos. Los antgenos febriles se utilizan para efectuar diagnsticos rpidos de las fiebres tificas, paratificas y brucellosis. Se utilizan en la prueba rpida de aglutinacin en lmina mediante la reaccin antgeno-anticuerpo con el objeto de detectar la presencia en suero de anticuerpos que los pacientes producen durante las enfermedades mencionadas. 9.2 Competencias 1. Realiza las determinaciones inmunolgicas de las pruebas de aglutinaciones.

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2. Explica los resultados obtenidos a travs de las pruebas cualitativas y cuantitativas. 9.3 Materiales y equipos Materiales Lamina de vidrio

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Reactivos Antgenos febriles

Suspensiones de cepas bacterianas estabilizadas y standarizadas: tifico o, tifico h, paratfico a, paratfico b y brucella abortus.

9.4 Procedimiento Las determinaciones comprenden dos etapas: 1. Prueba presuntiva: Con una pipeta serolgica o una micropipeta depositar una gota de suero problema en cada cuadrado. A cada gota de suero se le aade una gota de cada antgeno previa agitacin. Mezclar con un palillo mondadientes para cada cuadrado y leer en el trmino de uno a tres minutos. Lectura: La reaccin es positiva cuando aparece aglutinacin en uno de los 5 cuadrados. 2. Prueba de titulacin: Se preparan 5 cuadrados limpios y con una pipeta depositar en cada uno el volumen de suero: 0,08, 0,04, 0,02, 0,01 y 0,005 mL de suero respectivamente. Los ttulos sern: 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320. Agregar a cada suero una gota del antgeno. Mezclar. Luego hacer la lectura. Los resultados se expresan en trminos de la ms alta dilucin que presenta aglutinacin. 9.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 9.6 Cuestionario 1. Cul es la importancia clnica de la determinacin de las aglutinaciones? 2. Cul es la interpretacin clnica de los valores TO y TH elevados? 9.7 Fuente de informacin 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos Aires: Mdica panamericana; 1999. 2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005. 3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid: Masson; 2005. 4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007. 5. Turgeon ML. Hematologa clnica. Teora y procedimientos. Mxico D.F.: Manual moderno, 2006. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

B. DIAGNSTICO DE SIFLIS
9.1 Marco terico

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La sfilis es una enfermedad de transmisin sexual causado por una bacteria espiritada, el treponema pallidum . Para el diagnstico se emplean pruebas serolgicas treponmicas y no treponmicas, dentro de las no treponmicas: VDRL y RPR. 9.2 Competencias 1. Determina los anticuerpos del treponema pallidum a travs de los mtodos serolgicos no treponmicas. 2. Realizar una correcta interpretacin de los resultados de las pruebas serolgicas. 9.3 Materiales y equipos Materiales Laminas portaobjetos Equipos Rotador elctrico Microscpio Bao Mara Reactivos 1. Solucin antignica de VDRL 2. Solucin salina al 0,9% 3. Sueros controles

9.4 Procedimiento A. MTODO DE VDRL VDRL CUALITATIVO EN SUERO 1. Numerar los anillos de la lmina 2. Cargar 0.05ml de los surcos control reactivo y no reactivo al primer y segundo anillo respectivamente 3. A partir del tercer anillo cargar las muestras problemas. 4. Aadir con la micro pipeta 0.017ml de solucin antignica preparada sobre el suero contenido en cada uno de los anillos de la lmina. 5. Colocar la lmina serolgica con las muestras en un rotador a 1800 rpm por 4 min. 6. Terminada la rotacin examinar la lmina inmediatamente usando un microscopio con objetivo de 10x. LECTURA E INFORME 1. Reactivo (R)- grumoso grandes y medianos 2. Reactivo dbil (RD) grumos pequeos 3. No reactivo (NR) sin grumos. VDRL CUANTITATIVA EN SUERO Colocar 0.05ml de solucin salina al 0.9% del anillo dos al anillo seis de la lmina serolgica 1. Aadir 0.05ml de suero problema en el anillo 1 y 2 2. Mezclar la solucin salina y el suero del anillo dos y transferir de este anillo, 0.05ml al anillo tres. 3. Mezclar el contenido del anillo tres y transferir 0.05ml al anillo cuatro. 4. Mezclar el contenido del anillo cuatro y transferir 0.05ml al anillo cinco y asi sucesivamente hasta el anillo seis. 5. Aadir con una micropipeta 0.017 ml de la solucin antignica sobre el contenido de cada anillo de la lmina serolgica. Del anillo 1 al 6. 6. Colocar la lmina con las muestras sobre el rotador a 180 rpm por 4 min. o rotarlo manualmente. 7. Examinar al microscopio con objetivo de 10x y ocular de 10 x 8. De obtener reactivo sobre el ttulo 1/8 continuar con las diluciones.

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LECTURA E INFORME 1. - Reactivo.(R) 2. - Reactivo debil (RD) 3. - No reactivo (NR)

B. MTODO DE RPR Es una prueba serolgica plasmtica de floculacin macroscpica RPR CUALITATIVO EN PLASMA 1. Colocar 0.05ml de los sueros a evaluar o una gota utilizando el aplicador del kit no olvidar colocar los sueros control. 2. Con ayuda del aplicador extender la muestra dentro del crculo sin salir del margen. 3. Agregar 0.017ml del antgeno con micropipeta o una gota con el gotero del kit sobre la muestra a evaluar. 4. Colocar la tarjeta con las muestras sobre el rotador, por 8 min a 100 RPM, o hacerlo manualmente. 5. Luego de los ocho minutos hacer la lectura con ayuda de la lmpara de luz. 6. - LECTURA E INFORME 7. Reactivo.-(R) Grumos grandes medianos, o pequeos pero definidos 8. No reactivo (NR) Sin grumos si se observa grumos definidos o pequeos debe realizarse la prueba cuantitativa.de igual manera que para VDRL .

9.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 9.6 Cuestionario 1. En que se diferencian las pruebas de VDRL y RPR? 2.Cules son las pruebas confirmatorias de un VDRL positivo? 9. 7 Fuentes de informacin 1. Aiquel F. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos Aires: Mdica panamericana; 1999. 2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005. 3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid: Masson; 2005. 4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007. 5. Turgeon ML. Hematologa clnica. Teora y procedimientos. Mxico D.F.: Manual moderno, 2006. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

X. PRACTICA No 10: DETERMINACIN DE CRIOAGLUTININAS, PRUEBA A.R., PRUEBA DE PCR, ANTIESTREPTOLISINA (ASO) A. DETERMINACIN DE CRIOAGLUTININAS
10.1 Marco terico Las crioaglutininas son anticuerpos que en el suero son capaces de causar la aglutinacin de sus propios eritrocitos (autoaglutininas), asi como las de otras personas (isoaglutininas), a una temperatura comprendida entre o y 5 oc. Estos anticuerpos que tambin se les conoce con el nombre de crioaglutininas se hallan presentes en ttulos muy bajos en las personas sanas.

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La aglutinacin es de carcter reversible, es decir que desaparece a 37 oc y reaparece a baja temperatura. Este es un buen procedimiento para detectar una aglutinacin autntica al fro. 10.2 Competencias 1. Determina el proceso para la determinacin de crioaglutininas 2. Interpreta los resultados encontrados en la prueba de crioaglutininas 10.3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Reactivos: Oxalato de Potasio al 2% Solucin de citrato de sodio al 3,8% Solucin de cloruro de sodio al 0,85% 10.4 Procedimiento MTODO DE AIQUEL 1. Extraer 10 mL de sangre: colocar 4,5mL en un tubo que contiene 0,5mL de anticoagulante y el resto de sangre colocar en otro tubo sin anticoagulante. 2. A los dos tubos llevar a la temperatura de 37 oC los dos hasta que la sangre del segundo tubo coagule. 3. Centrifugar el tubo que contiene el coagulo, a fin de separar el suero. 4. Del tubo con anticoagulante tomar una cantidad determinada y lavar los eritrocitos por 3 veces con SSF. 5. Despus de eliminar el lquido del ltimo lavado preparar una suspensin al 2% en SSF. TITULACION: 6. En 8 tubos de ensayo colocar en el primer tubo o,8mL de SSF y a los dems 0,5mL luego se agrega 0,2 mL de suero se mezcla y se pasa 0,5mL al 2do tubo y as sucesivamente hasta el sptimo tubo de donde se extraen 0,5ml que se desechan. El tubo octavo sirve de testigo. 7. Se agregan a todos los tubos 0,5mL de la suspensin de hemates. Las diluciones sern: 8. 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320 y 1/640. 9. Colocar los tubos en la heladera a 4 hasta el da siguiente. 10. Hacer las lecturas. MTODO DE TRNBERG: Obtener 6 mL de sangre, mezclar con 1,5mL de citrato de sodio al 3,8% Centrifugar a 2,000rpm durante 5 minutos. Separar el plasma en un tubo de ensayo. Con el paquete de glbulos rojos preparar una suspensin de hemates al 0,5% (0,05ml de glbulos rojos y completar a 10mL de SSF) TITULACIN: En 6 tubos de ensayo colocar en cada uno 0,3mL de SSF Al primer tubo colocar 0,3mL del plasma, mezclar y pasar al segundo tubo y as sucesivamente hasta el sexto tubo del cual se desecha 0,3mL Las diluciones sern: , , 1/8, 1/16, 1/32 y 1/64. Adicionar 0,3mL de la suspensin de hemates al 0,5% a cada uno de los tubos. Colocar en una gradilla y llevar a refrigeracin (2-5 oC por 24 horas). Examinar todos los tubos balancendolos o girando ligeramente para apreciar la intensidad de aglutinacin en caso de ser positiva se considera al de mayor dilucin y son negativas cuando no existe aglutinacin. SIGNIFICANCIA CLNICA

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Se asocia con el sndrome clnico de la neumona atpica primaria causado por el Micoplasma pneumoniae, as mismo en la anemia hemoltica adquirida y congnita, en el falciformismo, en la tripanosomiasis, algunas hepatitis se pueden encontrar ttulos elevados.

B. ANTIESTREPTOLISINAS O
10.1 Marco terico La antiestreptolisina o prueba que a menudo se designa el nombre de asto , es til para el diagnstico y tratamiento de la fiebre reumtica , la glomrulo nefritis aguda y otras infecciones por estreptococo beta hemoltico. entre los anticuerpos antiestreptococicos destaca por su inters clnico la antiestreptolisina o, cuyo ttulo se expresa en unidades de todd, siendo la cifra normal 102 u Todd/mL. Con un lmite mximo de 250u . Un ttulo alto de antiestreptolisina o significa infeccin estreptoccica sobrepasada o actual y concretamente debido a estreptococos beta hemolticos del grupo serolgico a (excepcionalmente de los grupos c y d de la clasificacin de lancefield) amigdalitis, escarlatina, sepsis puerperal, erisipela etc. Pero tienen especial inters en los procesos estreptoccicos que aparecen como segunda enfermedad: fiebre reumtica y glomrulo nefritis aguda. No es por, lo tanto una prueba especfica de fiebre reumtica, pero apoya su diagnstico cuando la historia y los signos clnicos la sugieren; sin embargo un ttulo superior a 500 u solo se registran en fiebre reumtica, lo cual concede su diagnstico a esta prueba. 10.2 Competencias Explica el fundamento de la determinacin de antiestreptolisina. Realiza el proceso para determinar antiestreptolisina. Interpreta los resultados cuantitativos para un asto positivo.

10.3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Pipetas automticas Reactivos 1. Suspensin de eritrocitos humanos lavados dos veces con solucin fisiolgica y una con solucin buffer de ASTO, se suspende al 5% en este buffer.. 2. Buffer de ASTO, cloruro de sodio 7.40 g, fosfato monopotsico 3.17g , fosfato disdico anhidro 1.81g, se disuelve c.s.p 1000cc con agua destilada conservar en heladera.. 3. Antgeno de estreptolisina O 4. Suero del paciente no hemolisada ni contaminada debe ser inactivada a 56 oCx 30min 60 oC x 10min. 10.4 Procedimiento 1. Se hace una dilucin del suero 1/20 2. En ocho tubos numerados del 1 al 8 colocar 0.20mL de buffer de ASTO. 3. En el primer tubo colocar 0.20mL del suero diluido 1/20 se mezcla bien y de el se toma 0.20mL y pasar al siguiente tubo y as sucesivamente hasta el sptimo tubo eliminando finalmente 0.20mL del tubo siete el octavo sirve de control. 4. De esa manera obtenemos las siguientes diluciones 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560.A los ocho tubos se coloca 0.10 mL de antgeno y se incuban en bao mara a 37 oC durante 15 minutos, luego aadir 0.10 ml de las suspensin de eritrocitos al 5% en buffer de ASTO. Se agita para homogenizar y se incuba

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nuevamente a bao de agua a 37 oC por 45min. VALORES NORMALES. Por este mtodo los valores normales van de 1/40 a 1/60 unidades Todd. INTERPRETACIN. La presente determinacin es til para el diagnstico y tratamiento de la fiebre reumtica y sirve para la comprobacin serolgica de las antitoxinas de defensa contra las toxinas bacterianas, es decir para la comprobacin de una infeccin existente o pasada por estreptococos beta hemoltico de los grupos serolgicos humanos A, C y G. 10.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 10.6 Cuestionario 1. Cul es el fundamento de la prueba de ASTO? 2. Mencionar los estados fisiolgicos y medicamentos que interfieran con la prueba de antiestreptolisina. 3. En que se diferencian las pruebas de PCR y LATEX? 10.7 Fuentes de informacin 1. Davidson I, Bernard J. Diagnstico clnico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001. 2. Deska K, Pagana T. Gua de pruebas diagnsticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona: Elsevier Espaa SL; 2008. 3. Henry J. El laboratorio en el diagnstico clnico. Madrid: Marbn libros s.l.; 2007. 4. Platt W. Atlas de hematologa en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992. 5. Talaska F. Manual de pruebas diagnsticas. 7a ed. Mxico D.F.: McGraw Hill Interamericana; 2002.

PRACTICA N 11: EXAMEN DE ORINA COMPLETA: EXMEN FSICO, QUMICO y MICROSCPICO


11.1 Marco terico La utilidad del anlisis de orina tiene una doble vertiente: por un lado, permite la valoracin directa del propio aparato urinario, por otra, ms indirecta, resulta ser un reflejo de determinadas situaciones bioqumicas de la sangre. A estas ventajas hay que aadir, adems la facilidad de su recogida, que habitualmente no representa ninguna molestia valorable para el paciente .el examen de orina completa significa que se realizara varias pruebas fsica (densidad, pH, color. Etc.), bioqumicas (glucosa, protenas, nitritos, pigmentos biliares, etc.) Y microscpicas del sedimento urinario (leucocitos, hemates, cilindros, bacterias ,cristales, etc.) 11.2 Competencias 1. Aplica el proceso fsico-qumico para el examen de orina 2. Identifica los diversos elementos en el examen microscpicos de la orina 3. Explica la interpretacin clnica de los resultados del examen de orina 11.3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Equipos Microscopio Centrifuga Urodensimetro

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Reactivos Tiras reactivas para determinaciones bioqumicas en orina 11.4 Procedimiento Segn la finalidad del anlisis y no mediando indicaciones especiales del mdico se instruir al paciente acerca de como proceder para la recoleccin de muestra de orina, teniendo en cuenta: Par los exmenes de rutina, es suficiente una muestra de reciente miccin salvo en los casos en que se necesario practicar determinaciones casos es preciso realizar los exmenes en un muestra correspondiente a la mezcla de la orina total de 24 horas, es decir que compensa el metabolismo de un almuerzo o de una cena. Para reunir esta muestra, el paciente iniciar la recoleccin a las 8 a.m. vaciando la vejiga y desechando esa primera miccin. Luego las distintas micciones se recogern en un recipiente de boca ancha y perfectamente limpio incluyendo la miccin de las 8 de la maana del da siguiente. El recipiente conteniendo la muestra deber conservarse en un ambiente fresco como para impedir la descomposicin prematura de la orina. Para el examen microscpico del sedimento, se utiliza preferentemente una muestra de reciente miccin y en especial la obtenida por la maana al levantarse el paciente. Se prefiere las primeras muestras de la maana, que suelen ser las ms concentradas. En todo examen de orina se tomar en cuenta: 1. EXAMEN FISICO: Cantidad Color Olor Espuma Reaccin Densidad 2. EXAMEN QUIMICO: Determinacin de: acidez total protenas cloruros glucosa fosfatos cuerpos cetnicos urea pigmentos biliares urobilingeno hemoglobina Hoy en da existe en el mercado la utilizacin de papeles o tiras reactivas para el anlisis de orina que facilita la determinacin cualitativa y cuantitativa de los componentes qumicos de la orina. 3. EXAMEN MICROSCOPICO DE SEDIMENTO: El sedimento se obtiene centrifugando 10 ml. de orina a 1500rpm durante 5 minutos, transcurrido dicho tiempo se vuelca el lquido sobrenadante y se suspende el sedimento en el liquido remanente o sea que queda adherido a las paredes del tubo de centrfuga. Se coloca entre porta y cubreobjetos se observa al microscopio con objetivo de menor aumento y luego con el de mayor aumento. Los constituyentes del sedimento urinario pueden agruparse dentro de 3 grupos: no organizados, organizados y cuerpos extraos. Sedimento no organizado: En la orina normalmente no hay cristales y su presencia en orina no tiene significado clnico salvo si se trata de cristales de oxalato, uratos o de cistina. Sedimento organizado: Clulas epiteliales Escamosas o pavimentosas Clulas redondas o polidricas

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Clulas de transicin Cilindros Cilindroides Leucocitos y Piocitos Eritrocitos 11.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 11.6 Cuestionario 1. Cuales son las condiciones para una buena toma de muestra de orina? 2. En que casos se presentan protenas positivas en un examen de orina? 3. En que procesos patolgicos se presenta Thevenon positivo? 4. Cules son las pruebas bioqumicas que se utilizan para el examen de orina? 5. Cual es la importancia clnica de encontrar piocitos en una muestra de orina?. 11.7 Fuentes de informacin 1. Aiquel f. Manual de anlisis clnicos. 6a ed. Buenos aires: mdica panamericana; 1999. 2. Gnzales De Buitrago JM. Tcnicas y mtodos de laboratorio clnico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005. 3. Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos. Madrid: Masson; 2005. 4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007. 5. Turgeon ML. Hematologa clnica. Teora y procedimientos. Mxico D.F.: Manual moderno, 2006. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

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PRCTICA No. 12 : UROCULTIVO: COLORACIN GRAM, PRUEBAS BIOQUMICAS, ANTIBIOGRAMA.


12. 1 Marco terico El urocultivo es uno de los mtodos de anlisis microbiolgico de suma importancia para el diagnstico de las enfermedades infecciosas del tracto urinario y asi dar un tratamiento adecuado y oportuno 12.2 Competencias 1. Aplica tcnicas de laboratorio para la determinacin del urocultivo y coprocultivo. 2. Utiliza los medios de cultivo adecuado para el desarrollo de los microorganismos 3. Interpreta los hallazgos de laboratorio 12.3 Material y equipos Materiales Tubos de ensayo Asa de Kole Placas Petri Reactivos 1. Colorante Gram Cristal violeta alcalino: Sol. A: cristal violeta 1g. Agua destilada csp. 100 mL. Sol. B: bicarbonato de sodio 5g. Agua destilada csp 100mL. Sol. De yodo 1g. Ioduro de potasio 2g. Agua destilada csp 200mL. Sol. Decolorante: eter 1 vol. Acetona 3 vol. Colorante de contraste: safranina 0.5g agua destilada csp 100 mL. 2. Medios de cultivo: Agar Mac Conkey EMB Agar Azida Sangre Agar Chapman

3. Coloracin de Ziehl-Nelsen (bacilos cido-resistente) 4. Sol. A: fucsina bsica 0.3g alcohol de 95. 10ml. 5. Sol. B: fenol 5ml. Agua destilada csp. 95ml.
6. 7. 8. Mezclar las soluciones a y b Sol. Alcohlica de cido clorhdrico Sol. De azul de metileno

12.4 Procedimiento RECOLECCION DE MUESTRAS: 1. La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infeccin y debe

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recogerse con un mnimo de contaminacin de tejidos, rganos o secreciones adyacentes. 2. Establecer periodos ptimos para la recoleccin de muestras a fin de tener la mejor oportunidad de aislar los microorganismos causantes. 3. Obtener suficiente cantidad de muestra para llevar a cabo las tcnicas de cultivo solicitada. 4. Utilizar dispositivos de recoleccin, recipientes para las muestras y medios de cultivo adecuados para asegurar el ptimo aislamiento de microorganismos. 5. Siempre que sea posible obtener las muestras antes de la administracin de antibiticos. 6. El envase recolector de la muestra debe estar correctamente rotulado. UROCULTIVO: Primer Da: Recoleccin de la muestra. - Examen de orina completo: fsico, qumico, microscopio, sedimento. - Coloracin gram del sedimento: - Sembrar en: Agar Mac Konkey EMB Agar Azida Sangre Agar Chapman - Si el sedimento se observar adems de leucocitos, bacilos y en la coloracin estos ltimos aparecen teidos, entonces se prctica una coloracin de ZiehlNeelsen (bacilos cido-resistente) Segundo da: Lectura del recuento microbiano. Si hay mas de 100 colonias: No existe infeccin. Si hay entre 10 a 1000 colonias realizar nuevamente la tcnica. No. de colonias X 1000 = bacterias / mL de orina 1. Crecimiento en agar Mac Conkey: Coloracin gram negativo Siembra en diferenciales: LIA,TSI,CS,SIM-INDOL, UREA. Siembra en agar MH o TSA por diseminacin general. (usar discos antibiticos para gram negativos) Crecimiento en Agar Azida Sangre Coloracion gram positivo Observar si hay hemolisis. Observar si hay crecimiento en Agar Chapman (Positivo) Si hay crecimiento en Azida Sangre y Agar Chapman es: Stf sp (si las colonias son amarillas son Stf aureus) Si hay crecimiento en Azida Sangre y no en Agar Chapman: existe hemlisis, puede ser Stp. (puede demorar 36 a 48 horas). Resembrar (cuarta parte) en agar Chapman colonias sospechosas del Azida Sangre. Diferenciales para Stp: Resembrar (en la cuarta parte) de colonias sospechosas: por diseminacin y colocar discos de Optoquima y Bacitracina. Observar a las 24 horas. Sembrar por diseminacin en Agar MH o TSA y usar discos de antibiticos para gram positivos. Tercer da: 1. Lectura de diferenciales: identificacion de Enterobacterias 2. Lectura: sensible a la optoquima: Stp pneumoniae Sensible a la bacitracina:Stp tipo A. 3. Sea 1 o 2 leer antibiograma y definir ANTIBIOTICOS: A: SENSIBLE B: MEDIANAMENTE SENSIBLE C: RESISTENTES

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12.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 12.6 Cuestionario 1. Cules son los medios de cultivo utilizados en la identificacin de microorganismos gram negativos? 2. Desarrolle un mapa conceptual de un urocultivo. 3. Cmo es el proceso para la toma de muestra de un hemocultivo? 4. qu importancia tiene el antibiograma? 5. qu importancia tienen los medios de enriquecimiento en un coprocultivo?

12.7 Fuentes de informacin 1. Davidson I, Bernard J. Diagnstico clnico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001. 2. Deska K, Pagana T. Gua de pruebas diagnsticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona: Elsevier Espaa SL; 2008. 3. Henry J. El laboratorio en el diagnstico clnico. Madrid: Marbn libros s.l.; 2007. 4. Platt W. Atlas de hematologa en color. 4a ed. Barcelona: Editorial JIMS; 1992. 5. Talaska F. Manual de pruebas diagnsticas. 7a ed. Mxico D.F.: McGraw Hill Interamericana; 2002.

PRACTICA No. 13: ESTUDIO DE LAS HECES: EXMEN PARASITOLGICO. METODO DE FAUST
13.1 Marco terico En la patologa parasitaria tiene importancia la investigacin de los parsitos intestinales en las heces, utilizando tcnicas del laboratorio ms usadas como las del mtodo directo, mtodo de concentracin de faust,, jarabe fenolado, willis, mtodo de sedimentacin de teleman, etc. De esta manera se contribuye al mejor conocimiento de la sintomatologa, diagnstico, tratamiento y prevencin de la parasitosis intestinal. 13.2 Competencias 1. Identifica los parsitos mas frecuente en muestro medio utilizando las tcnicas de examen directo y concentracin 2. Relaciona el parsito hallado con el frmaco a utilizar para el tratamiento

13.3 Materiales y equipos CONSERVADORES Cuando las muestras provienen de lugares lejanos o no van a ser examinados inmediatamente, se aconseja conservarlos mediante diversas formas: Conservacin por el fro. Son para huevos de helmintos y quiste de protozoarios, as podemos mencionar: Solucin fijadora y conservadora por el agua formolada. La aplicacin y conservacin de esta solucin, vara segn las consistencia de las heces, as por ej: Las heces duras emplean agua formolada al 5%. Las heces pastosas emplean agua formolada al 10% Las heces conteniendo huevos de helmintos muy resistentes, emplean agua formolada al 20%.

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La cantidad que se utiliza para cualquiera de las 3 formas volmenes de agua formolada por 1 volumen de muestra de heces. b. Lquido de Deschiens: Glicerina Formaldehdo al 40% Agua destilada c. Solucin de De la Plaza: Formaldehdo al 40% Glicerina Sol. de Ringer o sol. fisiolgica Sol. de Ringer >ClNa ClK 75 g Cl2Ca 100 mg HCO3Na 100 mg Agua destilada csp 1000 mL 100 mL. 100 mL 800 mL 12.5 mL 12.5 mL 250 mL 6g

Existe otros conservadores tales como: Sol. MIF (Mertiolato-Yodo-Fromaldehido) de Sapreso y Lawles. Sol de PVa (Alcohol Polivinilico) REACTIVO DE FAUST: Sulfato de Zinc al 33% (D>1,180) REACTIVO DEL JARABE FONOLADO: Reactivo: Azcar granulada 400 g Agua destilada 300 mL Fenol 1g Disolver el azcar en agua caliente de 80 a 90 oC (No debe hervir) hasta consistencia de jarabe y aadir 1g de fenol como conservador. 13.4 Procedimiento El estudio debe identificarse en las heces: Las formas vegetativas Huevos Larvas Quiste de los parsitos. RECOLECCION DE LAS MUESTRAS El paciente colocar la primera deposicin sin mezclar con la orina en un recipiente de vidrio de boca ancha limpia y seca, rotular su nombre y ser remitido inmediatamente al laboratorio cerrndole hermticamente, no debe utilizar recipientes porosos; ya ser de papel o de cartn. Cuando se quiere investigar protozoarios en su forma vegetativa se requiere muestra fresca. Las muestras formadas son mejores para encontrar quiste, en cambio las lquidas nos permite identificar trofozoitos y deben se examinadas de inmediato o pueden ser conservadas. Ciertos parsitos para ser investigados requieren procedimientos especiales, por ej. Por el mtodo de Graham (cinta adhesiva) para Enterobius vermicularis. En todo examen de heces para la bsqueda de parsitos deben considerarse el siguiente orden: 1. EXAMEN MACROSCOPICO: Este examen consiste en buscar por simple observacin visual y minuciosa la consistencia de las heces, mucus, sangre y formas adultas de parsitos tales como: Enterobius vemincularis, Tenias, Ascaris Lumbricoides, Ancylostoma duocenales, Trichuris trichiura, etc.

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Cuando las heces son blancas o lquidas, las larvas o formas adultas de los parsitos pueden encontrarse ocultos en medio de la masa fecal, en esta caso se filtrarn la muestra a travs de un tamiz y se har la observacin. 2. EXAMEN MICROSCOPICO: En este examen parasitolgico obligatoriamente debe realizarse dos procedimientos: 1. Examen por el mtodo directo de heces frescas, empleando sol. de lugol parasitolgico y sol fisiolgica de cloruro de sodio. 2. Examen por el Mtodo de Concentracin, empleando un mtodo de rutina. METODO DIRECTO Permite encontrar mayora de los parsitos, quiste de protozoarios con ncleos teido de amarillo, las vacuolas de color pardo, larvas y huevos de helmintos. En dos lminas portaobjetos limpios y secos, colocar en uno de ellos dos gotas de sol. de lugol, en la otra lmina 2 gotas de sol. fisiolgica y con la ayuda de un mondadientes colocar una porcin de muestra a ambas lminas preparadas, mezclar homogneamente, cubrir con un cubreobjeto y observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento. METODO DE CONCENTRACION: Tiene por objeto reunir en un pequeo volumen a los elementos parasitarios inicialmente dispersos en una gran masa de heces. Los mtodos de concentracin son muy numerosos, clasificndose en dos grupos: I. METODOS FISICOS: Por sedimentacin y por flotacin. Mtodo de Faust Mtodo del Jarabe Fenolado Mtodo de Willis B. Mtodo de sedimentacin de Teleman METODOS DIFASICOS: Comprende dos etapas: a. Fases de separacin residuos mas voluminosos b. Fase de concentracin y enriquecimiento de los elementos parasitarios: Mtodo de Ritchie Mtodo de Carles-Barthelemy METODOS DE SEDIMENTACION Y FLOTACION: METODO DE FAUST: 1. En un recipiente adecuado, se prepara una suspensin de materia fecal mezclado una parte de heces con 10 partes de agua tibia. 2. Filtrar la mezcla sobre una gasa en 4 dobleces colocado en un embudo y se recoge 10 ml en un tubo de centrifuga. 3. Centrifugar a 2000 rpm durante 2 minutos, retirar de la centrifugadora y decantar el liquido sobrenadante. 4. Al sedimento obtenido agregar 3 ml de agua tibia, mezclar bien. 5. Centrifugar y decantar el lquido sobrenadante repitiendo la operacin por 3 veces hasta que el agua del sobrenadante permanezca lmpida. 6. Despus de la centrifugacin se decanta el lquido sobrenadante, y aadir 3 a 4 ml. de; la sol de sulfato de zinc al 33% agitar bien durante un minuto y centrifugar al 2500 rpm durante 1 o 2 minutos. 7. Con el asa de platino recoger la pelcula superficial donde se encuentra flotando los quistes de protozoario y huevos de helmintos colocar sobre un portaobjeto limpio y seco agregar una pequea gota de lugol parasitolgico y efectuar el examen al microscopio. METODO DEL JARABE FENOLADO (Flotacin) 1. En un vial colocar el jarabe fenolado hasta la mitad y agregar con una bagueta unos 2 g de heces. 2. Mezclar bien las heces con el jarabe fenolado hasta observar uniforme la suspensin. 3. Adicionar mas jarabe fenolado hasta el borde del vial 4. Al borde del vial aplicarle un portaobjeto y dejar en reposo por 20 minutos como tiempo mnimo. A.

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5. Retirar el portaobjeto y sobre la muestra aplicarle un cubreobjeto efectuar el examen microscpico. Por este mtodo se observan larvas y huevos de los helmintos. 13.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 13.6 Cuestionario 1. En que consiste la tecnica de Graham ? 2. Cuales son las condiciones para la toma de muestra de heces para un paciente que se sospecha parasitosis? 3. Desde el punto de vista patolgico como se adquiere una tricuriasis? 4. En que consiste el mtodo del jarabe fenolado? 13.7 Fuentes de informacin 1. Davidson I, Bernard J. Diagnstico clnico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001. 2. Deska K, Pagana T. Gua de pruebas diagnsticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona: Elsevier Espaa SL; 2008. 3. Henry J. El laboratorio en el diagnstico clnico. Madrid: Marbn libros s.l.; 2007. 4. Platt W. Atlas de hematologa en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992. 5. Talaska F. Manual de pruebas diagnsticas. 7a ed. Mxico D.F.: McGraw Hill Interamericana; 2002.

XIV. PRACTICA No. 14: DOSAJE DE GLUCOSA, PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA, GLUCOSA POST PRANDIAL.
14.1 Marco terico La determinacin de glucosa srica es til para el diagnostico de numerosas enfermedades metablicas (diabetes mellitus). Los niveles sricos, de glucosa deben interpretarse de acuerdo con la hora, da en la que se tomo la muestra. La concentracin de glucosa en los lquidos extracelulares se mueve en una banda de tolerancia que es regulada a la baja de insulina (accin hipoglucemiante y la alza mediante el glucagn, cortisol, catecolaminas y hormona de crecimiento).las determinaciones de glucosa en pacientes recientemente diagnosticados de diabetes se deben realizar con frecuencia para controlar de cerca la dosis de insulina que debe administrarse. 14.2 Competencias 1. Utiliza mtodos bioqumicos para la determinacin de la glucosa en sangre 2. Interpreta los resultados y correlacionarlos con otras determinaciones solicitados en anlisis clnicos 14.3 Materiales y equipos Materiales 1. 2. 3. 4. 5. 6. Gradillas Tubos de ensayo Pipetas volumtricas Pipetas automticas Baguetas Centrifuga

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Espectrofotmetro Reactivos 1. Reactivo enzimtico 2. Standard de glucosa: una solucin de glucosa 100mg/dl que contiene preservantes y estabilizadores. Mantener en refrigeracin.

14.4 Procedimiento METODO ENZIMTICO COLORIMTRICO: Preparar 3 tubos y agregar en ellos: BLANCO (mL) Standard Suero Reactivo constituido 1.0

STANDARD (mL) 0.01 1 .0

MUESTRA (mL) 0.01 .0

Mezclar suavemente. Incubar por 5 minutos a 37oC Leer absorbancia a 505nm contra el blanco. El color es estable por 1 hora. Clculos: Glucosa (mg/dL) = 100 --------------------- x A muestra problema A standard A= valor de absorbancia obtenido. VALORES: Suero o plasma: 65 115 mg/dL 14.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en sta prctica. 14.6 Cuestionario 1. En que consiste la prueba de la tolerancia a la glucosa? 2. En que consiste la prueba de la hemoglobina glicosilada? 3. Por qu es importante la utilizacin del mtodo enzimtico para determinar glucosa en sangre ? 14.7 Fuentes de informacin 1. Deska K, Pagana T. Gua de pruebas diagnsticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona: Elsevier Espaa SL; 2008. 2. Davidson I, Bernard J. Diagnstico clnico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001. 3. Guerci A. Laboratorio mtodos de anlisis clnicos y su interpretacin. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985. 4. Kumar V, Cotran R, Robbins S. Patologa humana. 7a ed. Madrid: Elsevier; 2004. 5. Widmann F. Interpretacin clnica de las pruebas de laboratorio. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1997. 6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

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