Microscopía

Introducción:
El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles al ojo humano. Esto se
logra mediante un sistema óptico compuesto por lentes que forman y amplifican la imagen del objeto
que se está observando.

El poder de resolución es la distancia mínima a la que se pueden discriminar dos puntos adyacentes.

Mientras que el ojo humano tiene un límite de resolución de 100 µm a 25 cm de distancia. Los
microscopios ópticos tienen un límite de resolución de 0,2 µm, es decir 500 veces mayor al ojo humano.

En el cuadro de abajo podemos ver que de todas las estructuras, solamente la célula vegetal está
escasamente dentro de nuestra resolución. En cambio, con microscopios ópticos podemos distinguir las
estructuras más grandes dentro de las células eucariotas y también células procariotas individuales.

Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o fijadas y teñidas.

Partes de un microscopio:

Las partes de un microscopio óptico se pueden dividir en dos grupos, aquellas partes que pertenecen al
sistema mecánico, que tiene la finalidad de sostener la preparación a examinar y soportar todo el
sistema óptico; y aquellas que son del sistema óptico destinado a la iluminación y obtención de una
imagen aumentada del objeto que se está examinando.

Partes del sistema mecánico

El sistema mecánico está formado por las partes que le dan robustez al microscopio, y entre ellas
encontramos las siguientes:

• Tubo: El tubo es una parte esencial de la estructura, ya que garantiza la alineación entre el ocular y el
objetivo.
• Revólver: El revólver es la pieza donde se encuentran posicionados los objetivos, permitiendo hacer
un intercambio de aumento simplemente con girarlo.
• Brazo: El brazo es el elemento que une todas las demás piezas fijas, como la base, la platina o el
cabezal.
• Platina: Es la parte donde se sitúan las muestras para analizar y en la que se encuentran las pinzas
que sujetan el portaobjetos. La platina tiene un agujero por donde atraviesa la luz que ilumina la
muestra, además es una pieza móvil que se regula mediante tornillos.
• Pinzas: Las pinzas son las encargadas de sujetar el portaobjetos y mantener fija la muestra para
poder analizarla sin que ésta se mueva.
• Tornillo macrométrico: Permite mover la platina para acercar la muestra hasta los objetivos
mediante un movimiento rápido vertical. Este tornillo macrométrico se utiliza para realizar un primer
acercamiento.
• Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico es el encargado de controlar el enfoque hacia la
muestra con una precisión mayor. Este tornillo permite realizar movimientos lentos y precisos para
ajustar un enfoque óptimo.
• Desplazamiento de la platina: con la perilla de arriba podemos mover el portaobjetos en el eje X
(vertical), mientras que con la perilla de abajo podemos hacerlo en el eje Y (horizontal).
• Base o pie: Esta parte del microscopio se encuentra en la posición más baja y es la encargada de
sostener al instrumento. Por lo general, se sitúan tanto el cable de alimentación como el botón de
encendido.

Partes del sistema óptico

Estos elementos son los que generan, manipulan y captan la luz, permitiendo generar la amplificación de
la imagen. Entre ellos se encuentran las siguientes partes del microscopio:

• Objetivo: El objetivo es un conjunto de lentes situado en el revólver, y es el elemento que está más
cercano a la muestra. El objetivo se encarga de realizar una primera ampliación, y ésta dependerá
del aumento del objetivo seleccionado. Tanto el aumento como su apertura numérica vienen
impresas en el elemento.
Existen diversos objetivos según el medio que se interpone entre el objetivo y la preparación:
- A seco: el medio es aire
- Inmersión: el medio es aceite de inmersión. La inmersión impide la desviación de los rayos
más oblicuos, lo que permite aumentar el poder de resolución.

• Ocular: El ocular está constituido por dos lentes convexas que se encargan de realizar una segunda
ampliación de la imagen, ya ampliada por el objetivo. Este aumento es inferior al ofrecido por el
anterior, y el aumento total se consigue multiplicando el aumento del ocular por el del objetivo.

El aparato de iluminación, situado debajo de la platina, está formado por:

• Condensador: El condensador es un conjunto de lentes que se encarga de concentrar los rayos de

luz divergentes enviados por la fuente de luz para mandarlos hacia la muestra en forma de un
amplio cono. El condensador manipular los rayos de luz para convertirlos en rayos paralelos o
convergentes, dando así una mayor claridad de imagen.

• Diafragma: El diafragma del microscopio se encuentra bajo la platina y se encarga de regular la

cantidad de rayos que impacta contra la muestra, generando así variaciones en el contraste. Este
juego con el contraste permite una visualización óptima de la imagen. Es un orificio de diámetro
variable

• Fuente de luz: La fuente de luz consiste en un foco que puede encontrarse en distintas
combinaciones, como halógeno o ultravioleta. Este elemento es el encargado de iluminar la
muestra para una perfecta observación.
Calidad de imágen

Brillo: podemos aumentar la cantidad de luz aumentando el voltaje de la lámpara. También es posible
regular la intensidad de la luz, abriendo o cerrando el diafragma. Si lo cerramos, dirigimos la luz solo a
un punto.

Foco: se relaciona con la distancia focal, que se controla mediante los tornillos macrométrico y
micrométrico. Vamos a encontrar un punto exacto en el que veamos una imagen nítida. Todos tenemos
un foco distinto. Puede ser que alguien enfoque y nos diga que miremos, pero tengamos que ajustar con
el tornillo micrométrico para poder encontrar el foco.

Resolución: como ya mencionamos, existe un límite de resolución.

Contraste: Tienen que ver con los colores de la imagen. El condensador consiste en un sistema de lentes
convergentes que captan el haz de luz y concentra sus rayos de forma que se ofrezca un mayor o
menor contraste.

Cómo se usa?

1. Encender la fuente de luz

2. Colocar en posición el objetivo de menor aumento

3. Bajar la platina, colocar el preparado centrado y empezar a subir con el tornillo macrométrico
(CUIDADO!)

4. Cuando veo algo, terminar de enfocar con el tornillo micrométrico

5. Cambiar de objetivo (siempre con cuidado!)

TINCIÓN DE CROMOSOMAS DE CEBOLLA

Introducción

En este trabajo práctico vamos a observar las diferentes etapas de la mitosis en tejido meristemático de
raíz, mediante la fijación y tinción de ADN genómico.

Las raíces de cebolla (Allium cepa) son comúnmente usadas para observar la división celular ya que
desarrollan raíces que crecen rápidamente y las células de la punta de la raíz se dividen activamente.
Además, es fáciles prepararlas para verlas al microscopio.

Diapo 2

CICLO CELULAR
La mitosis es un tipo de división celular en el cual una célula se divide para producir dos nuevas
células que son genéticamente idénticas entre sí
En las células eucariontes, las etapas del ciclo celular se dividen en dos fases importantes: la
interfase y la fase mitótica (M).

Interfase
Durante la interfase, la célula crece, copia los orgánulos y va a sintetizar una copia completa del
ADN en su núcleo, duplicando todos los cromosomas. Es una fase donde se gasta mucha energía.
Fase M
Mitosis
La mitosis consiste en cuatro fases básicas: profase, metafase, anafase y telofase.

• Profase
Los cromosomas que estaban en forma laxa se comienzan a condensa y se forma el huso mitótico
que comienza a capturar y organizar a los cromosomas. La envoltura nuclear se descompone y
los cromosomas condensados se liberan.
El huso es una estructura hecha de microtúbulos, fibras fuertes que son parte del “esqueleto” de
la célula. Su función es organizar los cromosomas y moverlos durante la mitosis.

• Metafase
En la metafase, todos los cromosomas se alinean en el centro de la célula. En esta fase se pueden
contar los cromosomas, las células de Allium cepa tienen 16 cromosomas.

• Anafase
Las cromátidas hermanas se separan y son atraídas hacia los polos opuestos de la célula. Cada
una ahora es su propio cromosoma.

• Telofase
En la telofase, la célula casi ha terminado de dividirse y comienza a restablecer sus estructuras
normales. El huso desaparece, una membrana nuclear se vuelve a formar alrededor de cada
grupo de cromosomas y un nucléolo reaparece en cada nuevo núcleo. Los cromosomas también
comienzan a descondensarse.
Mientras esto ocurre, comienza la citocinesis: el citoplasma de la célula se divide en dos, lo que
forma dos nuevas células. En las células vegetales se forma una estructura llamada placa celular
en el centro de la célula que la divide en dos células hijas separadas por una nueva pared.
Diapositiva 3
En las plantas superiores el proceso de formación de nuevas células ocurre en regiones de crecimiento
conocidos como los meristemos. Los meristemos son grupos de células indiferenciadas responsables del
crecimiento permanente de las plantas debido a que tienen una alta capacidad de división celular y
posteriormente pueden diferenciarse en una gran variedad de tipos celulares. Estas se encuentran
mayormente en la punta de los tallos o de las raíces.

Protocolo:

1. Fijación:

*Recomendación: Tomar las raíces más “nuevas”, es decir más cortas.

1. Cortar el extremo de la raíz (1cm) y sumergir en solución fijadora de Carnoy (Etanol absoluto:
ácido acético glacial 3:1) por 30 minutos. Es un fijador ácido especialmente indicado para
preservar ácidos nucleicos (núcleos, cromatina, grumos de Nissl) y glucógeno. Además, la
propia fijación deshidrata la muestra. Así, tras la fijación y unos cortos baños en etanol absoluto
se pude proceder a la inclusión, dependiendo del tamaño de la muestra.
2. Tomar la raíz con una pinza y colocarla sobre un portaobjeto.

*Con la punta hacia uno de los lados y rotular sobre el portaobjeto el extremo “p” de “punta” y el
extremo “c” de “corte”

2. Maceración:

1. Encender un mechero de alcohol; agregar 2-3 gotas de HCI 1N sobre la raíz y cuidadosamente tomar
el portaobjeto con una pinza de madera y pasar 5-6 veces por la llama, Con ayuda de la pinza de
madera. (HCl → degrada la pared celular)

2. Dejar reposar durante 10 minutos a temperatura ambiente.

3. Secar todo el exceso de HCI con papel absorbente. Con cuidado de no tocar ni mover la raíz

3. Tinción:

1. Colocar 2-3 gotas de azul de metileno y repetir paso 1 de Maceración

* Encender un mechero de alcohol; agregar 2-3 gotas de azul de metileno sobre la raíz y cuidadosamente
tomar el portaobjeto con una pinza de madera y pasar 5-6 veces por la llama.

2. Dejar el portaobjeto durante 10 minutos a temperatura ambiente.

3. Secar con papel absorbente todo el exceso de colorante. Con cuidado de no mover la raíz

4. Preparado:
1. Cortar con bisturí la punta de la raíz (1-2mm) y separar del resto de la raíz en el mismo portaobjeto.
*Manteniendo la dirección de la raíz

2. Agregar 1-2 gotas de agua y colocar el cubreobjeto sobre esta (el resto de la raíz se descarta o se
puede hacer esto mismo).

3. Presionar con un papel, de forma enérgica y homogénea el cubreobjeto para aplastar bien la raíz.

5. Observación y análisis:

Observar el preparado bajo el microscopio e identificar fases de la división celular