Capítulo 1: Aplicaciones de la microscópia en la histologia y biología

celular
HISTORIA DE LA MICROSCOPÍA
• 1590
La construcción del primer microscopio se atribuye a los hermanos Hans y Zacharias Jansen.
• 1632–1723
los primeros microscopios utilizados para observar el mundo microscópico de manera
sistemática fueron fabricados por Anthony v an Leeuwenhöek
• 1602–1680
el término “microscopio” fue acuñado por Anastasius Kircher

Padre de la Microscopía”. Anthony van Leeuwenhöek

La segunda etapa más importante en la historia de la microscopía se inicia en 1872 con Ernst
Abbe Jahr, quien estableció las bases de la óptica para microscopía y la teoría matemática para
fabricar de manera científica lentes para los microscopios.

1. BRAZO O ESTATIVO
2. PLATINA
3. PORTA CONDENSADOR
4. FUENTE DE LUZ
5. CONTROL DE INTENSIDAD
6. CONDENSADOR
7. OBJETIVO
8. REVOLVER
9. OCULARES
10. FOTOTUBO

CONDENSADOR
• El condensador está ubicado en un portacondensador por abajo de la platina, se
mueve con una cremallera, acercándolo al plano de la preparación o alejándolo.
• Como su nombre lo indica, el condensador tiene la función de concentrar la luz
proveniente de la lámpara, tiene integrado un sistema de apertura continua
(diafragma) que al abrir o cerrar regula la cantidad de luz que pasa por él.
OBJETIVOS
• En el exterior presentan datos importantes que debemos conocer:
• Valor de magnificación (10x) luego una línea diagonal y despues
• El valor de AN (apertura numérica) que el regularmente menor a la unidad y puede
llegar a 1.4
• En la siguiente línea se ve el valor de la distancia de trabajo (160mm)
• Grosor de cubre objetos 0.17mm o bien un (-) guion medio
• Por ultimo los anillos de color

OCULARES
• En cada ocular están grabadas las características más importantes como el tipo de
ocular, el valor de la magnificación seguida por una X, la cifra de campo y la indicación
de correcciones para quienes utilizan lentes personales.
• La cifra de campo permite conocer el diámetro del campo visual según el objetivo
utilizado
• 10X/20 con un objetivo de 40X, se divide el valor de la cifra de campo (20) entre el
valor de amplificación del objetivo (40), es decir, 20/40, el resultado es 0.5 de
milímetro, lo que significa que el diámetro del campo visual con esa combinación es de
la mitad de un milímetro; por tanto, el diámetro del campo visual en estas condiciones
es de 500 micrómetros.
• La magnificación final de la imagen formada por un microscopio se obtiene
multiplicando la magnificación del objetivo por la del ocular. Por ejemplo, si se utilizó
el objetivo de 40X y un ocular de 10X, la magnificación total es de 400X.

Resolución y apertura numérica

• La resolución de un sistema óptico está definida como la distancia mínima entre dos
objetos a la cual estos objetos se pueden apreciar como individuales.
• La fórmula para calcular resolución fue desarrollada por Ernst Abbe.

• es la longitud de onda de la luz expresada en nanómetros (nm).

• Es el índice de refracción del medio óptico colocado entre la lente frontal del objetivo
y el cubreobjetos de una preparación histológica (aire = 1.0; agua = 1.33; aceite de
inmersión = 1.5).

• Unidad angular, es el ángulo entre el eje óptico y los rayos de luz desviados,

• A fin de calcular la resolución sólo para el objetivo se emplea la ecuación de la

apertura numérica:

• NA=n sen α
 • y si se sustituye en la ecuación de Abbe el divisor por NA, entonces la ecuación queda
así:
resolución:= lambda /NA
• Calcule la resolución para un objetivo con una NA de 0.9 y otro con 1.4 de NA,
recibiendo una longitud de onda de 400 nm. Al sustituir estos valores en la última
ecuación, entonces para los 400 nm divididos entre 0.9, δ es igual a 444 nm y divididos
entre 1.4, δ es igual a 282 nm. De modo que estructuras cuya separación entre sí sea
menor a 444 nm y a 282 nm, respectivamente, no pueden ser discriminadas como
independientes.

SISTEMA ÓPTICO DE CAMPO CLARO

• Este método de contraste utiliza en esencia el diseño del microscopio antes descrito y
recibe el nombre de campo claro (CC) debido a que utiliza una fuente de iluminación
de luz blanca al menos de 5 000 K.
• Después de que el haz luminoso pasa por el condensador y por la preparación, entra al
objetivo, que se encarga de formar una imagen real, aumentada e invertida del objeto,
el ocular recibe la imagen formada por el objetivo y la amplifica.