Contenido Microscopía

Historia
Estructura de un microscopio compuesto
Principios de microscopía
Microscopios compuestos
• de campo claro
• de campo obscuro
• de contraste de fases
• de fluorescencia
• confocal
Microscopios electrónicos y de proximidad
• de transmisión
• de barrido
• de efecto túnel
• de fuerza atómica
Tamaño relativo de distintos organismos,
virus, componentes celulares y átomos
 Historia del microscopio
El primer microscopio se atribuye a Zaccharias y Hans
Janssen en 1590, consistía de dos tubos, uno dentro de otro,
en uno de los extremos una tenía una lente biconvexa,
que correspondía al ocular y una plano convexa en el
otro extremo que correspondía al objetivo.

En 1670, Roberto Hooke diseñó uno de los microscopios

más elegantes de esta época, el cual ilustra su
tratado “Micrographia”, uno de los primeros
documentos sobre microscopía e imágenes.

Anton Van Leeuwenhoek, fue un comerciante de

telas, quien se dedicaba a tallar lentes,
convirtiéndose en un científico aficionado. El fue
la primera persona que pudo observar a las
bacterias con un microscopio simple, organismos
que no habían sido vistos con los microscopios
compuestos de la época que no tenían el poder
de resolución de su microscopio.
Microscopio compuesto de
Culpeper 1720
Microscopio compuesto de
Dellebarre 1777 Microscopio
compuesto de Magny
1751

Microscopio de Smith-Beck
1862 Microscopio compuesto Microscopio compuesto
invertido XVIII francés 1870
 Historia del microscopio

En el siglo XVII y XVIII, los diseñadores Británicos

elaboraron diferentes versiones del microscopio
de trípode, basado en el microscopio de
Edmund Culpeper, que era un instrumento de
uso sencillo y con mecanismos precisos de enfoque.

En el siglo XIX hubo un enorme

avance en la tecnología de los
microscopios, las lentes eran de
muy buena calidad, los sistemas
mecánicos incorporan los tornillos
macro y micrométricos y se inicia la
Microfotografía (Robert Koch).

Durante el siglo XX, la tecnología

utilizada en la elaboración de los
microscopios llega a su clímax, la
calidad de las lentes y las opciones
en el manejo y utilidades de los
Equipos permitieron un
enorme avance en las ciencias biológicas.
Estructura de un microscopio Componentes principales
compuesto de campo brillante
Sistema óptico y sistema mecánico

Oculares

Tubo de microscopio

Brazo
Objetivos

Platina Carro de platina

Condensador
Tornillo de platina

Tornillos macro y
Fuente luminosa micrométrico

Pie o base
Estructura de un microscopio Sistema óptico
Condensador
El condensador de un microscopio permite dirigir el haz de luz hacia el espécimen que se
desea observar. Existen dos tipos de condensador, el más común es el de Abbé. El segundo
tipo es el condensador acromático que corrige tanto la aberración cromática como la esférica.
De estos dos tipos de condensador existen variantes en cuanto al uso que se le va a dar, para
campo obscuro, para contraste de fases, fluorescencia, etc. Todos los condensadores tienen
grabada su apertura numérica, la cual debe de ser igual o ligeramente mayor a la apertura
numérica de los objetivos, de no ser así la resolución con el objetivo no será total. En la
mayoría de los condensadores se puede usar aceite entre la lente del condensador y la
preparación, para usar la totalidad de la apertura numérica.

En forma general un condensador básico consta de tres partes:

Lente frontal

Diafragma de iris del condensador

Lente auxiliar
 Sistema óptico

Estructura de un microscopio

Lentes objetivos.

Los objetivos son las lentes más cercanas a la muestran que se desea
observar y se encuentran montados en el revólver. Los objetivos
generalmente encontrados en los microscopios de enseñanza son objetivos
acromáticos, los cuales están corregidos para aberraciones esférica y
cromática.

Los tres tipos de objetivos se elaboran con un sistema compensatorio de

lentes que evitan la curvatura del campo, dando como resultado una imagen
plana y se les conoce con el nombre de lentes plano objetivos.
Estructura de un microscopio Sistema óptico

Aumentos

Acromático A 40X PLAN Imagen plana

0.65 Apertura numérica
160 / 0.17
oil Grosor del cubreobjetos (0.17 mm)
Distancia entre
objetivo y ocular
en mm.
Anillo de identificación de aumentos
Medio de inmersión* Rojo 4X
negro aceite amarillo 10X
azul 40Xblanco 100X
naranja glicerina blanco ó negro 100X
blanco agua
rojo aceite, agua o glicerina
*Únicamente en los objetivos en que se requiere

Los objetivos de buena calidad tienen grabado en la pared del barril varios datos
que nos permiten conocer las características de cada una de las lentes.
Estructura de un microscopio Sistema óptico

Oculares.
El ocular es el juego de lentes a través de los cuales observamos en el microscopio,
cuya función es la de ser un sistema de lentes de proyección. Existen tres tipos de oculares, el
más común es el Huygenian, que se usa generalmente con objetivos acromáticos, y que
permite observar con el uso de anteojos. El segundo tipo es el ocular de compensación que se
usa con objetivos acromáticos y de campo plano, logrando imágenes de calidad superior. El
tercer tipo es el ocular de fotografía que permite proyectar imágenes planas a una película de
una cámara, este tipo se considera el más fino de los oculares.

Corrector de dioptrías

10X /20  Permite el uso de anteojos

Campo del ocular

Aumento del ocular

Los oculares tienen en grabado en el barril información sobre las características de esa lente.
 Sistema óptico
Estructura de un microscopio

Aumento total.

El aumento total se obtiene multiplicando el valor

de aumento del ocular por el del objetivo.

Aumento total = 10X (del ocular) x 100X (del objetivo) =

1000X
Estructura de un microscopio Sistema mecánico

El sistema mecánico de un microscopio está formado por el pie o base, el brazo, la platina, el
tubo, el carro, el tornillo del condensador y los tornillos macro y micrométricos. Los
componentes mencionados son parte del sistema que tiene influencia en el enfoque, la
resolución, el aumento total y la localización de la muestra.

El tubo del microscopio que permite el paso de luz del objetivo hacia el ocular tiene grabado un
número que se le conoce con el nombre de factor del tubo. La mayoría de los microscopios este
valor es de 1X, pero existen microscopios en que este valor varía (0.8X, 1.25X, 1.6X ó 2X,
cuando este es el caso el aumento total es diferente para cada combinación de ocular-objetivo
usada.

El tornillo del condensador, permite acercar o alejar la lente frontal, con lo cual podemos
variar la iluminación del objeto observado, pero también alteraremos el contraste en la
imagen.

Los tornillos macro y micrométricos, permiten el enfoque de la preparación, correspondiendo

al tornillo micrométrico el enfoque fino, pudiendo determinar la profundidad de foco
dependiendo del objetivo usado.

Sobre la platina, se colocan las preparaciones en el carro y con sus tornillos respectivos se
busca la imagen. Anotando los valores de referencia de las regletas horizontal y vertical, es
posible mover la preparación y localizar fácilmente la imagen ajustando los valores obtenidos
previamente.
 Principios de microscopía
Un microscopio es un instrumento que nos permite observar objetos que no
pueden ser observados a simple vista. Por la forma de iluminación de los objetos a observar,
los microscopios los podemos clasificar en dos categorías. Cuando la iluminación es a través
de la preparación que se desea Observar, se le denomina iluminación diascópica y cuando la
iluminación se hace sobre el objeto se le conoce como iluminación episcópica.

Dos tipos de microscopios con

iluminación diascópica. A la izquierda,
uno de tipo invertido, utilizado en la
observación de cultivo de tejidos o de
especimenes que reptan o se localizan
en el fondo de una preparación; y a la
derecha, uno de tipo estándar que se
utiliza para la observación de
preparaciones en fresco y fijas.

Microscopios con iluminación episcópica,

llamados estereoscópicos, se utilizan para la
observación de especimenes de más de 50
micrómetros, así como de organismos vivos.
 Principios de microscopía Apertura numérica

La calidad de una lente se establece básicamente con el valor denominado apertura numérica
(AN), que depende del diámetro de la lente, la distancia de trabajo y el índice de refracción. En
lentes de calidad este valor siempre esta grabado en un lado del barril del objetivo. Para
determinar este valor se hace uso de la siguiente fórmula:

AN = η sen 

donde η es el índice de refracción y  el ángulo que se forma al incidir la luz en un objeto a la

altura de trabajo.
18 mm
10 mm
10 mm




 = 48o35´  = 60o  = 60o

AN = 0.75 AN= 0.866 AN = 0.866
 Principios de microscopía Poder de resolución

La calidad de un microscopio se basa en su poder de resolución, es decir en la

capacidad de discernir la observación de detalles finos, esta resolución está dada por la
distancia mínima (d) en que dos objetos se observan como dos entidades separadas con una
combinación de ocular-objetivo dada y se calcula con la siguiente fórmula:

d = 0.5 / AN ó d= /2AN
donde  es la longitud de onda de la luz utilizada y AN es la apertura numérica del objetivo.
En el siguiente ejemplo se utiliza una  de 610 nm

Valores para objetivos acromáticos

Aumento del
4X 10X 40X 100X
objetivo

Apertura
0.1 0.25 0.65 1.30
numérica

Poder de
Resolución 3.05 1.22 0.469 0.234
(micrometros)
 Principios de microscopía Aberraciones
Las aberraciones son imperfecciones de las lentes que modifican substancialmente el poder de
resolución. Estas aberraciones pueden ser de forma cromática, esférica o por curvatura de
campo.

La aberración cromática es la imposibilidad de la lente para enfocar los diferentes colores en el

mismo punto.

Azul Verde Rojo

La aberración esférica es el resultado de la refracción de luz en otros puntos diferentes al centro,

el resultado es que cuando se observa una imagen con un halo difuso a su alrededor.

La aberración por curvatura de campo no enfoca en una superficie plana sino esférica, esto da
como resultado que cuando se enfoca el centro se desenfoca la periferia y viceversa.
Espectro de luz
FENÓMENOS DE LA LUZ
Efecto de la longitud de onda
Fenómeno
de
refracción
Efecto del aceite de inmersión
 Principios de microscopía Contraste
Se entiende por contraste al número de sombras que se pueden observar en una imagen. A
mayor número de sombras habrá mayor contraste, esto permite mayor información al poner de
manifiesto otras estructuras, esta última característica se le denomina intervalo dinámico. En las
imágenes a color se considera que a mayor número de colores y con menor número de matices
tendremos un mejor contraste. En los microscopios de campo claro el contraste y la resolución
son inversamente proporcionales, por lo tanto a mayor contraste menor resolución, por lo tanto
se requiere aplicar un colorante o dos, para obtener un mejor contraste. Asimismo, a mayor
iluminación menor contraste y a menor iluminación mayor contraste. Por lo tanto, el enfoque
correcto requiere la correcta combinación de contraste, resolución e iluminación.

A B C
Microfotografías de la observación de una amiba con tres condiciones de contraste.
A, bajo contraste; B, contraste normal; C, alto contraste.
 Microscopios compuestos Microscopio de campo claro

El microscopio de campo claro es el

instrumento de más uso en el trabajo
de rutina. Aún cuando se puede usar
para hacer observaciones tanto de
especímenes en preparaciones en
fresco como teñidas, muchas de las
estructuras internas del organismo
no son visibles a menos que se usen
tinciones selectivas.

La parte fundamental para realizar una observación adecuada es el tipo de iluminación. En la

iluminación crítica la fuente de luz se enfoca por medio del condensador en el plano del
espécimen, esto produce una gran iluminación, lo que no permite una observación adecuada.

La llamada iluminación Kohler es un método para ajustar la iluminación en un microscopio

compuesto. Este ajuste permite una iluminación uniforme de calidad en todo el campo, al
enfocar el campo a la apertura mínima del condensador sobre el plano del espécimen. Para
observaciones que requieren el máximo potencial de un microscopio es necesario realizar la
iluminación Kohler con regularidad.
 Microscopio de campo claro
Microscopios compuestos

Técnica de iluminación Kohler:

 Seleccionar el objetivo lupa. Bajar el diafragma. Colocar la muestra y enfocar.

 Seleccionar el objetivo de observación, y enfocar el espécimen.

 Cerrar la abertura del condensador. Algunos microscopios lo tienen en su base.

 Subir el diafragma hasta hacer nítido el borde del campo. Se observara en el campo visual
un halo rojo o azul. Mover el condensador al punto donde se combinen
ambos colores o el más cercano al azul.

 Después de este ajuste puede cambiar de objetivo, pero sin mover el condensador.

 Abrir el diafragma hasta cubrir todo el campo, sin mover el condensador.

 Colocar un filtro azul

 Ajuste el nivel de intensidad luminosa, en el punto en que no sea molesta al observador.

 En el caso de microscopios binoculares, ajustar la distancia interpupilar.

 Ajustar las dioptrías a los ojos del observador.

 Enfocar con el tornillo micrométrico.

 Contrastar con el diafragma iris.

 Microscopía de campo claro

Staphylococcus aureus

Streptococcus sp.

Bacteria Gram +, en muestra de esputo Nocardia en una biopsia de pulmón

 Microscopía de campo claro

Bacillus coagulans
Cromosoma de Axarus

Trypanosoma cruzi

Trichomonas vaginalis

Células HeLa infectadas con

Chlamydia trachomatis

Navicula brasiliensis
Microscopía de campo claro conidioporas

conidióforo

Conidióforos y
conidiosporas
Chloroflexus

Treponema pallidum

Levaduras Proteus vulgaris

Microscopios compuestos
Microscopio de campo obscuro

Microscopio de campo obscuro

Este tipo de microscopio, presenta un
condensador especial que bloquea los rayos
luminosos centrales y deja pasar los
periféricos, que se reflejan en la cara interna
del condensador, de esta forma el espécimen
se ilumina con los rayos laterales que son
reflejados observando un objeto fuertemente
iluminado sobre un fondo obscuro. Para evitar
que penetren en el objetivo los rayos
tangenciales que emergen del condensador, se
utiliza un diafragma en el objetivo.

Es útil para observar límites y movimientos de

especimenes pequeños no teñidos y sobre todo
puede ser usado con muestras en fresco.
Principalmente se usa para observar muestras
de organismos que se tiñen con dificultad,
como es el caso de Treponema pallidum y otras
espiroquetas debido a su grosor.
 Microscopía de campo obscuro

Closterium sp Borrelia burgdorferi

 Microscopía de Campo oscuro

Caulobacter crescentus
Glóbulos rojos

Haloquadratum sp Treponema pallidum

 Hammerschmidtiella diesingi

Borrelia burgdorferi

Volvox globator
 Treponema pallidum

Agente causal de
la sífilis
Observado con
distintos tipos de
microscopios

Campo oscuro
Microscopía electrónica de barrido o escaneo

Microscopía de campo claro

Microscopía de fluorescencia
 Microscopios compuestos Microscopio de contraste de fases

El conocimiento relativo al contraste de fases data

de 1892, pero su aplicación práctica se inicia a
partir del primer cuarto del siglo XX. Este
microscopio permite obtener mayores contrastes en
especímenes translúcidos sin la ayuda de tinciones.

Su fundamento radica en el hecho de que la luz al

atravesar medios de diferente densidad modifica su
λ y amplitud originales. El índice de refracción mide
el grado de modificación de la luz al pasar por
medios translúcidos de diferente densidad. El
propósito del contraste de fases es tomar ventaja
de los cambios de fase de la luz con respecto al
medio o de los diferentes índices de refracción de
los organelos o estructuras del espécimen. Si a un
organismo, conformado de diferentes estructuras
(cada una con diferente índice de refracción y
grosor), se le incide una onda luminosa, ésta
modificará su dirección y amplitud. Estos cambios
que se presentan en un microscopio de campo claro
no son perceptibles al ojo humano, por lo que se
requiere la utilización de instrumentos ópticos para
hacerlos evidentes.
Microscopios compuestos Microscopía de contraste de fases

Las diferencias básicas de un microscopio de

contraste de fases con uno de campo claro son:
el condensador es diferente ya que en su
interior se encuentra un diafragma anular. El
objetivo también es diferente, ya que dentro de
éste, se encuentra también un diafragma o
intercambiador de fase, cuya estructura cubre
las zonas claras del diafragma del condensador.
Este juego permite un retraso de 1/4 de la
longitud de onda, lo que lo hace perceptible al
ojo humano.

El condensador y los objetivos de contraste de

fases están marcados como “phase contrast”, lo
que indica que son para usar contraste de fases.

Este tipo de microscopio, permite ver

organismos vivos sin teñir y diferenciar
estructuras internas.
 Microscopía de contraste de fases

Fotografía de una bacteria filamentosa del azufre

Arriba: Fotografía del alga Spirogyra,

mostrando sus cloroplastos espirales.
Abajo: Diatomea Stephanodiscus,
donde los cloroplastos se observan
rojos
Fotografía de Aspergillus
a c

b d

Paramecium observado en varios microscopios compuestos. a, campo brillante; b, campo obscuro;

c, contraste de fases; d, contraste de interferencia diferencial.
Microscopios compuestos Microscopio de fluorescencia

La fluorescencia es la emisión de luz de una substancia cuando ésta es estimulada por

longitudes de onda corta, como puede ser la luz ultravioleta (LUV) (360 nM), que al incidir en
una substancia con la capacidad de fluorescer, emite luz visible (555 nM), lo que permite
observarla.
En el interior de un organismo existen substancias como
porfirinas, clorofilas, citocromos, algunas vitaminas, etc, que
al excitarse con longitudes de onda corta, emiten
espontáneamente luz visible, a este fenómeno se le llama
fluorescencia primaria o autofluorescencia.

Cuando se desea observar substancias u objetos que no

tienen fluorescencia primaria es necesario unir substancias
fluorescentes, fluoróforos o fluorocromos como los
derivados amino, carboxi e isotiocianato de fluoresceína, la
rodamina B, entre otras. A este tipo de fluorescencia se le
conoce como fluorescencia secundaria. Para observaciones
más específicas, los fluoróforos se pueden conjugar o unir a
anticuerpos o a sondas de DNA que reconocen secuencias de
RNA o DNA específicos. Esto permite observar estructuras
blanco fluorescentes después de la unión del anticuerpo o
sonda.
El microscopio de fluorescencia presenta las siguientes diferencias con un microscopio de
campo claro: su fuente luminosa es una lámpara de luz ultravioleta. Un condensador con un
filtro de excitación que retiene todas aquellas longitudes de onda que no excitan a la
substancia fluorescente y un filtro supresor selectivo que retiene toda aquella luz
ultravioleta que no fue absorbida por la substancia fluorescente para evitar daño a los ojos.
 Microscopía de fluorescencia

Candida albicans formando su Células musculares

tubo germinativo

Embrión de erizo de mar en mitosis

 E. coli
S. aureus

Cianobacterias Bacterias unidas a células de la mucosa oral

 Microscopios compuestos Microscopio confocal

La microscopía confocal nos permite observar células vivas,

permitiendo la observación de actividades fisiológicas “in
vivo”.

Todos los microscopios confocales utilizan el láser por sus

propiedades de intensidad lumínica, selección de longitud
de onda y uniformidad (emisión continua). Los más
comunes son los producidos por lámparas de argón (488 y
514 nm), krypton (568 y 647 nm) y helio-neón (543 y 633
nm) para iluminar en el espectro de la luz visible. La
iluminación ultravioleta (UV) está incorporada sólo en
algunos equipos, ya que requiere un láser especial de argón
o de helio-cadmio.

La mayor parte de los microscopios confocales se venden con el software necesario para el
procesamiento de la imagen digital. Son importantes las opciones que permiten mejorar la calidad
de la imagen mediante la reducción del ruido de fondo (aplicando filtros para las intensidades
bajas de fluorescencia) o incrementando el contraste de la imagen digital.
E. coli formando filamentos Streptomyces coelicolor
en la vesícula de un ratón

Comunidad presente en la placa Hoja de Arabidopsis infectada con

dentobacteriana Pseudomonas syringae
Microscopios compuestos Microscopio confocal

Imagen tridimensional de un líquen obtenida con

microscopía confocal, en la parte superior se observan
las algas que conforman esta simbiosis y en la parte
inferior la hifas del hongo.

Fibroblastos de ratón

Tejido cerebral
de rata
Cóclea y células del pelo
Microscopios electrónicos Microscopio electrónico de transmisión
En este microscopio se utilizan electrones en vez
de rayos de luz, y como lentes funcionan unos
electroimanes. Cuando los electrones pasan a
través de la preparación algunos son difractados
creando entonces una imagen que se hace visible
en una pantalla sensible a los electrones. La λ de
los electrones es mucho más pequeña que la de la
luz visible y, como el poder de resolución de un
microscopio es inversamente proporcional a la
longitud de onda utilizada. La resolución y
aumentos totales obtenida con el microscopio
electrónico es mucho mayor que la conseguida
con el microscopio óptico.

Con el microscopio óptico ordinario o el de

contraste de fases las estructuras más pequeñas
que pueden observarse tienen unos 0.2 µm, con el
microscopio electrónico pueden verse objetos de
0.5-1nm. Con el microscopio electrónico es posible
ver muchas estructuras. Sin embargo, a causa de
la naturaleza de este instrumento sólo pueden
examinarse objetos muy delgados: para observar
estructuras internas, incluso una sola bacteria,
ésta es demasiado gruesa para ser observada
directamente, por lo que se requiere hacer cortes
con un ultramicrotomo.
Microscopios electrónicos Microscopio de transmisión
IMAGENES

Bacterias en proceso de división

celular. Se observan los dos
nucleoides

Fotografía de las placas basales del flagelo de Rhodobacter

sphaeroides, utilizando la técnica de sombreado.
 Microscopía de Transmisión

Azotobacter Gránulos de poli ß-hidroxibutirato Nitrosomonas

Poliovirus
Conjugación bacteriana Virus Influenza AH1N1
 Microscopios electrónicos Microscopio de barrido
En el microscopio electrónico de barrido,
se utiliza una fuente de rayos catódicos, que
por medio de un campo magnético nos
permite enfocar el haz de electrones sobre la
muestra a analizar y de esta forma obtener
una imagen tridimensional. Con este
microscopio se pueden alcanzar de 100,000 a
200,000 aumentos.

Von Ardenne, en 1938, construyó el

primer Microscopio Electrónico de Barrido
(MEB); posteriormente, en Inglaterra, se
construyó el primer MEB Ambiental, con el
cual se pueden observar muestras hidratadas.

En el microscopio electrónico de barrido, la muestra se coloca en una cámara al alto vacío con
controles de posición en las tres dimensiones.

El haz de electrones se produce en la parte superior del microscopio por medio del calentamiento
de un filamento metálico con un voltaje de 10 a 30 KV. El rayo de electrones primarios sigue un
recorrido a través de la columna de vacío del microscopio, siendo modificado por un conjunto de
bobinas deflectoras (campos magnéticos). Primero atraviesa las lentes condensadoras o
electromagnéticas que le permiten ser reenfocado o centrado hacia la muestra. Posteriormente, el
diámetro del haz de electrones puede ser modificado al pasar por las lentes objetivos que
controlan la cantidad de electrones en el interior. Cuando los electrones primarios golpean la
muestra, son emitidos electrones secundarios que son atraídos por un colector, donde se aceleran
y se dirigen al cintilador. Una vez ahí la energía cinética es convertida en señales luminosas de
mayor o de menor luminosidad. Esta luz es dirigida a un amplificador donde se convierte en señal
eléctrica, la cual pasa a una pantalla de observación donde la imagen es formada línea por línea y
punto por punto, y ésta puede ser vista en tercera dimensión.
 Microscopios electrónicos Microscopio de barrido

El MEB consta de las siguientes partes:

1. Cañón de electrones (e-).
2. Filamento de tungsteno o de hexaboruro
de lantano-LaB6.
3. Ánodo.
4. Columna en vacío.
5. Lentes condensadores (centran y dirigen
el rayo de electrones).
6. Lentes Objetivas (controlan la cantidad
de electrones del haz).
7. Detectores para colectar y medir
electrones (producción de imagen).
8. Bobinas de barrido (obligan al haz a
barrer la muestra).
9. Control de aumento.
10. Generador de barrido.
11. Colector de electrones (electrones se
atraen y se aceleran).
12. Escintilador (convierte la energía
cinética de los e- en luz visible).
13. Amplificador.
14. Pantalla (imagen).
15. Bombas de vacío.
COMPARACIÓN DE MICROSCOPIOS
 Microscopios electrónicos Microscopía de barrido
Las imágenes que se obtienen por microscopía electrónica son inicialmente en blanco y negro,
sin embargo pueden ser digitalizadas y modificadas para convertirlas en colores falsos.

Cabeza del mosco Aedes aegypti

Escolex de Taenia solium

Microscopios electrónicos Microscopio de barrido
IMAGENES

Staphylococcus aureus Globulos rojos humanos

Bacteriofagos de Escherichia coli Cabeza de hormiga

Los responsables de los embarazos no deseados
Micrografía de una cianobacteria procesada por congelación y fractura y obsevada por microscopía
electrónica de barrido.
 pulga
Ascosporas de Emericella stellamaris

Escherichia coli

Treponema pallidum

Bacteria flagelada Esporas fúngicas con estructuras que

funcionan como anclas
Microscopía Electrónica de Barrido

Célula flagelada Células de la sangre

Cabeza de insecto

Microorganismos
retenidos por un
filtro Millipore

Pseudomonas aeruginosa
 Microscopio de efecto túnel y Microscopio de fuerza atómica

Dentro de la microscopía, se han diseñado dos nuevos tipos de microscopios y se les

cataloga dentro de la microscopía de proximidad, la cual reúne un conjunto de técnicas
que no utilizan lentes, ni radiación como pueden ser rayos X o electrones para obtener
imágenes de gran resolución. Las dos técnicas más relevantes son la microscopía de
efecto túnel (STM, acrónimo de Scanning Tunnel Microscopy) y microscopía de fuerza
atómica (AFM, acrónimo de Atomic Force Microscopy).

Estos dos tipos de microscopía permiten conocer la topografía y la organización de

las moléculas en la superficie de un material con una resolución de nanómetros
(esto es 10-9 metros) lo que hace posible caracterizar la superficie de un material a
escala atómica. Esta información, junto al conocimiento de cuáles son los procesos
biológicos que se estimulan como consecuencia de la estructura química y la
topografía de cada biomaterial, ha llevado al desarrollo de una nueva generación
de biomateriales cuyo diseño se basa en la observación del ordenamiento
estructural de su superficie. También, en el reconocimiento en ella de sitios
precisos donde tienen lugar las reacciones que definen la respuesta biológica y en
general, del estudio de cómo el ensamble de moléculas en una superficie es capaz
de desencadenar y controlar diferentes reacciones en la materia viva.
El microscopio de efecto túnel fue desarrollado por Gerd Binnig y Heinrich Rohrer en
1980 integrantes del grupo de investigación de IBM (Zurich). Ambos, recibieron el premio
Nobel en 1986. Este microscopio fue la base del siguiente desarrollo que corresponde al
microscopio de fuerza atómica inventado por Calvin F. Quate y Christoph Gerber en
1986.

Calvin F. Quate

Gerber junto
Binnig y Rohrer con Quate
desarrollaron el desarrollaron el
Microscopio de Efecto microscopio de
Túnel Fuerza Atómica
(AFM)
El STM está basado en el concepto de efecto túnel. Cuando una punta conductora es
colocada muy cerca de la superficie a ser examinada y se aplica una diferencia de
voltaje entre las dos se provocará el paso de electrones mediante un efecto túnel a
través del vacío entre ellas. La corriente de “tunelización” resultante es una función
de la posición de la punta, del voltaje aplicado y de la densidad de la muestra.
La información es adquirida monitoreando la corriente conforme la posición de la
punta recorre la superficie del material examinado y es desplegada en forma de
imagen utilizando un complejo sistema de software.
Con este microscopio se obtiene una resolución lateral de 0.1 nm y 0.01 nm de
resolución de profundidad.

El microscopio de fuerza atómica es un instrumento capaz de detectar fuerzas del

orden de los nanonewtons. Al rastrear una muestra es capaz de registrar
continuamente la topología mediante una sonda o punta afilada de forma piramidal o
cónica
Principio del microscopio de efecto tunel. El efecto de una punta que se aproxima al
objeto produce alteraciones cuánticas detectables.
Imágenes de microscopía de efecto túnel mostrando la red atómica del Grafito
Periódico Altamente Orientado (HOPG). La imagen de la izquierda muestra la
topografía, y la de la derecha es un mapa de fuerza normal. El tamaño de
imagen es 3nm x 3nm. Tomadas por Dang Xueming, LNM, Departamento de
Física de la Materia Condensada.
 Imagen del DNA por
microscopía de efecto túnel
Esquema del microscopio de fuerza atómica. Una punta integrada entra en contacto con el objeto
como un escaner (derecha). Un rayo laser es reflejado desde la punta en movimiento y, las
deflecciones son localizadas por el detector fotodiodo. Las imágenes topológicas se integran
mediante control electrónico y computacional.
 Usos de la microscopía de fuerza atómica
Investigación de Estudio de
materiales fenómenos Este microscopio
permite la
1.-Cubiertas de observación de
películas 1.-Abrasión superficies a nivel
2.-Cerámica 2.-Corrosión atómico y también
3.-Vidrio 3.-Fricción permite medir la
4.-Membranas 4.-Lubricación fuerza a una escala
biológicas y 5.-Pulido de nano-Newton.
sintéticas 6.-Grabado Observación de
5.-Metales 7.-Laminado proteínas, bicapas
6.-Polímeros lipídicas, complejos
7.-Materiales ADN-proteínas.
semiconductores Células, tejidos,
bacteriófagos, virus
Imágenes tomadas con un
microscopio de fuerza
atómica.

Escaneo longitudinal
de un cabello
mostrando las capas
de cutícula que se
traslapan

Nanocristales de celulosa

Plásmido absorbido a una mica Nanopartículas de oro

 Microscopía de fuerza atómica
Flagelos de Vibrio alginolyticus

Estomas de Zelkova

Esmalte de diente corroído por ácido

 Microscopía de fuerza atómica

Pseudomonas

Virus de la vid
Eritrocito
Micrografía de Saccharomyces cerevisiae observada con microscopía de fuerza atómica. Nótese la
cicatriz que deja la gema al separarse.
Micrografía de los detalles de la superficie de Escherichia coli. La superficie en apariencia rugosa
corresponde al arreglo de los lipopolisacáridos de la membrana externa.
 Diversas imágenes
utilizando microscopios de
luz y electrónicos
 Esporas
refringentes en Bacillus anthracis
una bacteria del
suelo

E. coli fimbriada
(MET)

Giardia lamblia
(MEB)
 E. coli
Uropatogénica
(MEB)
 Bacteria
infectada con
fagos
(MET)

Paramecium bursaria
Campo claro

Esporas de
Coccidioides immitis
Cilios de Paramecium Campo claro
Contraste de fases
Retrovirus HIV (MEB)
 Bacillus coagulans
Gránulos de P-β-hidroxibutirato Campo claro
(MET)

Bacteria piliada
(MET)
 Helicobacter pylori (MET) Flagelado (con un flagelo)

Ebolavirus
Legionella pneumophila
(MET)
 Virus del papiloma
(MET)

SARS (MET)

Células de la sangre
(MEB)
Caulobacter crescentus
Escherichia coli
Célula infectada por el virus Vaccinia. Microscopía de
fluorescencia
 Microscopía de fuerza atómica

a)Virus de leucemia murina emergiendo de fibroblastos

embrionarios de ratón infectados, b) virus HIV emergiendo de un
linfocito humano, c) cápside icosahédrica de un Mimivirus gigante
mostrando la “entrada” en forma de estrella d) observación
aumentada de una de las facetas de la cápside de Mimivirus.
 Amiba fagocitando
célula epiteliales
(MEB)

Vibrio mostrando un
flagelo (MET)

Microvellosidades del epitelio intestinal. Se

Leptospira observa el glicocálix(MET)
Pestañas humanas (MEB)
Superficie de
una fresa
(MEB)
Velcro (MEB)
 Pulga
(MEB)

Vénula rota
y eritrocitos
(MEB)
Hilo dental usado (MEB)
 Polvo (MEB)

Sal y pimienta
(MEB)
Ruptura de un capilar (MEB)
Herida suturada (MEB)
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El primer microscopio
 Jorge
Ortigoza

Los primeros microbiólogos