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Universidad Francisco de Paula Santander

Informe de Laboratorio N° 8: Cuantificación de ADN del hongo extraído
(Geotrichum sp.)
Ramos O. María del Pilar.1 – 1611718*, Martínez B. Adriana M.1 – 1611729*, Coronado S.
Daniela J.1 -1611738*
1 (Estudiante de séptimo Semestre De Ingeniería Biotecnológica) y * (Código Institucional)
Grupo B: 1610701 Biología Molecular (B2)
Introducción
La cuantificación de ADN son de las pruebas que comprueban con mayor exactitud
la etapa más crítica de la biología celular (Molecular Devices, 2022) en donde se tiene en
cuenta la secuenciación y la manipulación genética de un organismo vivo; la idea es
conocer si esta presenta gran presencia de ADN particularmente de la especie que se
estudia; estos suelen revisarse bajo espectrofotometría y fluorescencia, y para corroborar
aparece la absorbancia, se calcula su concentración en un formato de microplaca según los
valores del umbral analítico (ICMP “Comisión Internacional sobre Personas
Desaparecidas”, 2022). La cuantificación se considera un proceso corto, siempre y cuando
se utilice un buen método por medio de utilización de espectrofotómetro NanoDrop de
Thermo Scientific (Suárez, 2016) que es el que se encuentra disponible en el área de
laboratorio.
Este análisis por absorbancia puede variar según el estudio de enfoque, y los
parámetros establecidos por la teoría, esta se expresa por medio de una longitud de onda. El
Análisis de pruebas puede variar en ADN con una relación de 260nm/280nm con una
pureza de 1,8 a 2 y hay un rango diferente se considera una muestra contaminada por otros
compuestos (Universidad de Salamanca, 2020). El objetivo de este laboratorio es poder
evidenciar la concentración y pureza de los resultados de la extracción de ADN realizada en
prácticas anteriores y corroborar si hay presencia de componente genómico en la especie
estudiada (Geotrichum sp.) Con el fin de escoger las mejores para continuar con el estudio
molecular.
Metodología
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Imagen 1. Metodología según varios autores: (Suárez, 2020; Red de apoyo

de la Investigación de UNAM, 2015; Universidad Autónoma Metropolitana, 2019)
Realizado por Ortiz P, 2023 Metodología para Cuantificación de ADN extraído
(Geotrichum sp.) en el Espectrofotómetro Nanodrop 2000
Resultados
En la práctica se logró cuantificar ADN de hongos, empleando un
espectrofotómetro a 340 nm, el cual detecta la radiación emitida por las bases nitrogenadas
presentes en el ADN luego de ser excitadas con luz, (Rocha Salavarrieta, 2002),
A continuación, se observa la cuantificación de ADN extraído del hongo Geotrichum sp

Muestra Rango 260/280 Rango 230/260 Concentración

GB2-AM 1,63 0,86 580, 5

Nota: Tabla 1. Datos del espectrofotómetro muestra 1

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Imagen 2. Curva ABS vs Longitud de onda. Martínez, A. M. (2023).Curva

espectrofotómetro muestra GB2-AM [ Fotografía 1] Laboratorio Biología
molecular, UFPS, Los Patios, Norte de Santander, Colombia

Muestra Rango 260/280 Rango 230/260 Concentración

GB2-JC 1,87 1,02 306,9

Nota: Tabla 2. Datos del espectrofotómetro muestra 2
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Imagen 3 Curva ABS vs Longitud de onda. Martínez, A. M. (2023).Curva

espectrofotómetro muestra GB2-JC [ Fotografía 2] Laboratorio Biología molecular,
UFPS, Los Patios, Norte de Santander, Colombia

Muestra Rango 260/280 Rango 230/260 Concentración

GB2-A 1,78 0,71 304,3

Nota: Tabla 3. Datos del espectrofotómetro muestra 3

Imagen 3. Curva ABS vs Longitud de onda. Martínez, A. M. (2023).Curva

espectrofotómetro muestra GB2-A [ Fotografía 3 ] Laboratorio Biología molecular,
UFPS, Los Patios, Norte de Santander, Colombia

Muestra Rango 260/280 Rango 230/260 Concentración

GB2-PR 1,79 0,99 363,5

Nota: Tabla 4. Datos del espectrofotómetro muestra 4
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Imagen 4. Curva ABS vs Longitud de onda. Martínez, A. M. (2023).Curva

espectrofotómetro muestra GB2-PR [ Fotografía 4] Laboratorio Biología molecular,
UFPS, Los Patios, Norte de Santander, Colombia

Imagen 5. Tabla de Resultados de Cuantificación de ADN de hongos

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A partir de lo obtenido, se determinó que las muestras GB2-JC y GB2-PR, junto

con las demás muestras seleccionadas de los grupos B1, B3 y B4, son las muestras que
están bajo los rangos óptimos 260/280 y de concentración, las cuales fueron seleccionadas
para la posterior prueba de PCR.
Discusiones
Como lo expresa Rache L, 2023 la adaptación de un protocolo modificando cierta
parte del proceso es una solución que evita contaminación o afección del ADN y a su vez,
disminuye los costos del proceso. Rache supone que el empleo de un protocolo en conjunto
al uso de un kit de extracción de ADN ya estandarizado da los mejores resultados de la
relación 280/260 y 260/230 y lo relaciona con las estructuras que posee cada
microorganismo.
Conclusiones

• Para la determinación y cuantificación de ADN del hongo Geotrichum sp, se logró

evidenciar que a pesar de que en la electroforesis no se ve presencia de ADN del
hongo(Anexo 1), en la cuantificación se logra obtener ADN, con una concentración
y rango de contaminación de proteínas aceptables.
• De las 4 muestras de ADN del hongo Geotrichum sp, las muestras B2G-JC y B2G-
PR, con concentraciones de 306,9 y 363,6 y rangos de 260/280 de 1,87 y 1,79
respectivamente, se seleccionan como muestras que se pueden utilizar para la
prueba de PCR.
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