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* Autor correspondiente
Resumen– Los pretratamientos de congelación (-20 °C, 12 h) y alcalino En este estudio se ha considerado la cascarilla de arroz como
(NaOH 8%) se aplicaron individualmente y se combinaron en cáscara de arroz fuente de biomasa lignocelulósica ya que, según el MINAGRI [5], el
(Oryza sativa L.) antes de su hidrólisis con celulasa (EC: 3.2.1.4.). Se evaluaron arroz es el segundo cereal más consumido en el Perú, y el tercer cereal
los efectos sobre modificaciones estructurales, contenido de lignina, celulosa,
más cultivado en el mundo después del maíz y el trigo. [6].Por lo tanto,
contenido de hemicelulosa y producción de glucosa. Además, se describió la
los residuos de arroz lignocelulósico generados son elevados y, hasta el
cinética de producción de glucosa utilizando el modelo de Peleg. La cáscara de
arroz homogénea (1 g) con y sin pretratamientos se hidrolizó con 150 U de
momento, no se han utilizado ni eliminado de forma adecuada. La
Cellulase en 10 ml de acetato durante 60 h (37 °C, pH 5,5, 100 rpm). Como cáscara de arroz, debido a su composición, tiene un alto potencial para
resultados, las imágenes SEM evidenciaron microestructuras porosas con la producción de monosacáridos (glucosa) que podrían usarse en la
menor aglomeración generada por todos los pretratamientos, las cuales se fabricación de biocombustibles [6, 7]. Dependiendo de la variedad de
intensificaron con el pretratamiento combinado. Este pretratamiento arroz, la cáscara del arroz está compuesta por lignina (18,20% - 24,60%),
permitió obtener mayor contenido de celulosa (62,51 ± 0,3 %). Además, el hemicelulosa (18,10% - 27,06%) y celulosa (25,89% - 39,05%) [8].
contenido de glucosa después de los pretratamientos aumentó. Los
parámetros del modelo Peleg de la cinética de producción de glucosa durante
Los pretratamientos tienen como objetivo mejorar la disponibilidad de
la hidrólisis enzimática se relacionaron con el contenido inicial de glucosa
celulosa para maximizar la hidrólisis enzimática y generar mayor
(G0), la tasa de producción de glucosa (1/k1) y el rendimiento máximo de
rendimiento en azúcares fermentables. Se han estudiado algunos
glucosa (1/k2). Después del proceso de hidrólisis enzimática, en comparación
con el rendimiento de glucosa de control (0,359 ± 0,002 g G/g de cáscara de pretratamientos para modificar la estructura y composición de fuentes
arroz), este fue un 27 %, 71 % y 88 % mayor para los pretratamientos lignocelulósicas a partir de residuos. Utilizando cascarilla de arroz se estudió
congelados, alcalinos y combinados, respectivamente. el pretratamiento de congelación [9] y el pretratamiento alcalino [10],
Palabras clave-- cascarilla de arroz; congelación; pretratamiento pretratamientos con lacasa de Lentinus polychrous
alcalino; celulasa; hidrólisis encimática. [11], en todos los casos se incrementó la digestibilidad enzimática.
Por otro lado, en mazorcas de maíz se aplicaron pretratamientos
yo yoNTRODUCCIÓN de fraccionamiento mecánico a diferentes niveles [12]; celobiosa,
Para afrontar la creciente demanda mundial de energía junto celulasa y NaOH en rastrojos de piña [13]; H2O2, H2SO4 y NaOH en
con la paulatina escasez de recursos energéticos, la biotecnología residuos de yuca [14]; explosión de vapor, pretratamiento ácido y
ofrece alternativas tecnológicas que, a partir de la producción de alcalino en aserrín de pino [15].
biomasa lignocelulósica, se pueden obtener energías verdes como Este estudio propuso aprovechar una fuente lignocelulósica de
el bioetanol, el biodiesel y el biogás. La biomasa de segunda fácil acceso como es la cáscara de arroz en Perú para obtener sustratos
generación puede provenir de residuos lignocelulósicos que son utilizables como alternativa a la producción de biocombustibles. Para
renovables, accesibles, abundantes y no perturban la alimentación ello se evaluó el efecto de la aplicación de pretratamientos físicos
humana [1-3]. La biomasa lignocelulósica de segunda generación (congelación), químicos (alcalinos, utilizando solución de NaOH) y
está constituida por lignina, hemicelulosa y celulosa en una red de fisicoquímicos (alcalinos y congelación) sobre la microestructura, los
microfibrillas, esto provoca difícil acceso de enzimas para su compuestos lignocelulósicos y la posterior cinética de producción de
transformación en azúcares fermentables [4]. Por este motivo, glucosa mediante hidrólisis enzimática. .
estos residuos lignocelulósicos exigen un pretratamiento II. METROMATERIALES YMETROMÉTODOS
(biológico, mecánico, químico, etc.) que permita modificar la
estructura y su accesibilidad. A. Acondicionamiento de la cáscara de arroz
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Libertad, Perú). Para promover una alta área de contacto, la cáscara Se mezclaron 0,1 ml de muestra y 0,9 ml de DNS (previamente preparado), se
seca de arroz se molió y tamizó (tamiz n° 60, Standard Test Sieve, calentaron a 100 °C durante 10 min, se enfriaron y se diluyeron a 10 ml
EE.UU.), obteniendo partículas de 0,25 mm. La cascarilla de arroz usando agua destilada. La absorbancia se leyó a 540 nm usando un
homogeneizada presentó las siguientes características de humedad espectrofotómetro (Unico Spectro Quest 4802E, Estados Unidos). Se
(4,44%), cenizas (14,14%) y pH (6,08). construyó una curva de calibración usando diferentes concentraciones de
glucosa (0,5-2,1 g/L) mezcladas con DNS como se describió anteriormente.
B.Pretratamientos Luego, los azúcares reductores totales se expresaron en g de glucosa por g
Las partículas de cáscara de arroz homogeneizadas se pretrataron de cáscara de arroz (g G/g de cáscara de arroz).
química y físicamente. Además, se evaluó la aplicación combinada de
estos dos pretratamientos. Para esto, las muestras fueron expuestas a GRAMO.Cinética de producción de glucosa.
las condiciones descritas en la Tabla 1, después de cada pretratamiento Para construir la cinética de producción de glucosa, durante el
las muestras se secaron a 60 °C durante 12 h. proceso de hidrólisis enzimática se tomaron muestras cada 12 h
durante 60 h. La cinética de producción de glucosa se ajustó utilizando
TABLA I el modelo de Peleg (Ec. 1) [21] donde ( )es el contenido de glucosa (g de
PAGPRE REALIZADO-DESCRIPCIÓN DEL TRATAMIENTO Y CÓDIGO UTILIZADO A LO LARGO
glucosa/g de cáscara de arroz) en el momentot(h),GRAMO0es el
ESTE ESTUDIO PARA IDENTIFICAR A CADA UNO.
Pretratamiento Descripción Código
contenido inicial de glucosa (después de los tratamientos previos), 1es la
Ninguno Cáscara de arroz sin pretratamiento Control constante de velocidad (h·(g glucosa/g de cáscara de arroz)−1) y 2es la
Físico (congelación) Congelación a -20 °C durante 12 h F constante del nivel asintótico ((g glucosa/g de cáscara de arroz)−1). El
Químico (alcalino) Tratamiento alcalino con NaOH al 8%, a 121 °C A recíproco de k1representa la tasa de producción de glucosa y el
durante 85 min usando 1:10 (g de cáscara de recíproco de 2representa la producción de glucosa en el equilibrio.
arroz/mL de solución alcalina)
C. Imágenes de la estructura de la cáscara de arroz mediante microscopía Los parámetros del modelo de Peleg (Ec. 1) se ajustaron
electrónica de barrido (SEM) iterativamente a los datos experimentales minimizando la suma de
Las muestras, con y sin pretratamientos, fueron previamente errores al cuadrado ( en la ecuación. 2). Se utilizó el algoritmo de
deshidratadas y pulverizadas con una fina capa de oro de 0,150 nm gradiente reducido generalizado (método de resolución no lineal
mediante deposición de plasma (PVD) utilizando un DC Sputtering- GRG), implementado en la herramienta 'Solver' del software Excel
SPI. Luego, se observaron en un microscopio electrónico de barrido 2016 (Microsoft, EE. UU.). Las regresiones se realizaron para cada
operado a un voltaje de aceleración de 10 kV (TESCAN VEGA 3 LMU, réplica.
República Checa) utilizando un aumento de 1,00 kx.
2
=∑ =1(( )−( )) (2)
D. Determinación del contenido de componentes
h.Análisis estadístico
lignocelulósicos El % de lignina se determinó según el
Se realizó un diseño completamente al azar (CRD). Todos los
método TAPPI 222 [16]. Para determinar el % de celulosa se
procesos y análisis se realizaron al menos 3 veces. El análisis de
utilizó la norma ANSI/ASTM [17]. Para determinar el % de
varianza (ANOVA unidireccional), seguido de la prueba post-hoc de
hemicelulosa, primero se determinó el % de holocelulosa
Tukey se realizó con un nivel de significancia del 5%. Los análisis
como lo describe Browning [18], y posteriormente por
estadísticos se realizaron utilizando el software IBM SPSS Statistics
diferencia entre el % de celulosa y el % de holocelulosa se
23 (IBM SPSS, EE. UU.).
obtuvo el % de hemicelulosa.
III. RRESULTADOS YDDISCUSIÓN
E. Hidrólisis enzimática
Para realizar la hidrólisis se utilizaron 150 U de celulasa de
Efecto de los pretratamientos sobre la microestructura de la cáscara de arroz.
Aspergillus niger (Sigma-Aldrich, USA) por cada g de cáscara de
arroz en 10 ml de acetato de sodio (50 mM), a pH: 5,5 y 37 °C. La
Los cambios morfológicos de la cáscara de arroz al aplicar los
dispersión se agitó con un agitador orbital (Orbital Shaker, BS-
diferentes pretratamientos se evidenciaron en la Figura 1. La estructura
GS-30) a 100 rpm durante 60 horas [9, 19]. Después de eso, la
de la cáscara de arroz sin ningún pretratamiento (Figura 1, Control)
dispersión se filtró y los sobrenadantes se centrifugaron a una
muestra el tejido epidérmico rígido y ordenado debido a la presencia de
velocidad de 4800 rpm durante 15 minutos.
células amorfos. hemicelulosas en su área [13], tampoco tenían poros
mostrando la apariencia de células interrumpidas. Se debe al cruce de
F. Determinación de azúcares reductores totales
sus componentes [22]. Ebrahimi, Caparanga [23] observó la misma
Antes y durante la hidrólisis enzimática, el contenido de
estructura rígida sin poros en la superficie de la cáscara de arroz crudo.
azúcares reductores se cuantificó utilizando el método del ácido 3,5
dinitrosalicílico (DNS) descrito por Miller [20]. Para eso,
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Cuando se realizó el pretratamiento por congelación (Figura ± 0,147% de lignina. Estos valores fueron similares a los reportados
1, F), se observó el agrietamiento de la estructura por efectos del por Chang, Thitikorn-amorn [9], Valverde, Sarria [27], Arias Ortiz y
congelamiento. Durante la congelación del fluido (agua), los cristales Meneses Cruz [28].
formados ocupan un mayor volumen en el interior del tejido, de modo
que, al descongelarse, los espacios ocupados por los cristales de hielo
quedan libres observándose el agrietamiento de la estructura [24, 25].
Chang, Thitikorn-amorn [9] informaron los mismos efectos sobre la
estructura de la cáscara de arroz después de la congelación. Por otro
lado, el pretratamiento alcalino con NaOH al 8% (Figura 1, A) causó
erosión en la estructura. De hecho, Kahar, Taku [26] afirmó que el
pretratamiento con NaOH podría fragmentar la rigidez estructural de
las matrices de lignocelulosa de las fibras y formar muchos microporos
en su interior. Finalmente, la combinación de pretratamientos (Figura 1,
A + F) originó una estructura menos aglomerada y altamente
particionada con poros de mayor tamaño, observándose una
distribución en forma de red cristalina irregular. Esto ocurrió debido a
la supresión de hemicelulosa y la dispersión de las fibras de la
estructura lignocelulósica, principalmente debido al pretratamiento con
NaOH y además al aumento en el espesor de los poros debido al Fig. 2. Compuestos lignocelulósicos (%) tras pretratamientos. Letras
diferentes indican diferencias significativas entre pretratamientos (p<0,05).
pretratamiento por congelación.
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que mostró la tasa más baja (mayor k1valor) fue el pretratamiento limitante durante la reacción enzimática. Como se describió anteriormente,
combinado con 0,011 ± 0,000 (g G/g cáscara de arroz)/h. los efectos del pretratamiento de congelación causaron un aumento en la
tasa de producción de glucosa durante la hidrólisis enzimática, por lo tanto,
el rendimiento de glucosa en equilibrio se alcanza en tiempos cortos. Sin
embargo, probablemente el sustrato disponible (contenido de celulosa,
Figura 2) no fue suficiente para alcanzar un mayor rendimiento de glucosa.
Lo mismo podría haber ocurrido con las muestras de Control. De hecho, la
Figura 4 muestra el % de conversión de celulosa después de 60 h de
hidrólisis enzimática. Como se observó, no se obtuvieron diferencias
significativas para el % de conversión de celulosa entre los pretratamientos
después del proceso de hidrólisis enzimática.
combinado, alcanzando valores de rendimiento de glucosa previstos de + Alcalino) tiene un mayor impacto sobre los componentes
0,616 ± 0,023 y 0,726 ± 0,180 (g G/g de cáscara de arroz), respectivamente. lignocelulósicos. Obteniendo un aumento del %celulosa (62,51 ± 0,06%),
Por el contrario, el pretratamiento de Control y Congelación podría alcanzar disminución del %hemicelulosa (12,44 ± 0,28%) y un aumento del
valores de rendimiento de glucosa previstos de 0,482 ± 0,011 y 0,442 ± 0,008 %lignina (24,72 ± 0,16%). Los azúcares reductores totales se expresaron
(g G/g de cáscara de arroz), respectivamente. en glucosa, cuya cantidad se evaluó después de los pretratamientos y
durante la hidrólisis enzimática. En comparación con el control, todos
TABLA 2 los pretratamientos aumentaron significativamente la cantidad de
PAGMODELO ELEG(MIq.1)PARÁMETROS OBTENIDOS DEL MODELADO DE glucosa, siendo mayor en el pretratamiento combinado. Por otro lado,
DATOS DE LA CINÉTICA DE PRODUCCIÓN DE GLUCOSA.DIFERENTES LETRAS
no hubo evidencia de una mejora en la tasa de producción de glucosa
MUESTRAN DIFERENCIAS SIGNIFICATIVAS ENTRE PRE-TRATOS(PAG<0,05).
(parámetro cinético, k) con la aplicación de pretratamientos. Sin
Pretratamientos embargo, hubo diferencias significativas en la cantidad de glucosa
Modelo Peleg
Control F A A+F generada después de la hidrólisis, siendo mayor cuando se utilizó el
parámetros
GRAMO0
pretratamiento combinado.
[g G/g cáscara de arroz] 0,002±0,002a 0,066±0,003b 0,13±0,001C 0,34±0,011d
k1
[hꞏ(g G/g cáscara de arroz)-1] 43,339±2,671C 17,311±1,177a 30,798±4,397b 88,421±1,167d REFERENCIAS
k2
[(g G/g cáscara de arroz)-1] 2,076±0,048antes de Cristo2,264±0,043C1,624±0,062ab1,447±0,419a [1] Almarsdottir, AR, MA Sigurbjornsdottir y J. Orlygsson, Efecto de varios factores
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