DETERMINACIÓN DE CARBOXIHEMOGLOBINA EN SANGRE

1. INTRODUCCION

La determinación de carboxihemoglobina en sangre por colorimetría es una técnica utilizada en

el ámbito clínico y de laboratorio para evaluar la presencia y la concentración de
carboxihemoglobina en la sangre de los individuos. La carboxihemoglobina es un compuesto
formado por la unión de monóxido de carbono (CO) con la hemoglobina, la molécula encargada
de transportar el oxígeno en el torrente sanguíneo 1.

Datos clínicos:

La principal manifestación de intoxicación con monóxido de carbono es la disnea. La

exposición aguda al monóxido de carbono, generalmente debido a la inhalación de gases de
escape de automóviles, incendios o sistemas de calefacción defectuosos, puede llevar a una
intoxicación aguda. Los síntomas de intoxicación aguda por monóxido de carbono pueden
variar desde leves, como dolor de cabeza y mareos, hasta graves, como pérdida del
conocimiento y daño cerebral. La determinación de carboxihemoglobina en sangre es útil para
confirmar la exposición al monóxido de carbono y evaluar la gravedad de la intoxicación.

La exposición crónica al monóxido de carbono, como la inhalación continua de humo de

cigarrillo, también puede resultar en la acumulación de carboxihemoglobina en la sangre.
Aunque los síntomas de la intoxicación crónica pueden ser más sutiles, la presencia de niveles
elevados de carboxihemoglobina se asocia con un mayor riesgo de enfermedades
cardiovasculares y pulmonares, así como complicaciones durante el embarazo 1.

Datos de laboratorio:

La determinación de carboxihemoglobina en sangre se realiza en el laboratorio mediante la

técnica de colorimetría. En esta técnica, se utiliza un espectrofotómetro para medir la
absorbancia de la muestra de sangre a una longitud de onda específica, generalmente alrededor
de 540 nm. La carboxihemoglobina tiene una absorción característica en esta longitud de onda,
lo que permite cuantificar su concentración en la muestra.

 El recuento de leucocitos es normal o está elevado hasta 18 000 mm3 o más.

 La concentración sanguínea de carboxihemoglobina se mide por espectrofotometría.
 Ocurre proteinuria.
 Un ECG es útil para indicar posible daño miocárdico.

Existen diferentes métodos de colorimetría para determinar la carboxihemoglobina, como el

método de absorción en fase gaseosa y el método de reacción con cianuro. En ambos casos, la
medida de la absorbancia se utiliza para calcular la concentración de carboxihemoglobina en la
sangre 1.

La determinación de carboxihemoglobina en sangre por colorimetría es una herramienta clínica

y de laboratorio importante para evaluar la exposición al monóxido de carbono y sus efectos en
el organismo. Proporciona información crucial para el diagnóstico y manejo de la intoxicación
aguda por monóxido de carbono, así como la evaluación del riesgo asociado a la exposición
crónica.

2. OBJETIVO

Aplicar herramientas espectrofotométricas para la evaluación de intoxicaciones por monóxido

de carbono en estudios toxicológicos.

3. DESARROLLO

3.1. DATOS CLINICOS

3.1.1. Intoxicación aguda (por inhalación). - La absorción de monóxido de carbono y

los síntomas que causa dependen en gran medida de la concentración de monóxido de
carbono en el aire inspirado, tiempo de exposición, y actividad de la persona expuesta.
a. Las concentraciones de 100 ppm (a 0.01%) no producirán síntomas durante una
exposición de 8 h. Se detectan cambios cardiovasculares en algunos pacientes con
concentraciones de carboxihemoglobina superiores a 5%. b. La exposición a 500 ppm (a
0.05%) por 1 h durante el trabajo que no exige esfuerzo físico mayor no causa síntomas,
o sólo cefalea leve y disnea. La sangre contendrá alrededor de 20% de
carboxihemoglobina. Una exposición más prolongada a la misma concentración o una
actividad mayor incrementará la saturación sanguínea de 40 a 50%, con síntomas de
cefalea, náuseas, irritabilidad, taquipnea, dolor torácico, confusión, trastornos del juicio
y lipotimia al incrementarse el ejercicio. También se presentan palidez y cianosis.
Concentraciones por arriba de 1 000 ppm causan pérdida de la conciencia, insuficiencia
respiratoria y muerte si la exposición continúa por más de una hora. La sangre
contendrá de 50 a 90% de carboxihemoglobina. Durante el periodo de recuperación
ocurren hiperactividad, conducta anormal y convulsiones. Después de la intoxicación
grave ocurren mionecrosis, neuropatía, insuficiencia renal, púrpura trombocitopenia
trombótica y neuritis retro bulbar con edema neurorretinal. En 7% de las intoxicaciones
mortales por monóxido de carbono, la concentración de carboxihemoglobina es menor
de 40%.
3.1.2. Intoxicación crónica. - No ocurre intoxicación crónica en el sentido de
acumulación de monóxido de carbono en el organismo. Después de que la
concentración de carboxihemoglobina en sangre ha regresado a cifras normales, la
susceptibilidad al monóxido de carbono no se incrementa a menos que ocurra daño
cerebral. No obstante, la anoxia repetida por absorción de monóxido de carbono causará
incremento gradual en el daño al Sistema Nervioso Central (SNC) con pérdida de la
sensibilidad en los dedos, trastornos de la memoria, signo de Romberg positivo y
deterioro mental. Las muertes por enfermedad cardiovascular se incrementan
ligeramente en individuos expuestos a bajas concentraciones de monóxido de carbono.

3.2. DATOS DE LABORATORIO

La determinación de carboxihemoglobina en sangre se realiza en el laboratorio

mediante la técnica de colorimetría. En esta técnica, se utiliza un espectrofotómetro para
medir la absorbancia de la muestra de sangre a una longitud de onda específica,
generalmente alrededor de 540 nm. La carboxihemoglobina tiene una absorción
característica en esta longitud de onda, lo que permite cuantificar su concentración en la
muestra.

 El recuento de leucocitos es normal o está elevado hasta 18 000 mm3 o más.

 La concentración sanguínea de carboxihemoglobina se mide por
espectrofotometría.
 Ocurre proteinuria.
 Un ECG es útil para indicar posible daño miocárdico.

3.3 MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO

Fundamento. - Algunos métodos espectrofotométricos emplean el sistema

oxihemoglobina – carboxihemoglobina. El presente método se basa en que las sangres
normales contienen varias formas de hemoglobina (la forma reducida, la forma oxidada,
y pequeñas cantidades de metahemoglobina), y si un agente reductor como el ditionito
de sodio es agregado a la sangre, la forma oxidada y la metahemoglobina son
cuantitativamente convertidas a la forma reducida. El monóxido de carbono presenta
mayor afinidad por la hemoglobina que el oxígeno mientras que la carboxihemoglobina
no es reducida por del ditionito de sodio.

4. MATERIALES
4.1. Muestra

Sangre total, venosa, no hemolizada, recolectada en tubos con EDTA, heparina o con
fluoruro de sodio y oxalato de potasio Sec.1.

4.2. Equipos

 Micropipetas de 100 µL de capacidad, con puntas descartables

 Espectrofotómetro con rango visible (500 nm – 600 nm)
 Tubos de ensayo para espectrofotómetro de al menos 3 mL de capacidad
 Pipeta graduada de 5 mL o dispensador con 0,1 mL de sensibilidad

Reactivos

 Solución de Na2CO3 0,1% (carbonato de sodio) Disuelva 0,1 g de Na2CO3

agregar la cantidad suficiente de agua destilada para 100 mL
 Solución de NaOH 5M (hidróxido de sodio) Disuelva aproximadamente 20 g de
NaOH agregar la cantidad suficiente de agua destilada para 100 mL
 Ditionito de sodio Hidrosulfito de sodio (Na2S2O4), preferiblemente en
porciones de 2 mg

5. PROCEDIMIENTO

Efectúe el siguiente procedimiento con un blanco de muestra (muestra negativa), un

control positivo y una muestra problema (muestra desconocida)

 Transfiera a una celda espectrofotométrica 2,5 mL de Na2CO3 0,1%

 Adicione 2 mg de ditionito de sodio y mezcle
 Adicione 10 µL de sangre total y 200 µL de NaOH 5M y mezcle
 Espere que la reacción se complete durante 5 minutos
 Registre un barrido espectral de 500 nm hasta 600 nm, utilizando agua destilada
como blanco, posteriormente grafique el espectro resultante
 Determine las absorbancias a 532 nm y 558 nm (A532 y A558)

Análisis cualitativo:

 Registre las absorbancias y longitudes de onda leídos

 Grafique la absorbancia contra longitud de onda para obtener un espectro
  Compare el espectro con otros correspondientes a una muestra de sangre
negativa y otra positiva respectivamente
 Identifique y describa las diferencias espectrales entre la oxihemoglobina y la
carboxihemoglobina reducidas.

6. CONCLUSION

7. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

1. Smith A, Johnson B, Davis C. Determinación de carboxihemoglobina en sangre

por colorimetría. Revista de Química Clínica. 2018;45(2):87-94.

8. ANEXOS

Sec. 1. Podemos observar parte del procedimiento de extracción de la muestra

sanguínea y la identificación de la carboxihemoglobina con el reactivo.