UNIVERSIDAD REGIONAL AMAZÓNICA IKIAM

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA VIDA

CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

Práctica 4. Cultivo e Identificación microbiana mediante pruebas fenotípicas y

bioquímicas.

Informe de laboratorio de Microbiología

Autores: Emilio Bernabé Parra Guzmán

Erick Aníbal Palacios Loayza

Fernanda Flecher Loza

Nathaly Anahi Martinez Orozco

Napo – Ecuador

2023
 Cultivo e Identificación microbiana mediante pruebas fenotípicas y bioquímicas.
1
Universidad Regional Amazónica Ikiam: Ciencias de la Vida, Microbiología. (12 de diciembre de 2023)

1. Resumen
El inóculo, hace referencia a la muestra de microorganismos para comenzar un
cultivo contamos con tres tipos de bacterias: Staphylococcus, Pseudomonas y
Escherichia coli (E. coli) Los medios de cultivo utilizados incluyen Agar McConkey
(MKL), Agar Sangre Humana (ASH), Agar Triple Azucar-Hierro (TSI), Agar Urea y
Agar Citrato. Estos medios son empleados para el crecimiento y la identificación de
diferentes bacterias en el laboratorio. Para Staphylococcus y Escherichia coli, utilizamos
medios de cultivo generales o selectivos, como agar nutritivo o agar MacConkey, Agar
Sangre Humana respectivamente para cada una de las bacterias. Pseudomonas y
Staphylococcus son bacterias de géneros diferentes con características distintas a pesar
de que ambas son Gram negativas. Es importante distinguir entre ellas para un
diagnóstico y tratamiento adecuados de las infecciones bacterianas.

El método de siembra que utilizamos se denomina agotamiento por estrías para

obtener colonias aisladas y se introduce el cultivo de trasplante en diversos campos. La
importancia de que los medios de cultivos sean los adecuados con nutrientes esenciales,
fijándonos en la formación de colonias, crucial para la identificación bacteriana. Nos
centraremos en la identificación, mediante pruebas fenotípicas y genotípicas, junto con
pruebas bioquímicas, para comprender propiedades metabólicas únicas para una
comprensión detallada de la diversidad microbiana, crucial para investigaciones en
microbiología clínica y seguridad alimentaria.

1.1. Palabras claves.

Staphylococcus -Pseudomonas - Escherichia coli (E. coli) -Medios de cultivo- Agar
(MKL)- (ASH)- (TSI), Agar Urea y Agar Citrato

2. Abstract
The inoculum refers to the sample of microorganisms to start a culture. We have
three types of bacteria: Staphylococcus, Pseudomonas and Escherichia coli (E. coli).
The culture media used include McConkey Agar (MKL), Human Blood Agar (ASH). ,
Triple Sugar-Iron Agar (TSI), Urea Agar and Citrate Agar. These media are used for the

2
growth and identification of different bacteria in the laboratory. For Staphylococcus and
Escherichia coli, we use general or selective culture media, such as nutrient agar or
MacConkey agar, Human Blood Agar respectively for each of the bacteria.
Pseudomonas and Staphylococcus are bacteria from different genera with different
characteristics even though they are both Gram negative. It is important to distinguish
between them for proper diagnosis and treatment of bacterial infections.
The sowing sowing method we use is called streak depletion to obtain isolated
colonies and transplant cultivation is introduced in various fields. The importance of
culture media being adequate with essential nutrients, focusing on colony formation,
crucial for bacterial identification. We will focus on identification, using phenotypic and
genotypic testing, along with biochemical testing, to understand unique metabolic
properties for a detailed understanding of microbial diversity, crucial for research in
clinical microbiology and food safety.

2.1. Keywords.
Staphylococcus -Pseudomonas - Escherichia coli (E. coli) -Culture media- Agar (MKL)-
(ASH)- (TSI), Urea Agar and Citrate Agar

3
3. Índice
1. Resumen………………………………………………………………………...2
1.1. Palabras claves
………………………………………………………………....2
2. Abstrac…………………………………………………………………………..2
2.1. Keywords…………………………………………………………………
……..3
3. Índice…………………………………………………………………………….4
4. Introducción…………………………………………………………………….5
4.1. Identificación y
caracterización……………………………………………….5
5. Obejetivos del Informe…………………………………………………………6
6. Materiales y métodos…………………………………………………………...6
6.1. Materiales………………………………………………………………
……….6
6.2. Métodos…………………………………………………………………
……….7
7. Resultados……………………………………………………………………….7
Tabla 1. Tipo de medios de cultivos empleados en el laboratorio…………...7
Tabla 2: Características fenotípicas coloniales del cultivo de bacterias…….7
Tabla 3: Resultados de la batería bioquímica………………………………...7
Tabla 4: Resultados comparativos entre las cepas de cocos Gram positivos.7
Tabla 5: Resultados comparativos entre las cepas de bacilos Gram
negativos………………………………………………………………………...7
8. Discusión de los resultados……………………………………………………10
9. Conclusiones…………………………………………………………………...10
10. Perspectivas……………………………………………………………………11
11. Referencias Bibliográficas……………………………………………………11
12. Anexos………………………………………………………………………….12

4
 Loayza, Erick1; Parra, Emilio2; Flecher, Fernanda3; Martinez Nathaly4
4. Introducción
Los microorganismos pueden habitar en lugares extremadamente diversos, se
pueden encontrar en cualquier lugar adecuado para su crecimiento y desarrollo de los
organismos superiores, incluso vive dentro de ellos (Rodríguez, 2017). Para la siembra
de microrganismos el método más usual es la siembra por estría sobre un medio de
cultivo sólido. Un respectivo medio de cultivo adecuado para la investigación
microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y
sales inorgánicas (Tovar, 2012).

La temperatura para cultivar microorganismos variará según el tipo de

microorganismos. Generalmente, la temperatura óptima de cultivo para la mayoría de
los microorganismos está entre 35 y 37°C (Bouza et al., 1993). Para el cultivo de
microorganismos, una de las técnicas más usadas es el agotamiento por estrías, el cual
es utilizado para obtener colonias aislada en placas de agar (DIRECCION DE
BROMATOLOGÍA DE NEUQUEN, 2021). El propósito del cultivo de trasplante es
preparar plantas o microorganismos para su posterior trasplante a un nuevo medio o
sustrato. Esta tecnología se utiliza en diversos campos como la agricultura, la
horticultura y la microbiología (huertolia, 2021).

La formación de colonias en los medios de cultivo puede variar según el tipo de

organismo que se cultive. En general, una colonia es un grupo visible de células que se
desarrolla a partir de una sola célula o grupo de células en un medio de cultivo (Castro,
2007). Algunas colonias pueden ser redondas, mientras que otras pueden tener una
forma irregular. Además, las colonias pueden tener características como lisas, rugosas,
brillantes, opacas, húmedas o secas. Estas características pueden ayudar a los
microbiólogos a identificar y clasificar diferentes tipos de organismos en medios de
cultivo y además pueden tener varias características particulares (Manzano, 2019).

4.1. Identificación y caracterización

5
 Se habla que la identificación de microrganismos, ya que este es un proceso de
gran importancia para una colonia de cultivos microbianos. Se toma como uno de los
requisitos fundamentales para que una cepa sea ingresada a una colección, también
permite direccionar la búsqueda de un microrganismo identificado, estos se pueden
dividir en dos grupos: fenotípicos y genotípicos (Carrasco, 2016).

Las pruebas bioquímicas sirven para determinar la actividad metabólica de una

cepa pura, también se pueden combinar para identificar satisfactoriamente una especie
bacteriana (Labster theory pages, 2020). Consisten en distintitos test químicos aplicados
a medios biológicos en los cuales es conocida su reacción, no permiten identificar
distintos microrganismos presentes. Tiene un sistema el cual consiste en determinar, su
actividad de la vía metabólica a partir de un sustrato el cual se puede incorporar en
cualquier medio de cultivo. (Matinez, 2016).

5. Objetivos del Informe

Objetivo General.
 Analizar e Identificar los microorganismos presentes en un medio de cultivo
utilizando técnicas fenotípicas y bioquímicas.
Objetivos Específicos.
 Comprobar el crecimiento de la bacteria Escherichia coli en las diferentes
baterías bioquímicas para su posterior lectura.
 Interpretar las reacciones obtenidas y el crecimiento de los microorganismos a
base de la bibliografía establecida.

6. Materiales y métodos.
6.1. Materiales
 Cultivo en placa de Escherichia coli
 Cultivo en placa de Staphylococcus aureus
 Cultivo en placa de Pseudomonas aeruginosa
 Asa de siembra microbiológica
 Porta objetos
 Gradillas para tubos
 Mechero
 Incubadora
 EPP (guantes, mascarilla, gafas, etc)

Medios de cultivo:

6
- Agar McConkey (MKL)
- Agar Sangre Humana (ASH)
- Agar Triple Azucar-Hierro (TSI)
- Agar Urea
- Agar Citrato
- Medio SIM

Reactivos:
- Peróxido de Hidrógeno al 30% - Reactivo de Kobacs - Tiras o discos de oxidasa.

6.2. Métodos
1.- Para la realización de la práctica como primer punto se llevó a cabo la desinfección
del área, el cual conlleva la limpieza del mesón con alcohol.
2.- como segundo paso llevamos los cultivos cerca de un mechero para evitar la
contaminación.
3.- Se rotulo las cajas petris y tubos de ensayo de pruebas bioquímicas para la
clasificación
4.- Se esterilizo el asa llevándola al rojo vivo en el calor, y luego enfriar
5.- Se tomó una colonia de bacterias aisladas con el asa esterilizada para sembrarla
sobre una placa Petri que contenía un medio de cultivo Agar sangre Humana, se realizó
un inoculo primario, esterilizar el asa y proceder a realizar la siembra por el método de
agotamiento en estría.

7. Resultados
Tabla 1. Tipo de medios de cultivos empleados en el laboratorio.

Medio de Cultivo Composición del medio de Tipo de medio según

cultivo
1. Agar McConkey Digerido pancreático de
gelatina y peptonas como
fuentes de nutrientes,
monohidrato de lactosa como
carbohidrato fermentable,
sales biliares y violeta cristal
como agentes selectivos, y
rojo neutro como indicador
de pH
2. Agar Sangre Agar base enriquecido y 5%
de sangre ovina
3. TSI Contiene extracto de
selectividad de crecimiento
Promover el crecimiento de
bacterias gramnegativas y
diferenciarlas en función de
su capacidad para
metabolizar la lactosa.
Para el crecimiento de una
amplia gama de bacterias,
medio no selectivo. Incluye
el crecimiento de patogenos
Se utiliza para determinar la

7
 levadura, extracto de carne, capacidad de una bacteria
peptona, proteosa peptona, para fermentar la glucosa,
cloruro de sodio, sulfato lactosa y sacarosa, así como
ferroso de amonio, tiosulfato para producir sulfuro de
de sodio, rojo de fenol y hidrógeno y gas
agar.
4. UREA Tripteína, glucosa, cloruro Se utiliza para determinar la
de sodio, rojo de fenol y agarcapacidad de una bacteria
para hidrolizar la urea por
medio de la enzima ureasa,
liberando amoníaco y
dióxido de carbono
5. CITRATO Contiene citrato de sodio, Se utiliza para determinar la
fosfato de potasio, magnesio, capacidad de una bacteria
cloruro de amonio, sulfato de para utilizar el citrato como
hierro, agar y bromotimol única fuente de carbono
azul
6. OXIDASA Contiene peptona, cloruro de Se utiliza para determinar la
sodio, agar y tetrametil-p- capacidad de una bacteria
fenilendiamina para producir la enzima
dihidrocloruro oxidasa
7. SIM Contiene triptona, sulfato Se utiliza para determinar la
ferroso, cloruro de sodio, capacidad de una bacteria
agar y rojo de fenol para producir sulfuro de
hidrogeno, Indol y su
motilidad.

a) Resultados del cultivo en medio Agar Sangre - Agar McConkey, de cada una de
las bacterias estudiadas en la práctica.

Tabla 2: Características fenotípicas coloniales del cultivo de bacterias.

Nombre científico de la bacteria: Staphylococcus

aureus
Nombre del Medio de Características de Graficar el cultivo después de
cultivo y Tipo de desarrollo colonial la incubación
siembra
Agar Sangre Forma: Filamentosa
Tipo de siembra:
Estriado Tamaño: Grande

Borde: Ondulado

Elevación: Plana, grumosa

8
 Superficie: Brillantes Cultivo después de 48 horas
Descripción: Su color es blanco
y consistencia vicosa, se puede
ver su forma filamentosa en la
parte de menos estriado.

Nombre científico de la bacteria: Pseudomonas

Nombre del Medio de Características de Graficar el cultivo después de

cultivo y Tipo de desarrollo colonial la incubación
siembra
Agar sangre Forma: Irregular
Tipo de siembra: Por
estriado Tamaño: Grande

Borde: Ondulado
filamentoso

Elevación: Plana

Superficie: Opaca

9
 Cultivo después de 48 horas
Descripción: Su color es blanco
opaco, después del horario se
puede observar que la bacteria
tuvo un crecimiento rápido e
irregular.

b) Resultados de la batería bioquímica para Entero bacterias del microorganismo

asignado.

Tabla 3: Resultados de la batería bioquímica.

Nombre científico de la bacteria: Escherichia coli

Prueba Lectura del (Graficar la/s
Interpretación del resultado
Bioquímica Resultado reacción/es)

SIM

TSI

UREA

10
 CITRATO

OXIDASA

c) Resultados comparativos de las pruebas bioquímicas realizadas a las bacterias

Gram positivas.

Tabla 4: Resultados comparativos entre las cepas de cocos Gram positivos.

Cepa 1 Cepa 2

Clave: Clave:
Prueba bioquímica Nombre: Nombre
Resultados Reportado en la Resultados Reportado en la
obtenidos bibliografía obtenidos bibliografía
Morfología
Agrupación
Gram
Crecimiento
en Agar
Sangre
Hemólisis
Catalasa

d) Resultados comparativos de las pruebas bioquímicas realizadas a las bacterias

Gram negativas.

Tabla 5: Resultados comparativos entre las cepas de bacilos Gram negativos.

Cepa 1 Cepa 2

Clave: Clave:
Prueba bioquímica Nombre: Nombre
Resultados Reportado en Resultados Reportado en
obtenidos la bibliografía obtenidos la bibliografía

11
 Morfología
Gram
Crecimiento en
medio
McConkey
Oxidasa
TSI
a) Fermentación de
Glucosa
b) Fermentación de
Lactosa
c) Producción de H2S
d) Producción de gas
Citrato
Ureasa
SIM
a) Producción de H2S
b) Indol
c) Motilidad

8. Discusión de los resultados.

Reconocer cuál es la importancia de los factores nutricionales del medio de cultivo, el

pH y la temperatura en los cultivos microbianos.
1. Determinar para cada uno de los medios de cultivo empleados: ¿Cuál es su
composición (fuente de carbono, fuente de nitrógeno, si tiene alguna substancia
inhibitoria, si tiene alguna substancia orgánica de enriquecimiento, si tiene algún
indicador de pH)?, ¿Qué tipo de medio es? y ¿Cómo la composición del medio
influye en el crecimiento de las bacterias estudiadas?
2. Determinar 1) ¿Cuáles fueron las características fenotípicas (características
coloniales)? y 2) ¿Cuáles fueron las características distintivas en los medios de
cultivo diferenciales?, de cada una de las bacterias estudiadas.
3. Interpretar los resultados de la batería bioquímica de las bacterias analizadas y
determinar cómo actúa el indicador de pH en cada reacción química producida.
4. Comparar los res000000000000ultados obtenidos entre las 2 cepas de Cocos Gram
Positivos y entre las 2 cepas de Bacilos Gram negativos.
5. ¿Se puede clasificar a las bacterias estudiadas de acuerdo a sus características
fenotípicas y características bioquímicas observadas? ¿Por qué?
9. Conclusiones
 Este enfoque proporciona una comprensión detallada y completa de la
diversidad microbiana en las muestras analizadas. Utilizando métodos
fenotípicos, como la observación de características morfológicas y el estudio del
comportamiento visible, se puede obtener información valiosa sobre la
apariencia y el comportamiento general de los microorganismos.

12
  El Aislamiento y caracterización de E. coli mediante pruebas bioquímicas
proporciona una identificación específica y confiable de este microorganismo.
Estas técnicas son esenciales para comprender sus propiedades metabólicas
únicas, facilitando así la investigación y las aplicaciones prácticas en áreas como
la microbiología clínica y la seguridad alimentaria.
 La interpretación de las respuestas microbianas y el crecimiento a la luz de la
literatura disponible es esencial para sacar conclusiones importantes en la
investigación microbiana. Este método apoya la identificación y comprensión
precisas de las propiedades microbianas y también contribuye al desarrollo del
conocimiento científico y aplicaciones prácticas en diversos campos.
10. Perspectivas
 Mantener una rigurosa observación de las colonias formadas en los medios de
cultivo, considerando sus características morfológicas, textura y brillo, para una
clasificación más precisa de los microorganismos.
 Priorizar la elección de medios de cultivo específicos, adaptados a las
necesidades nutricionales de cada bacteria, para optimizar el crecimiento y la
identificación en investigaciones microbiológicas.
 Emplear métodos fenotípicos, como la observación detallada de las
características visibles, para obtener información valiosa sobre el
comportamiento general de las bacterias

11. Referencias bibliográficas

Bouza, E. L. (1993). Hemocultivos. España: Picazo, Juan.

Carrasco, J. (2016). biblioteca.inia.cl. Obtenido de biblioteca.inia.cl:

https://biblioteca.inia.cl/bitstream/handle/20.500.14001/6945/NR42415.pdf

Castro, C. (19 de 01 de 2007). OLD.IUPAC.ORG. Obtenido de OLD.IUPAC.ORG:

https://old.iupac.org/publications/cd/medicinal_chemistry/Practica-IV-3.pdf

DIRECCION DE BROMATOLOGÍA DE NEUQUEN. (07 de 2021). Saludneuquen. Obtenido de

Saludneuquen:
https://www.saludneuquen.gob.ar/wp-content/uploads/2021/08/ANAL-005-
Microbiologia-general.pdf

huertolia. (2021). huertolia.com. Obtenido de huertolia.com: https://huertolia.com/cual-es-el-

proposito-de-trasplantar-plantas/?=

13
Labster theory pages. (2020). https://theory.labster.com/. Obtenido de
https://theory.labster.com/: https://theory.labster.com/es/biochemical-identification-
bacteria/

Manzano, C. (06 de 2019). oa.upm.es. Obtenido de oa.upm.es:

https://oa.upm.es/57044/1/TFG_CARLOS_MANZANO_BASALO.pdf

Matinez, M. (18 de 04 de 2016). es.slideshare.net. Obtenido de es.slideshare.net:

https://es.slideshare.net/Marlenpmtz/pruebas-bioqumicas-61067684

Rodríguez, K. P. (2017). El hábitad de los microbos. Ciencia, 18.

Tovar, F. (26 de 09 de 2012). conalepfelixtovar. Obtenido de conalepfelixtovar:

https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/medios-de-cultivo/#:~:text=Un
%20medio%20de%20cultivo%20adecuado,otras%20sustancia%20inductoras%20del
%20crecimiento.

12. Anexos

14