Universidad Nacional Autónoma de Honduras

Escuela de Microbiología
Departamento de Bioanalisis e inmunología
Técnicas básicas e instrumentales

Trabajo:
Diferentes modelos de microscopios de Fluorescencia, ventajas y
desventajas, y aplicaciones de estos.

Catedrática:
Dra. Claudia Waleska Sánchez

Integrantes:
Angie Felicia García Orellana 20191007180
María José Valdez Irías 20201004799
Mayra Elizabeth Hernández Martínez 20201002997

Sección 1300

Lugar y fecha:
Tegucigalpa M.D.C 24 de febrero del 2022
 Introducción

Si bien sabemos un microscopio de fluorescencia no es más que una variación del

microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una
determinada longitud de onda.
Existen muchas marcas de microscopios de fluorescencias entre ellos están
Microscopios de fluorescencia Leica, Olympus. Medline Carl Zeis, Kern & Sohn.
Biobase. En esta ocasión indagaremos en las marcas de Microscopio de
fluorescencia LED Trinocular invertido, filtros IOS Azul/Verde/UV y Confocal.
Por medio de este contenido plantearemos las ventajas y desventajas de ambas
marcas así como también la utilidad que se le da a cada uno de estos dentro de los
laboratorios, y las características y funciones que desempeñan.

Objetivos
1. Describir al menos dos marcas de microscopios de fluorescencia.
2. Enumerar tanto las ventajas, así como también las desventajas que cada uno
de estos nos brindan.
3. Conocer las funciones y características de ambas marcas.
4. Distinguir cual marca sería más beneficiosa para usar dentro de un
laboratorio.
Microscopio Confocal
El microscopio confocal es uno de los más populares del mundo, desarrollado para
visualizar imágenes tridimensionales. Se define como un microscopio que emplea una
técnica óptica la cual permite incrementar el contraste, utilizando un pinole espacial.
A través de este proceso se pueden obtener imágenes tridimensionales.
El primer concepto de una imagen confocal fue inventado por el matemático
estadounidense Marvin Lee Misnky, en 1957, como parte de su diseño de un
microscopio de fluorescencia. En aquel momento no existía la capacidad tecnológica
para la creación de un microscopio confocal. Fue hasta finales de la década de los 80
que se creó el primer modelo, abriendo una nueva rama de estudio denominada
microscopía confocal.

Los microscopios confocales captan la luz de todos los planos,

pero no toda llega hasta el ojo del investigador. La luz emitida
por los planos que está fuera de foco al momento de estudiar
una muestra, impide la visualización de la misma de manera
específica. Esta luz se elimina con la incorporación “pinhole” o
diafragma dentro del microscopio.
Los objetos tridimensionales tienen varios planos focales y la luz de todos sus planos
es refractada por la lente. Pero, solo la que está en el plano central pasa a través del
pinhole, permitiendo una imagen nítida y sin interferencia del espécimen.
Los microscopios confocal modernos están complementados con sistemas
informáticos que permiten realizar una reconstrucción tridimensional. Dicha
reconstrucción en distintas secciones ópticas se asemeja a los cortes de un sistema
radiológico de TAC o resonancia magnética. A partir de allí se apertura nuevos
campos de investigación centrados en la reconstrucción informáticamente de
estructuras anatómicas humanas.
Los microscopios confocales simples tienen un diseño básico que permiten formar
una imagen a través de un proceso de barrido punto a punto de la muestra. Dicho
proceso genera imágenes con mayor resolución.
Los microscopios confocales se componen de:
 Fuente luminosa: Capta la luz amplificada por emisión estimulada de
radiación.
 Espejo dicroico: Refleja totalmente la luz que incide con un ángulo de cerca
de 45°.
 Ranura detectora “Pinhole”: Permite el paso de la luz reflejada por el plano
focal.
 Lente objetivo: Enfoca los rayos de luz que se reflejan en el espejo dicroico
hacia el plano focal en las distintas secciones ópticas de la muestra.
 Detector: Recibe el haz de luz y corrige las distorsiones para generar una
imagen.

Funciones del microscopio confocal
Entre las aplicaciones más importantes del microscopio confocal destacan:
 Monitorizar el movimiento de las moléculas dentro de las células.
 Localizar la posición de las secuencias de los ácidos nucleicos de las células.
 Realizar hibridación histoquímica de alta resolución con procedimientos no
isotópicos, algo imposible antes de la invención de este tipo de microscopio.
 Visualizar en tres dimensiones incluyendo el interior y permite registrar
procesos de secreción en células vivas.
En el campo clínico los microscopios confocales permiten observaciones de
estructuras tisulares, celulares y subcelulares. Con dicha tecnología se puede
dilucidar mecanismos fisiológicos, patológicos, toxicológicos de distintos organismos.
El estudio de enfermedades relacionadas con trastornos celulares, así como su uso
en la farmacología y toxicología. Su uso en el campo de la microbiología está
enfocado en el estudio de la dinámica celular y en enfermedades como el cáncer.

Características de los microscopios confocales

 Equipos complejos y delicados compuestos por partes delicadas.
  El “pinhole” se encuentra ubicado delante del fotomultiplicador, evitando el
pasaje de la fluorescencia natural de la muestra.
 El “pinhole” elimina la luz del plano focal.
 Se compone de un espejo dicroico y un lente óptico.
 Está soportado en una base tradicional y un ordenador.

Ventajas del microscopio confocal

 Con un microscopio confocal se pueden observar distintos tejidos sin
necesidad de dañarlo con cortes transversales.
 Permite la visualización de uno o más tintes de marcaje.
 Un microscopio confocal puede reconstruir de esta manera imágenes en
tercera dimensión.
 Con tecnología tridimensdional se pueden hacer perfiles de superficie, medir
profundidades y definir parámetros volumétricos.
 Permite enfocar un plano escogido de una muestra fina.

Ventajas del microscopio confocal

 Se necesita experiencia y conocimiento para el análisis de las imágenes que
proporciona el microscopio y por eso se hace difícil llegar a un diagnóstico y
completar la valoración.
Microscopio de fluorescencia LED Trinocular invertido, filtros IOS
Azul/Verde/UV
“SERIE IM-5”

Microscopio de investigación invertida producir

imágenes brillantes para el examen de li células
Ving, organismos y varios otros especímenes
en matraces grandes, combinando técnicas de
campo claro, campo oscuro y contraste de fase
para los usuarios más exigente.

Este microscopio de investigación invertido

conduce a nuevos horizontes que proporcionan
condensador Köhler, controles ergonómicos
prácticos y características únicas significativas,
como el FOV más alto disponible en un
microscopio invertido ( FN 24 mm ).

Características:
 Cabeza: Trinocular (relación de división: 100/0, 0/100), 45 ° inclinado.
 Ajuste dióptrico: Ambos oculares.
 Oculares: WF10x / 24 mm, punto de mira alto y con copas de goma retráctiles.
Ventajas;
 El F.O.V. (campo de visión) de la Serie IM-5 se basa en un diámetro muy
cómodo de 24mm, siendo el mayor disponible en el mercado en su categoría.
Se garantiza una vista natural y fácil, especialmente para ver un área más
grande e inspeccionar el espécimen mucho más rápido
 MÚLTIPLES MÉTODOS DE OBSERVACIÓN DISPONIBLES
 Técnicas de campo brillante, contraste de fase y campo oscuro se pueden
utilizar en cualquier momento, para resaltar diferentes aspectos de su
espécimen.
 LED de 5 W de alta potencia con control de brillo, selección de LED motorizada
con diafragma de campo centrable, portafiltros de 4 posiciones
 El condensador Köhler totalmente ajustable se puede girar fuera de la
trayectoria óptica, ampliando la distancia de trabajo permitiendo la inspección
de voluminosos recipientes de muestra

Desventajas:
 Puede que No discrimine entre células vivas y muertas. Desventaja: solo
apropiado para cultivos puros, tintes se pueden pegar a otras cosas que no
son células en muestras ambientales o complejas.
 Requiere bastante mmantenimiento y cuidados
Usos:
 Examen de li células Ving
 resaltar diferentes aspectos de su espécimen.
 ver una muestra de vitamina C, vista debajo (de arriba a abajo):
Brightfield, Darkfield y Phase Contraste.

Conclusiones

1. Existen muchas marcas en el mercado de microscopios de fluorescencia de

acuerdo a nuestras necesidades en el laboratorio y presupuesto.
2. Es sumamente importante conocer las ventajas y desventajas de las distintas
marcas de microscopios de fluorescencia ara tomar en cuenta al momento de
dotarnos de uno.
3. Es esencial conocer el funcionamiento de los microscopios de fluorescencia
que tengamos ala alcance en los laboratorios y de esta forma darle un uso
adecuado.
Bibliografía
Biogen cientifica. (s.f.). Recuperado el 22 de febrero de 2022, de
https://www.biogen.es/es/microscopios-fluorescencia/1029744-microscopio-de-
fluorescencia-led-trinocular-invertido-filtros-ios-azulverdeuv-serie-im-5.html
Cientec instrumentos cientificos. (s.f.). Recuperado el 22 de febrero de 2022, de
https://cientecinstrumentos.cl/comparar/producto/serie-im-5/
El Microscopio Optico . (2020). Microscopio Optico . Obtenido de microscopiooptico.org:
https://microscopiooptico.org/
MicroscopioOptico.org. (s.f.). microscopiooptico.org. Obtenido de https://microscopiooptico.org/
Otika Italy. (s.f.). Recuperado el febrero de 2022, de
https://www.optikamicroscopes.com/optikamicroscopes/product/im-5-series/

España, T. D. [TopdoctorsEspana]. (2020, Enero, 21). ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la
microscopía confocal? (3/4).YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=TW3Z_pyMl-I