PRÁCTICAS

DE LABORATORIO

DE

INMUNOLOGÍA BÁSICA
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
José Alfonso Esparza Ortiz
Rector
René Valdiviezo Sandoval
Secretario general
María del Carmen Martínez Reyes
Vicerrector de Docencia
Ygnacio Martínez Laguna
Vicerrector de investigación y Estudios de
Posgrado
 Prácticas
de Laboratorio de
Inmunología Básica

D. en C. María Alicia Díaz y Orea

D. en C. Eduardo Gómez Conde
D. en C. José Luis Gálvez Romero
Dra. Guadalupe Morales de León
D. en C. Mario García Carrasco
D. en C. Jorge Antonio Yañez Santos
M. en C. Juan Carlos Balandrán Juárez
Ana Luisa Galicia Zamalloa
Pedro Abisay Rivera Matias

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Medicina
Departamento de Inmunología
 Contenido
● Prólogo de la primera edición 5
● Prólogo de la segunda edición 6
Prácticas
1. Introducción y fundamentos del
laboratorio de inmunología 8
D. en C. María Alicia Díaz y Orea
Ana Luisa Galicia Zamalloa
2. Identificación de la cadena ganglionar 8. Crioglobulinas
y del nódulo linfático en el cuello del
Gallus domesticus 15
D. en C. Eduardo Gómez Conde
D. en C. María Alicia Díaz y Orea
Rafael Gutierrez Becerra
Luis David Gómez Cortés
Dra. Tayde Guerrero González
3. Migración leucocitaria
Transwell 23
M. en C. Juan Carlos Balandrán Juárez
Ana Luisa Galicia Zamalloa
4. Proteína C reactiva 29
Dra. Guadalupe Morales de León
Ana Luisa Galicia Zamalloa
5. Floculación 36
D. en C. María Alicia Díaz y Orea
Ana Luisa Galicia Zamalloa
6. Grupos sanguíneos 44
Ana Luisa Galicia Zamalloa
Katia Damaris Flores Lagunes
Brenda Carrasco Jiménez
7. Pruebas cruzadas 54
D. en C. María Alicia Díaz y Orea
Ana Luisa Galicia Zamalloa
61
D. en C. María Alicia Díaz y Orea
D. en C. Mario García Carrasco
Ana Luisa Galicia Zamalloa
9. Factor reumatoide 66
D. en C. Mario García Carrasco
Ana Luisa Galicia Zamalloa
Pedro Abisay Rivera Matias
10. Prueba cutánea de
hipersensibilidad retardada 72
D. en C. José Luis Gálvez Romero
Pedro Abisay Rivera Matias
Rodolfo Juárez Fernández
11. Determinación de Gonadotropina
Coriónica Humana 79
M. en C. Angélica Porras Juárez
D. en C. María Alicia Díaz y Orea
12. Inmunología del trasplante 87
D. en C. María Alicia Díaz y Orea
Ana Luisa Galicia Zamalloa
 Prólogo de la primera edición
La inmunología es la ciencia que estudia un complejo, pero fascinante sistema de células y
moléculas que tienen como funciones principales el reconocimiento de lo propio, la defensa
contra las infecciones, la vigilancia de la malignidad celular y el mantenimiento de la
homeostasis. Este Manual de Prácticas de Laboratorio de la Academia de Inmunología de la
Facultad de Medicina de la BUAP (Benemérita Universidad Autónoma de Puebla), presenta en
un formato agradable visualmente, once prácticas de laboratorio que describen fenómenos
inmunológicos de importancia en la medicina. El abordaje de cada capítulo se realiza en forma
concisa y clara, lo que facilita al estudiante la adquisición de los conceptos. En la práctica de
Introducción al Laboratorio de Inmunología se da un panorama conciso sobre las células que
componen el sistema inmunitario, sus características, funciones y su origen hematopoyético.
Con la utilización de imágenes de gran calidad se acerca al estudiante al conocimiento de la
morfología de las células sanguíneas y su identificación microscópica. En los cuatro capítulos
siguientes se abordan las propiedades de los anticuerpos, moléculas solubles cuya función es
identificar la presencia de los antígenos, que son los componentes estructurales de los agentes
patógenos que generan la respuesta inmunitaria. En estos capítulos se analizan las interacciones
antígeno-anticuerpo desde diversas perspectivas funcionales, haciendo resaltar aspectos de
aplicación en la práctica clínica, como el reconocimiento de antígenos microbianos en la prueba
de floculación (VDRL) para diagnosticar la presencia de sífilis. En las prácticas de aglutinación se
analizan de manera clara los antígenos presentes en las superficies de los eritrocitos que son la
base de la clasificación de los grupos sanguíneos y tienen gran importancia en las transfusiones
de sangre. También se aborda el reconocimiento inmunológico de la Proteína C reactiva,
componente del suero que se utiliza como indicador del inicio de un proceso inflamatorio. El
capítulo sobre la fagocitosis complementa el estudio de la inflamación y nos habla del papel que
juegan los neutrófilos y otras células para ingerir, degradar y eliminar agentes patógenos y
restos celulares; cuya función adquiere mayor relevancia al ser la vía de activación de la
respuesta adaptativa, mediada por los linfocitos T, que se caracteriza por su alta especificidad y
la generación de memoria inmunológica. El último capítulo nos habla de la función de las
Plaquetas, fragmentos citoplasmáticos de los megacariocitos que contribuyen, mediante la
liberación de mediadores químicos, al proceso inflamatorio, a la regulación de la permeabilidad
vascular y la resolución de las hemorragias, cuyas alteraciones traen graves consecuencias en el
curso de las infecciones y enfermedades sistémicas.
Reconozco el mérito de los Profesores que conforman la Academia de Inmunología al
presentar este Manual de Prácticas de Laboratorio que destaca por la calidad en su contenido.
También quiero reconocer la participación de los estudiantes que son instructores de
laboratorio que aportaron su tiempo y dedicación a la redacción de buena parte de esta obra.
Finalmente quiero destacar el respaldo que la Benemérita Universidad Autónoma de Puebla da
para la publicación de obras como esta, que tienen una utilidad directa en el proceso de
aprendizaje, pero que son a la vez una plataforma para la expresión del conocimiento generado
al interior de la universidad. Felicidades por este excelente trabajo.
PhD. Julio Roberto Reyes Leyva, Inmunólogo.
 Prólogo de la segunda edición
Nuevamente y a la vanguardia entre las competencias de clase mundial que requieren
los estudiantes de Medicina de la Benemérita Universidad Autónoma de Puebla se
publica la segunda edición del Libro de Prácticas de Laboratorio de Inmunología Básica.
Esta renovada edición vuelve en su formato ágil y fácil de comprender tanto para los
instructores de la materia como para el alumno en formación y para involucrarlo en la
importancia de los recursos y auxiliares diagnósticos vitales para la atención en la
práctica médica cotidiana.
La inmunología es una materia que cubrir dentro del plan de estudio en la
Licenciatura de Medicina y su vital importancia radica en conocer las variables y
complejas respuestas del sistema inmune frente a la invasión de microorganismos o
partículas extrañas que a la vez propician una cascada de reacciones altamente
especializadas de células que guardan una puntual especificidad y memoria para
enfrentar lo propio de lo extraño.
En este ya reconocido manual se abordan temas de interés actual, desde las
implicaciones bioéticas del uso de los productos biológicos, el apego a las normas
oficiales para la manipulación apropiada de los animales de experimentación, así como
de la seguridad dentro de las instalaciones de un laboratorio.
Las prácticas que se describen en este manual facilitan el aprendizaje significativo
desde la descripción de conceptos básicos, funciones de las distintas células del sistema
inmune y las distintas técnicas empleadas para la detección e identificación de las
variadas formas de reacción antígeno-anticuerpo y reconocer la más adecuada acorde
a las necesidades por resolver. Incluye además temas de alto interés e impacto actual
con las diversas técnicas para reconocer y evaluar células de participación en la
respuesta inflamatoria tan en boga por los distintos tratamiento empleados
específicamente a células blanco y que han marcado un hito en los tratamientos de las
enfermedades reumáticas, neoplásicas y otras autoinmunes que han cambiado el
pronóstico y calidad de vida de muchos pacientes afectados por dichos padecimientos y
que hasta apenas hace un par de décadas parecía poco alentador el manejo de las
enfermedades medidas por autoanticuerpos.
Se aborda con sumo interés el tema de las pruebas cruzadas e
histocompatibilidad para la seguridad en la transfusión sanguínea siempre cuidando
que los grupos sanguíneos tanto de los donantes y principalmente de los receptores sean
los adecuados a fin de evitar riesgos que puedan poner en peligro la integridad de quien
requiere del apoyo transfusional. Las pruebas además sirven para identificar a pacientes
que han sido debido a su estado multitransfundidos.
Finalmente, el estudio y comprensión del factor reumatoide como un anticuerpo
que no es privativo de la artritis reumatoide sino también presente en un numero nada
despreciable de enfermedades mediadas por autoanticuerpos permite reconocer más su
valor pronóstico de respuesta a tratamiento y evolución de la enfermedad que como un
reactante de fase aguda.
Sin duda alguna este libro nuevamente pone de manifiesto la gran calidad de los
programas académicos que ofrece la Benemérita Universidad Autónoma de Puebla a
sus alumnos, también refleja la calidad de la infraestructura de los modernos laboratorios
con los que cuenta pero sobre todo destaca la excelente plantilla de profesionistas con
los que cuenta el departamento de Inmunología Clínica y la disposición de cada uno de
los autores para mejorar y ofrecer los mejores estándares de calidad que obligan a la
superación en cada trabajo de todos y cada uno de los participantes. Este libro tendrá
sin duda alguna el éxito esperado y asegurado para todos y cada uno de los que en su
elaboración participaron.

M. en C. Silvia Sánchez Alonso

Coordinador Clínico Médico
Hospital General de Zona 20 IMSS La Margarita
 Bioética
El conocimiento de la esencia de la naturaleza, mediante la aplicación del método
científico, nos ha recompensado con el desarrollo de la ciencia a gran escala; la
interacción científica ha permitido la manipulación de los mecanismos celulares más
intrínsecos.
Desde las últimas cinco décadas la bioética se ha convertido en un tema que cobra
cada vez más importancia debido al enorme avance tecnológico obtenido. El
conocimiento que hemos obtenido implica un gran poder para la manipulación de la
naturaleza, las ciencias naturales nos otorgan los lineamientos para otorgar un orden al
estudio, sin embargo, es necesario complementarlas con las ciencias sociales para su
justa manipulación.
En el sentido histórico, los principios bioéticos deben estar ligados con los albores
de la humanidad, ya que implican la interacción del hombre con los seres vivos. Sin
embargo, es hasta el año de 1927 que el teólogo alemán Fritz Jahr utiliza por primera
vez el termino en su publicación “Bioética: una panorámica sobre la relación ética del
hombre con los animales y las plantas” (Molina; 2013). En 1970 el oncólogo
norteamericano Van Rensselaer Potter realiza la publicación de un artículo titulado
“Bioética: La ciencia de la supervivencia” (Gómez; 2009). Desde entonces el termino se
ha consolidado internacionalmente y en la actualidad es obligatoria la formación de
comités de bioética en los hospitales e instituciones donde se realiza investigación con
seres vivos o productos biológicos.
Etimológicamente la palabra bioética se conforma por el prefijo griego «bio» que
significa ‘vida’. Y el sufijo griego «ética» y significa ‘manera de hacer o adquirir las cosas’
(RAE; 2018). En la práctica diaria la ética nos permite hacer juicios de valor sobre las
normas morales para dictaminar en circunstancias específicas qué es lo correcto. Se
lleva de la mano de la moral ya que ésta última recopila las normas sociales aceptadas
comúnmente, sin embargo, la ética nos da la herramienta de reflexionar sobre cuándo
las normas sociales son aplicables o se deben de modificar de acuerdo al avance
tecnológico o circunstancias específicas.
En el año de 1979 Tom L. Beauchamp y James F. Childress publicaron
conjuntamente la primera edición de Principles of Biomedical Ethics que establece los
cuatro principios fundamentales de la bioética actualmente vigentes:
1) Autonomía: Es la capacidad de las personas de deliberar sobre sus finalidades
personales y de actuar bajo la dirección de las decisiones que puedan tomar.
Todos los individuos deben ser tratados como seres autónomos y las personas
que tienen la autonomía mermada tienen derecho a la protección. Aún más, todos
los animales que por su condición cognoscitiva se encuentran en desventaja ante
nuestra especie tiene derecho a un trato digno, y es nuestra obligación el
minimizar su sufrimiento cuando sean objeto de investigación.
2) Beneficencia: ‘Hacer el bien’ la obligación moral de actuar en beneficio de los
demás, curar el daño y promover el bien o el bienestar. En el tema de investigación
en animales o sus derivados, el principio de beneficencia se extiende a obtener la
mayor información del producto a investigar, con el eje rector de que el fruto de
 las investigaciones sea utilizado para el bien de la humanidad o especie en
peligro.
3) No-maleficencia: Es el primum non nocere, no producir daño y prevenirlo. Incluye
no matar, no provocar dolor ni sufrimiento, no producir incapacidades; no hacer
daño. Es un principio de ámbito público y su incumplimiento está penado por la
ley.
4) Justicia: Equidad en la distribución de cargas y beneficios. El criterio para saber
si una actuación es o no ética, desde el punto de vista de la justicia, es valorar si
la actuación es equitativa. Debe ser posible para todos aquellos que la necesiten,
incluye el rechazo a la discriminación por cualquier motivo. Es también un principio
de carácter público y legislado. En el ámbito de investigación médica contempla
el respeto del derecho de los individuos sin importar su raza, clase o edad, así
como de los animales en estudio (Siurana; 2010).
Como profesionales de la salud, vistos en la necesidad de la experimentación
mediante prácticas de laboratorio diseñadas y supervisadas por expertos, no debemos
olvidar los principios bioéticos que deben regir nuestro ejercicio, debemos aplicar juicios
de valor constantemente para la protección de los derechos de los seres vivos que se
someten a una investigación, así como aprovechar al máximo los conocimientos que la
investigación arroje para el bien común.

Bibliografía
1) Gómez P. I. (2009). Principios
básicos de bioética. [Artículo en
línea]. Rev. Per. Ginecol Obstet.
55, 230-33. Disponible en:
HYPERLINK
"http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevist
as/ginecologia/vol55_n4/pdf/A03V5
5N4.pdf"http://sisbib.unmsm.edu.
pe/bvrevistas/ginecologia/vol55_
n4/pdf/A03V55N4.pdf. [Citado el
08 de mayo de 2020].
2) Molina, N. (2013) La bioética: sus
principios y propósitos, para un
mundo tecnocientífico,
multicultural y diverso. Rev.
Colombiana de Bioetica. Vol. 8.,
Pág: 18-37. {Artículo en línea}
Disponible en
http://www.redalyc.org/pdf/1892/1
89230852003.pdf. [Citado el 08
de mayo de 2020].
3) Real Academia Española. (2018).
Definición bioética. [Página web].
Disponible en
http://dle.rae.es/?id=5YQWij3.
[Citado el 08 de mayo de 2020].
4) Siurana, J. (2010) Los
principios de la bioética y el
surgimiento de una bioética
intercultural. [Artículo en línea].
Rev. VERITAS, 22, 121-157.
Disponible en
https://scielo.conicyt.cl/pdf/veritas
/n22/art06.pdf. [Citado el 08 de
mayo de 2020].
 Normas de seguridad en laboratorio
Parte de la formación integral del personal
de salud requiere de la realización de
prácticas de laboratorio que complementen
los conocimientos teóricos adquiridos en
clase, logrando obtener un aprendizaje
significativo.
Haciendo un adecuado uso de las
instalaciones y material de práctica se evita
poner en riesgo al personal participante y
siguiendo siempre los principios universales
de bioética que nos comprometen con un
trato digno en el momento de recurrir al uso
de seres vivos con fines de investigación.
Basándonos en el reglamento de
creación y funcionamiento del comité para el
cuidado y uso de animales de laboratorio de
la Benemérita Universidad Autónoma de
Puebla, así como las normas oficiales
mexicanas vigentes que competen al
ejercicio de las practicas por realizarse en
este manual, enlistamos la normas para
ingreso y permanencia a las prácticas de
laboratorio de la academia de inmunología
básica.
A) Sobre el ingreso a laboratorio
1. Presentarse en condiciones de salud
óptimas, habiendo realizado la
lectura de los temas
correspondientes a la práctica, así
como con el material completo para
la misma.
2. La asistencia puntual a práctica, con
una tolerancia máxima de cinco
minutos iniciada la hora, ningún
estudiante podrá ingresar después
de haberse iniciado la práctica.
3. Portar uniforme blanco completo:
Zapato medico blanco cerrado,
pantalón blanco, bata blanca manga
larga, camisa y corbata (hombres),
camisa o blusa (mujeres). En
cualquiera de los dos casos puede
usarse chasarilla o filipina.
4. En caso de cabello largo se debe
recogerlo a fin de evitar accidentes.
5. No portar alhajas (anillos, relojes,
pulseras, bisutería).
6. Tener en la mesa de trabajo solo el
material de la práctica, se le indicara
donde colocar sus artículos
personales.
7. Está permitido el uso de celular solo
para documentar las evidencias de su
práctica. Previo a su ingreso a
laboratorio mantenerlo en modo
silencio.
B) Sobre la permanencia en laboratorio
1. Atender las instrucciones y
recomendaciones para la realización
de la práctica, si tiene dudas sobre los
procedimientos al realizar previa
lectura manifiéstelos antes de
comenzar.
2. Queda prohibido introducir,
consumir o guardar alimentos y
bebidas dentro del laboratorio.
3. Conozca los materiales y medidas de
seguridad de laboratorio.
8. Queda prohibido correr dentro del
laboratorio. En caso de contingencias
seguir las recomendaciones de
seguridad de protección civil para
desgracias naturales apoyándose de
su profesor titular e instructores.
9. Siga las recomendaciones de la
Norma Oficial Mexicana para la
adecuada clasificación
especificaciones de manejo de
residuos peligros biológico-
infecciosos, en caso de dudas
consulte con su instructor o profesor
titular.
10. Realice siempre la limpieza de su
lugar de trabajo previo uso y al
finalizar su práctica.
11. Realice lavado de manos antes y
después de su práctica. Siga las
recomendaciones de lavado de
manos de la Organización Mundial de
la Salud.
12. Realice exclusivamente los
procedimientos establecidos en las
prácticas, en caso de complicaciones
en el desempeño de ésta, pida apoyo
al profesor titular.
13. Utilice lentes, guantes y cubre bocas
en las practicas pertinentes.
14. No aspire o pruebe ninguno de los
materiales biológicos o reactivos de
la práctica, en caso de ocurrir
accidentes conserve la calma y pida
ayuda a su profesor titular o
instructor.
15. Rotule adecuadamente el material a
utilizar para evitar confusiones en la
práctica.
16. Siga las recomendaciones de la
Norma Oficial Mexicana sobre las
especificaciones técnicas para la
producción, cuidado y uso de
animales de laboratorio.
17. Sigua las recomendaciones de la
Norma oficial mexicana para la
organización y funcionamiento de los
laboratorios clínicos.
y 18. Siga las recomendaciones para el
trato humanitario en la movilización
de animales.
19. Es obligación de los integrantes del
equipo reportar si detectan animales
o muestras biológicas que
consideren peligrosas.
20. Es obligación de los integrantes del
equipo reportar si detectan el mal
uso de animales o muestras
biológicas en sus prácticas de
laboratorio.
21. El cuidado y uso de los animales de
laboratorio de manera apropiada, así
como humanitaria buscando la
minimización del sufrimiento del ser
vivo en estudio.
22. Queda prohibido el compartir
información del material de las
prácticas en redes sociales, o
cualquier medio de difusión que no
sea para responder sus reportes.
Bibliografía
1) H. Consejo universitario. (2007),
Reglamento de creación y
funcionamiento del comité para el
cuidado y uso de animales de
laboratorio de la Benemérita
Universidad Autónoma de Puebla.
[Documento en línea]. Disponible en
http://www.consejouniversitario.bu
ap.mx/legisla/Reglamento_Bioterio.
pdf. [Citado el 08 de mayo de 2020].
2) Diario Oficial de la Federación.
(1995), Norma Oficial Mexicana
NOM-051-ZOO-1995, Trato
 humanitario en la movilización de
animales. [Documento en línea].
Disponible en
http://www.omecega.org.mx/uploa
ds/1/6/5/2/16526694/nom-051-
zoo-
1995_trato_humanitario_en_la_mo
vilizacio%CC%81n_animal.pdf
[Citado el 08 de mayo de 2020].
3) Diario Oficial de la Federación.
(2014), Norma Oficial Mexicana
NOM-033-SAG/ZOO-2014, Métodos
para dar muerte a los animales
domésticos y silvestres. [Documento
en línea]. Disponible en
http://www.dof.gob.mx/nota_detall
e.php?codigo=5405210&fecha=26/0
8/2015&print=true. [Citado el 08 de
mayo de 2020].
4) Diario Oficial de la Federación.
(1999), Norma Oficial Mexicana
NOM-062-ZOO-1999,
Especificaciones técnicas para la
producción, cuidado y uso de los
animales de laboratorio.
[Documento en línea]. Disponible en
http://dof.gob.mx/nota_detalle.php
?codigo=762506&fecha=22/08/2001
. [Citado el 08 de mayo de 2020].
5) Diario Oficial de la Federación.
(1997), Norma Oficial Mexicana
NOM-166-SSA1-1997, Para la
organización y funcionamiento de los
laboratorios clínicos. [Documento en
línea]. Disponible en
http://www.ordenjuridico.gob.mx/D
ocumentos/Federal/wo69557.pdf.
[Citado el 08 de mayo de 2020].
6) Diario Oficial de la Federación.
(2002), Norma Oficial Mexicana
NOM-087-ECOL-SSA1-2002,
Protección ambiental - Salud
ambiental - Residuos peligrosos
biológico-infecciosos - Clasificación y
especificaciones de manejo. [Página
web]. Disponible en
http://www.salud.gob.mx/unidades
/cdi/nom/087ecolssa.html. [Citado
el 08 de mayo de 2020].
7) OMS (Organización Mundial de la
Salud). (2018) ¿Cómo lavarse las
manos?. [Página web]. Disponible en
http://www.imss.gob.mx/salud-en-
linea/infografias/lavado-manos.
[Citado el 08 de mayo de 2020].
8) Protección civil (2018)
Recomendaciones en casos de
contingencia. [Página web].
Disponible en
http://www.proteccioncivil.es/catal
ogo/carpeta02/carpeta24/vademec
um17/vdm040.htm. [Citado el 08 de
mayo de 2020].
 Criterios para el reporte de práctica
● Deberán ser escritos a mano.
● En caso de que las hojas que vienen en el manual no sean suficientes para el reporte de
la práctica, se anexarán las hojas blancas necesarias y se engraparán al final de dicha
práctica.
● El reporte consta de los siguientes componentes:
Componentes Descripción
Introducción Es una breve descripción de lo realizado durante la práctica y la
importancia que ésta tiene.
Desarrollo Esquematizar el procedimiento por medios de dibujos.
Resultados Presentación de los resultados en dibujo, esquema o tabla.
Discusión Explicar científicamente los resultados; hay que mencionar que
sustancias intervienen, procesos involucrados, eventos celulares e
importancia clínica.
Conclusión En base al objetivo de la práctica, el aprendizaje que tuvieron y/o una
muy breve reflexión de lo que aprendieron.
Bibliografía Fuentes consultadas para la realización del reporte, deben citarla en
formato Vancouver o APA (American Psychological Association).

* En el caso de la primera práctica en específico, no se realizará un reporte habitual, sino

que se evaluará solo con las actividades indicadas en el cuestionario.
Práctica 1
Introducción y fundamentos del laboratorio de
inmunología
Objetivos
● Definir los conceptos básicos de la
inmunología.
● Conocer los objetivos de la inmunología
clínica y el papel del laboratorio de
inmunología.
● Identificar las células del sistema inmune y
conocer su origen.
● Presentar la teoría general de un
laboratorio de inmunología.
Introducción
La inmunología es la ciencia que estudia el
sistema inmunitario y las patologías
relacionadas con él. El sistema inmune es el
encargado de proteger al individuo de las
agresiones procedentes tanto del medio externo
como del medio interno, así como de aprender
a tolerar a los agentes que no son patogénicos.
Un ‘antígeno’ (Ag) es toda molécula que
puede ser reconocida por inmunoglobulinas y
receptores de los linfocitos B y T (LB y LT), pero
no todos son capaces de activar una respuesta
inmune; mientras que un inmunógeno además
de ser reconocido siempre es capaz de
desencadenar una respuesta inmunitaria sin la
intervención de adyuvantes. Cabe mencionar
que un epítopo es la unidad más pequeña de un
antígeno.
Un ‘anticuerpo’ (Ac) es una
glucoproteína, perteneciente a la súper familia
de las inmunoglobulinas, producida por células
plasmáticas cuya función principal es reaccionar
de forma específica con un inmunógeno.
El ‘inmunoensayo’ es una prueba de
laboratorio que se basa en la formación de
inmunocomplejos (productos de la unión de un
antígeno y un anticuerpo) como medio para
generar un resultado perceptible que se mide de
forma cuantitativa o cualitativamente.
Los objetivos que tienen los inmunoensayos son:
1. Detectar enfermedades en etapa subclínica.
2. Confirmar el diagnóstico sospechado
clínicamente.
3. Diferenciar las enfermedades con
presentación clínica similares.
4. Predecir el pronóstico de una enfermedad.
5. Vigilar el tratamiento.
6. Precisar los factores de riesgo.
7. Apoyar las actividades de promoción y
prevención.
8. Detectar y confirmar alteraciones de los
mecanismos de defensa.
Los inmunoensayos poseen ciertas
características y/o criterios que los distinguen
entre ellos y a su vez pueden determinar cuál es
la mejor prueba de diagnóstico para una
situación dada.
Para saber cuál prueba diagnóstica tiene
mayor exactitud, se calculan la especificidad y la
sensibilidad:
1. Especificidad (Es): Es definida por la
cantidad de veces que una prueba dé un
resultado negativo cuando el sujeto estudiado
no tiene la enfermedad o característica
estudiada y por tanto equivale a los verdaderos
negativos.
𝑉𝑒𝑟𝑑𝑎𝑑𝑒𝑟𝑜𝑠 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠 𝑥100
𝑉𝑒𝑟𝑑𝑎𝑑𝑒𝑟𝑜𝑠 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠+𝐹𝑎𝑙𝑠𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠
2. Sensibilidad (Se): Es definida por la
cantidad de veces que la prueba dé positiva
cuando la enfermedad o característica estudiada
está presente, es decir, los verdaderos positivos.
𝑉𝑒𝑟𝑑𝑎𝑑𝑒𝑟𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠 𝑥100
𝑉𝑒𝑟𝑑𝑎𝑑𝑒𝑟𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠+𝐹𝑎𝑙𝑠𝑜𝑠 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠
Tanto la sensibilidad como la especificidad
guardan una estrecha relación, es decir cuando
se afecta uno también el otro. El efecto
esperado es que cuando aumenta la
sensibilidad, puede disminuir la especificidad y
viceversa. Idealmente una prueba debería ser
100% sensible y 100% específica, sin embargo,
esto es algo imposible, por ello a las pruebas que
más se acercan a estos valores se les denomina
«estándar o prueba de oro».
3. Precisión: Es la capacidad de ser
reproductible, que la combinación de reactivos,
analizador y otros factores no influyan o no
tengan tanto peso en el resultado de la prueba.
4. Exactitud: Describe la cantidad de
analito realmente presente y que así el resultado
sea correcto.
Enfermedad
Ausente Presente
Resultado de una Negativo Verdadero negativo Falso negativo
prueba diagnóstica Positivo Falso positivo Verdadero
positivo
Los inmunoensayos pueden ser exactos pero
imprecisos, precisos pero inexactos, o ambas
cosas, exactos y precisos.
Tabla 1. Evaluación de pruebas diagnósticas
La mayoría de las técnicas diagnósticas
inmunológicas se fundamentan en el principio
de unión Ag-Ac, diferenciándose unas de otras en
la manera en que se visualiza dicha reacción. Los
tipos de técnicas inmunológicas son:
- Técnicas de precipitación: Al
encontrarse en concentraciones óptimas, el Ag y
el Ac forman complejos Ag-Ac que se inestabilizan
y precipitan, pudiéndose detectar y cuantificar
dicho precipitado.
- Técnicas de aglutinación: El Ac se une al
Ag que forma parte o bien se encuentra unido
de modo artificial a la superficie de glóbulos
rojos, leucocitos, plaquetas o partículas de látex.
De esta manera se forman aglutinados celulares
fácilmente visualizables.
- Técnicas de Fluorescencia: El anticuerpo
se marca con un fluoróforo, pudiéndose conocer
la unión del complejo Ag-Ac a través de la medida
de fluorescencia.
- Técnicas de citometría: Se puede
conocer el porcentaje de células que marca un
anticuerpo determinado al estar conjugado con
un fluorocromo.
- Técnicas de radioinmunoensayo (RIA):
Permiten cuantificar la radioactividad que emite
el Ac marcado del complejo Ag-Ac.
- Técnicas de nefelometría: Se cuantifica
el efecto sobre un rayo de luz que atraviesa una
suspensión con complejos Ag-Ac (turbidez).
- Técnicas de Enzimoinmunoensayo:
Mediante la unión al Ac de una enzima se puede
cuantificar el complejo Ag-Ac, tras la
transformación del sustrato específico que se
añade (cambios en la coloración de la solución).
- Otras técnicas: Se usa Ac marcado con
ferritina u oro coloidal para
inmunohistoquímica.
Células del sistema inmune
El sistema inmune de los seres humanos está
compuesto por una gran variedad de células
morfológica y funcionalmente diferentes, éstas
se diferencian a partir de células madre
hematopoyéticas adultas que viven en la medula
ósea y dan origen a dos líneas de diferenciación:
mieloide y linfoide. Las características
funcionales que tiene la célula madre son su
capacidad de renovación y su potencialidad (da
origen a distintos linajes). Todas las células
ejercen funciones diferentes e interaccionan
entre sí por contacto directo o a través de
factores solubles que ejercen su función en
células a distancia con receptores específicos.
Línea mieloide
Fagocitos
mononucleares:
Engloba tanto a los
monocitos inmaduros
circulantes en sangre (5-
10% de los leucocitos
totales) como a los
macrófagos maduros en
tejidos. Su función es la fagocitosis de patógenos
y sustancias extrañas y su posterior
presentación a linfocitos T por lo que reciben
también el nombre de células presentadoras de
antígeno CPA (células presentadoras de
antígenos), participan también en el
reclutamiento de otras células al sitio de la
lesión y en la posterior reparación de los tejidos
afectados por la inflamación; su vida depende
del tipo de macrófago que se hable, aunque en
general viven más que los granulocitos,
pudiendo durar de días a semanas.
Granulocitos: Viven menos que los
macrófagos, presentan un núcleo multilobulado
y una gran cantidad de gránulos en su
citoplasma (de ahí su nombre). Residen en la
sangre, responden a factores quimiotácticos y se
deslizan entre las células endoteliales para llegar
al tejido blanco. Según su afinidad por los
colorantes ácidos o básicos de las tinciones se
dividen en neutrófilos, eosinófilos y basófilos.
Neutrófilos:
Constituyen del 50 al 70%
de leucocitos circulantes,
poseen un núcleo
multilobulado que puede
tener de tres a cinco
lóbulos, al igual que los
macrófagos, su función es la fagocitosis, aunque
carecen de la capacidad de presentación, en
lugar de esto, digieren la sustancia fagocitada.
Posee tres tipos de gránulos, los primarios o que
son los lisosomas, están presentes en todas las
células leucocitarias y contienen
mieloperoxidasa además de hidrolasas ácidas,
defensinas y catelicidina, péptidos que ayudan a
la degradación de patógenos. Los gránulos
secundarios o específicos contienen enzimas
que degradan la matriz extracelular, activadores
del complemento, lisozima y lactoferrina.
Finalmente, sus gránulos terciarios contienen
fosfatasas o metaloproteinasas y se cree que
sirven durante la migración a través del tejido
conjuntivo.
Eosinófilos:
Comprenden del 1-5% de
todos los leucocitos, su
núcleo es bilobulado y a
diferencia del neutrófilo
posee solo dos tipos de
gránulos, los primarios u azurófilos de igual
contenido que el de todos los leucocitos y los
secundarios o específicos que contienen cuatro
proteínas principales: la proteína básica mayor
(PBM) que le confiere la acidófila característica a
sus gránulos, la proteína catiónica de eosinófilo
(PCE), la de eosinófilo (POE) y la neurotoxina
derivada de eosinófilo (NDE). Las tres primeras
tienen efectos citotóxicos sobre protozoos y
helmintos mientras que la NDE causa disfunción
de su sistema nervioso. Adicionalmente a esto
también poseen histaminasa, y arilsulfatasa,
enzimas encargadas de la degradación de
histamina y leucotrienos respectivamente.
Basófilos:
Constituyen menos del
0.5% de los leucocitos
sanguíneos, su núcleo
queda oculto tras la gran
cantidad de gránulos
secundarios, sin embargo,
se sabe que tiene una forma de «S» itálica. Al
igual que el eosinófilo posee dos tipos de
gránulos, los primarios o azurófilos y los
secundarios o específicos, en cuyo caso
contienen heparina, histamina y heparán
sulfato, leucotrienos e interleucinas 4 y 13, por
lo que esta célula está ampliamente relacionada
con procesos alérgicos. Cabe mencionar que
posee receptores de alta afinidad para IgE
(inmunoglobulina E) en su membrana además
de CD40L (Cluster of Diferentiation 40L) que al
interactuar con el linfocito B promueve la
síntesis de IgE.
Mastocitos: Tienen
una morfología similar a la
del basófilo, sin embargo,
son células estacionarias en
tejidos y del doble de
tamaño con núcleo
esferoidal. Se encuentran cerca de los vasos
sanguíneos del tejido conjuntivo (submucosas),
su función es la de célula centinela que libera
factores e inflamatorios para el reclutamiento
de otros leucocitos al sitio lesionado o
inflamado.
Plaquetas/Trombocitos: Derivan de los
megacariocitos y a pesar de no ser células
leucocitarias, cumplen funciones en la
inflamación y reparación por la liberación de
mediadores inflamatorios. Sus gránulos son de
tres tipos: alfa, que intervienen en la
coagulación, delta, que intervienen en la
adhesión y vasoconstricción y gamma, que
contienen enzimas hidrolíticas para la
degradación del trombo.
Línea linfoide
Linfocitos: Representan
aproximadamente el 30% de los
leucocitos circulantes, pueden
diferenciarse en tejidos ajenos
a la médula ósea y son
responsables de desencadenar la respuesta
inmunitaria específica.
Existen tres tipos principales de
linfocitos, los B, T y Natural Killer. Al microscopio
óptico es imposible diferenciar los dos primeros
tipos, pues ambos poseen un núcleo esferoidal
de gran tamaño que ocupa casi todo su
citoplasma y miden de 6 a 12 µm. En el caso de
los NK son de mayor tamaño (más de 15 µm)
además de que en algunos casos se pueden
apreciar sus gránulos azurófilos, aun así, para
poder determinar la naturaleza de cada linfocito
es necesaria la realización de un proceso de
inmunohistoquímica para detectar sus
marcadores de membrana.
Linfocitos B: Se diferencian en el hígado
(vida fetal) y en la médula ósea (vida adulta).
Poseen en su membrana IgM e IgD, y además de
ser CPA’s, tienen la capacidad de diferenciarse a
células plasmáticas para la producción de
anticuerpos. Su marcador es el CD19 y además
presentan CD9, 20 y 24.
Linfocitos T: Son generados en la médula
ósea para después madurar en el timo. Son
capaces de identificar antígenos de forma
específica gracias a sus receptores de linfocitos
T; los cuales están compuestos de dos cadenas:
una α y una β, las cuales interactúan con MHC
(Complejo Mayor de Histocompatibilidad, por
sus siglas en inglés) I o II para su activación y
proliferación. Según la función que desempeñan
existen varios tipos:
● LT citotóxicos (CD8+): Lisan células que
presentan péptidos extraños al organismo
por medio del MHC I, por ejemplo, péptidos
de un virus.
● LT helper/cooperadores (CD4+): Es el
responsable de la activación y proliferación
de diversas células del sistema inmune,
sobre todo de los linfocitos B, y se activa al
entrar en contacto con un MHC II de una CPA.
● LT regulador (Foxp3+): Se encargan de la
inhibición de la respuesta inmune tanto al
inhibir la activación como producción de
inmunoglobulinas y participa en la
maduración eritroide.
● LT gamma-delta (γδ): A diferencia del resto
de linfocitos este linfocito es estacionario en
diversos epitelios y recibe su nombre debido
a que su receptor de linfocito T posee
cadenas γ y δ en lugar de las comunes α y β.
Natural Killer (NK): Son programados
para destruir células que presenten
anormalidades como la falta de MHC I en células
tumorales o infectadas por virus. Pueden
secretar INF-γ (Interferón gamma) y su marcador
es el CD16, además de CD56 y CD94.
Materiales
Laminillas de frotis de sangre teñidas con el
colorante de Wright proporcionadas por el
Departamento de Inmunología.
Procedimiento
Observar al microscopio y contestar el
cuestionario de los diferentes tipos celulares
presentes.
Cuestionario
En el caso de esta primera práctica en específico,
no se realizará un reporte habitual, sino que se
evaluará con la realización de estas actividades:
● Describir las células del sistema inmune,
incluir:
a. Nombre
b. Función
c. Morfología (con ilustración)
d. Concentración de cada célula en una
citometría hemática
e. Principales causas en las que hay un
aumento de las células en los valores
de esta prueba
Referencias
1. Abul K. Abbas, Andrew H. Litman, Shiv Pillai.
(2012). Inmunología Célular y Molecular. (7ª Ed).
España, Elsevier.
2. Judith A. Owen, Jenni Punt, Sharon A.
Stranford. (2014). Kuby Inmunología. (7ª Ed.)
Mexico DF: McGraw-Hill.
3. Ross H. Michael, Pawlina Wojciech, Negrete
Jorge (2007). Histología : texto y atlas color con
biología celular y molecular (5° Ed.). Buenos
Aires, Argentina, Medica Panamericana.
4.Delves P., Martin S., Burton D. y Roitt I. (2014)
Roitt. Inmunología. Fundamentos. (12 ed.)
México: Panamericana.
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Kumar V., Abul K. A. y Jon C. A. (9° ed). Robbins y
Cotran. Patología estructural y funcional.
Barcelona: Elsevier.
6. Gómez M. Marcelo (2006). Introducción a la
metodología de la investigación científica.
Córdoba, Argentina, Editorial Brujas.
7. Regueiro G. José, López L. Carlos, González R.
Segundo, Martínez N. Eduardo (2010).
Inmunología: Biología y patología del sistema
inmunitario. (4° Ed.). Madrid, España, Médica
Panamericana.
8. Rojas M. William, A. C. (2015). Inmunología de
Rojas (Decimséptima ed.). Medellín, Colombia,
Corporación para Investigaciones Biológicas
(CIB).
Cuestionario
Cuestionario
Práctica 2
Identificación de las cadenas ganglionares y del
nódulo linfático en el cuello del Gallus domesticus
Objetivos
Material
● Palpar y comprobar la presencia de - Una hoja de cartulina
ganglios linfáticos en el cuello del Gallus
- Dos pares de guantes
domesticus.
- Un estuche de disección
● Identificar y diseccionar la cadena - Un cubrebocas
ganglionar del cuello del Gallus - Un cuello y tórax de Gallus domesticus
domesticus. - Un paquete de gasas
● Diseccionar y descubrir un nódulo - Diez sanitas
linfático de la cadena ganglionar del - Un plumón punto medio
cuello del Gallus domesticus. - Un recipiente con tapa hermética
- Un benzal
Introducción
La circulación linfática interconecta el Procedimiento
contenido del líquido del espacio intersticial Corrobora que tengas todo el material
del cuerpo y sus órganos con la sangre venosa. necesario, ya que la práctica es individual y no
podrás desenguantarte una vez iniciado el
Durante su trayecto en el cuerpo procedimiento.
humano, los vasos linfáticos confluyen en los
ganglios, los cuales tienen la función de 1. Procede a realizar la limpieza del área que
depurar la linfa. vas a utilizar, recuerda traer limpio el
instrumental de tu estuche de disección. Para
Su importancia radica en que es una vía esto, tendrás que lavar todo el instrumental
en la que se pueden diseminar procesos con agua y jabón, enjuagarlo con agua de
infecciosos de tipo bacteriano, viral, garrafón hervida y colocarlo una noche antes
parasitario, además de células cancerosas que en un recipiente que contenga la cantidad de
terminan instalándose en el ganglio linfático benzal suficiente para que lo cubra por
(Tabla 1). completo (refractario-topper).
2. Coloca la cartulina blanca en el área limpia
Patología Consistencia Fijación Secreción Dolor donde vas a trabajar. A un lado de esta
Virus Firme No No No deposita el recipiente destapado que contiene
Bacterias Firme No No Si
Tuberculosis Firme So Si No el instrumental.
Cáncer Pétrea Si No No 3. En una esquina de la cartulina coloca un par
de guantes estériles de tu talla.
Tabla 1. Características clínicas de los ganglios 4. En una esquina de la cartulina coloca un
linfáticos en humanos con procesos infecciosos plumón indeleble punto medio color azul o
o neoplásicos. rojo. Del mismo modo coloca una hoja de
bisturí estéril cubierta (Figura A).
5. Procede a colocar tu material biológico en el
centro de la cartulina. Recuerda que tu
material debe encontrarse sin sangre en la piel,
para ello lávalo previamente con agua y jabón
en tu casa (Figura B).
6. Explore con el pulpejo de sus dedos el cuello
del Gallus domesticus formando un pliegue
lateral entre la piel adosada a la cartulina y la
piel superior que queda frente al explorador.
Realice movimientos laterales y de arriba hacia
abajo hasta que perciba pequeñas elevaciones
a lo largo del cuello. Recuerda las
características clínicas que percibas como
consistencia y fijación, ya que las pediremos
para tu reporte (Figura C).
7. Marca con tu plumón un punto sobre los
nódulos que hallas detectado mediante la
palpación (Figura D).
8. Realiza tu lavado de manos quirúrgico o en
su caso con gel antibacterial y vuelve a tu mesa
de trabajo para enguantarte con técnica
estéril.
9. Una vez enguantado, el instructor de apoyo
te proporcionará una pinza para que saques
del recipiente tu instrumental: Coloca y ordena
tu material de acuerdo con los tiempos de
cirugía que utilizarás: Corte, disección,
separación y exéresis.
10. Identifica la anatomía del espécimen y
coloca el tórax con la parte visible de los
pulmones y corazón frente a ti.
11. Usa tu sonda acanalada y con el plumón
marca una línea sobre la piel de arriba hacia
abajo en el centro del cuello y que termine a la
altura de las clavículas (Figura E-F).
12. Introduce tu sonda acanalada en 30 grados
debajo de la línea marcada, con el dedo índice
y pulgar de esa misma mano, colocados a los
lados de la línea marcada y estira la piel.
13. Una vez montada tu hoja de bisturí en el
mango, tómalo a manera de bolígrafo con tu
mano de preferencia y procede a cortar (Figura
G-I).
14. Sostener la piel con la pinza de disección
con dientes, con tu mano de preferencia
divulsiona el tejido subcutáneo de ambos lados
con una tijera curva o con una gasa. Ten
cuidado cuando abordes el lado derecho de la
cadena ganglionar ya que tendrás que
diseccionar con cuidado la tráquea y el
esófago, al llegar a la altura de las clavículas
encontraras un reservorio alimenticio (buche)
del lado derecho, el cual tendrás que separar
de la cadena ganglionar (Figura J-K).
15. Observa las cadenas ganglionares del tejido
subcutáneo de ambos lados de la piel que fue
dibulsionada, apóyate con tu instructor para la
toma de fotografías de tus hallazgos (Figura L).
16. Corrobora la relación de los puntos
marcados en la piel con la presencia del ganglio
linfático expuesto.
17. Con la pinza de disección sin dientes,
sostén el extremo superior de la cadena
ganglionar y sepárala del tejido subcutáneo
con tijeras de corte curvas de ambos lados sin
romperla.
18. Procede a la exéresis de la cadena
ganglionar completa de cada lado y colócala
sobre la cartulina blanca. Nuevamente pide a
tu instructor que te apoye para la toma de
fotografías (Figura N-O).
19. Procede a separar el ganglio linfático de
mayor tamaño previamente identificado por
palpación y marcado sobre la piel. (Figura P).
20. Coloca el ganglio linfático con una de sus
caras sobre la superficie de la cartulina, realiza
un corte longitudinal de manera que expongas
el hilio de este (Figura Q).
21. Describe la coloración y consistencia de la
parte expuesta al corte del ganglio linfático.
22. Retira la hoja de bisturí del mango con
apoyo de tu portaagujas y colocarla en su caja
contenedora de desecho.
23. Sin quitarte los guantes, guarda todos los
desechos en una bolsa apropiada.
 Cuestionario
Responda el siguiente cuadro comparativo:
Ganglio Consistencia Fijación Tamaño Hipertrofia Coloración
Linfático
Por No Aplica
Palpación
(Clínica)
Por
Observación
(Quirúrgico)

Elabore un collague secuencial de las fotos

obtenidas de su práctica y escriba brevemente
sus observaciones.

Referencias

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functional features of central nervous system
lymphatics. [Artículo en línea]. Nature 523,
337–341. Disponible en
https://www.nature.com/articles/nature1443
2. [Citado el 08 de mayo de 2020].

2. Inho C., et al (2012) The new era of the

lymphatic system: No longer secondary to the
blood vascular system. [Artículo en línea] Cold
Spring Harb Perspect Med. Abr.2 Vol.
4(a006445),1-23. Disponible en
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/P
MC3312397/. [Citado el 08 de mayo de 2020].
REPORTE
REPORTE
Práctica 3
Migración leucocitaria Transwell
Objetivos
● Aislar CMN (células mononucleares) de
sangre periférica.
● Conocer el sistema Transwell.
● Evaluar la migración celular en respuesta a
agentes quimiotácticos del suero.
● Que el alumno comprenda los aspectos
teóricos de la práctica.
Introducción
La inflamación es un conjunto de procesos
fisiológicos que se da en tejidos vascularizados
y se divide en forma aguda y crónica. La
inflamación aguda se considera fisiológica y
benéfica ya que contribuye a combatir las
infecciones y daños, mientras que la
inflamación crónica es una manifestación que
demuestra el fallo de la inflamación aguda, por
lo que su prolongación ocasiona una
destrucción excesiva en los tejidos y provoca la
cicatrización.
El reconocimiento de agentes
patógenos y células dañadas está dado por:
- Receptores microbianos celulares.
- Sensores de lesión celular.
- Otros receptores implicados en la
inflamación.
- Proteínas circulantes.
La migración de las células en respuesta
a señales químicas es crucial durante el
desarrollo, la inmunidad y para combatir las
enfermedades. Cuando una célula es atacada
por patógenos, normalmente envía atrayentes
solubles para reclutar las células inmunes que
migrarán y posteriormente resolverán la
infección. Es conocido que las células
infectadas producen varias moléculas con
propiedades quimioatrayentes o
quimiotácticas que inducen la migración de
células inmunes. La migración celular puede
ocurrir en fenómenos libres de enfermedades
como en la metástasis, cuando una célula
cancerosa adquiere características para migrar
lo hace a través de estímulos quimiotácticos
para establecer tumores en órganos
secundarios.
El efecto quimioatrayente se da
solamente si la célula es capaz de responder a
dicho estímulo a través de receptores en su
membrana celular. Las moléculas más
estudiadas con función atractora son las
quimiocinas, que son un grupo de proteínas
pertenecientes a las citocinas. A la fecha
existen alrededor de 50 quimiocinas descritas
y se han dividido en cuatro familias de acuerdo
con la estructura proteica, interesantemente
algunas de las quimiocinas comparten afinidad
por un mismo receptor. Los receptores de
quimiocina están acoplados a receptores de
proteínas G de los cuales se han descubierto
20.
El papel más importante que
desempeñan las quimiocinas es guiar la
migración celular. Las células que son atraídas
por las quimiocinas siguen una señal de
incremento de la concentración hacia la fuente
que la produce, algunas quimiocinas controlan
a las células del sistema inmunitario durante
procesos de vigilancia inmunitaria, como la
dirección de los linfocitos hacia los ganglios
linfáticos para que puedan detectar la invasión
de los patógenos mediante la interacción con
células presentadoras de antígenos residentes
del tejido. Estas quimiocinas son conocidas
como quimiocinas homeostáticas y son
producidas y secretadas sin ningún estímulo en
particular.
Algunas quimiocinas tienen un papel en
el desarrollo: promueven la angiogénesis
(crecimiento de nuevos vasos sanguíneos) o
guían a células hacia tejidos que proporcionan
señales críticas específicas para la maduración
celular. Existen otras moléculas biológicas que
no pertenecen a la familia de las quimiocinas
pero que poseen propiedades
quimioatrayentes, algunas citocinas
inflamatorias son liberadas por una gran
variedad de células como respuesta a agentes
infecciosos o al daño físico, que puede ser, por
ejemplo, la sílice o los cristales de urato que se
producen en la gota. Su liberación es a menudo
estimulada por citocinas proinflamatorias tales
como la interleucina 1.
Las quimiocinas inflamatorias
quimiotácticos para los monocitos, neutrófilos
y otras células efectoras desde la sangre hasta
lugares de infección o daño tisular. Algunas
quimiocinas inflamatorias activan las células
para iniciar una respuesta inmunitaria o
promover la cicatrización de la herida. Son
liberadas por muchos tipos de células distintas
y sirven para guiar tanto células del sistema
inmunitario innato como del sistema
inmunitario adaptativo.
No solamente basta con tener una
señal quimioatrayente o una célula con
receptores funcionales a tales agentes
quimiotáticos, en la fisiología natural las
células endoteliales necesitan ser activadas
para cambiar su permeabilidad y permitir la
salida de los leucocitos, este proceso permitirá
favorecer la adhesión mediada a través de
integrinas y selectinas, que lograrán frenar y
detener a células de sistema inmune
encargadas de resolver el problema
inflamatorio. Posteriormente, las células
necesitan atravesar la barrera endotelial y ésta
puede ser paracelular o transcelular donde las
quimiocinas dirigen la dirección de tal
migración celular.
Esta migración se da por cinco pasos
principales:
1. Marginación
2. Rodamiento
3. Adhesión
4. Diapédesis
5. Quimiotaxis
Fundamento
Para cuantificar la migración celular en
respuesta a factores quimiotácticos, un simple
ensayo fue desarrollado en 1961 por el Dr.
Stephen Boyden, que ahora se conoce como el
ensayo de migración transwell o ensayo de
cámara de Boyden.
Esta configuración consiste en una
membrana de poro definido que separa los
pocillos de una placa de cultivo en
compartimentos superior e inferior. El ensayo
consiste en sembrar las células cuya migración
será evaluada en el compartimiento superior y
la solución quimioatrayente se coloca en el
compartimento inferior. Después de la
incubación, visualizar y contar las células en el
compartimiento inferior permite la
cuantificación de la migración inducida por
quimioatrayentes. Este ensayo puede
modificarse para estudiar la transmigración y
extravasación leucocitaria si en la cámara
transwell además de los poros se prepara una
monocapa endotelial que al ser activada con
elementos solubles permitirá la permeabilidad
celular.
Correlación clínica
La deficiencia de adhesión leucocitaria altera el
sistema fagocítico ya que existe una ausencia o
disfunción de alguna de las moléculas de
adhesión. Se han agrupado 2 tipos principales
de síndromes:
Deficiencia de adhesión leucocitaria (LAD)
tipo I
En condiciones normales, la expresión de las
integrinas β-2 en los leucocitos facilita las
interacciones célula-célula y célula-matriz
extracelular, gracias a la unión de dichas
integrinas a sus ligandos, denominados ICAM1
(CD54), ICAM2 (CD102), ICAM3 e iC3b.
La LAD es una enfermedad rara que se
hereda de forma autosómica recesiva, con
manifestaciones clínicas, generalmente en los
dos primeros años de vida, que consisten en
infecciones bacterianas recurrentes. Los
agentes microbianos más comunes son
Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa, Klebsiella sp., Proteus sp. y
enterococos.
La enfermedad se debe a alteraciones
del gen que codifica la proteína CD18 lo que
ocasiona una expresión deficiente de las
proteínas de adhesión leucocitaria
CD11a/CD18, CD11b/CD18 y CD11c/CD18.
Los pacientes presentan infecciones
recurrentes necróticas cutáneas y del tejido
celular subcutáneo, una cicatrización
defectuosa y graves gingivitis y periodontitis.
La enfermedad puede ser mortal en el primer
año de vida o seguir un curso benigno.
La cicatrización defectuosa se
manifiesta por cicatrices displásicas y el retraso
en la caída del cordón umbilical (incluso
superior a tres semanas). Esto probablemente
se debe a la ausencia del infiltrado normal de
monocitos/macrófagos, que contribuye a la
cicatrización mediante la producción de
factores de angiogénesis, como las citocinas y
el TGF-β (Factor de crecimiento tumoral beta).
En los casos moderados se detecta algo
de CD18 en la superficie celular, aunque menos
que en condiciones normales. Clínicamente,
aparecen gingivitis, infecciones (raramente
graves) y lesiones cutáneas. En las formas
severas, la expresión de CD18 es indetectable y
aparecen infecciones sistémicas graves y de
carácter recurrente.
Deficiencia de adhesión leucocitaria tipo II
Existen dismorfias craneofaciales, defectos
neurológicos e infecciones recurrentes. Los
pacientes carecen del antígeno H eritrocitario
y tienen un fenotipo Bombay (hh).
En este caso los niveles de CD18 son
normales, pero hay una expresión defectuosa
del hidrato de carbono de Lewis X sializado
(sLeX), que es el ligando de distintas moléculas
de adhesión (selectina E y selectina P). Dicha
interacción interviene en condiciones
normales en la extravasación de células
fagocíticas desde la circulación y en el proceso
de recirculación linfocitaria.
Mientras que en la LAD I la familia de las
integrinas es la más afectada, en la LAD II el
sistema más implicado es el de las selectinas.
Materiales
Muestra
Sangre periférica (anticoagulante E.D.T.A.)
Plasma
Reactivos
Solución salina
Ficoll-paque o Lymphoprep
Materiales
Placa de 24 pozos
Soportes Transwell de 8.0μm
Mircroscopio
Pipetas serológicas
Micropipetas y puntas desechables (1 mL).
Procedimiento
● Obtener sangre periférica siguiendo la
metodología previamente descrita (10 mL)
● Centrifugar la sangre a 3000 rpm
(revoluciones por minuto) por cinco
minutos.
● Retirar el plasma y mantenerlo en
refrigeración (se utilizará como agente
quimiotático).
● Resuspender el botón celular con solución
salina (20mL)
● Preparar tubos Falcon con 5mL de Ficoll o
Lymphoprep, con cuidado depositar la
suspensión celular sanguínea cuidando de
no mezclar la muestra con el
Ficoll/Lymphoprep.
● Centrifugar durante 15 minutos sin freno y
sin aceleración a 1500 rpm.
● Retirar la capa de células mononucleares y
resuspenderla en solución salina.
● Colocar 200 uL de la solución salina en el
fondo del pozo de la placa (control) y 200
uL de plasma/suerto otro pozo (problema).
Colocar en cada pozo un soporte transwell.
● Colocar la suspensión de células
mononucleares en la parte superior del
soporte tanswell como se muestra en la
figura e incubar a 37ºC por media hora (500
uL).
● Retirar el soporte transwell y observar los
pozos con ayuda del microscopio invertido,
o bien, resuspender y tomar una gota para
observarla bajo el microscopio y contar las
células por campo.
● Comparar el número de células que
migraron en el control (sol. salina) y en el
problema (plasma/suero).
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Control: Menor número de células que
migraron (células que atravesaron el poro).
Plasma: Mayor número de células que
migraron en respuesta a la atracción de
elemntos del plasma sanguíneo.
Cuestionario
1. ¿Cuáles son las integrinas y selectinas que
permiten la migración leucocitaria?
2. Esquematiza los cinco pasos de la migración
leucocitaria donde se incluyan las quimiocinas
necesarias para cada paso.
Referencias
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REPORTE
REPORTE
Práctica 4
Proteína C reactiva
Objetivos
● Que el alumno conozca la utilidad haptoglobina. La PCR y el amiloide sérico A, se
pronóstica de la Proteína C reactiva. aumentan hasta mil veces, principalmente en
● Que el alumno corrobore la reacción procesos inflamatorios agudos e infecciosos.
antígeno-anticuerpo por medio de aglutinación. Por otra parte, las proteínas que disminuyen se
● Que el alumno realice la determinación conocen con el nombre de reactantes
de Proteína C reactiva en suero. negativos, constituidos por la albúmina y la
transferrina.
Estas proteínas se clasifican en tres
Introducción
grupos funcionales:
La cuantificación de la respuesta inflamatoria
1. Las que participan en la defensa del húesped.
permite estratificar y pronosticar el estado
2. Inhibidoras de las proteinasas de serina.
basal de la enfermedad y evaluar su respuesta
3. Transportadoras con actividad antioxidante.
al tratamiento a través del tiempo.
En 1941 se introdujeron los términos de
reactantes de fase aguda para describir el suero
de los pacientes con infecciones graves,
posteriormente se observó que también se
asociaban con procesos traumáticos,
neoplásicos y reacciones de hipersensibilidad.
Las proteínas de fase aguda son aquellas cuya
concentración cambia al menos el 25% durante
la inflamación; las que se incrementan se
conocen con el nombre de reactantes positivos,
las principales son: Proteína C reactiva (PCR),
algunos componentes del complemento (C3-
C4), ferritina, fibrinógeno, amiloide sérico A,
alfa-1 antitripsina, ceruloplasmina y
Streptococcus pneumoniae.
La Proteína C reactiva (PCR) fue la
primera proteína de fase aguda que se La Proteína C reactiva pertenece a una
describió y su nombre deriva de su capacidad familia de proteínas cíclicas pentámericas
para precipitar al polisacárido somático C del
llamadas pentraxinas. Las cinco subunidades
(protómeros) son estructuralmente idénticas y
tienen un pliegue proteico característico. Junto
con las ficolinas y las colectinas son el grupo de
moléculas que se encargan del reconocimiento
de patrones.
En el caso de la PCR, cada protómero se
puede unir a residuos de fosfocolina presentes
en el polisacárido C y otras moléculas que se
encuentra en las superficies de las membranas
bacterianas. Pero también están presentes en
la fosfatidilcolina y la esfingomielina,
componentes de membranas celulares
humanas, las cuales llegan a exponerse debido
a un daño celular.
Por lo tanto, la PCR puede reconocer los
patrones moleculares asociados a patógenos y
asociados a daño (PAMPs y DAMPs,
respectivamente) formando parte de la
inmunidad innata. Su síntesis es inducida como
respuesta al daño tisular, infecciones, procesos
inflamatorios y neoplasias, producida
principalmente por los hepatocitos y su
expresión está regulada por tres citocinas,
como las IL (interleucina)-1, IL-6 y el TNFα (Factor
de necrosis tumoral Alpha).
En individuos sanos, la concentración
media de PCR es de 0.8 mg/L mientras que,
durante un estímulo de fase aguda, estos
niveles pueden incrementar hasta más de
10,000 veces su valor normal, con la síntesis de
novo en hígado. En estas condiciones, las
concentraciones séricas comienzan a elevarse a
las seis horas (momento en el cual pueden
detectarse concentraciones de hasta 5 mg/L),
alcanzando sus niveles máximos
aproximadamente 48 horas después del
estímulo inicial. La vida media en plasma de la
proteína C reactiva es aproximadamente de 20
horas, pero su concentración plasmática es
constante bajo cualquier condición y no es
afectada por la ingestión de alimentos ni
presenta variación circadiana; en contraste con
las proteínas de coagulación y demás proteínas
de fase aguda.
Una vez que el estímulo que promovió
su producción cesa por completo, la
concentración en circulación de la PCR
disminuye rápidamente hasta alcanzar sus
niveles basales. Se ha observado que los niveles
séricos de PCR tienden a incrementar con la
edad probablemente como reflejo de algún
incremento en la incidencia de procesos
inflamatorios subclínicos o el incremento de
fenómenos apoptóticos. Por otro lado, se
conoce desde hace varios años que las mujeres
por lo general presentan niveles más elevados
en circulación que los varones.
Gráfica 1. Aumento exponencial de la Proteína
C-reactiva (y otras proteínas de fase aguda) al
producirse un estímulo inflamatorio con daño
tisular, y regreso a sus niveles normales
asociado a la fase de recuperación.
Un papel fisiológico fundamental de la
PCR es su participación en la eliminación de
materiales autólogos incluyendo a los
fosfolipidos oxidados y a las células
apoptóticas. La mayoría de las células de la
respuesta inmune tienen una vida media muy
corta, y millones de células apoptóticas
requieren ser eliminadas diariamente, la PCR
participa en este proceso mediante diversos
mecanismos.
- Amplifica la activación de la vía clásica del
complemento debido a su capacidad de unirse
a la lisofosfocolina presente en las membranas
de las células apoptóticas una vez que estas han
presentado alteraciones en su organización.
- Inhibe el ensamble de los componentes
terminales del complemento (C5-C9)
atenuando la formación del complejo de
ataque a la membrana en la superficie de las
células apoptóticas y protegiéndolas de los
procesos de lisis y necrosis.
- Induce la expresión de moléculas de adhesión
por las células endoteliales. Aumenta la
expresión de VCAM-1, ICAM-1 y de selectina-E
en las células endoteliales de la vena umbilical
y de la arteria coronaria, y aumenta la secreción
de la proteína quimiotáctica del monocito-1
(MCP-1) por parte de las células endoteliales de
la vena umbilical. Se ha postulado que la
modulación de la expresión de las moléculas de
adhesión (VCAM-1, ICAM-1) y de MCP-1 por la
PCR puede inducir y sostener la aterogénesis.
- Opsonina, es decir, recubre junto con el
componente C3 del complemento, las
superficies de las células apoptóticas, lo que
favorece su fagocitosis por los macrófagos
activados. Todo ello es importante puesto que
las células apoptóticas inducen la expresión de
citocinas anti-inflamatorias como la TGF-β.
En contraste, las células necróticas
promueven la síntesis de citocinas pro-
inflamatorias que conllevan al desarrollo de
respuestas inmunológicas adquiridas. Ésto
explica en gran medida que algunas
deficiencias en la vía clásica del complemento y
de ciertas pentraxinas den lugar a una
remoción deficiente de células apoptóticas y a
un incremento en los procesos de necrosis con
características similares a una respuesta de tipo
autoinmunitaria.
Existen otros factores que parecen
incrementar los niveles de PCR circulante, como
la enfermedad periodontal, el tabaco, la
fibrilación auricular, el consumo de café y el
estrés. Por el contrario, se ha observado una
disminución de los niveles séricos de PCR
relacionada con la pérdida de peso y el
ejercicio.
Fundamento
Existe una variedad de técnicas nefelométricas,
de aglutinación reversa, inmunoenzimáticas,
radioinmunes y otras, el método manual más
común, por su sencillez y bajo costo, es la
aglutinación pasiva reversa. Ésta utiliza
partículas de látex recubiertas con anticuerpos
anti-PCR, que aglutinan en presencia de esta
proteína.
Correlación clínica
Posterior a un infarto del miocardio existe una
gran respuesta de PCR que refleja la extensión
de la necrosis, los niveles máximos alcanzados
a las 48 horas del evento agudo son útiles como
factor pronostico en la evolución de estos
pacientes. La producción elevada de PCR que
sigue a una necrosis miocárdica corresponde a
una respuesta de fase aguda típica que se
desarrolla frente a la muerte celular e
inflamación subsecuente.
Independientemente de ser un
marcador de daño miocárdico, la producción
moderada y continua de PCR se asocia con un
incremento en la incidencia de eventos
coronarios agudos (angina inestable, infarto
agudo de miocardio y muerte súbita
isquémica).
En otras palabras, la detección de un
incremento en los niveles séricos basales de la
proteína en sujetos aparentemente sanos tiene
un valor predictivo comparable e
independiente al del colesterol o LDL
(lipoproteínas de baja densidad, por sus siglas
en inglés) para el desarrollo futuro de isquemia.
No está del todo claro cuáles son los estímulos
que disparan este nivel de producción que se
encuentra entre el considerado normal
(<1mg/L) y el que se observa comúnmente en
una respuesta de fase aguda (>10mg/L), pero es
posible que refleje un proceso infamatorio
crónico en el interior de las arterias.
Estudios recientes sugieren que la PCR
además de reflejar el daño tisular después de
un infarto y de funcionar como un marcador
sérico para predecir eventos coronarios agudos
a plazos muy variables e indefinidos, también
contribuye directamente a la presentación del
evento isquémico del miocardio. De hecho, en
la actualidad se considera que la PCR contribuye
a la patogénesis, progresión y complicaciones
de la enfermedad aterosclerótica de manera
fundamental.
 Los efectos pro-infamatorios y pro-
aterogénicos de la PCR que han sido
documentados hasta ahora sobre las células
endoteliales incluyen: disminución en la
producción de óxido nítrico (NO) y
prostaciclina, incremento en la secreción de IL-
6, aumento en la expresión de moléculas de
adhesión (imprescindibles para el
reclutamiento de monocitos y linfocitos T a los
tejidos) y aumento en la secreción de
quimiocinas, que son esenciales para la
migración de leucocitos hacia la íntima de las
arterias.
Materiales
1. Suero problema
2. Placas de plástico o vidrio fondo negro
3. Pipetas
4. Palillos mezcladores
5. Cronómetro
6. Lámpara o fuente de luz
Procedimiento
1. Obtener una muestra de suero. Refrigerar
hasta por 24 horas o congelar para plazos
mayores.
2. Diluir el suero 1:6 con PBS (ej. 0,1 + 0,5 ml).
3. En una lámina de fondo oscuro limpia,
colocar una gota (50 μl) del suero diluído.
Correr igualmente sueros control (+) y (-) en
cada lote de muestras.
4. Homogenizar la suspensión del látex-anti-
PCR y agregar una gota a cada muestra. Evitar el
contacto del gotero con las muestras. Mezclar
con un aplicador, rotar la lámina durante dos
minutos y leer por aglutinación.
5. Para estimar los niveles, se pueden probar
diluciones dobles, preparadas a partir de la
dilución 1:6. La mayor dilución que resulte en
aglutinación es el título de PCR. Este puede
multiplicarse por la sensibilidad mínima del
reactivo, dada por el fabricante, para estimar la
concentración de la proteína.
La concentración de PCR en individuos
aparentemente sanos es inferior a 3 μg/ml, en
el 90% de la población (e inferior a 10 μg/ml en
el 99%). Es importante tener en cuenta que la
presencia de factores reumatoides en la
muestra puede causar falsos positivos con esta
técnica.
Cuestionario
1. ¿Qué es la Proteína C reactiva?
2. ¿Cuáles son las funciones de la Proteína
C reactiva en el organismo?
3. ¿Cuál es la asociación de la Proteína C
reactiva y el riesgo cardiovascular?
4. ¿En qué patologías existe un
incremento de la Proteína C reactiva?
5. ¿Cuáles son los factores que modifican
las concentraciones séricas de la Proteína C
reactiva?
Referencias
1. Batún Garrido J, García Padrón O, Salas
Magaña M. Proteína C reactiva como marcador
de riesgo cardiovascular en una cohorte de
pacientes con artritis reumatoide. [Artículo en
línea]. Revista Cubana de Reumatología. 2,
111-119. Dispopnible en
http://scielo.sld.cu/pdf/rcur/v18n2/rcur03216
.pdf. [Citado el 08 de mayo de 2020].
2. Ros J. Fiebre reumática y artritis post
estreptocócica. [Artículo en línea]. Protoc diagn
ter pediatr. 1, 165-75. Dispopnible en
https://www.aeped.es/sites/default/files/doc
umentos/18_fiebre_reumatica_artritis_postes
treptococica.pdf. [Citado el 08 de mayo de
2020].
3. Haro A. María et al., (2017). Asociación de
Proteína C reactiva ultrasensible con la
composición de la dieta en niños escolares
mexicanos. [Artículo en línea] Investigación
Clínica. 58, 44-55. Disponible en
http://ve.scielo.org/pdf/ic/v58n1/art05.pdf.
[Citado el 08 de mayo de 2020].
REPORTE
REPORTE
 Práctica 5
Floculación
Objetivos
● Observar la reacción antígeno-anticuerpo
de la floculación.
● Conocer el fundamento de las reacciones de
floculación, específicamente la prueba VDRL
(Veneral Disease Research Laboratory).
● Que el alumno, valiéndose de los
conocimientos previamente adquiridos,
sepa interpretar los resultados de la prueba
VDRL.
Introducción
La prueba denominada VDRL recibe su nombre
de las siglas del Venereal Diseases Research
Laboratory, institución que la desarrolló
alrededor de los años cuarenta. Es una de las
pruebas serológicas que ayudan al diagnóstico
de sífilis, causada por la espiroqueta Treponema
pallidum;por su bajo costo, simpleza y rapidez,
es utilizada como primer tamizaje serológico
para la detección de esta infección.
El VDRL se basa en una prueba de
floculación que consiste en una reacción Ag-Ac
de precipitación. La precipitación es el término
para la agregación de antígenos de prueba
solubles, es la combinación de antígeno soluble
con anticuerpo soluble para producir un
complejo insoluble visible. En este tipo de
reacción se distinguen dos etapas:
1. Reacción primaria no visible.
2. Reacción secundaria caracterizada por la
aparición de grupos o abultamientos
(flóculos) en lugar de un precipitado.
Fundamento.
En el kit de VDRL el antígeno usado es la
cardiolipina, la cual en conjunto con la lecitina y
el colesterol da como resultado el compuesto
llamado CALECOL (cardiolipina, lecitina y
colesterol), éste complejo genera la
estabilización de la reacción Ag-Ac al limitar la
cinética de la disociación y se formen los
flóculos.
Cuando las células del organismo sufren
una lisis causada por Treponema pallidum
quedará expuesta la membrana interna de las
mitocondrias al espacio extracelular, entre sus
componentes está el difosfofatidilglicerol, al
cual el sistema inmune reaccionará produciendo
anticuerpos principalmente de tipo IgM e IgG
(anticuerpos reagínicos), que al contacto con la
cardiolipina (presente en el reactivo de VDRL)
generarán la formación de flóculos. La
aglomeración es ocasionada por la interacción
antígeno anticuerpo gracias a que el antígeno en
este caso es un fosfolípido.
El VDRL tiene periodos de ventana (tiempo en el
que se generan resultados seronegativos); se
observará un resultado seropositivo durante la
fase secundaria y latente temprana, por
producción sistémica de anticuerpos, en la sífilis
primaria no habrá producción de anticuerpos
debido a que aún no es sistémica y en la sífilis
latente tardía el resultado es mayormente
seronegativa por una falta de producción de
productos lesivos por parte de la bacteria.
 Prueba Anticuerpo Antígeno Características

Por Microscopía

Campo oscuro Ninguno T. pallidum Estándar de oro

*excepto en muestras bucales
ya que existen treponemas que
son microbiota normal

Fluorescencia Anticuerpo T. pallidum

antitreponema
con marcador
fluorescente

Pruebas no treponémicas

RPR Reagina Partículas de carbón No requiere activación del

recubiertas con complemento
cardiolipina

VDRL Reaginas Cardiolipina Primera prueba de Tamizaje

Pruebas treponémicas

Prueba de Ninguno El ADN del paciente coincide con ADN treponémico

ADN

EIA Anti IgM o anti IgG Antígeno treponémico Menos sensible de las pruebas
antitreponémico ligado a enzimas treponémicas

FTA - ABS Antitreponémico T. pallidum Sirve para verificar reacciones

positivas en RPR o VDRL

MHA - TP Antitreponémico T. pallidum Tiene menos sensibilidad que

FTA - ABS

Existen patologías que pueden dar resultados Correlación clínica

falsos positivos en la prueba VDRL: síndrome
anticuerpos antifosfolípidos, lupus eritematoso
sistémico, fiebre reumática, neumonía viral,
neumonía neumocócica, mononucleosis
infecciosa, hepatitis infecciosa, lepra, malaria,
artritis reumatoide e infecciones por otros
treponemas.
La sífilis es una enfermedad sistémica
degenerativa causada por una espiroqueta:
Treponema pallidum subespecie pallidum. Es
trasmitida principalmente por contacto sexual
(sífilis adquirida), aunque anteriormente
también se pudo transmitir por medio de
contacto directo con una lesión, por traspaso
placentario (sífilis congénita) o durante el paso
por el canal de parto. Actualmente en el caso de
las trasfusiones sanguíneas la transmisión es de
poca importancia debido a que el Treponema no
puede subsistir por más de 48 horas en las
condiciones de almacenamientos de la sangre. El
curso clínico de la infección se ha podido
establecer en diferentes fases (ver tablas).

Fase o
Características Examen
período

Se da entre el contacto con la bacteria y el inicio de la sintomatología, se establece en promedio después

Período de de tres semanas (o incluso hasta 90 días), en este periodo la cantidad de espiroquetas va en aumento
incubación hasta que logran una concentración lo suficientemente para ocasionar manifestaciones clínicas (aprox.
107 espiroquetas/mg de tejido).

Caracterizada por la expresión de un signo patognomónico de esta fase en la infección Microscopia

por T. pallidum conocido como chancro sifilítico, éste se presenta en forma de pápula de campo
ulcerada que posee características diferenciables: es dura, indolora, limpia (por no oscuro
presentar ningún tipo de secreción o exudado), no sangra y se presenta en el sitio de
Fase primaria
entrada del patógeno como una lesión solitaria en su mayoría. Comúnmente se
acompaña de linfadenopatía regional indolora. Esta fase se mantiene durante 2 a 8
semanas, después de este período, el chancro generalmente desaparece sin dejar
señales o dejando una cicatriz fina.

Se presenta después de aproximadamente 6-12 semanas de la desaparición del 1.- RPR o VDRL
chancro sifilítico. La infección se disemina debido a que es el periodo con mayor
2.- EA o FTA-
número de treponemas (por multiplicarse y diseminarse) en el cual alcanzan la
ABS
Fase circulación, generando también que la respuesta inmunitaria sea muy acelerada y con
secundaria ello se presentan las siguientes manifestaciones clínicas: lesiones eritematosas que
pueden ser máculas, pápulas y pústulas, que no respetan palmas ni plantas en forma
característica, van acompañadas mayormente por síntomas constitucionales como
febrícula, malestar general y linfadenopatía

No se presentan manifestaciones clínicas que orienten a la presencia de sífilis, sin embargo, las pruebas
serológicas que detectan anticuerpos producidos durante la estancia del patógeno en el organismo son
reactivas (positivas). El hecho de no haber manifestaciones clínicas no implica la ausencia de progreso de
la enfermedad. Esta fase se divide a su vez en dos fases principales y éstas dependen del tiempo durante
el que se presente.
Periodo
Fase de latencia temprana: Ocurre hasta antes de 4 años de la terciaria y las recaídas son más frecuentes,
subclínico
quizá por el cese de la actividad inmunitaria durante ese periodo, por lo que el paciente es altamente
infeccioso.

Fase de latencia tardía: Después de 1 año, esta fase es muy poco predisponente a que se presenten
recaídas. Se dice que el paciente es resistente a la reinfección, en esta el paciente es poco infeccioso sin
embargo el feto puede contagiarse si la madre se encuentra en este período.

Es la fase más grave de sífilis y es exclusiva de pocos pacientes (sólo un tercio

+Fase de los pacientes no tratados o de un 4-10% del total de pacientes con sífilis),
Terciaria presente entre los 5 y 30 años después de adquirir la infección primaria y que
 se divide en neurosífilis, sífilis cardiovascular, sífilis gomosa y en ocasiones
osteítis luética. VDRL en líquido
cefaloraquideo.

Neurosífilis: Es la afectación del SN que se define básicamente como una Si es negativo y hay alto
meningitis crónica que afecta a dicha porción, se divide en una forma índice de sospecha de
temprana del primer año de infección hasta el doceavo año del mismo como neurosífilis, realizar FTA –
sífilis meningovascular que se refiere a la afectación de los vasos sanguíneos ABS en suero.
de las meninges, encéfalo y médula espinal, se manifiesta con cefaleas,
hemiparesias, afasias y convulsiones focales y generalizadas. Algunos pacientes no
La forma tardía que se presenta de los 15 a los 25 años presentada como sífilis reaccionan a pruebas no
parenquimatosa en donde se presenta una destrucción real de las neuronas, treponémicas tardías de
principalmente en la corteza cerebral, por lo que es un proceso degenerativo. neurosífilis.
Se manifiesta con afasia general (afectación cortical) y tabes dorsal
(afectación de raíces sensitivas), se presenta una desmielinización de las
raíces mayormente posteriores y en pequeña medida de las raíces anteriores,
generando una marcha atáxica con la caída súbita del pie, incontinencia fecal,
impotencia, pupilas de Argyl-Robertson y signo de Romberg (imposibilidad de
permanecer de pie con los pies juntos y los ojos cerrados) positivo.
Se presenta en dirección vertical, dado de la madre al feto por vía transplacentaria a partir de la 16° semana
de gestación, en donde ocurre el desprendimiento de las vellosidades coriónicas (membrana de Langhans).
La infección dada por el treponema genera que se produzca una respuesta de tipo humoral y celular,
produciendo muerte fetal, o problemas de peso y retraso mental en los bebés que llegan a término. El
proceso o las manifestaciones clínicas se deben al estadio de sífilis que presente la madre en el momento
Sífilis del embarazo. La fase más infecciosa es la sífilis secundaria (en la madre por ser sistémica), mientras que
congénita la fase latente tardía y terciaria son muy poco contagiosas. Las manifestaciones clínicas de la sífilis
congénita se dividen en dos etapas.
Sífilis Congénita Temprana: Se presenta descamación palmo-plantar, exantema maculo papular que se
transforma en vesicular (característica única de la sífilis congénita), ictericia, anemia, etc.
Sífilis Congénita Tardía: se presenta principalmente la triada de Hutchinson (queratitis intersticial, sordera
y dientes en sierra), puede presentar nariz en silla de montar y tibia en sable.

Día 1-90 Día 90 al 4° año 4° - 30 año

3 meses 3 años 1 año años ... • Sífilis tardía (latente tardía y terciaria):
Sífilis Sífilis Sífilis latente Sífilis latente Sífilis
Incubación
primaria secundaria temprana tardía terciaria Penicilina G benzatínica 2.4MUI por semana en
VDRL (-) VDRL (+) VDRL (+ o -) VDRL (+ o -) VDRL (- o +)
Contagio > Contagio < Contagio tres aplicaciones durante dos semanas. Se
puede emplear en pacientes alérgicos
El tratamiento de la sífilis depende del Doxiciclina 100mg VO por cuatro semanas.
estadio en el que se presenta:
• Sífilis en embarazadas: Penicilina G
• Sífilis temprana (primaria, secundaria y benzatínica 2.4MUI en una sola dosis en el
latente temprana): Penicilina G benzatínica primer y segundo trimestre. En el tercer
2.4MUI (Millones de Unidades internacionales) trimestre emplear otra dosis similar. Si la
en una sola dosis. Si el paciente es alérgico a la paciente es alérgica se debe emplear
penicilina se emplea Doxiciclina 100mg VO (vía Eritromicina 500 mg VO por dos semanas.
oral) por dos semanas o Eritromicina 500mg VO
por dos semanas.
 • Sífilis congénita: Penicilina Sódica 100
mil a 150 mil UI/kg por día IV (Intravenosa) por
diez días.

Debido a que la sífilis puede ser de

etiología congénita la NOM-039-SSA2-2002 para
la prevención y control de las infecciones de
transmisión sexual, exige que a toda mujer
embarazada se le realice una prueba de VDRL
durante la primera visita prenatal,
independientemente del trimestre de gestación
en que se encuentre y posterior al parto.
Puntualiza que el personal de salud no
debe dar de alta a ninguna mujer posterior al
parto sin que se le haya realizado la prueba.
Materiales
Proporcionados por el laboratorio de
inmunología
● Antígeno: cardiolipina al 0.3%, Colesterol al
0.9%, y 0.01% lecitina
● Solución salina
● Microscopio óptico
● Una laminilla con tres excavaciones
● Un tubo con suero de un paciente con sífilis
● Tres pipetas serológicas
Procedimiento
● Incubar el suero a baño maría a 60ºC durante
tres minutos para inactivar el complemento.
● Sacar el suero del baño maría y dejarlo
enfriar.
● Depositar, con una pipeta serológica una
gota dentro de cada una de las excavaciones
de la laminilla.
● Añadir una gota de emulsión de antígeno al
suero y a la solución salina con una pipeta.
● Girar el portaobjetos durante cuatro
minutos con movimiento rotatorio.
● Se lee la prueba inmediatamente después de
la rotación bajo el microscopio y con objetivo
seco débil.
Cuestionario
1. Investiga y realiza un esquema de cómo el
Treponema pallidum evade el sistema inmune y
cómo se crea la reagina.
2. Investiga las manifestaciones clínicas de la
sífilis cardiovascular, gomosa y osteítis luética.
Referencias
1. Mandell G.L., Bennett J.E., Dolin R. Eds.
(2015). Principles and practice of Infectious
Diseases. Philadelphia. Churchill Livingstone.
8º Ed. Elsevier.
2. Rytel, M.W. Bacterial Immunology. En Grieco
M.H. y Meriney, D.K., Eds. Immunodiagnosis
for clinicians. Year Book Medical Publishers.
Chicago;1983, 235.
REPORTE
REPORTE
 Práctica 6
Grupos sanguíneos
Objetivos
● Demostrar la reacción antígeno-
anticuerpo en antígenos de superficie
(aglutinación).
● Conocer la importancia de la
Identificación del grupo sanguíneo en la
terapia transfusional y el sistema de
compatibilidades e incompatibilidades
transfusionales.
● Determinar el grupo sanguíneo ABO y Rh
del alumno.
● Conocer los principios que intervienen
en la selección de donadores de sangre
de los grupos ABO y Rh adecuados para
un receptor, y los principios de las
pruebas de compatibilidad, incluida la
prueba de Coombs.
● Discutir la importancia de los sistemas
menores de grupos sanguíneos: Lewis,
Duffy, Kidd, MN, Lutheran, etcétera.
Introducción
Las reacciones de aglutinación y de
precipitación son la base de la mayor parte de
las técnicas inmunológicas. Las pruebas de
aglutinación son aquellas reacciones que se
caracterizan por la formación de agregados
visibles, cuando se mezclan antígenos
insolubles (aglutinógenos) con sus anticuerpos
específicos (aglutininas). La reacción toma lugar
sobre la superficie de las partículas que poseen
el antígeno disponible para los sitios de unión
específica de los anticuerpos.
La unión del aglutinógeno y la aglutinina
ocurre en segundos, esto conlleva la formación
gradual de un entrecruzamiento entre el Ac y
los determinantes antigénicos, que al final de la
reacción da como resultado la formación de
grumos visibles. Cuando se utilizan glóbulos
rojos, la reacción se denomina hemaglutinación
y los anticuerpos involucrados, hemaglutininas;
los antígenos situados en la membrana de los
hematíes reaccionan con los anticuerpos y el
resultado de la reacción es la formación de
grumos de hematíes o aglutinados.
Siendo esta la técnica base usada en la
clasificación y determinación de los grupos
sanguíneos, teniendo como aplicación clínica la
identificación de la presencia de antígenos en la
superficie de los hematíes.
Algunas pruebas de aplicación clínica
son: prueba de Coombs, factor reumatoide,
reacción Widal, determinación de Proteína C
reactiva, determinación de anticuerpos
antinucleares.
Un grupo sanguíneo es un sistema
definido por componentes antigénicos
eritrocitarios presentes en la membrana de
superficie de los hematíes (glucolípidos y
proteínas) controlados por un locus genético
con un número variable de alelos. La
determinación de grupos sanguíneos está
relacionada a la terapéutica transfusional, pero
uno de los principales problemas de la
transfusión sanguínea es la necesidad de evitar
las reacciones inmunitarias que resultan de las
diferencias entre los eritrocitos del donador y
del receptor.
La Sociedad Internacional de
Transfusiones de Sangre ha reconocido 33
sistemas de clasificación de grupos sanguíneos,
que juntos constituyen cientros de posibles
fenotipos eritrocíticos. Dentro de los sistemas
más importantes se encuentran los sistemas
ABO y Rh, aunque también se han aceptado los
sistemas menores: MNS, Lutheran, Kell, Duffy,
Kidd, entre otros.
Sistema ABO
El primer grupo de sustancias fue identificado
por Landsteiner en 1901. En 1939, Levine y
Stetson reportaron el caso de una mujer con
una intensa reacción hemolítica después de
haberle practicado una transfusión con sangre
donada de su esposo. Landsteiner descubrió
que los glóbulos rojos pueden clasificarse en A,
B y O, de acuerdo a la presencia o ausencia de
antígenos reactivos en la superficie de los
glóbulos rojos.
Los antígenos del grupo sanguíneo ABO son
glucolípidos de superficie.
Hay tres genes que controlan la
expresión de los antígenos ABO
1. Gen H🡪 ubicado en el cromosoma 19,
codifica para la producción de una enzima
transferasa (H) que une una molécula de L-
fucosa a la galactosa terminal (Gal) de la
sustancia precursora unido a los lípidos o
proteínas de membrana del eritrocito,
dando origen al antígeno H.
2. Gen ABO ubicado en el cromosoma 9 posee
tres alelos que son el A, B y O, que varían de
acuerdo con las sustituciones de
nucleótidos, el alelo A codifica la
transferasa A que cataliza la adición de un
residuo de N-acetilgalactosamina (GalNAc)
y el alelo B codifica para la enzima
transferaza B que cataliza la adición de
reciduo de D-galactosa (Gal). Estos azúcares
se transfieren al antígeno H.
3. Gen Se ubicado en el cromosoma 19
codifica para una enzima
(fucosiltransferasa) que se expresa en el
epitelio de tejidos secretores, incluidas las
glándulas salivales y los tractos respiratorio
y gastrointestinal. Esta enzima cataliza la
producción de antígeno H en secreciones
del organismo.
El fenotipo Bombay (Oh) se da en los
individuos que no heredan un gen H (genotipo
hh) Bombay ( Oh). Estos individuos no producen
substancia H y, por tanto, los genes A y B no
pueden expresarse. El fenotipo Bombay (Oh) es
muy raro (1/106), los individuos Bombay
pueden heredar los genes A y B, pero debido a
su carencia de su sustancia H no pueden
producir ni el antigeno A ni el antigeno B. los
hematies Bombay carecen de dicha substancia.
Los hijos de individuos Bombay pueden
expresar cantidades normales de los antigenos
A y/o B en sus hematies siempre que hereden
el gen H del otro progenitor; de este modo, dos
individuos cuyo fenotipo es O en apariencis
pueden tener un descendiente con un fenotipo
A.
 Grupo Rh
En 1940, Landsteiner y Wiener inmunizaron
conejos y cobayos con eritrocitos obtenidos de
Macacus rhesus, partían del planteamiento de
que los eritrocitos de estos monos podrían
existir antígenos similares a los humanos. El
suero obtenido aglutinaba a los glóbulos rojos
de estos monos y a los eritrocitos del 85% de la
población blanca.

Los anticuerpos de este sistema ABO son
llamados «anticuerpos naturales» debido a que
se producen por por una exposición previa a
antígenos similares en partículas de polen,
alimentos, bacterias (Bacteroides fragilis) y
virus.
Se describen más de 50 otros antígenos
Rh, pero aquellos importantes en la práctica de
transfusión son D, d, C, c, E y e. Los antígenos se
codifican del gen 1p36, se heredan en los
haplotipos que comúnmente se designan por
una de las dos terminologías:

La generación de anticuerpos sigue la 1. Fisher-Race distingue tres genes situados en

ley de Landsteiner: Los anticuerpos son
dirigidos contra los antígenos ausentes en los
eritrocitos de cada persona. Los anticuerpos
anti-A y Anti-B son producidos por individuos
que carecen de los respectivos antígenos A y B.
Estos anticuerpos son en su mayoría
inmunoglobulinas de tipo IgM. También pueden
ser IgG, pero son menos frecuentes, y
generalmente son producidos por individuos
del grupo O. Los anticuerpos anti-A y anti-B en
conjunto los producen individuos
pertenecientes al fenotipo O.
Grupo A Grupo B
loci muy próximos. Los cinco alelos más
comunes que pueden ocupar dichos loci se
designan con los símbolos D, d, C, c, E, e. Cada
alelo (con excepción del d) codifica un antígeno
específico, que puede ser detectado en la
membrana del hematíe. La presencia o
ausencia del antígeno D es la que determina si
un individuo es Rh positivo o negativo.
2. Weiner utiliza la letra R (D-positivo) o r (D-
negativo), con el estado de los antígenos C/c y
E/e indicado por un subíndice a R o un
superíndice a r.

Anticuerpos Contra Ags B Contra Ags A

Antígeno Ag A Ag B

Grupo AB Grupo 0

Anticuerpos No hay Acs Contra Ags

contra Ags AyB
AyB
Antígeno Ag A y B Sin Ags A y B
 Se ha demostrado que el antígeno RhD
es el más inmunogénico de todos los antígenos
de glóbulos rojos. Los aloanticuerpos que
reconocen los antígenos Rh son usualmente
IgG. Se determina el grupo RhD mediante una
IgM aglutinante anti-D o con IgG anti-D
combinada con la prueba de antiglobulina (ver
en pruebas cruzadas).

Una variante D débil con muy baja

expresión de antígeno D, solo detectable por
adsorción y elución, es el fenotipo Del, que se
encuentra con mayor frecuencia en los
asiáticos.
Las variantes del tipo D son negativas
por serología y generalmente solo se reconocen
después de que la donación de sangre D-
negativo haya inmunizado una transfusión D-
negativa. Donantes de sangre que expresan
incluso pequeñas cantidades del antígeno D
debe etiquetarse como D-positivo, para no
inmunizar al receptor D-negativo.
Reacción serológica de aglutinación
In vivo los eritrocitos corren en un flujo laminar
a través del torrente sanguíneo, la superficie de
los eritrocitos tiene cargas eléctricas negativas
debidas a los carboxilos del ácido siálico (NANA)
de la membrana. Los cationes presentes en el
torrente sanguíneo forman una envoltura de
cargas positivas alrededor, convirtiéndolos en
partículas cargadas de electricidad del mismo
signo que experimentan una fuerza de
repulsión entre ellas. Esta fuerza de repulsión
se denomina «potencial Zeta».
La reducción de la fuerza iónica
mediante proteínas u otras sustancias
inorgánicas, reduce las distancias entre las
partículas, permitiendo la formación de
puentes y de una malla del complejo Ag-Ac
visible: la aglutinación. Las determinaciones de
antígenos hemáticos y el estudio de
anticuerpos en sueros se basan principalmente
en la aglutinación de los hematíes.
En el proceso de aglutinación un factor
es el tipo de inmunoglobulina a la que
pertenecen los anticuerpos reaccionantes. Si
los anticuerpos son del tipo IgM la aglutinación
se produce directamente (aglutininas
completas, multivalentes). Por su tamaño
molecular y la distribución de los lugares de
reacción con los antígenos, pueden unirse
fácilmente con varios eritrocitos y producir su
aglutinación.

La sensibilización de hematíes por

anticuerpos de tipo IgG (Incompletas,
bivalentes) no puede producir aglutinación. La
molécula de IgG es demasiado pequeña para
unirse a más de un hematíe por lo que necesita
de la agregación de otros factores para que se
lleve a cabo la reacción. Se dice que la IgM es
unas 750 veces más eficiente que la IgG en las
reacciones de aglutinación.

Para que la reacción de aglutinación se

produzca correctamente, es preciso que la
concentración del aglutinógeno no sea excesiva
con respecto a la de la aglutinina, y viceversa.
En caso contrario se verificará el llamado
fenómeno de zona y se obtendrá un resultado
falsamente negativo.
La reacción serológica de aglutinación
consta de dos fases
1. Fase de sensibilización: unión de anticuerpos
con antígenos de membrana del eritrocito,
temperatura óptima, pH (6.5 y 7.6),
concentración, fuerza iónica y tiempo de
incubación.
2. Fase de aglutinación: cuando ya están lo
bastante cerca para que una molécula de
anticuerpo pueda hacer de puente entre células
adyacentes, esto depende del potencial iónico
del medio, potencial zeta, temperatura;
densidad, agrupación y movilidad del antígeno.
Las partículas se agregan y se puede
visualizar la aglutinación.
Los ensayos de aglutinación pueden
clasificarse en:
1. Ensayo de aglutinación directa o activa
Un antígeno celular o de partículas
insolubles es aglutinado directamente por el
anticuerpo. Es la clásica reacción que involucra
la agregación de células o antígenos en
partículas presente en la superficie de forma
natural.
2. Ensayo de aglutinación indirecta o pasiva
Se refiere a la aglutinación de las células
recubiertas artificialmente de antígeno o a las
partículas inertes que son portadoras pasivas
de antígenos solubles.
Al proceso mediante el cual las
partículas son recubiertas con aglutinógenos
que no les son propios se le denomina
Sensibilización.
3. Ensayo de aglutinación pasiva en reversa
Es la modalidad de la aglutinación, en la
que el anticuerpo está unido a las partículas.
Las reacciones de aglutinación pueden
llevarse a cabo sobre portaobjetos de cristal, en
la superficie de tarjetas visualizadoras, en
placas de microtitulación y en el interior de
tubos de ensayo.
El resultado positivo se observa por la
formación de grumos, mientras que el
resultado negativo produce una mezcla
homogénea de los reactivos.
En general, las reacciones de
aglutinación pueden ser observadas a simple
vista, sin necesidad de aumento ni la ayuda de
microscopio.

Correlación clínica
En ocasiones se detectan pequeñas cantidades
de células fetales en la circulación materna
durante todo el embarazo, en especial en el
tercer trimestre, pero la principal transferencia
transplacentaria ocurre en el momento del
parto. El volumen de la hemorragia suele ser
menor de 5 mL, pero en ocasiones es mayor de
50 mL; hay indicios de que, a mayor cantidad de
células fetales en la circulación, mayor
oportunidad de que se produzcan anticuerpos y
se produzca la enfermedad hemolítica del
recién nacido.
Los factores Rh se determinan
genéticamente. Un bebé puede tener el grupo
sanguíneo y el factor Rh de cualquiera de sus
padres, el gen Rh positivo es dominante.
Es muy raro que el primogénito se
afecte, la incidencia es un poco menor de 1% de
todas las madres Rh negativas sin antecedente
de transfusión o aborto. La razón de ello es que
sólo de manera ocasional cantidades
significativas de eritrocitos fetales cruzan la
placenta lo suficientemente temprano en el
embarazo para estimular la producción de anti-
D antes de que el niño nazca. Si los eritrocitos
fetales en la madre después del parto inducen
una inmunización primaria, es posible
encontrar anticuerpo en el transcurso de los
seis meses siguientes. Sin embargo, en casi la
mitad de los casos las concentraciones de
anticuerpo no se elevan lo suficiente para que
se detecte anti-D en ese momento. Si después
ocurre un embarazo con feto Rh positivo, sólo
es necesario que unos pocos eritrocitos fetales
crucen la placenta en una fase temprana de la
gestación para constituir un estímulo
secundario que induzca la producción de anti-
D. Por lo regular ésta puede detectarse hacia la
semana 28, pero en ocasiones no aparece sino
hasta las últimas semanas del embarazo.
Existe gran variación en la gravedad del
trastorno en un niño afectado. En un extremo
de la escala se encuentran lactantes no
anémicos al nacer y que nunca presentan
ictericia. Sin embargo, su concentración de Hb
puede disminuir de forma anormalmente
rápida después de nacer y pueden encontrarse
valores de apenas 6 g/dL hasta 30 días después.
Por lo tanto, todos los neonatos con
anticuerpos maternos en sus eritrocitos
(prueba de antiglobulina directa positiva)
deben someterse a seguimiento por un breve
periodo después de nacer.
Los lactantes con afectación moderada
pueden tener o no anemia al nacer, pero el
ritmo de destrucción de eritrocitos es tal que se
produce ictericia en pocas horas. No se observa
ictericia al nacer, dado que antes de esto la
bilirrubina se excreta por transferencia
placentaria. En las 48 a 72 horas que siguen al
nacimiento, la bilirrubina plasmática puede
aumentar de 350 a 700 μmol/L. El índice de
aumento de la bilirrubina plasmática se rige en
parte por la rapidez de destrucción eritrocítica
y en parte por el grado de madurez del
mecanismo de excreción de bilirrubina. Como
resultado del escaso desarrollo de dicho
mecanismo en muchos lactantes es muy común
que un niño con Hb del cordón umbilical dentro
del intervalo normal (límite inferior, 13.5 g/dL)
sufra ictericia grave.
El peligro relacionado con una elevada
concentración de bilirrubina es el desarrollo de
encefalitis hiperbilirrubinémica con posterior
daño de los ganglios basales del encéfalo, con
un cuadro clínico caracterizado por
espasticidad y muerte a causa de insuficiencia
respiratoria, llevando al hallazgo anatomo-
patológico de Kernicterus.
Procedimiento
1. Lavarse las manos (con agua y jabón).
2. Desinfectar con alcohol el pulpejo del dedo
anular o índice y puncionar con la lanceta
estéril. Con presión suave hacer salir tres gotas
gruesas de sangre y colocarlas por separado en
la laminilla.
3. Añadir una gota de antisuero anti-A (líquido
azul), en la primer gota de sangre, una gota de
antisuero anti-B (líquido amarillo), en la
segunda gota de sangre y una gota de antisuero
anti-D (líquido transparente), en la tercera gota
de sangre.
4. Revolver cada una de las gotas y antisuero
con un palillo diferente.
5. Utilizando un palillo diferente para cada
reacción, mezclar las gotas de sangre con las de
antisuero durante 20 segundos.
6. Evitar la contaminación entre reacciones.
7. Examinar las mezclas, si se forman gránulos,
se ha llevado a cabo la reacción de aglutinación.
Cuestionario
1. Coloca un “X” o “✓” en la siguiente tabla con
lo aprendido sobre compatibilidad
A+ B- AB+ O-
Anti-A
Anti-B
Anti-D
2. De acuerdo con los antígenos encontrados en
los eritrocitos, señalar el grupo sanguíneo y el
anticuerpo correspondiente
Grupo Anticuerpo en
Antígenos
sanguíneo suero
A+
 A-
B+
B-
AB+
AB-
O+
O-
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REPORTE
REPORTE
Práctica 7
Pruebas cruzadas
Objetivos
● Reconocer los peligros de la transfusión
sanguínea (incompatibilidad, reacciones
alérgicas, infección bacteriana,
intoxicación por citrato y transmisión de
enfermedades) y la transfusión
sanguínea masiva.
● Conocer la forma de investigar a un
paciente con sospecha de haber recibido
una transfusión incompatible.
● Observar una reacción macroscópica de
aglutinación.
Introducción
La transfusión sanguínea es una medida
terapéutica en pacientes que necesitan
recuperar su estabilidad hemodinámica. Para su
realización es indispensable contar con una
historia clínica completa, así como realizar las
pruebas de seguridad necesarias; la Norma
Oficial Mexicana NOM-253-SSA1-2012 Para la
disposición de sangre humana y sus
componentes con fines terapéuticos estipula
todo el proceso que se lleva a cabo, desde la
selección de donantes, las pruebas serológicas
que deben ser realizadas, la forma de
almacenamiento de los componentes
obtenidos, y su disposición para uso terapéutico
o su desecho según corresponda con el fin de
garantizar la seguridad del donante, del paciente
que requiere la transfusión (receptor), y todo
aquel que tenga contacto con los componentes
obtenidos. Al realizar la historia clínica del
receptor se deben documentar episodios
previos de transfusiones recibidas, así como
cualquier complicación durante estas
intervenciones o posteriores a las mismas. El
donante por su parte es sometido a una amplia
anamnesis, así como a pruebas serológicas
previas a la obtención de los componentes
sanguíneos.
Las pruebas serológicas que se realizan a
la muestra obtenida son de dos tipos:
infecciosas y de hemocompatibilidad.
La NOM-253-SSA1-2012 indica que cinco
patógenos se buscan de rutina en todo México:
a) Treponema pallidum
b) Virus B de la hepatitis
c) Virus C de la hepatitis
d) VIH (Virus de Inmunodeficiencia
Humana) 1 y 2
e) Trypanosoma cruzi
Adicionalmente se agregan cinco que se
buscan solo en zonas endémicas los cuales son:
a) Brucella
b) Plasmodium
c) Citomegalovirus
d) Toxoplasma
e) Retrovirus HTLV tipos I y II
En segundo lugar, se realizan las pruebas
de hemocompatibilidad las cuales solo se
practican una vez que se ha designado el
receptor del componente sanguíneo. Estas
pruebas consisten en:
a) Hemoclasificación de los sistemas AB0
y Rh (antígeno D)
b) Investigación de anticuerpos
irregulares de importancia clínica
c) Pruebas cruzadas
 Los anticuerpos irregulares de apropiado o bien la lisis de estos cuando el
importancia clínica hacen referencia a aquellos complemento se preserva en el suero. Incluso si
que no se producen de manera natural como se los resultados de las pruebas cruzadas son
expuso en la práctica 6 con el grupo AB0 compatibles, éstas tienen sus limitaciones, como
(preferentemente de tipo IgM), en cambio, el hecho de que no garantizan la sobrevida
estos llamados artificiales o inmunes, son normal de los eritrocitos transfundidos ni
producidos tras el contacto con el antígeno y tampoco evitan la inmunización del receptor; sin
preferentemente son de tipo IgG. En nuestra olvidar que siempre están sujetas a errores
población los más comunes son los que humanos. Es posible considerar que la única
involucran a los sistemas MNS, Kidd, Duffy, Kell, transfusión exenta de la posibilidad de provocar
Lewis y Diego, además de que también pueden inmunización es la autotransfusión o bien la
detectar membranas de plaquetas y hasta transfusión que se efectúa entre gemelos
leucocitos. idénticos, aún con riesgo de producir
autoinmunidad. Logaritmo para la transfusión
A su vez, estos sanguínea:
pueden clasificarse
como anticuerpos fríos
o calientes, según la
temperatura a la que
actúan de manera
óptima, los primeros
actúan en temperaturas
de entre 4 y 22° C, y los
segundos alrededor de
los 37° C. Como se
mencionó al ser de tipo
IgG, son incapaces de aglutinar eritrocitos, por el
tamaño de los mismos, sin es posible identificar
esta reacción al aplicar un mejor medio, como el
reactivo AHG (AntiHumano de Globulina)
(también conocido como reactivo de Coombs).
Si se añade reactivo AHG, este segundo
anticuerpo se une al anticuerpo presente en los
eritrocitos tal como se
Figura 7.1 Esquema muestra en la figura 7.1.
de una aglutinación
con uso de AHG. Por último, en
cuanto a las pruebas
cruzadas, se realizan para evidenciar la
Fundamento
presencia de anticuerpos artificiales o
Al procesar las pruebas cruzadas se pretende
autoanticuerpos, la técnica básica para detectar
experimentar in vitro las condiciones de lo que
tales anticuerpos se basa en su capacidad de
pudiera ocurrir in vivo, cuando se mezclan el
aglutinar eritrocitos que portan el antígeno
suero y los eritrocitos, tanto del receptor como
del donador; asimismo, según sea la fase
durante el procedimiento de las pruebas
cruzadas en que se observe incompatibilidad
(aglutinación o hemólisis), se puede conocer el
tipo de anticuerpo del que se trata. Las pruebas
cruzadas sólo reconocen, pero no identifican, la
especificidad de los anticuerpos.
La prueba cruzada principal o mayor
consiste en ensayar el suero del paciente con
células donantes para determinar si el paciente
tiene un anticuerpo que puede causar una
reacción de transfusión hemolítica o una menor
supervivencia celular de las células donantes.
La prueba cruzada menor consiste en
ensayar las células de pacientes con suero del
donante para determinar si hay un anticuerpo
en el suero del donante dirigido contra un
antígeno en las células del paciente.
El resultado que se puede obtener en las
pruebas cruzadas es de compatibilidad o
incompatibilidad.
La mayor parte de éstas es compatible en
la práctica diaria y es el resultado que se obtiene
cuando la tipificación del grupo ABO y Rho se
realiza correctamente y además se ha
seleccionado la unidad de sangre o componente
apropiados.
En el pequeño número de pruebas
cruzadas con resultados incompatibles,
especialmente cuando se trata de la prueba
cruzada mayor, se debe resolver el problema
antes de transfundir las unidades seleccionadas.
La urgencia para transfundir determina
la conducta a seguir. Cuando es urgente, como
en el choque hemorrágico, no hay tiempo para
estudiar la causa de la incompatibilidad de las
pruebas cruzadas.
Una vez comprobado que las unidades
de sangre son negativas para enfermedades
infecciosas transmitidas por la sangre, se
seleccionan la o las unidades de sangre
compatibles para los receptores.
De preferencia, el paquete globular a
transfundir será del mismo hemotipo (AB0 y Rh)
del paciente siempre que esté disponible; en
caso de que no se posea el mismo hemotipo se
usará una compatible, por ejemplo: el paciente
de hemotipo “A” o “B” ya sea + o - puede recibir
paquete globular de grupo O- (denominado
‘donador universal’). Por su parte, el receptor de
grupo AB+ puede recibir paquete globular de
cualquier grupo, se conoce como ‘receptor
universal’.
Correlación clínica
El riesgo de no llevar a cabo las pruebas
pretransfusionales o que se den falsos
negativos, es que el paciente sufra de una
reacción adversa postransfusional. Para su
estudio se pueden clasificar en agudas o
retardadas dependiendo si se presentan antes o
después de las 24 horas a la transfusión.
Independientemente si las reacciones
son de aparición aguda o tardía, la fisiopatología
implicada puede ser de etiología inmune o no
inmune.
Las reacciones agudas de fondo
inmunológico más comunes incluyen: la
hemólisis eritrocitaria aguda, fiebre, urticaria,
anafilaxia o TRALI (lesión pulmonar aguda
relacionada a transfusión, por sus siglas en
inglés). Aquellas de fondo no inmunológico por
su parte pueden ser: sepsis, hemólisis no
inmunológica (mecánica o térmica), embolismo
aéreo e incluso TACO (sobrecarga circulatoria
asociada a transfusión por sus siglas en inglés).
En cuanto a las reacciones tardías de
fondo inmunológico se encuentran:
aloinmunización (ya sea a eritrocitos, plaquetas
o leucocitos), reacción de injerto contra
huésped asociado a transfusión y púrpura
postransfusional, mientras que las que no están
mediadas por el sistema inmune incluyen:
sobrecarga de hierro (hemosiderosis) e
infecciones.
El manejo para todo paciente que
presente reacciones postransfusionales agudas
consiste en la suspensión de la transfusión e
instalación de solución fisiológica para hemo-
diluir los componentes, en conjunto se puede
hacer uso de diuréticos y un análisis exhaustivo
del componente sanguíneo administrado con el
fin de hallar la causa de la reacción e instaurar
un tratamiento específico.
Procedimiento
1. La muestra de sangre se debe colectar y
mantener a 37ºC.
2. Marcar tubos de ensayo, indicar cuál será el
donador y cuál el receptor.
3. Se centrifuga a 1500 r.p.m. durante cinco
minutos, para separar el coágulo; los sueros
obtenidos se pasan a tubos limpios y se marcan
como receptor y donador respectivamente.
4. Los eritrocitos deben lavarse con solución
salina a 37ºC varias veces para eliminar el
plasma.
5. Marcar un tubo de ensayo con “PM” para la
prueba mayor y “pm” para la prueba menor.
6. Prueba mayor: colocar dos gotas del suero del
receptor y una gota de glóbulos rojos del
donador.
7. Prueba menor: agregar una gota de glóbulos
rojos de receptor, más dos gotas del suero del
donador.
8. Se mezclan y centrifugan ambos tubos a 300
r.p.m por 15 segundos.
9. Leer. Si hay aglutinación, no se realiza la
transfusión.

Materiales
Cuestionario
- Solución Salina.
1. Completa las siguientes tablas:
- Dos tubos rojos para recolectar sangre.
PM DONADOR
- Cuatro tubos de ensayo limpios y secos. AB+ AB- B+ B- A+ A- O+ O-
R
- Cuatro pipetas de 1ml. E O-
O+
- Centrífuga. C A-
- Gradilla. E A+
- Suero del donador (obtenido de 5ml de P B-
T B+
sangre coagulada). AB-
O
- Glóbulos rojos del donador (obtenido de R
AB+

2ml de sangre sin coagular).

- Suero del receptor (obtenido de 5ml de
sangre coagulada).
- Glóbulos rojos del receptor (obtenido de
2ml de sangre sin coagular).
 Pm RECEPTOR 2995.1998.381098440860.x. Open access.
AB+ AB- B+ B- A+ A- O+ O- [Citado el 09 de mayo de 2020].
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Free access. [Citado el 09 de mayo de 2020].
REPORTE
REPORTE
 Práctica 8
Crioglobulinas
Objetivos
● Definir los tipos de crioglobulinas que
existen. término CGM (Crioglobulinemias Mixtas),
constituyen entre el 75 y el 95% de todas ellas,
● Conocer la utilidad de las crioglobulinas.
y en su mayoría están relacionadas con una
● Conocer el diagnóstico y tratamiento de la infección crónica por el virus de la hepatitis C.
crioglobulinemia. La más frecuente es la tipo II (62%), seguida de
la tipo III (32%) y de la tipo I (6%).
Introducción
Las crioglobulinas son inmunoglobulinas que Las crioglobulinemias se pueden
precipitan de manera reversible a temperaturas clasificar según la presencia o no de
inferiores a 37° C y cuya presencia en la sangre enfermedad asociada, en esenciales o
(crioglobulinemia) se asocia a fenómenos de secundarias.
hiperviscosidad sanguínea, vasculitis y a la
formación de inmunocomplejos. En 1974, Con frecuencia se observan sujetos
Brouet et al establecieron una clasificación de asintomáticos portadores de crioglobulinas, o lo
las crioglobulinemias que aún sigue vigente en que es más raro, cuadros característicos de
función del tipo de inmunoglobulina que CGM sin lograr aislar las crioglobulinas en el
constituye el crioprecipitado: suero. En cualquiera de estos casos se debe
hacer un estudio y seguimiento exhaustivos,
- Tipo I (IgG o IgM monoclonal sin actividad puesto que el cuadro clínico-analítico completo
factor reumatoide). puede desarrollarse tras varios años de
- Tipo II (IgG policlonal e IgM monoclonal con evolución.
actividad factor reumatoide).
Tratamiento de la Crioglobulinemia
- Tipo III (IgG e IgM policlonales con actividad Etiológico Sintomático
factor reumatoide). VHC + VHC -
Afectación
Articular
Afectación
Cutánea
Afectación
Renal
Afectación
Neurológica
Tratamiento Púrpura Úlceras Isquémicas AINE
de AINE Corticoides Carbamazepina
Interferón
Enfermedad Corticoides Inmunosupresores Corticoides
+
Autoinmune o Plasmaféresis Inmunosupreso
Ribavirina
Hematológica res
de base Plasmaféresis

La CGM es más frecuente en las mujeres,

entre la quinta y sexta década de la vida. Su
incidencia estimada es de 1 caso por 100.000
individuos/año y tiene una mayor incidencia en
el sureste europeo. Se detectan crioglobulinas
Las dos últimas se engloban bajo el
en el 40%-50% de los pacientes con infección
por el VHC (Virus de la Hepatitis C), pero sólo un
2%-5% presentan manifestaciones clínicas. La
CGM por VHC es más frecuente en los pacientes
de mayor edad, en casos de infección
prolongada y en los que sufren cirrosis. Entre el
60% y el 90% de los pacientes
concrioglobulinemia están infectados por el
VHC. La CGM es la manifestación extrahepática
más frecuente de la hepatitis C.
En cada tipo de crioglobulinemia existe
un mecanismo patogénico predominante. En las
CG tipo I se suelen asociar a trastornos
linfoproliferativos, las manifestaciones clínicas
son secundarias en su mayoría a fenómenos de
hiperviscosidad sanguínea y a la agregación y
precipitación de inmunoglobulinas que
ocasionan fenómenos vaso-oclusivos; por otra
parte, en menor medida son producidas por una
leve vasculitis inflamatoria por depósito de
inmunocomplejos. Así, las manifestaciones más
frecuentes son: el fenómeno de Raynaud,
úlceras isquémicas y gangrena distal, urticaria
inducida por el frío, lívedo reticularis, púrpura,
hemorragias retinianas, trastornos visuales,
cefalea y encefalopatía por afectación de la
microcirculación del sistema nervioso central,
etc.
Las CGM se producen en procesos
inflamatorios crónicos, como conectivopatías
(lupus eritematoso sistémico, síndrome de
Sjögren, etc.), infecciones virales (VHC), en
pocos casos, en trastornos linfoproliferativos.
Estos tipos tienen en común la
hiperproliferación y/o hiperactivación de
células B que parecen predisponer a una
expansión clonal selectiva de células B
productoras de crioglobulinas. Se producen
depósitos subendoteliales de inmunocomplejos
en la pared de los vasos de pequeño y mediano
tamaño, lo que inicia la respuesta inflamatoria
que origina el proceso vasculítico en muchos
órganos. Existen síntomas inespecíficos, como
son artralgias, fatiga y mialgia, así como
vasculitis cutánea y neuropatía periférica. La
tríada de púrpura, debilidad y artralgias es
característica y recibe el nombre de tríada de
Meltzer.
Los niveles de crioglobulinas son
mayores en las crioglobulinemias tipo I (el 90%
de los casos tienen niveles >1 mg/ml y el 60% de
los casos >5 mg/ml). En las CG tipo II, el 40% de
los casos tienen niveles de crioglobulinas entre
1 y 5 mg/ml y otro 40% > 5 mg/ml. En las CG tipo
III el 80% de los pacientes tienen niveles <1
mg/ml y son casi inexistentes los casos con
niveles >5 mg/ml.
Criterios diagnósticos o de clasificación:
- La presencia de un criocrito persistentemente
elevado, mayor de un 1% durante tres a seis
meses.
- Signos clínicos de vasculitis crioglobulinémica
o trombosis, y/o la constatación de
crioglobulinas en muestras obtenidas por
biopsia.
Se puede definir una respuesta
completa al tratamiento como la desaparición
de toda la sintomatología vasculítica, la
normalización de la hemoglobina, de la función
renal y hepática, negativización de la viremia y
la disminución del criocrito a menos del 10% de
los valores iniciales. El tratamiento se muestra
en la imagen de la parte de arriba.
Fundamento
La determinación de crioglobulinas es obligada
en pacientes con enfermedades autoinmunes
sistémicas, infecciosas o hematológicas que
presentan determinadas manifestaciones
clínicas, especialmente aquellas sugestivas de
vasculitis de pequeño y mediano vaso. Los
métodos usados para la cuantificación de las
crioglobulinas no son uniformes, aunque
algunos aspectos de su determinación están
estandarizados. Una crioglobulina es una
globulina que precipita cuando el suero se
incuba a una temperatura inferior a 37° C, por
lo que las muestras de sangre deben obtenerse
con una jeringuilla precalentada a 37° C sin
anticoagulantes para procesar suero y no
plasma a fin de evitar la precipitación de otras
crioproteínas como el criofibrinógeno. El
transporte de la muestra, su coagulación
durante dos horas y la separación del suero
mediante centrifugación deben realizarse
también a 37° C. A continuación, se incuba entre
0° y 4° C durante un período variable de cuatro
a siete días. El suero que contiene crioglobulinas
se vuelve opalescente y forma un precipitado
visible cuando se incuba a 0°-4° C. La cantidad
de proteína insoluble en frío puede
determinarse por medio del criocrito
(porcentaje del volumen del precipitado con
respecto al de la muestra del suero originario),
se puede cuantificar en g/dl. La caracterización
posterior del tipo de inmunoglobulina (IgM, IgG,
IgA) que se encuentra en el precipitado se puede
realizar mediante inmunoelectroforesis,
inmunofijación, immunoblotting o 30(3): 65-68.
electroforesis bidimensional.
Material
- Tubo de hematocrito wintrobe.
- Pipetas Pasteur tallo largo.
- Baño maría 37°C.
Procedimiento
- Se toman 5 ml de sangre con jeringa
desechable calentada a 37°C.
- Se espera a la formación del coágulo dentro
del tubo, se recolecta con una pipeta el suero
para colocarlo en el tubo Wintrobe.
- Se mantiene por tres días a 4-5°C.
- Se centrifuga el tubo a 3000 rpm durante 30
min y a 4°C, se lee el porcentaje de sedimento.
Los Valores normales son hasta 3%.
Cuestionario
1. ¿Qué alteraciones en estudios de laboratorio
existen en la crioglobulinemia tipo I?
2. Procesos en los que hay que establecer el
diagnóstico diferencial de crioglobulinemia.
3. ¿Qué alteraciones sistémicas causa la
crioglobulinemia?
4. Menciona cuales con las complicaciones de la
crioglobulinemia.
Referencias
1. Winfield JB. Cryoglobulinemia. Hum. Pathol
1983;14:350-354.
2. Brouet JC, Clauvel JP, Danon F, Klein M,
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perspectives with immunosuppressive drugs.
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7. Trejo Gutiérrez O, Ramos Casals M, Ruiz
Aragón J, Rius Camarasa J, García-Carrasco M, et
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Integr 2000;36:380-6.
REPORTE
REPORTE
 Práctica 9
Factor Reumatoide
Objetivos
● Entender los principios básicos de los de especificidades. Un tipo de estos AutoAc
autoanticuerpos y la autoinmunidad (autoanticuerpos) son el factor reumatoide,
● Determinar el factor reumatoide a anticuerpos dirigidos contra epítopos ubicados
en las cadenas pesadas de la IgG,
partir de una muestra de suero.
específicamente en la región que une los
● Reconocer la utilidad del factor dominios CH2 y CH3 de la Fc. Algunos de estos
reumatoide para el diagnóstico de artritis epítopos representan estructuras conservadas
reumatoide. entre las inmunoglobulinas de distintas
especies. La mayoría de los ac del factor
reumatoide son del isotipo IgM y reconocen
Introducción epítopos de las IgG. Sin embargo, existe factor
reumatoide de todos los isotipos. La subclase
El estado de homeostasis total del organismo se IgG3 parece ser uno de sus blancos más
encuentra también regulado por la forma en comunes, aunque dependiendo de su
que el sistema inmunitario es capaz de especificidad fina, algunos anticuerpos de
reconocer a nuestros propios antígenos sin factor reumatoide reconocen todas las
generar una respuesta contra ellos, a este subclases. Interesantemente, algunos de los
proceso se le denomina tolerancia epítopos reconocidos aparecen o se exponen
inmunológica y se divide en dos mecanismos. cuando los anticuerpos IgG forman un complejo
La tolerancia central, llevada a cabo en con su antígeno correspondiente.
órganos linfoides primarios, y la tolerancia
periférica, llevada a cabo en los órganos
linfoides secundarios y el sistema circulatorio.
Los mecanismos regulatorios de tolerancia
hacia los componentes propios están sujetos a
fallas, dando lugar a patologías complejas
colectivamente denominadas enfermedades
autoinmunes. En estas, los elementos
humorales y celulares del sistema inmune van a
El término factor reumatoide se originó
causar inflamación y daños en los tejidos y
del hallazgo inicial de estos autoanticuerpos en
órganos, utilizando los mismos mecanismos que
el suero de pacientes con artritis reumatoide.
normalmente nos defienden de los antígenos
exógenos patógenos.
Correlación clínica
Entre las respuestas humorales contra
Artritis reumatoide
componentes propios, encontramos una
Esta es una enfermedad autoinmune que se
variedad de autoanticuerpos, de prácticamente
caracteriza por la inflamación crónica de las
cualquier isotipo, que poseen una amplia gama
articulaciones de tipo diartrodiales, es decir,
con un amplio rango de movimiento gracias a su Anormalidad ara PCR o VSG 1

capsula sinovial, que conlleva a dolor, Ciertamente la formación de complejos

tumefacción, y erosión de las mismas, con entre la IgG y el factor reumatoide puede activar
pérdida importante de su movilidad y al sistema de complemento y promover la
funcionalidad. Aunque un alto porcentaje (75- inflamación.
80%) de los pacientes con artritis reumatoide
presentan altos niveles de factor reumatoide en Sin embargo, la administración de factor
su plasma, estos autoanticuerpos también reumatoide por si solo, en modelos animales,
pueden ser hallados en otras condiciones no reproduce por completo el cuadro de artritis.
(autoinmunes o no). La presencia del factor Esto deja abierta la posibilidad de que la
reumatoide es uno de los criterios del ACR producción de factor reumatoide sea un
(American College of Rheumatology) para el epifenómeno asociado al daño autoinmune y
diagnóstico de artritis. no necesariamente la causa primaria de la
Criterios ACR/EULAR 2010 inflamación articular. Independientemente de
Lista de enfermedades en las que se detecta el FR y su frecuencia ello, las elevaciones marcadas en los niveles de
factor reumatoide tienden a correlacionar con
Enfermedades Frecuencia periodos de incremento y activación de la
Reumatológicas artritis, o bien, las manifestaciones
● Artritis Reumatoide 50-90%
● Síndrome Sjögren 75-95% extraarticulares que suelen presentarse en la
● Lupus Eritematoso Sistémico 15-35% enfermedad, por lo cual su determinación
● Esclerosis Sistémica 20-30%
● Polimiositis/ Dermatomiositis 5-10% posee utilidad en el seguimiento de los
● Enfermedad mixta del tejido conectivo 50-60% pacientes. Por otro lado, la sensibilidad y
Enfermedades no reumatológicas asociadas al FR especificidad diagnósticas de la determinación
● Endocarditis bacteriana de factor reumatoide son bajas y deben ser
● Hepatitis infecciosa 25-50%
● Tuberculosis 15-40% asociadas estrictamente a la clínica.
● Sífilis 8%
● Lepra 13%
● Infecciones virales 20-90% Los anticuerpos del factor reumatoide
● Fibrosis pulmonar 5-58% forman complejos inmunes de tamaño variable,
● Silicosis 10-50%
● Cirrosis biliar primaria 30-50% detectables en el plasma, los tejidos y las
● Neoplasias 45-70% articulaciones (por ejemplo, en el líquido
2-25%
sinovial). Estos complejos son normalmente
eliminados de la circulación por el sistema
mononuclear fagocítico. Aunque los complejos
Involucro articular (0-5) son solubles a la temperatura corporal, en
1 articulación mediana o grande 0
2 a 10 articulaciones medianas o grandes 1
algunos casos pueden precipitar por el frío
1 a 3 articulaciones pequeñas 2 (crioglobulinas). El hallazgo de crioglobulinas
4 a 10 articulaciones pequeñas 3 plasmáticas es más frecuente en pacientes con
Más de 10 articulaciones (al menos una pequeña) 5
Serología (0-3) predisposición a sufrir lesiones secundarias en
Negatividad para anti CCP y FR 0 la artritis, como vasculitis y glomerulonefritis.
Al menos 1 positivo a título bajo 2
Al menos 1 positivo a título alto 3
Duración de la SINOVITIS (0-1) Al ser una enfermedad de tipo
Menos de 6 semanas 0
Más de 6 semanas 1
autoinmune el tratamiento está orientado a
Reactantes de fase aguda (0-1) regular está respuesta inmunitaria, y, en
Normalidad para PCR o VSG 0 segundo término, a tratar de disminuir el daño
articular causado por la inflamación crónica de - Solución salina (en caso de que se quiera diluir
la enfermedad. el suero).

1 2 3
Procedimiento
Control Negativo 1 gota - -
Control Positivo - 1 gota - 1. Obtener una muestra de sangre.
Muestra - - 1 gota 2. Centrifugar.
Reactivo látex-FR 1 gota 1 gota 1 gota
3. Extraer el suero.
4. Colocar una gota (50 μl) de cada muestra
sobre una lámina de fondo limpia. Correr sueros
control (+) y (-) en cada lote de muestras.

5. Homogenizar la suspensión del látex-IgG y

Fundamento
Las técnicas de laboratorio más utilizadas para
la detección de factores reumatoides son las
aglutinaciones, la nefelometría y las
determinaciones inmunoenzimáticas. Las
primeras tienden a favorecer la detección de
factor reumatoide de tipo IgM anti-IgG.
Las partículas son recubiertas por una
fracción proteica de globulinas humanas
(fracción II de Cohn del plasma humano), rica en
IgG. Esta aglutinación pasiva con látex como
medio de soporte, evita los problemas de
especificidad ocasionados por la utilización de
eritrocitos, además, proporciona una mayor
sensibilidad física, y, por tanto, mayores títulos.
Materiales
- Suspensión del látex-IgG.
- Control positivo: suero humano positivo.
- Control negativo: suero humano negativo.
- Pipetas y micropipetas.
- Tubos de ensayo.
- Cronómetro.
- Lámpara.
agregar una gota a cada muestra. Evitar el
contacto del gotero con las muestras.
6. Mezclar con la ayuda de un aplicador, rotar la
lámina por dos minutos y leer.
7. Es recomendable establecer valores de
referencia en cada laboratorio, utilizando
sueros normales. A la vez, es importante
considerar la edad del paciente, ya que en
edades avanzadas es posible encontrar
individuos sanos con títulos moderados de
factor reumatoide, en ausencia de patología.
Hasta un 20-25% de pacientes con artritis
reumatoide pueden tener una prueba de factor
reumatoide negativa.
Cuestionario
1. ¿Qué es tolerancia y autoinmunidad?
2. ¿En qué patologías podemos encontrar factor
reumatoide positivo?
3. ¿Qué anticuerpos en encuentran positivos en
la artritis reumatoide?
4. ¿Qué se utiliza como tratamiento de artritis
reumatoide?
5. ¿El factor reumatoide es patognomónico de
la artritis reumatoide?
Referencias
1. Lomonte, B. (2009) Técnicas de Laboratorio
en Inmunología Clínica, 122 pp. Universidad de
Costa Rica.
2. Westergaard MW, Draborg AH, Troelsen L,
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virus antibodies in rheumatoid arthritis:
association with rheumatoid factors and
citrulline-dependent antibodies. Biomed Res Int.
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3. McInnes IB, Schett G. The pathogenesis of
rheumatoid arthritis. N Engl J Med. 2011 Dec
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4. Cusick MF, Libbey JE, Fujinami RS. Molecular
mimicry as a mechanism of autoimmune
disease. Clin Rev Allergy Immunol. 2012
Feb;42(1):102-11. doi:10.1007/s12016-011-
8293-
5. Nisihara R, Kubis MM, Rodrigues PC, Skare T,
Mocelin V, Utiyama S. als. J Am Geriatr Soc.
2013 Nov;61
6. Diagnóstico y tratamiento de artritis
reumatoide del adulto. México: Secretaría de
Salud, 2010.
REPORTE
REPORTE
 Práctica 10
Prueba cutánea de hipersensibilidad retardada
Objetivos
● Definir el concepto de hipersensibilidad
y conocer su clasificación.
● Evaluar la integridad de la respuesta
inmune celular mediada por las
citocinas.
● Que el alumno comprenda los aspectos
teóricos de la práctica.
Introducción
Las citocinas indirectamente evaluadas son: IL-2,
IL-12, TNFa/b e IFN-γ. Las células indirectamente
evaluadas son: células dendríticas, linfocitos
TCD4+ y linfocitos TCD8+. Figura 1.
En la práctica clínica ésta prueba se
emplea para evaluar la posibilidad de memoria
hacía algunos microorganismos relacionados con
la respuesta inmune celular, por ejemplo,
Mycobacterium tuberculosis (prueba PPD,
tuberculina o de Mantoux), Mycobacterium
leprae (prueba de lepromina o Mitsuda),
Histoplasma capsulatum (prueba de
Histoplasmina), Aspergillus fumigatus o Candida
albicans.
Es la memoria inmunológica que se
pondrá de manifiesto con la prueba de la
tuberculina y permitirá diferenciar los individuos
infectados (tuberculina positivos) de los no
infectados (tuberculina negativos).
Figura 1. Prueba de hipersensibilidad tipo IVA.
Se aplica por vía intradérmica el antígeno para
el cual se desea conocer una respuesta
inmune. La célula dendrítica aledaña al sitio
de la aplicación procesará la información
antigénica y la transportará al ganglio linfático
más cercano. En el ganglio linfático, la célula
dendrítica presenta la información a los
linfocitos TCD4+. Si existe reconocimiento de
la información, entonces a las 48 horas se
formará una roncha y edema en el sitio de la
aplicación del antígeno. Esta prueba valora in
vivo la integración de la respuesta inmune
celular infiriendo la actividad de las citocinas
(IL-2, IL-12, INF-g y TNF-a) y células (células
dendríticas, macrófagos, linfocitos TCD4+ y
linfocitos TCD8+) involucradas.
Correlación clínica
Durante toda su historia, la especie humana
ha sido periódicamente atacada por
diferentes microorganismos que han puesto
en peligro su propia existencia. Uno de ellos
actualmente sigue siendo una causa de
morbimortalidad a nivel mundial, la
tuberculosis, enfermedad infecciosa causada
por los bacilos del género Mycobacterium,
incluidos en el denominado complejo
Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis,
M. bovis y M. africanum) y por otras especies
de micobacterias oportunistas
potencialmente patógenas para el hombre.
El contagio se produce habitualmente
por vía aerógena a partir de pacientes con
infección activa. Al toser se generan aerosoles
de pequeñas partículas líquidas (gotas de
Flügge), en cuyo interior se encierran uno o
dos bacilos. Las partículas de tamaño superior
a 10 µm quedan retenidas en la mucosa de las
vías respiratorias superiores y son eliminadas
por el sistema mucociliar, pero las de menor
tamaño (entre 1 y 5 µm) tienen la capacidad
de llegar hasta los alvéolos y desencadenan la
primoinfección.
Un pequeño porcentaje de las
personas infectadas (aproximadamente, el
10%) llegará a desarrollar la enfermedad; la
mitad de ellos tempranamente, a los pocos
meses de la infección, mientras que el otro 5%
necesitará de un largo intervalo (a veces, de
varias décadas) para que se produzca la
reactivación endógena de lesiones
aparentemente curadas que albergan en su
interior micobacterias en condiciones
metabólicas adversas, pero potencialmente
viables.
La aspiración de M. tuberculosis hasta
los alvéolos desencadena una serie de
respuestas tisulares e inmunológicas
conocidas como primoinfección tuberculosa.
Los linfocitos activadores de los macrófagos,
las células epitelioides y las gigantes se sitúan
concéntricamente para rodear e intentar
destruir a los bacilos intrusos dando lugar al
característico granuloma tuberculoso que al
cabo de un tiempo se reblandece en su centro
y deja un núcleo de necrosis caseosa. En
muchos casos, el granuloma controla
totalmente la infección y una vez cumplido su
cometido se reabsorbe dejando una pequeña
cicatriz fibrosa que, para mayor seguridad,
acostumbra a calcificarse. En estas
circunstancias es posible que la
primoinfección haya sido asintomática y que
incluso no deje secuelas detectables en la
radiografía de tórax; lo que sí queda. Así pues,
según el balance inicial entre el sistema
inmunitario del huésped y las micobacterias
tuberculosas, se distinguen tres situaciones
diferentes:
La tuberculosis secundaria o
tuberculosis del adulto, es la forma clínico-
radiográfica más frecuente, aunque en
general el individuo no tiene constancia de la
primoinfección previa por haber sido ésta
asintomática o poco aparente.
A menudo, la primera sospecha de
tuberculosis se basa en hallazgos radiológicos.
Es más común la lesión apical; en una fase
temprana de la reinfección es característica
una densidad moteada. El diagnóstico
definitivo requiere la identificación de M.
tuberculosis o de M. bovis por cultivo. La
mejor fuente consiste en la recogida del
esputo matutino.
La prueba de la tuberculina es otro
método que supone una importante ayuda
diagnóstica. El producto estándar para la
prueba, el PPD (derivado proteico purificado)
se estabiliza al incluir un detergente
polisorbato en el diluyente a diferentes
concentraciones. Hoy en día la concentración
estándar para administración de PPD es de 5
UT (unidades de tuberculina).

Clasificación de la reacción a la prueba
cutánea de la tuberculina
El antígeno puede aplicarse mediante
escarificación (Pirquet), por método de
punción múltiple y de Heaf, pero el
procedimiento más satisfactorio es la
administración intradérmica cuidadosa
también llamada prueba de Mantoux.
Materiales
- Jeringa de tuberculina.
- Prueba de tuberculina: 0.1 ml de derivado
proteínico purificado (5UT/0.1 ml).
Proporcionado por el laboratorio:
- Torundas con alcohol.
Procedimiento
Para la evaluación de la respuesta cutánea de
la inmunidad retardada, se utiliza 0.1ml de
diversos antígenos, aplicados con jeringa de
tuberculina con el bisel hacia arriba en la cara
anteroexterna del brazo no predominante, en
la unión del tercio superior con el tercio medio
(Figura 2).
Se pueden emplear diversos antígenos
con una separación de 5 cm entre cada uno de
ellos:
1. Antígeno de cándida (Monilia Skin
Test Antigen), se diluye 1 ml en 9 ml de
solución salina al 0.9% o bien solución Evans y
se toma 0.1 ml para su aplicación. Este
antígeno valora la respuesta a cándida.
2. Prueba de tuberculina o de
Mantoux, se emplea PPD, se aplica 0.1 ml de
derivado proteínico purificado (5UT/0.1ml).
Este antígeno evalúa la respuesta a
Mycobacterium tuberculosis (este antígeno se
manejaría dependiendo de la disponibilidad).
3. Antígenos de extractos de multiples
bacterias (Streptococcus, staphylococcus,
Moraxella catarralis). El principio es el mismo
se realiza una dilución de 1:10 del
concentrado madre y de esto solo aplica 0.1
ml.
4. Antígenos diversos de bacterias,
hongos y virus (obtenidos de vacunas).
La práctica consistirá en realizar
equipos de 5 integrantes, aplicarse el
antígeno y describir los cambios físicos e
interpretar los resultados inmunológicos al o
los antígenos.
La respuesta se mide a las 48 horas y a
las 72 horas después de la
intradermorreaccción (Figura 3).
La induración de más de 5mm es
considerada positiva en todos los casos. La
presencia de eritema por sí misma no indica
una reacción positiva (Figura 4).

Figura 2. Técnica de aplicación para la prueba
de intredermorreación.
Figura 3. Reacción a las 48 y 72 horas.
Figura 4. Lectura correcta de la prueba de
hipersensibilidad retardada.
La prueba positiva indica alguna de las
siguientes circunstancias:
a) Nos ayuda a identificar in vivo,
el funcionamiento de los elementos
relacionados con la respuesta inmune celular
incluyendo citocinas y células involucradas.
b) Nos ayuda a identificar en el
individuo, la memoria de respuesta inmune
celular para algún microorganismo a los
cuales presuponemos ya se cuenta con
inmunidad.
c) En caso de presentar una
respuesta mayor a 10 mm, sugiere la alta
posibilidad de una infección activa
relacionada con el microorganismo inyectado
en la epidermis.
En caso de ser negativo y con
evidencia de infección activa por el
microorganismo testeado, entonces es
probable que presente alguna
inmunodeficiencia de origen celular.
Cuestionario
1.- ¿Cuál o cuáles serían las razones por las
cuales una persona sana, presenta los
siguientes resultados al ser aplicado él
antígeno?
a) Prueba con resultado menor a 5 mm.
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
b) Prueba con resultado entre 5 y 10 mm.
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
c) Prueba con resultado mayor a 10 mm.
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
2.- ¿Cuál o cuáles serían las razones por las
cuales una persona presuntamente enferma
por el microorganismo que estamos
aplicando, presenta los siguientes resultados?
a) Prueba con resultado menor a 5 mm.
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
b) Prueba con resultado entre 5 y 10 mm.
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
c) Prueba con resultado mayor a 10 mm.
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
3.-Investigue las características clínicas de
inmunodeficiencia celular y desarrolle los
siguientes reactivos:
a) ¿Cuál es el cuadro clínico de las personas
que padecen inmunodeficiencia celular?
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
b) ¿Qué microorganismos infectan a estas
personas?
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
c) ¿Qué antígenos de los microorganismos
anteriores sugiere para poder investigar
mediante la prueba de hipersensibilidad
retardada?
_____________________________________
_____________________________________
_____________________________________
Referencias
1. Rajan TV. The Gell-Coombs classification
of hypersensitivity reactions: a re-
interpretation. Trends Immunol. 2003;
24:376-9.
2. José Lozano. (2002). Tuberculosis.
Patogenia, diagnóstico y tratamiento.
OFFARM, 21, 102-110.
3. Cdc.gov. (2018). CDC|TB|Hojas
informativas- Pruebas de tuberculosis.
[online]
4. Schluger NW. Tuberculosis and
Nontuberculous Mycobacterial. Infections in
Older Adults. Clin Chest Med 2007;28: 773- 81.
5. American Thoracic Society and CDC.
Diagnostic standards and classification of
tuberculosis in adults and children. (PDF) Am J
Respir Crit Care Med 2000; 161.
3. CDC. Targeted tuberculin testing and
treatment of latent tuberculosis
infection. MMWR 2000; 49 (No. RR-6).
REPORTE
REPORTE
Práctica 11
Determinación de Gonadotropina Coriónica
Humana
Objetivos
● El alumno comprenderá el
fundamento teórico del método
inmunoensayo cromatográfico y su aplicación
en pruebas diagnósticas como la prueba
inmunológica de embarazo.
● Analizar el concepto “cromatografía”.
● Explicar los diferentes métodos de
separación cromatográfica.
● Explicar el procedimiento de
cromatografía de capa fina en la detección de
hormona gonadotropina coriónica humana
en sangre o suero de la mujer embarazada.
Introducción
La hCG (Gonadotropina Coriónica Humana por
sus siglas en inglés) es el primer mensajero
hormonal producido en el ser humano y vital
regulador bioquímico de la relación materno-
embrionaria. Es detectable en sangre materna
a las pocas horas posteriores a la implantación
y se comporta en gran medida como un
agonista de la hormona luteinizante (LH),
estimulando la síntesis y secreción de
hormonas esteroideas por el cuerpo lúteo, el
establecimiento de la circulación materno fetal
y la respuesta inmunitaria de tolerancia
materna hacia el aloinjerto que es el embrión y
posteriormente la unidad feto-placentaria.
Existe evidencia creciente sobre la
importancia de la hCG en la invasión de la
decidua endometrial por parte del trofoblasto.
Como tal, la hCG promueve la apoptosis de las
células endometriales, facilitando así la
invasión trofoblástica. En estudios In vitro, se
ha demostrado que estas mismas células
endometriales tratadas con hCG inducen
también la apoptosis de células T, reduciendo
como consecuencia una posible respuesta
celular materna en contra del embrión y su
implantación. Se ha inferido que la hCG tiene
influencia sobre la implantación reduciendo la
secreción de citocinas por parte de las células
T y NK, así como también se ha visto que
disminuye el reclutamiento de células
inmunológicas activadas a la interface
materno-fetal. Por lo anterior, es muy
probable que la hCG sea un importante
regulador de la profundidad de la invasión
embrionaria y una función defectuosa de la
hormona ha sido propuesta como causa de una
placentación defectuosa. La resultante
isquemia tisular pudiera incrementar el riesgo
de preeclampsia y, si es muy severa, originar
infertilidad y aborto.
Fundamento
El inmunoensayo cromatográfico es un
método de separación de los distintos
componentes de una mezcla (muestra). Los
componentes de la mezcla (muestra) se
distribuyen entre dos fases:
 1.- Fase estacionaria (sólida) que
retiene los componentes de interés de la
mezcla de acuerdo con su afinidad.
2.- Fase móvil (líquida) cuyo objetivo es
transportar los componentes de la mezcla.
Métodos cromatográficos:
a) Según la naturaleza de la fase móvil:
- Cromatografía de gases. La fase móvil
es un gas.
- Cromatografía líquida. La fase móvil es
un líquido.
b) La fase estacionaria puede ser un sólido ó un
líquido, según esté depositada esta fase, la
cromatografía puede clasificarse en:
- Cromatografía plana.
- Cromatografía de columna.
- Cromatografía en capa fina:
cromatografía plana, líquido-sólido con la fase
estacionaria depositada en una placa de vidrio
aluminio o plástico. Los elementos de la mezcla
deben ser solubles en la fase móvil y capaz de
interaccionar con la fase estacionaria que
puede ser gel de sílice, papel o celulosa.
Se utiliza una placa recubierta con el
adsorbente (fase estacionaria) en forma de
una capa delgada, de espesor constante,
adherida sobre un soporte rígido, que puede
ser una placa de vidrio, aluminio o poliéster. El
adsorbente puede tener fluoresceína para
identificar las muestras.
El eluyente (fase móvil) ascenderá por
capilaridad por la placa y arrastrará los
componentes en forma diferenciada a lo largo
de ésta, produciendo “manchas” de los
componentes.
La Prueba inmunológica de embarazo
(PIE), se basa en el método de cromatografía
en capa fina.
La hCG es una hormona glucoproteína
producida por el sincitiotrofoblasto en el
periodo embrionario, está constituida por dos
cadenas de aminoácidos, alfa y beta, unidas no
covalentemente por un puente sulfhídrico. La
subunidad alfa la comparte con otras
hormonas como luteinizante, folículo
estimulante, mientras que la subunidad beta
es diferente y es quien le confiere
especificidad. Puede detectarse desde los siete
o diez días de la concepción con una
sensibilidad de 25 mUI/mL.
A través de una lámina de textura
similar al papel, por capilaridad asciende la
muestra (suero u orina de la mujer
embarazada). La lámina (fase estacionaria)
contiene anticuerpos monoclonales y/o
policlonales anti hCG, que en caso de estar
presente forma la primera de las bandas del
test, que indica un resultado positivo para
embarazo. La segunda banda es la línea de
control que está compuesta por anticuerpos
policlonales y partículas coloidales de oro.
Material
- Reactivo prueba rápida (Quid Plus).
- Muestra (suero u orina) de mujer con
sospecha de embarazo.
- Control positivo.
- Control negativo.
Procedimiento
- Deje que la placa, la muestra de orina o suero
y/ó los controles alcancen la temperatura
ambiente (15-30°C) antes de realizar la prueba.
- Coloque la placa en una superficie limpia y
nivelada. Mantenga el cuentagotas en posición
vertical y deposite tres gotas de orina o suero
(aproximadamente 100 μL) en el pocillo de la
placa (S) y ponga en marcha el cronómetro.
- Espere hasta que aparezcan una o dos líneas
coloreadas. Los resultados deberán leerse a los
tres minutos cuando se analice orina o a los
cinco minutos cuando se analice una muestra
de suero.
- La muestra migra por acción capilar por la
membrana para reaccionar con el conjugado
de color. Las muestras positivas reaccionan con
el conjugado de color del anticuerpo específico
anti-hCG para formar una línea de color en la
región de la línea de la prueba de la membrana.
La ausencia de esta línea de color sugiere un
resultado negativo.
Cuestionario
1.- ¿Qué es la cromatografía?
2.- ¿Cuál es la utilidad del método
cromatográfico en inmunología?
3.- ¿Qué es la Hormona Gonadotropina
Coriónica Humana?, ¿Dónde se sintetiza?, ¿En
qué proceso fisiológico?
4.- Desde el punto de vista de laboratorio,
¿Cómo puede detectarse (método) la
presencia de la hormona gonadotropina
coriónica humana en suero u orina?
5.- Escribe tus conclusiones respecto a los
aspectos revisados y aprendidos durante el
desarrollo de esta práctica.
Referencias
1. Mayolo-Deloisa, K., & Martínez, L., & Rito-
Palomares, M. (2012). Técnicas
cromatográficas y su aplicación a estudios de
cambios conformacionales, estabilidad y
replegamiento de proteínas. Revista Mexicana
de Ingeniería Química. 11 (3), 415-429.
2. Siri Valen Egeland, Léon Reubsaet, Elisabeth
Paus, Trine Gronhaug Halvorsen. (2016) Dual-
immuno-MS technique for improved
differentiation power in heterodimeric protein
biomarker analysis: determination and
differentiation of human chorionic
gonadotropin variants in serum. Analytical and
Bioanalytical Chemistry 408:26, pages 7379-
7391.
3. Owen, Punt, Stranford. (2014). Kuby
Inmunología. Séptima Edición. Mc Graw Hill.
4. Cole, LA. (2009). Human Chorionic
Gonadotropin tests. Expert Review of
Molecular Diagnostics. Oct;9(7):721-47.
5. Davies S, Byrn F, Cole LA. (2003). Human
Chorionic Gonadotropin testing for early
pregnancy, viability and complications. Clinics
in Laboratory Medicine. Jun;23(2):257-64.
REPORTE
REPORTE
 Práctica 12
Trasplante de Tejidos
Objetivos
● Que el alumno comprenda la respuesta
del aparato inmunocompetente.
● Que el alumno comprenda la
importancia de la inmunidad en el rechazo de
trasplantes.
● Que el alumno comprenda los
mecanismos de rechazo de los injertos.
Introducción
En el organismo humano existen proteínas que
son polimórficas, es decir que presentan
pequeñas diferencias en la secuencia de
aminoácidos de unos individuos a otros. Estas
proteínas pueden ser reconocidas como
extrañas por el sistema inmunológico de otro
individuo desencadenando una respuesta
cuyo objetivo es la eliminación de los
elementos extraños.
Las moléculas del Complejo Principal
de Compatibilidad son glucoproteínas
codificadas en una agrupación de genes, en los
seres humanos, éste fue identificado como el
locus del HLA (antígeno leucocitario humano),
de modo que a estas moléculas se les puede
llamar como moléculas HLA.
El MHC tiene tres regiones que agrupan
a genes llamados de clase I, II y III. Los de clase
I generan los HLA-I que colonizan la membrana
de todas las células del organismo, con
excepción de las neuronas y eritrocitos. Los de
la clase II, codifican para los HLA-II que se
expresan en los linfocitos B, los macrófagos y
las células dendríticas. Los de la clase III
codifican para los factores del sistema de
complemento, algunas moléculas relacionadas
con la inflamación, etc.
Los genes del MHC están dispuestos
dentro de un tramo continuo largo de DNA
(Ácido Desoxirribonucleico) en el cromosoma
6 en seres humanos. Los loci que componen el
MHC son altamente polimórficos, es decir,
existen varias formas alternas de los genes
(alelos) para cada locus. Se han descubierto
unos 8.500 alelos HLA en la región del genoma
que se extiende cuatro millones de pares de
base en el brazo corto del cromosoma 6. Cada
alelo se designa con el nombre del gen, al que
se le han asignado cuatro letras, seguidas y de
un signo (*) y de cuatro dígitos que indican el
alelo. Por ejemplo, DRB1*0101.
Todas las moléculas del MHC
comparten características estructurales
importantes en la presentación de péptidos y
reconocimiento del Ag:
- Constan de una hendidura
extracelular de unión al péptido, seguida de
dominios de tipo inmunoglobulina y dominios
transmembranario y citoplásmico.
- Los aminoácidos polimórficos de las
moléculas del MHC se localizan en la
hendidura de unión al péptido y al lado de ella.
- Los dominios de tipo Ig no
polimórficos contienen zonas de unión para las
moléculas CD4 y CD8 del linfocito T.
 Los linfocitos CD4 cooperadores,
reconocen moléculas de la clase II del MHC que
presentan péptidos, mientras que los linfocitos
CD8 reconocen moléculas de la clase I del MHC
con péptidos unidos.
Cada clase es expresada en la superficie
celular bajo la forma de un heterodímero
compuesto de dos cadenas de polipéptidos
unidas de manera no covalente.
MHC-I: existen tres loci principales de
moléculas conocidos como clásicos, A, B y C,
que codifican individualmente cadenas alfa; y
existen los no clásicos, E, F, G que se
encuentran en algunas células. Cada molécula
de clase I, consiste en una cadena alfa unida a
un segundo polipéptido más corto llamado β-2
microglobulina. La cadena α de la clase I se
organiza en tres dominios (α1, α2 y α3) y posee
un anclaje a la membrana en el extremo
carboxi terminal. La β-2 microglobulina
(codificada en el cromosoma 15) es más
pequeña, con un solo dominio, se une a la
membrana de forma indirecta a través de su
unión con la cadena α; tal unión estabiliza a la
molécula de clase I y facilita su transporte a la
superficie celular. El sitio de unión a péptidos
está formado por los dominios α1 y α2.
Los péptidos se unen dentro de la
hendidura en una conformación extendida, en
este caso hay un estrechamiento en ambos
extremos y, por lo tanto, solo acomoda
péptidos de ocho a diez aminoácidos de
longitud.
MHC-II: Este sistema consta
igualmente de tres loci, HLA-DP, HLA-DQ y
HLA-DR, cada uno de los cuales incluye genes
que codifican para una cadena polipeptídica
alfa y al menos una beta.
Las moléculas están formadas por dos
polipéptidos, α y beta, los cuales son
semejantes en tamaño y ambos están anclados
a la membrana de la superficie en su extremo
caboxi terminal. Las regiones extracelulares de
las cadenas α y beta de la clase II se encuentran
plegadas sobre si mismas para formar un par
de dominios globulares designados α1 y α2 o
β1 y β2. El sitio de unión a péptidos de una
proteína clase II está formado por los dominios
α1 y β1, la hendidura permite unión de
péptidos un poco más largos, de 9-20 parte de un microorganismo o de partículas
aminoácidos. engullidas por fagocitosis, o capturadas a
través de endocitosis mediada por receptor, o
pinocitosis. Éstas, llegan al interior de la célula
dónde son degradadas al exponerse a un pH
ácido y enzimas proteolíticas celulares,
algunos péptidos escapan de una mayor
degradación y en cambio se transportan de
regreso a la superficie para ser presentados a
células T.

Correlación clínica
Se define como trasplante a las transferencias
de órganos, tejidos, o células vivas, de un
individuo a otro con el objetivo de mantener la
integridad funcional del tejido trasplantado en
Una persona hereda normalmente dos
el receptor.
copias del locus de cada gen (uno de cada
padre) y, por lo tanto, es portadora de un total
Tipos de injerto:
de seis loci clase I y seis loci clase II.
1) Aloinjerto u homoinjerto: Cuando
donante y receptor son genéticamente
Para funcionar como antígenos
diferentes, pero de la misma especie. Más
reconocidos por las células T, las proteínas
frecuente en humanos.
deben primero ser procesadas y convertidas a
2) Xenoinjerto o heteroinjerto o
péptidos, de manera que puedan unirse a las
heterólogo: Cuando donante y receptor
moléculas de MHC de la célula huésped, hay
pertenecen a especies distintas (válvulas
dos vías principales de procesamiento:
cardíacas de cerdo en humanos).
3) Autoinjerto: Implica la transferencia
1. La vía citosólica (clase I) donde las
de tejidos de un sitio a otro en el mismo
proteínas antigénicas vienen de patógenos en
individuo (ej. Injerto óseo para estabilizar
el interior de células huésped infectadas (ej.
fracturas).
Virus). Los antígenos provenientes de tales
4) Isoinjerto: Transferencia de tejidos
patógenos intracelulares se procesan
entre gemelos idénticos entre los que no hay
mediante eventos del metabolismo normal de
rechazo.
las proteínas, esto ocurre en proteosomas que
5) Ortotópico: Extracción del órgano
liberan los péptidos cortos al citosol gracias a
del paciente y sustitución por el del donante.
canales creados por transportadores de
El órgano ocupa su posición anatómica normal.
péptidos antigénicos TAP (Transportador
6) Heterotópico: El órgano del paciente
asociado al procesamiento de antígeno) 1 y
permanece como apoyo del órgano del
TAP 2 para llegar a la luz del RER (Retículo
donante y se injerta el órgano nuevo en un
Endoplásmico Rugoso) de una manera
lugar distinto del que ocupa el del paciente. No
dependiente de ATP (Adenin trifosfato).
se elimina el órgano enfermo, se inactiva. Es
2. La vía endocítica (clase II) es
muy frecuente en trasplantes renales.
principalmente para antígenos que fueron
Clasificación del trasplante
1) Tejidos: Córnea, hueso, válvula
cardíaca, piel, pelo, uñas. Los tejidos, por su
menor demanda metabólica, toleran períodos
prolongados de isquemia, así como logran la
ablación varias horas después de la detención
circulatoria. Pueden preservarse en bancos
durante tiempos variables, que en algunos
casos llegan a meses o años.
2) Órganos: Corazón, hígado, riñón,
pulmón, páncreas, intestino. Los órganos
reciben irrigación por vasos exclusivos. Tales
órganos, dada la especialización de sus
estructuras celulares y su elevada demanda
metabólica toleran escasos tiempos de
isquemia. La posibilidad y pronóstico del
trasplante depende de la conservación óptima
de su función hasta la ablación y de la
adecuada preservación en el período de
isquemia fría hasta la reperfusión en el
receptor. Necesitan ser perfundidos con
soluciones de preservación a bajas
temperaturas durante su transporte para
evitar alteraciones electrolíticas y ácido base
del medio intracelular, las alteraciones de
toxicidad extracelular y el efecto deletéreo de
los radicales libres del oxígeno entre otras
cosas.
3) Células: De páncreas (islotes de
Langerhans), células madre de médula ósea;
obtenidas de sangre periférica o de sangre de
cordón umbilical. Ciertos tipos de cáncer,
trastornos genéticos o sanguíneos,
alteraciones del sistema inmune mejoran
notablemente con el empleo de células madre,
que pueden en general ser trasplantadas con
una inyección (Ej. Niños con leucemia, dónde
se destruyen los glóbulos blancos
cancerígenos con quimioterapia y luego se
reemplazan con células madre del cordón
umbilical).
Tipo de donante
En la actualidad los trasplantes clínicos son
aloinjertos de parientes vivos o donantes
cadavéricos.
1) Donante vivo: El donante sigue vivo
después de la donación, generalmente
emparentados. Se pueden donar: tejidos
(piel), células (médula ósea), órgano completo
(riñón) o parte de un órgano que tenga
capacidad de regeneración (hígado).
2) Donante cadavérico: En este caso el
donante es un individuo fallecido en muerte
encefálica, en el cual los órganos a trasplantar
son mantenidos con vida hasta el trasplante,
manteniendo la irrigación los órganos a ser
trasplantados.
Por muerte encefálica se entiende el
cese irreversible y permanente de las
funciones de todas las estructuras cerebrales,
lo cual es incompatible con la vida.
El rechazo es un proceso en el que los
linfocitos T y los anticuerpos producidos contra
antígenos del injerto reaccionan contra los
injertos tisulares y los destruyen. Tras el
trasplante, los linfocitos T del receptor
reconocen los antígenos del donante en el
injerto, por 2 vías, llamadas directa e indirecta.
1) Vía directa: Los linfocitos T del
receptor del trasplante reconocen las
moléculas alógenas (del donante) del CMH en
la superficie de las APC en el injerto. El
reconocimiento de moléculas alógenas del
CMH es una reacción cruzada de linfocitos T
seleccionados para reconocer el CMH propio
más péptidos extraños.
2) Vía indirecta: Los linfocitos T del
receptor reconocen antígenos CMH del injerto
del donante después de que son presentados
por las propias APC del receptor. Este proceso
implica la captación y procesamiento de
moléculas del CMH del órgano injertado por
las APC del anfitrión.
Las reacciones de rechazo se clasifican
en hiperagudas, agudas y crónicas.
1) Rechazo hiperagudo: Se produce
sólo horas o incluso minutos después del
injerto. Es el rechazo fulminante mediado por
anticuerpos, cuando el receptor se halla
previamente sensibilizado por embarazo,
transfusión o trasplante previo o bien porque
no se ha tomado el recaudo de controlar que
exista compatibilidad ABO. La expresión
histopatológica del fenómeno es la
destrucción del injerto en las horas o minutos
que siguen a la revascularización, por
trombosis o infarto de los pequeños vasos del
injerto, por lo que son ineficaces todas las
técnicas de inmunosupresión como
tratamiento. Es por ello que la evaluación pre-
trasplante debe constar de:
a) Verificar compatibilidad ABO.
b) Realizar pruebas cruzadas para
anticuerpos tisulares (leucocitos donantes +
suero receptor).
c) Tipificación tisular de la
compatibilidad HLA.
2) Rechazo agudo: Aquel que se
produce en el primer mes postransplante.
Predominan mecanismos inmunitarios
celulares y humorales. Su mecanismo principal
es la reacción del huésped contra el injerto
conocida como HVGR (por sus siglas en inglés,
Host Vs. Graft Reaction) y mediada por
linfocitos (reacción celular). Como respuesta
de hipersensibilidad retardada, similar a la
provocada por la tuberculina, causa la
destrucción del injerto al cabo de días o meses,
provocando infiltración mononuclear, edema y
hemorragia. Como existe una indemnidad
vascular, se puede tratar este tipo de rechazo
mediado por células intensificando la terapia
inmunosupresora. Después del rechazo agudo
el injerto suele presentar áreas de fibrosis y
otras de regeneración. Generalmente, luego
de un episodio de rechazo agudo, pasan
muchos años en los que existe una
“adaptación” probablemente debida al
desarrollo de alguna “supresión” específica
para el donante en la respuesta inmune del
receptor.
3) Rechazo crónico: Se produce meses
o años después del trasplante y su etiología no
se conoce con exactitud. Tiene muchas veces
una progresión insidiosa pero inexorable pese
a una inmunosupresión creciente, pues en esta
modalidad el daño vascular es lo primero por
extrema proliferación endotelial que
progresivamente ocluye los vasos del injerto.
Inmunosupresión
Luego de realizado el implante, la lucha contra
el rechazo está presidida por la
inmunosupresión con drogas que hagan
tolerables inmunológicamente las diferencias
que quedan después de realizado el descarte
de compatibilidades por medio de la
tipificación tisular y las pruebas cruzadas. A
excepción de los isoinjertos, la
inmunosupresión no puede detenerse
después del trasplante, pero a dosis intensivas
sólo debe usarse las primeras semanas o
durante la crisis de rechazo. Posteriormente, el
injerto puede mantenerse con dosis
relativamente pequeñas de fármacos
inmunosupresores que desde luego tienen
efectos adversos mucho menores.
La eficacia de la inmunosupresión solo
puede medirse por la respuesta específica e
inespecífica de los linfocitos en la sangre
periférica y por la funcionalidad del injerto; de
modo que la dosis de inmunosupresores solo
se regula con base en su toxicidad.
Fármacos inmunosupresores
- Prednisona o metilprednisona: Se
administra a dosis elevadas (2 a 20 mg/kg/d)
en el momento del trasplante y en los tejidos
de rechazo, para ir disminuyendo hasta una
dosis de mantenimiento de 0,2 mg/kg/d que
debe darse indefinidamente. Debido a los
efectos adversos, sobre todo en los niños en
los que detiene el crecimiento, en ciertas
ocasiones se utiliza a días alternos, pero esto
reduce su capacidad inmunosupresora.
- Azatioprina: Es un antimetabolito que
se usa desde el momento mismo del trasplante
y que es tolerado indefinidamente por el
receptor a dosis de 1,5 a 3 mg/kg/d. Sus
efectos adversos son la depresión de medula
ósea y la hepatitis.
- Ciclofosfamida: Es un agente
alquilante y es el sustituto para los pacientes
que no toleran la azatioprina. Tiene con
frecuencia episodios de toxicidad grave: cistitis
hemorrágica, alopecia, infertilidad, etc.
- Ciclosporina A: Su acción es
sumamente específica pues inhibe de manera
intensa la formación de 417 células T
citotóxicas, lo cual resulta evidente en cultivos
mixtos de linfocitos y evitando el rechazo de
aloinjertos con su administración profiláctica.
Impediría la producción de IL-2, esencial para
la proliferación de los clones de linfocitos T
reactivos a antígenos, aunque no inhibe las
células T supresoras. Su uso ha hecho
evolucionar los trasplantes clínicos pues en
combinación con dosis bajas de prednisona
suplanta con ventaja a todas las otras drogas
debido a su especificidad. Su principal
desventaja radica en su nefrotoxicidad y en su
absorción en medio liposoluble (leche o aceite)
cuando es administrada oralmente.
Leyes del trasplante Georg Schöne
(Heteroplastic and Homoplastic
Transplantation, 1912):
1. El trasplante en otra especie
(xenogénico) es rechazado siempre.
2. Los trasplantes a miembros sin
relacionar de la misma especie (alogénico) casi
siempre son rechazados.
De modo lento la primera vez y
acelerado en las sucesivas (memoria).
3. Los autotrasplantes (autólogos) no
son rechazados (autotolerancia).
4. A mayor consanguinidad (identidad
genética) entre donante y receptor menor será
la probabilidad de rechazo.
Estas reglas son válidas para tejidos
normales y tumorales.
Material
POR PERSONA:
• Pijama quirúrgica.
• Gorro quirúrgico.
• Un par de botas quirúrgicas.
• Cubrebocas (Se recomienda traer uno extra
para cubrir los ojos al conejo).
• Un par de guantes estériles (DE SU
NÚMERO).
• Un par de guantes desechables.
• Un cepillo con jabón, ESTÉRIL.
• Una toalla limpia (para secarse las manos
después del lavado quirúrgico).
POR MESA:
• Un pañal para adulto.
• Un campo estéril.
• Un campo hendido estéril.
• Un plumón indeleble (a prueba de agua).
• Dos estuches de disección completos (24
horas previas en benzal completamente
hundidos).
• Dos hojas de bisturí (checar # de hoja y
mango).
• Una moneda de $10 (en 24 horas previas en
benzal).
• Cinco a siete suturas de nylon 00
(doble cero).
• Un catgut crómico 00 (doble cero).
• 20 a 40 gasas estériles.
• Un botecito estéril para muestra (tapa roja).
• Un bote de 250 ml de solución salina.
• Un bote de isodine espuma.
• Un bote de merthiolate blanco en spray.
• Un apósito.
• Una malla elástica del # 5-6.
• Un micropore.
• Una bolsa negra para basura.
• Una bolsa roja pequeña.
Procedimiento
1. Elegir quién será cirujano, primer ayudante,
instrumentista y circulante.
2. Limpiar la mesa de trabajo y colocar el
material, así como la tabla para colocar al
conejo.
3. Colocar al conejo en la tabla en el siguiente
orden:
• Tabla.
• Campo estéril.
• Pañal para adulto.
• Conejo.
4. Colocar un cubrebocas sobre los ojos del
conejo para mantenerlo tranquilo y colocarlo
sobre la tabla.
5. Todo el equipo se coloca pijamas quirúrgicos
(en caso de ser desechable), gorro, botas y
cubrebocas.
6. Los primeros en lavarse serán el circulante y
el instrumentista.
7. Después del lavado el circulante se
enguantará con guantes desechables y el
instrumentista con guantes estériles.
8. El circulante le presentará un campo estéril
al instrumentista y este lo extenderá sobre la
mesa y comenzará la colocación del
instrumental (por tiempos quirúrgicos).
9. El cirujano y primer ayudante deben lavarse.
10. El instrumentista enguantara al primer
ayudante y al cirujano.
11. Una vez listo el equipo se iniciará la cirugía
siguiendo los siguientes tiempos:
• Asepsia de la zona: Se hace con
isodine espuma.
Se empapan dos o tres gasas con isodine
espuma y se limpia la zona quirúrgica en una
sola dirección.
• Marcado de la moneda: Se tomará la
moneda (recordar que está estéril), se colocará
lo más céntrico posible y marcar la periferia de
la moneda.
• Colocación del campo hendido.
• Corte y disección del tejido: se
tomarán dos pinzas con dientes y se tomará la
piel del conejo con ambos bordes de la línea
del círculo y se levantará a manera de “tienda”
y se hará un corte fino y firme por fuera del
círculo marcado.
Al terminar el primer corte diseccionar
solo la piel sin invadir otros tejidos, en caso de
invadir: suturar con catgut.
• Colocación del tejido en un bote para
muestra: Al finalizar la disección de la piel se
llenará un bote de muestra un poco por debajo
de la mitad con solución salina y se meterá el
tejido.
• Intercambio de tejido.
 • Sutura del tejido: Después de hacer el
intercambio de tejidos se continuará con la
sutura del trasplante con puntos simples.
Se colocarán primero puntos a las 12,
6, 3 y 9 y después se suturarán los bordes
restantes.

• Colocación de merthiolate blanco, de

apósito y malla: El merthiolate solamente se
rocía sobre la herida y después de esto se pone
el apósito fijándolo con micropore y se coloca
la malla #5-6.

Cuestionario
1. A menudo se desarrolla enfermedad de
injerto contra hospedador después de ciertos
tipos de trasplantes:
a. Describa los mecanismos.
b. ¿En qué condiciones es probable que
ocurra?
c. Indique antígenos de superficie celular
contra los que podrían elaborarse anticuerpos
monoclonales para evitar esta enfermedad, y
explique su razonamiento para decidir las
opciones.

Referencias
1. Abbas A, Lichtman A. (2015) Inmunología
Celular y Molecular. 8a Ed. Madrid, España.
Elsevier.
2. Abbas A, Lichtman A. (2014) Inmunología
básica. 4ª Ed. Barcelona, España. Elsevier
3. Gruessner, Angelika C., et al. (2015)
Trasplantes. En Brunicardi FC (ed) Principios de
cirugía (pp. 1031–1185). New York: McGraw-
Hill.
4. Deffelitto, D. J. (2011). Trasplante de
Órganos: Generalidades (Tesis inédita de
doctorado). Universidad Nacional de La Plata,
Buenos Aires
REPORTE
REPORTE
Agradecemos a los instructores: Francisco Alejandro Jiménez Leyva, Abraham Castro
Ponce y Diane del Rayo Molina Sánchez por su colaboración en la realización de las
prácticas.