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TLC-Procedimiento
0:12
En esta sección del laboratorio, utilizarás la TLC para comparar lo bien que el hexano puro y una
mezcla de 60% de hexano y 40% de acetato de etilo pueden separar el fenol, el ácido benzoico y el
éter de butilfenol midiendo la distancia que recorrió el compuesto en cada disolvente.

0:32
Antes de empezar el laboratorio, póngase una bata de laboratorio, gafas de seguridad y guantes de
nitrilo.

0:38
Cámbiese los guantes si se manchan de disolvente, ya que el hexano y el acetato de etilo impregnan
los guantes de nitrilo en cuestión de minutos.

0:47
El hexano y el acetato de etilo son volátiles, tóxicos e inflamables, por lo que siempre hay que trabajar
con ellos en una campana extractora.

0:56
Ahora coja una toalla de papel y colóquela sobre la superficie del banco.

1:01 Coge
con cuidado una placa de TLC utilizando unas pinzas en el extremo de la placa.

1:06
Sujete siempre las placas de TLC por los bordes o por la parte superior con unas pinzas para evitar
dañar o contaminar el gel de sílice.

1:16
Busque astillas o arañazos en el gel de sílice y consiga una placa nueva si es necesario.

1:21
No pasa nada si sólo hay un pequeño desconchón en un extremo, ya que puede ser la parte superior.

1:27
Ahora coloque la placa sobre la toalla de papel en su campana extractora y ponga una regla métrica a
su lado.

1:33
Utiliza un lápiz de grafito para hacer suavemente una pequeña marca en el gel de sílice,
aproximadamente a 1 cm de la parte superior de la placa, justo a 100 de la placa por encima de la
marca.
1:45
A continuación, marque suavemente el plato 1 centímetro por encima del fondo en ambos lados.

1:50
Traza con cuidado una línea recta entre las marcas inferiores para hacer la línea de salida.

1:56
A continuación, añada tres pequeñas marcas espaciadas uniformemente a la línea de salida, con las
marcas exteriores a una distancia mínima de 0,5 cm de los lados de la placa.

2:05
Aquí es importante que el gel de sílice no esté dañado, así que si lo rayas con el lápiz, prepara una
nueva placa.

2:14
Ahora traza el contorno de la placa de TLC en tu cuaderno de laboratorio y copia con precisión las
marcas de la placa.

2:21
Etiquete las tres marcas como fenol, ácido benzoico y butil fenol éter.

2:26
También puede etiquetar las marcas en la propia placa.

2:30
Su plato debería tener ahora este aspecto.

2:35
Prepare una segunda placa de TLC rotulada 6040 de la misma manera.

2:40
Ahora lleve las placas etiquetadas al banco común y localice las soluciones de 1 miligramo por
mililitro de fenol, ácido benzoico y éter de butilfenol en etanol.

2:52
Sumerja un capilar limpio en una de las tres soluciones.

2:56
Toque brevemente y con suavidad el capilar en la intersección entre la línea de salida y la marca de
ese compuesto.

3:04
Debes manchar dos veces para cada compuesto.

3:09
Utilice el mismo capilar para manchar la misma solución en su segunda placa de TLC.
 3:17
Las manchas no deben tener más de 2 mm de diámetro, como ésta.

3:23 A
continuación, deseche el capilar y cierre el vial.

3:28 Coloque
las otras dos soluciones en las placas de la misma manera, utilizando capilares limpios.

3:33
Tenga cuidado de no contaminar las soluciones de forma cruzada.

3:38
Si una mancha es muy ligera o muy pequeña, espere a que se seque y aplique la misma solución
sobre la mancha seca.

3:46
Si la mancha aún está húmeda, la capilaridad podría hacer que se diluyera demasiado.

3:52
Una vez que haya hecho tres manchas en cada placa, deseche los capilares y lleve las placas a su
campana.

3:59
Mantén los platos en posición horizontal mientras se secan.

4:03
Ahora etiquete el frasco de A50 mililitros con 100% de hexano y lleve el frasco, su tapa y la probeta
graduada de A10 mililitros a la campana de disolventes.

4:13
Mide de 2 a 3 mililitros de hexano puro con tu probeta graduada y viértelo en el frasco hasta llenarlo
a una profundidad de 0,6 a 0,7 centímetros.

4:24
Tapar la botella y el tarro y volver a la campana extractora.

4:28
Etiqueta un segundo frasco de 50 mililitros, 60% hexano, 40% acetato de etilo y llévalo junto con una
probeta graduada limpia a la campana de disolventes.

4:39
Mida de 2 a 3 mililitros de la mezcla 6040 en el frasco y vuelva a su campana extractora.

4:46
Coloca las placas junto a los frascos para comparar la posición relativa del disolvente y las manchas.
 4:52
El nivel de disolvente debe estar por debajo de los puntos de cada placa.

4:57 A
continuación, obtenga 3 trozos de papel de filtro.

5:00 Coloca
un papel de filtro en posición vertical contra la pared en cada tarro y luego tapa los tarros
herméticamente.

5:07
Pon tus iniciales en cada placa por encima de la marca para poder identificarlas más tarde.

5:12
Confirme que los papeles de filtro de los frascos se han saturado de disolvente y que las manchas de
las placas están completamente secas.

5:21
Ahora abra el frasco de hexano al 100% y utilice unas pinzas para colocar suavemente la placa 100 en
el frasco, manteniendo la placa nivelada con la superficie del disolvente a medida que entra en el
disolvente.

5:33
Cierra bien el tarro con cuidado de no empujar el plato.

5:38
Deja el tarro quieto mientras el disolvente sube por la placa.

5:42 El
revelado en hexano puro suele durar entre 7 y 10 minutos.

5:47 Vigile
la placa para asegurarse de que el disolvente no llega a la parte superior.

5:52
Cuando el frente de disolvente hexano puro esté a aproximadamente 1 cm de la parte superior de la
placa, retírelo con ayuda de unas pinzas.

6:00
Colócala sobre la toalla de papel con el gel de sílice hacia arriba y marca rápidamente el frente del
disolvente con una línea y un lápiz a lo largo de la placa.

6:08
Dejar la placa en posición horizontal mientras se evapora el disolvente.
 6:13 Coloque
la otra placa en el eluyente 6040 de la misma manera.

6:18 Espere
hasta que el frente de disolvente de la placa 6040 esté a 1 cm de la parte superior y, a continuación,
recupérela y marque rápidamente el frente de disolvente del mismo modo.

6:29
Una vez que la placa 100% hexano esté completamente seca, cógela con unas pinzas y acércala junto
con un lápiz a la lámpara UV del banco común.

6:40
Coloque la placa bajo la lámpara e ilumínela con luz UV.

6:44
La placa brillará en verde debido a un marcador fluorescente en la capa de gel de sílice.

6:49
Las manchas oscuras son los compuestos.

6:53
Delinea cuidadosamente cada punto con lápiz, aunque no se hayan movido mucho.

6:58
Apague la lámpara y acerque la placa a la campana de revelado con yodo.

7:04
Abra la cámara de yodo.

7:06
Utilice unas pinzas para colocar suavemente la placa en posición vertical en la cámara de yodo y, a
continuación, vuelva a tapar la cámara.

7:13
Espere de 3 a 4 minutos a que el vapor de yodo tiña las manchas y, a continuación, recoja la placa con
unas pinzas.

7:21
Cierre la cámara y perfile las manchas marrones y amarillas de la placa.

7:25
Estas manchas se desvanecerán, así que márcalas rápidamente.

7:30
Visualice la placa 6040 seca bajo luz ultravioleta y después con vapor de yodo de la misma manera.
 7:37
Para evitar reacciones secundarias, compruebe siempre las placas bajo luz ultravioleta antes de
exponerlas al yodo.

7:47
Ahora, copia con precisión las manchas y los frentes de disolvente en los dibujos correspondientes de
las placas de tu cuaderno de laboratorio.

7:54
Para cada placa, mida y registre la altura del frente del disolvente con respecto a la línea de salida.

8:02
Por último, mide la distancia entre el centro de cada punto y su línea de salida y anótala en tu
cuaderno de laboratorio.

8:09
Ahora puede pasar a la siguiente parte del laboratorio.

8:18
En la segunda parte del laboratorio, utilizarás la TLC para averiguar qué contiene un analgésico
desconocido.

8:25
Puede contener uno o más de estos compuestos: Aspirina, cafeína y paracetamol.

8:32
Estos compuestos son muy polares, por lo que utilizaremos como eluyente una mezcla preelaborada
de 90% de acetato de etilo y 10% de hexano.

8:42 Se
analizarán los tres compuestos de referencia y el desconocido en la misma placa.

8:47
Más tarde utilizará los valores RF de los compuestos de referencia para identificar la incógnita.

8:54
En primer lugar, compruebe qué material desconocido se le ha asignado para analizar antes de
empezar.

9:00
Ahora coloque una toalla de papel limpia en la campana y obtenga una nueva placa TLC.

9:05
Preparar la marca superior y la línea de salida de la misma manera que antes.

9:11
Haz 4 marcas uniformemente espaciadas en la placa, asegurándote de que las marcas exteriores están
a una distancia mínima de 0,5 centímetros de los bordes.

9:21 Dibuja
una copia exacta de la placa en tu cuaderno de laboratorio y etiqueta las marcas como aspirina,
paracetamol, cafeína y tu incógnita.

9:31
Ahora lleve su placa al banco común. Manche las soluciones de aspirina, acetaminofén, cafeína y la
incógnita que se le asignó en las marcas correspondientes utilizando un capilar limpio para cada
solución.

9:45
Cuando estés manchando la solución desconocida, no sumerjas demasiado el capilar en el vial de
solución para evitar obstruir tu capilar con material insoluble de la sustancia desconocida, desecha los
capilares y cierra los viales antes de volver a llevar la placa a tu campana extractora.

10:06 Coloca
el plato sobre una toalla de papel para que termine de secarse.

10:10 A
continuación, etiquete un frasco limpio con tapón de rosca de 50 mililitros, 90% acetato de etilo, 10%
hexano y llévelo junto con una probeta graduada limpia a la campana de disolventes.

10:21
Ponga de 2 a 3 mililitros de la solución 9010 en el frasco y vuelva a su campana extractora.

10:28
Confirme que el nivel de disolvente estará por debajo de los puntos de la placa.

10:32 A
continuación, coloque un papel de filtro limpio en posición vertical en el frasco y ciérrelo
herméticamente.

10:37
Una vez seca la placa de TLC y saturado el papel de filtro, coloque cuidadosamente la placa en el
disolvente.

10:45 Es
esencial mantener el plato nivelado cuando hagas esto.

10:50
Si el frente del disolvente es diagonal, la distancia recorrida por el disolvente será diferente para cada
punto, lo que imposibilitará la comparación visual entre los puntos desconocidos y los de referencia.

11:02 Espere a que

el frente de disolvente llegue a 1 cm de la parte superior de la plancha, luego recupere la plancha,
marque su frente de disolvente y déjela secar tumbada.

11:15
Una vez seca la placa, visualízala con luz UV y en la cámara de yodo y perfila las manchas con lápiz.

11:22
Su material desconocido podría ser una mezcla de compuestos, así que busque cuidadosamente
manchas en línea con las tres manchas de referencia.

11:32 A
continuación, copie con precisión las manchas en el dibujo de la placa.

11:35
En tu cuaderno de laboratorio.

11:37
Medir y registrar la altura del frente del disolvente y de los puntos respecto a la línea de salida.

11:45
Cuando hayas terminado, saca los papeles de filtro saturados de disolvente de los frascos y déjalos
secar en la campana.

11:52
Vierta los disolventes sobrantes en los residuos orgánicos estándar.

11:56
Lava la cristalería siguiendo los métodos habituales de tu laboratorio y guarda el material de
laboratorio.

12:02
Tire las placas de TLC usadas a la basura del laboratorio o con los residuos de vidrio, dependiendo del
material de soporte.

12:09
Por último, una vez secos los filtros, tíralos junto con la basura restante.

12:19
En primer lugar, vamos a calcular los valores de RF para el fenol, el ácido benzoico y el éter de
butilfenol, eluidos con hexano al 100%.

12:29
Para cada compuesto de la placa de TLC, mida la distancia desde la línea de salida hasta el centro de
su mancha y, a continuación, divida este valor por la distancia desde la línea de salida hasta el frente
del disolvente.

12:42
Sólo el éter de butilfenol se movió una distancia mensurable desde la línea de salida, lo que es
coherente con que sea el menos polar.

12:51
Para una separación eficaz, los valores de RF deben diferir entre 0,3 y 0,7.

12:59
Así, podemos deducir que el fenol y el ácido benzoico son dos polares para ser separados
eficazmente por un disolvente apolar como el hexano puro.

13:10
Calcule ahora los valores de RF de la placa que ha analizado en una mezcla 6040 de hexano y acetato
de etilo.

13:18
El acetato de etilo es un disolvente moderadamente polar, por lo que los compuestos viajaron más
lejos y están más espaciados en la placa.

13:28
El orden de separación muestra que el ácido benzoico, el compuesto más polar, tiene la mayor
afinidad por el gel de sílice, y el éter de butilfenol, el compuesto menos polar, tiene la menor afinidad
por el gel de sílice.

13:43
Esto es coherente con la suposición de que los compuestos menos polares viajan más lejos en las
fases estacionarias polares.

13:51 A
continuación, vamos a ver su tercera placa.

13:53
Primero, calcule los valores de FR para la aspirina, el paracetamol y la cafeína.

13:59
Aquí verás que la cafeína, el complejo más polar de los tres, fue el que menos viajó, el paracetamol
fue el segundo que más viajó, mientras que la aspirina, el menos polar, fue el que más viajó.

14:13
Por último, vamos a identificar los compuestos de nuestro material desconocido comparando su
mancha o manchas con las tres manchas de referencia.

14:22 Se
puede ver que el material desconocido de esta placa contenía dos de los tres compuestos:
paracetamol y cafeína.