BACTERIOLOGÍA II

3.2 PERFILES DE RESISTENCIA Y SUSCEPTIBILIDAD A William Calero Cáceres, PhD

ANTIBIÓTICOS EN BACTERIAS
INTRODUCCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS EN LA
MEDICINA HUMANA
REDUCCIÓN DRAMÁTICA DE LA
MORTALIDAD CLÍNICA

Sulfonamida en el tratamiento de la fiebre

puerperal.

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PRODUCCIÓN ACTUAL DE ANTIBIÓTICOS

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TIPOS DE ANTIBIÓTICOS

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USOS DE LOS ANTIBIÓTICOS

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DISEMINACIÓN AMBIENTAL DE ANTIBIÓTICOS

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RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS

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 EVOLUCIÓN DE LA RESISTENCIA ANTIMICROBIANA
Sobreuso de
antibióticos

Diseminación ambiental Crisis en la

Generación de
emergencia de
Errores en prescripción nuevos clones
y/o ausencia de resistencia a
resistentes
regulación Recalcitrancia antibióticos

Deficiencias en la
generación de
nuevos
antibióticos
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“ERA POST-ANTIBIÓTICA”
IDSA Emerging Infections Network-60% participantes mostró un
cuadro de infecciones bacterianas no tratables.

CDC, 2013 – La raza humana se enfrenta a una era “post-antibiótica”

WHO, 2014 – “La crisis de la resistencia a antibióticos está
empezando a ser crítica”.
IDSA-Institute of Medicine- “Resistencia antimicrobiana es una
amenaza sustancial para la salud pública y la seguridad nacional”

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CAUSAS DETALLADAS
Sobreuso Prescripción inapropiada
• Relación consumo de antibióticos y la emergencia y • Errores en el 30%-50% casos
diseminación de nuevas resistencias. • Frecuencia de detección en neumonía: USA 7.6%,
Suecia 89%.
• 30%-60% antibióticos en UCIs son innecesarios.
• Agente, concentraciones, tiempo.
• MIC

Uso agrícola extensivo

Disponibilidad de pocas moléculas
• 80% de antibióticos son para los animales.
• Promotores de crecimiento
• Prevención de infecciones.
• Transmisión de determinantes de resistencia a los
humanos.

Barreras regulatorias
• Burocracia
Ausencia de claridad regulatoria
Diferencias en requerimientos entre países
Cambios en leyes regulatorias
Vías de comunicación inefectivas
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RESISTENCIA INTRÍNSECA

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MUTACIONES

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TRANSFERENCIA GENÉTICA HORIZONTAL
Principales vías de desarrollo evolutivo
0.05-80% genes de bacterias y arqueas implicados en HGT.

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RESISTOMA

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 PRESIÓN EN EL RESISTOMA
E. coli
E. coli (R)
E. coli (R)

E. coli (R)
Antibióticos
Concentración subinhibitoria

E. coli (R) E. coli (R)

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PRESIÓN EN EL RESISTOMA

E. coli (R)
E. coli (R)
Antibióticos
Concentración subinhibitoria

E. coli

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PRESIÓN EN EL RESISTOMA

E. coli (R)
E. coli (R)
Antibióticos
Concentración subinhibitoria

E. coli

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RESERVORIOS Y “REACTORES” DE NUEVAS
RESISTENCIAS

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RESISTENCIA Y SUSCEPTIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS
El principal objetivo de las pruebas de
susceptibilidad a antimicrobianos (PSA) in vitro es
el proporcionar una guía para el manejo
terapéutico de las enfermedades infecciosas a
través de la sensibilidad o resistencia de
bacterias patógenas aerobias y anaerobias
facultativas a diferentes compuestos
antimicrobianos

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TÉCNICAS DE EVALUACIÓN IN VITRO
Test de Kirby Bauer
Ensayo de difusión en disco.

Determinar la sensibilidad o resistencia de una bacteria a

varios compuestos antimicrobianos con la finalidad de asistir a
un médico en la selección del mejor tratamiento a usar en sus
pacientes.

El agente patogénico crece en agar Mueller-Hinton en

presencia de varios antimicrobianos impregnados en discos de
papel.
La presencia o ausencia de crecimiento es un indicador indirecto
de la habilidad de tal compuesto para inhibir el crecimiento.

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TEST DE KIRBY BAUER
Medición de halos de inhibición en mm

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TEST DE KIRBY BAUER
CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE STANDARTS

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TEST DE KIRBY BAUER

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VET01-A4

Para microorganismos
aislados a partir de
animales

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EUCAST

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 E-TEST
PRUEBA EPSILONMETRICA DE RESISTENCIA
Estas tiras contienen un gradiente del antimicrobiano en la
superficie inferior que difunde en el agar estableciendo un
gradiente continuo del mismo a lo largo de la tira. Después de
la incubación se forma una zona elíptica de inhibición del
crecimiento y la CMI corresponde con el punto donde el área
de inhibición del crecimiento intersecciona con la tira.

CMI (concentración inhibitoria mínima): menor concentración

de antimicrobiano capaz de inhibir el desarrollo de una cepa
bacteriana dada.
CBM (concentración bactericida mínima): menor concentración
de antimicrobiano capaz de destruir una cepa bacteriana
dada.

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MÉTODOS BASADOS EN DILUCIÓN
Dilución en agar o microdilución

Determinamos la concentración en el laboratorio incubando una cantidad

conocida de bacterias con diluciones definidas del agente antimicrobiano. Utilizando
los criterios de interpretación del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)
los resultados son interpretados como susceptible, intermedio o resistente.

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 DILUCIÓN EN AGAR

El agente antimicrobiano es incorporado en el

agar en cada placa a una concentración diferente.

El o los microorganismos se inoculan en el medio.

Los inóculos pueden ser aplicados rápida y

simultáneamente a las superficies de agar
utilizando un aparato de replicación del inóculo.

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MICRODILUCIÓN

La prueba de microdilución en
caldo de CIM se realiza en una
placa de poliestireno (MICROTITER)
que contiene aproximadamente 96
celdillas. Una placa puede
contener de 7 a 8 diluciones de 12
diferentes agentes antimicrobianos.

Lector de placas automatizado

Medición de densidad óptica.

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MÉTODOS AUTOMATIZADOS
VITEK (Biomerieux)

Evaluación automática de crecimiento en

función del tiempo.

Perfiles de MIC muy precisos.

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 PUBLICACIONES
Piedra-Carrasco, N., Fàbrega, A., Cornejo-Sánchez, T.,
Mir-Cros, A., González-López, J. J., Calero-Cáceres,
W., ... & Muniesa, M. (2017). Carbapenemase-
producing enterobacteriaceae recovered from a
Spanish river ecosystem. PLoS ONE, 12(4).
Ovejero, C. M., Delgado-Blas, J. F., Calero-Caceres, W., Muniesa, M., &
Gonzalez-Zorn, B. (2017). Spread of mcr-1-carrying Enterobacteriaceae
in sewage water from Spain. The Journal of Antimicrobial
Chemotherapy, 72(4), 1050-1053.
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PANELES RECOMENDADOS POR EL CLSI

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CONTROL DE CALIDAD

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CONTROL DE CALIDAD

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 MICROORGANISMOS DE INTERÉS

* Enterobacteriaceae include: Klebsiella pneumoniae, Escherichia

coli, Enterobacter spp., Serratia spp., Proteus spp., and
Providencia spp, Morganella spp.

Betalactámicos Quinolonas Aminoglicósidos

Tetraciclinas Sulfonamidas

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BETALACTAMASAS
Enzimas que hidrolizan el anillo ß-lactámico
1300 betalactamasas

ESBL Extended Spectrum Beta Lactamases

BLEE Beta Lactamasas de Expectro Extendido

Hidrolizar y causar resistencia a penicilinas, oximino-

cefalosporinas (cefotaxima, ceftriaxona,
ceftazidima, cefepima) y monobactámicos
(aztreonam), pero no a cefamicinas (cefoxitina) ni a
carbapenémicos (imipenem, meropenem y
ertapenem), siendo inhibidas por el ácido
clavulánico.
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 BETALACTAMASAS

(http://www.lahey.org/webt.asp)

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 DETECCIÓN FENOTÍPICA DE BLEE

Estas enzimas hidrolizan cefalosporinas de

tercera y cuarta generación y los
monobactámicos y se inhiben con el ácido
clavulánico (inhibidor de betalactamasas).

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PERFILES DE RESISTENCIA FENOTÍPICA Y GENOTÍPICA DE
SALMONELLA DE ORIGEN AVIAR, PERÍODO SEPTIEMBRE
2017-ENERO 2018
Panel de 21 antibióticos de interés de salud pública y veterinaria.
10 genes de resistencia a antibióticos.
(BLEE, carbapenemasas, colistina, tetraciclina, sulfonamida)
MVZ Elizabeth Sánchez
Tutor: William Calero PhD

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