TRABAJO PRÁCTICO N° 8

METABOLISMO INTERMEDIO. CONVERSIÓN ENERGÉTICA y MITOCONDRIAS

2022

OBJETIVOS
− Analizar los procesos globales de Glucólisis y Respiración en las células.
− Interpretar el rol de las moléculas transportadoras de energía.
− Conocer la estructura y función mitocondrial.
− Visualizar la posición de la mitocondria en un esquema general del flujo de la
materia y de la energía.

UNIDAD DE CONOCIMIENTO

VOCABULARIO ESPECÍFICO DEL TEMA

Glucosa - Glucógeno - Respiración - Fermentación - Aeróbico - Anaeróbico –
Metabolismo intermedio - Anabolismo - Catabolismo - Ciclo - Simbionte -
Coenzima - Gradiente electroquímico – Oxidación/Reducción - Potencial redox -
Transportador - Inhibidor – Desacoplante -Ionóforo - Fuerza Protón-motriz.

CONOCIMIENTOS PREVIOS REQUERIDOS

Principios de bioenergética. Tipos de energías y diagramas de flujo de las
mismas. Reacciones acopladas. Nucleótidos: estructura y funciones.
Mecanismos de transporte a través de membranas. Sistemas de
endomembranas.

TEMARIO
Glucosa como fuente de energía.
Glucólisis: ubicación celular de dicho proceso. Sustratos y productos de la vía.
Rendimiento energético. Fermentación láctica y alcohólica: su importancia
biológica.
Respiración celular. Nucleótidos transportadores de poder reductor.
Ciclo de Krebs: ubicación celular y características generales. Sustratos y
productos de la vía. Su relación con otras vías del metabolismo intermedio:
entrada al ciclo de ácidos grasos y aminoácidos.
Estructura de la mitocondria. Membranas interna y externa: características
estructurales y composición. Permeabilidad. Principales sistemas de
intercambio localizados en estas membranas.
Teoría endosimbiótica. Comparación de la mitocondria con la célula
procarionte.
Matriz: constituyentes. Proteínas importadas del citosol: mecanismos de
importación. Mitorribosomas y ADN mitocondrial: estructuras e implicaciones
biológicas.
Cadena de transporte electrónico; membrana mitocondrial interna como asiento
de dicho proceso. Complejos enzimáticos y transportadores intermediarios
entre ellos; características generales de sus estructuras y funciones. Destino
final de los electrones.
Regulación de la vía. Control respiratorio. Inhibidores metabólicos; mecanismos
de acción de los principales tipos.

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Fosforilación oxidativa: estructura y función de la ATP sintetasa. Acoplamiento
de la fosforilación a la transferencia de electrones. Fuerza protomotriz.
Rendimiento energético; diferencias con los procesos anaeróbicos.
Factores desacoplantes: definición, mecanismos de acción y ejemplos.
Diferencia con los inhibidores metabólicos. Función biológica de desacoplantes
naturales: grasa parda.

BIBLIOGRAFÍA
- Alberts, B. y otros. Biología molecular de la célula. Editorial Omega.
Barcelona, 2004. (Cap. 2 pág. 68 –108, Cap. 12 pág. 678-686, Cap. 14 pag.
767-793).
- De Robertis, Edward M. &Hib, J. “Biología Celular y Molecular”. Editorial
Promed, 2012.
- Lehninger, A. “Bioquímica’. Editorial.Omega.2004
- Blanco, A. “Química Biológica”. 8a Edición. Editorial El Ateneo. 2015

MATERIAL MULTIMEDIA SUGERIDO:

Generalidades y respiración celular:
https://www.youtube.com/watch?v=51o8szLbFfI
Respiración celular:
https://www.youtube.com/watch?v=-xgn0PQK3eQ
https://www.youtube.com/watch?v=4Eo7JtRA7lg
Ejercicios interactivos:
https://www.cerebriti.com/juegos-de-ciencias/partes-de-una-mitocondria

UNIDAD DE ACCION
Se pretende que el estudiante, en su casa, realice la guía de estudio utilizando
la bibliografía seleccionada, y que en clase resuelva los ejercicios de aplicación
con ayuda de los conceptos teóricos y la colaboración del docente.

CUESTIONARIO GUÍA DE ESTUDIO

1-. Respecto a la glucólisis:

a) ¿En que compartimiento celular se produce?
b) ¿Cuál es su función en organismos aeróbicos y cuál en anaeróbicos?
c) ¿Qué entiende por proceso redox y qué ejemplo de ello encuentra en la
glucólisis?

2-. Respecto al Ciclo de Krebs:

a) ¿Cuál es la ubicación celular de dicho proceso?
b) ¿En qué consiste la decarboxilación oxidativa del piruvato? ¿Cuál es su
objetivo? ¿Forma parte dicho proceso del Ciclo de Krebs? ¿Dónde ocurre?
c) ¿Mediante qué otras vías se pueden obtener intermediarios para el Ciclo
de Krebs?
d) ¿Cuál es el rendimiento energético de este proceso?
e) ¿Cuál es la finalidad de este ciclo?

3- a) Esquematice una mitocondria y nombre todas las estructuras que la

componen.
b) Compare el esquema anterior con la estructura de una célula procariota.
Utilice los resultados obtenidos para resolver el ítem c)

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 c) Si su trabajo de tesis se titulara: “La mitocondria como simbionte celular”.
¿Con qué argumento defendería dicha tesis?
d) ¿Cómo justificaría la composición química diferencial entre el espacio
intermembrana y la matriz mitocondrial?
e) ¿Qué características de la composición química de las membranas
mitocondriales explica dicha diferencia?
f) En caso de que la mitocondria pierda su sistema genético funcional,
¿puede la célula sustituirlo?
g) ¿Qué aplicación práctica tiene la existencia de un sistema genético propio
e independiente en la mitocondria?

4- Respecto a la cadena de transporte electrónico y fosforilación oxidativa:

a) ¿En qué compartimiento celular se produce?
b) Realice un esquema de los componentes de dicha cadena.
c) ¿Quiénes transportan específicamente los electrones dentro de cada
complejo y de qué modo lo hacen?
d) ¿Cuál es el destino final de los electrones?
e) En la membrana interna de la mitocondria los complejos enzimáticos
implicados en el transporte electrónico están separados entre sí y no unidos
en forma permanente unos a otros. ¿Cómo es posible entonces la
transferencia de electrones, a una velocidad compatible con la vida, desde el
primer transportador hasta el último? ¿Podría aplicar el modelo de Danielli-
Davson para resolver este problema? ¿Por qué?
f) ¿Sobre la base de qué propiedad de los transportadores y complejos
pueden estos ordenarse funcionalmente?
g) En un sistema de coordenadas grafique cómo varía el potencial redox en
función de la dirección del flujo de electrones en la cadena de transporte.
h) ¿Puede relacionarlo con la variación de energía libre?
i) ¿A qué conclusión arriba a partir de las respuestas anteriores?
j) ¿Mediante qué hipótesis se explica el acoplamiento entre flujo de
electrones y formación de ATP? Explíquela.
k) ¿Cuánto ATP se produce por cada par de electrones transportados por el
FADH2 y NADH hasta la cadena respiratoria?
l) ¿Cuál es la causa de la diferencia entre ambos?
m) ¿De qué modo se ejerce el control respiratorio y en qué consiste?
n) ¿Cuál es el rendimiento energético del proceso de respiración celular?

5- ¿Cuáles son los productos finales de la degradación de la glucosa en

condiciones aeróbicas y anaeróbicas y cuál es el rendimiento energético neto
en cada caso? Plantee las correspondientes ecuaciones balanceadas

6- ¿Qué son y cómo actúan los agentes desacoplantes y los inhibidores de la

cadena respiratoria?

EJERCICIOS DE APLICACIÓN
En esta sección, hemos incluido problemas que relacionan los temas
estudiados en este TP con problemáticas de importancia médica, identificados
con el símbolo:
Al final de algunos de estos problemas encontrará un texto breve identificado
como “Lectura complementaria” que brinda una breve explicación sobre el
tema biomédico que se desarrolla en el mismo. Su lectura no resulta
indispensable para la resolución del problema pero brinda información útil para
su futura formación como médico tanto3generalista como especialista.
1- Observe el siguiente esquema del metabolismo intermedio:
a) Complete el esquema con los siguiente términos y referencias:
glucosa, aminoácidos, ácidos grasos, glucólisis, piruvato, acetilCoA, matriz
mitocondrial, espacio intermembrana, citoplasma, ciclo de Krebs,
transpotadores de electrones, cadena respiratoria, fosforilación oxidativa,
membrana mitocondrial interna, membrana mitocondrial externa.
b) Agregue al esquema los siguientes transportes a través de la membrana
mitocondrial interna
i- O2, ii-ATP/ADP, iii- Piruvato, iv- Fosfato inorgánico (Pi) v- CO2.
Explique de qué tipo de transporte se trata en cada caso y de dónde se
obtiene la energía para impulsarlos en caso de ser necesario.

2. a) Escriba las ecuaciones generales que describen a cada uno de los

siguientes procesos:
i- glucólisis (partiendo de glucosa);
ii- decarboxilación oxidativa del piruvato;
iii- Ciclo de Krebs;
iv- cadena transportadora de electrones y fosforilación oxidativa.
b) ¿Por qué si la oxidación desde un compuesto A hasta otro B libera la misma
cantidad de energía independientemente del número de pasos intermedios

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entre ambos estados, la célula degrada sus combustibles a través de una serie
tan compleja de reacciones enzimáticas (recordar el alto costo de la síntesis
proteica) y no en un solo paso?

3- Se midió la cantidad de ácido láctico que producen dos cultivos celulares

que utilizan glucosa como única fuente de carbono y energía, observándose
que en la célula A la producción es de 100:1 con respecto a la célula B.
¿Cómo puede interpretar esta diferencia si encuentra que ambas células
consumen idéntica cantidad de glucosa por minuto? ¿Cómo será la producción
de energía y el consumo de oxígeno de la célula A con respecto a la B?

4- Señale la premisa correcta y justifique su respuesta.

i- La glucólisis es un proceso:
A) que tiene lugar en el citosol
B) a través del cual se oxida glucosa en ausencia de oxígeno
C) en el cual se generan 4 moléculas de ATP/molécula de glucosa
D) A y B son correctas
E) TODAS son correctas

ii- La fermentación alcohólica:

A) se realiza a nivel de Matriz mitocondrial
B) es un proceso mediante el cual a partir de una molécula de piruvato se
generan 1 etanol y 1 CO2 y se sintetiza una molécula de ATP por fosforilación a
nivel de sustrato
C) es un proceso que permite regenerar NAD+ en condiciones anaeróbicas.
D) B y C son correctas
E) NINGUNA es correcta

iii- En la matriz mitocondrial se encuentran enzimas

A) del ciclo de Krebs
B) que permiten la transcripción y traducción del ADN mitocondrial
C) de la β-oxidación
D) de la decarboxilación oxidativa del piruvato
E) TODAS son correctas

iv- En el ciclo de Krebs

A) se produce la oxidación completa del grupo acetilo del acetil-CoA
B) la mayor parte de la energía liberada se almacena bajo la forma de ATP
C) se consume oxígeno
D) A y B son correctas
E) A y C son correctas

v- La ATP sintetasa
A) cataliza la síntesis de ATP utilizando la energía de la disipación del
gradiente de protones existente a través de la membrana mitocondrial externa.
B) puede bombear protones desde la matriz mitocondrial hacia el espacio
intermembrana utilizando la energía de la hidrólisis de ATP
C) Es un enzima que se puede encontrar en la membrana plasmática
bacteriana
D) A y C son correctas
E) B y C son correctas

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vi- Como resultado del flujo de electrones a través de la cadena transportadora
de electrones
A) se genera un gradiente de [H+] a través de la membrana interna mitocondrial
B) el pH de la matriz mitocondrial es mayor que el del citosol
C) la matriz tiene carga negativa con respecto al citosol
D) se genera la fuerza protón-motriz
E) TODAS son correctas

vii- Un ritmo respiratorio mitocondrial bajo, de tan solo 5 a 10% de la velocidad

máxima es debido a que:
A) La concentración de ADP en el medio es baja y la de ATP elevada.
B) La concentración de ADP y ATP en el medio son ambas elevadas.
C) La concentración de ADP y de ATP en el medio es constante.
D) A y C son correctas
E) B y C son correctas

5- Estudia el caso de un paciente pediátrico de 15 meses que se presenta con

un cuadro progresivo que comenzó con debilidad y dificultad para alimentarse y
que actualmente presenta convulsiones, ataxia, rigidez, retardo en el desarrollo
intelectual y su movilidad y fuerza están disminuidas. Gracias a criterios
clínicos, de imágenes, histopatológicos y de laboratorio llega a la conclusión de
que se trata de una patología debida a la alteración de una proteína
mitocondrial involucrada en la cadena transportadora de electrones.
a) Para la realización de estudios posteriores debieron aislarse mitocondrias
del paciente ¿Qué procedimientos utilizaría con este fin?
b) ¿En qué parte de la cadena respiratoria cree Ud. que se encuentra el
defecto, teniendo en cuenta los resultados que obtuvo al comparar los
siguientes parámetros obtenidos en mitocondrias aisladas del paciente y de 2
individuos control a los que llamaremos “ind. sano a” e “ind. sano b”? Justifique
su respuesta.

Tasa de oxidación de Tasa de oxidación de

Consumo de O2
NADH FADH2

c) ¿Qué órganos se verán más afectados por la presencia de dicha proteína

anómala?¿Por qué? Indique cómo serán los niveles de las siguientes
sustancias (aumentados – normales – disminuidos) en las células afectadas
por la enfermedad:
i- Ácido láctico
ii- NADH
iii- Ubiquinona reducida (ubisemiquinona y ubiquinol)
iv- FADH2

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¿Podría utilizar alguno de los anteriores como marcador sérico de la
enfermedad? ¿Cuál? ¿Por qué?
d) Se observó que en la familia de este niño existían casos de la enfermedad
en parientes de la línea materna. ¿Qué podría decir acerca de la localización
del gen que codifica a la proteína en cuestión teniendo en cuenta que durante
la fecundación prácticamente la totalidad del citoplasma del cigoto es aportado
por el oocito. ¿Cuál es el riesgo hipotético de que el niño pueda transmitir la
enfermedad a su progenie?
LECTURA COMPLEMENTARIA: Las enfermedades denominadas mitocondriales suelen
presentarse tanto en etapa pediátrica como adulta, siendo progresivas y multisistémicas. El
mayor daño es ocasionado a las células de órganos con una alta demanda energética tales
como el cerebro, corazón, hígado, músculo esqueleto, riñón así como alteraciones en los
sistemas endócrino y respiratorio.
Dependiendo de qué células resulten afectadas, los síntomas pueden incluir pérdida de control
motor, debilidad muscular y dolor; desórdenes gastrointestinales y dificultades para deglutir;
crecimiento deficiente, enfermedades cardiacas, del hígado, diabetes, complicaciones
respiratorias, convulsiones, problemas visuales y auditivos, acidosis láctica, retrasos en el
desarrollo y susceptibilidad a contraer infecciones.

6- En el siguiente cuadro se presentan algunos agentes que interfieren con la

fosforilación oxidativa:

TIPO DE COMPUESTO MODO DE ACCION O COMPLEJO

INTERFERENCIA BLANCO AFECTADO

Cianuro
Inhiben el complejo de la citocromo

Monóxido de carbono
oxidasa

Azida sódica

Antimicina
Inhiben el complejo citocromos bc1
Inhibición de la
Carboxina
transferencia de
Myxotiazol
electrones
Rotenona

Ptericidina Inhiben el complejo NADH

Amital deshidrogenasa

Demerol

Oligomicina
Inhibición de la ATP Bloquean el flujo de protones a

DCCD
sintasa través de F0

Venturicidina
+

Valinomicina Ionóforo para K

Termogeninas Moléculas que generan poros en la
membrana interna de las
Desacoplantes mitocondrias

2,4 Dinitrofenol (DNP) Moléculas hidrofóbicas

Dicumarol transportadoras de protones a
través de la membrana
Inhibidores
Atractilósido Inhibe la traslocasa de ATP/ADP
indirectos
Ouabaina Inhibe la Bomba Na /K
+ +

a) Para cada tipo de agente describa detalladamente la secuencia de eventos

que conducen finalmente a la inhibición de la fosforilación oxidativa.
b) Teniendo en cuenta sus mecanismos de acción, complete el siguiente
cuadro indicando el efecto que tendrá la adición de los compuestos indicados
sobre los parámetros celulares presentados en la primera columna.

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 Efecto de la adición de:
CIANURO (*) 2,4-DNP (*)

Síntesis lípidos
Absorción de aminoácidos en células del
epitelio intestinal
Consumo de O2

Producción de CO2
+
Concentración H en matriz
+
Concentración H en espacio intermembrana
+
Gradiente de concentración de H
+
Producción de NADH + H
Degradación de acetil-CoA en ciclo de Krebs
(*) indique su efecto sobre los parámetros celulares en términos de: aumenta –
disminuye – no cambia)

c) Considerando lo respondido en el ítem anterior respecto a los efectos de los

compuestos indicados en el cuadro sobre el gradiente de concentración de H+,
¿cree usted que habrá síntesis de ATP si se aumenta experimentalmente (in
vitro) la concentración de H+ en el espacio intermembrana ?

d) Realice un esquema para comprender cómo se modifica el estado redox si

se produjera la inhibición de la cadena respiratoria a nivel de cada uno de los
complejos. ¿Qué ocurrirá con el estado redox en presencia de un
desacoplante? Justifique en cada caso su respuesta.

7- a) ¿Qué efecto tendrá la utilización de ouabaina sobre la respiración celular?

¿Por qué a este proceso se le denomina inhibición indirecta?
b) ¿De qué manera se altera el consumo de oxígeno en una célula donde la
actividad de la bomba Na+/K+ se encuentra incrementada?
c) Si se destruyeran todas las partículas elementales de las mitocondrias, ¿qué
efecto podría tener sobre dicha bomba? ¿Qué consecuencias traería aparejada
dicha situación sobre el volumen celular? Justifique.

8- Un laboratorio está estudiando la producción de una vacuna contra la

bacteria AHK27. El cultivo celular de dicha bacteria requiere el gaseado con
una mezcla de O2/CO2 95/5% así como el agregado de glucosa como nutriente.
a) Si con el agregado de 1 mol de glucosa por litro de medio de cultivo, éste
sobrevive 12 días, ¿cuál será el consumo de ATP por litro de cultivo y por día?
b) Si Ud. reemplaza el O2 por N2, ¿puede sacar alguna conclusión respecto a
sí su bacteria es aeróbica estricta o anaeróbica facultativa? ¿Cómo?
c) ¿Cuál será el rendimiento de ATP por mol de glucosa en cada caso?

9- Ud. es un estudiante de medicina amante del deporte y como además es un

ferviente seguidor de su equipo de fútbol, siempre comienza a leer el periódico
por la sección deportiva. Para su sorpresa encuentra la siguiente nota
periodística que combina sus dos pasiones el deporte y la medicina:

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En la nota periodística destacan además que el
dinitrofenol es una sustancia muy consumida por
los físicoculturistas debido a que quema las grasas
muy rápidamente sin necesidad de hacer dietas.
Aunque presenta las siguientes acciones
secundarias: Aumento del apetito, excesiva
transpiración, deshidratación, incremento del ritmo
respiratorio y metabólico, puede causar la muerte
por incremento de la temperatura corporal.
Apelando a sus conocimientos como estudiante de
medicina, explique el fundamento biológico para el
uso de esta droga tan peligrosa y cuyo uso está
terminantemente prohibido. ¿Cómo se explican
todos los efectos mencionados en la nota?