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NOTA DE APLICACIÓN

Espectroscopía UV/Visible

Autor:

Kathryn Lawson­madera
Ian Robertson

PerkinElmer, Inc.
Vidente verde

Determinación del color del vino

y contenido total de fenoles
Introducción
Uso de la PDA LAMBDA Históricamente, la evidencia más antigua

de vinicultura data de hace

Espectrofotómetros UV/Vis aproximadamente 8.000 años y en todo el

mundo se ha vuelto cada vez más

frecuente en los últimos años. El

La expansión de los mercados y de los productores ha resultado en una intensificación de los métodos utilizados

para garantizar la seguridad del producto y la calidad del vino.

El vino contiene más de 600 sustancias nutricionales, entre ellas vitaminas, ácidos orgánicos y, lo que es más

importante, polifenoles. Las semillas y la piel de la uva proporcionan una valiosa fuente de polifenoles y, con el

creciente interés en sus propiedades antioxidantes para mejorar la salud, la investigación se ha acelerado en los

últimos 15 años. Los beneficios clave encontrados han sido ayudar a prevenir la edad y las enfermedades

cardiovasculares al prevenir la oxidación de las lipoproteínas de baja densidad (LDL).1

La versatilidad de los espectrofotómetros UV/visible LAMBDA™ 265 y LAMBDA 465 PDA de PerkinElmer

permite cuantificar el contenido total de fenol en los vinos y también medir el color del vino para determinar la

calidad y cualquier posible contaminación.

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Medición de la intensidad y el tono del color del vino

La calidad del vino y su posible contaminación se pueden observar Ecuación 1.

cuantificando la "intensidad del color del vino" y el "tono del vino". Un Intensidad del color del vino = A420 + A520 + A620
método sencillo para determinar la "intensidad del color del vino" utilizando el
Ecuación 2.
instrumento LAMBDA 265 es establecer una ecuación para calcular la suma de
Tono vino = A420 / A520
la absorbancia de tres longitudes de onda que ocurren en la región visible,
típicamente 420 nm, 520 nm y 620 nm. Un parámetro adicional a calcular es Resultados
el 'Tono del vino', que se ejecuta cambiando el cálculo de la ecuación para obtener
La Figura 2 muestra los espectros de siete muestras de vino tinto, y los
la relación de absorbancia a 420 nm y 520 nm (A420/A520).
valores de absorbancia correspondientes para calcular la 'Intensidad del color
del vino' y el 'Tono del vino' se presentan en la Tabla 1. Como se muestra en la
Reactivos y aparatos
Figura 2, todos los espectros de absorción tienen la misma característica espectral.
1. Muestras de vino tinto
características, aunque con valores de absorbancia variables. Además, se observa
2. Agua desionizada (DI) una variación en la 'Intensidad del color del vino' y el 'Tono del vino' para todos los
vinos, como se muestra en la Tabla 1.
3. Espectrofotómetro visible/UV PDA LAMBDA 265

(o LAMBDA 465)

4. Software UV Lab™

5. Cubetas (paso óptico de 1 cm)

Experimental

Utilizando el software UV Lab, los parámetros del instrumento LAMBDA

265 se configuraron como se muestra en la Figura 1. El método inicial se
estableció para registrar la 'Intensidad del color del vino', como se muestra en la
Ecuación 1. Se configuró un cálculo adicional para calcular el 'Tono del vino'.
como se muestra en la Ecuación 2.

Las muestras de vino tinto se diluyeron en un factor de 5 y se midieron en un

Figura 2. Espectros UV/Vis de muestras de vino tinto.
LAMBDA 265 con una cubeta de cuarzo estándar de 1 cm de paso óptico.
Utilizando agua desionizada como blanco, el instrumento se puso a cero y cada Tabla 1. Intensidad del color del vino y Tono del vino de muestras de vino tinto utilizando LAMBDA 265.
muestra de vino tinto se analizó por turno utilizando los métodos "Intensidad Color Vino
Vino Absorbancia a Absorbancia a Absorbancia a
del color del vino" y "Tono del vino". Intensidad
Matiz 420 nm 520 nm 620 nm
(Au)

vino tinto 1 2.095 0,787 0.814 1.034 0.247

vino tinto 2 0,889 0.840 0.367 0,437 0.084

vino tinto 3 1.274 0,694 0.469 0,676 0.130

vino tinto 4 1.048 0.862 0.438 0.509 0.101

vino tinto 5 1.122 0.831 0.463 0.557 0.102

vino tinto 6 1.376 0,792 0.548 0,692 0,136

vino tinto 7 1.259 0.834 0.517 0.620 0,122

Contenido total de fenoles del vino

El ácido gálico, un tipo de compuesto fenólico, es un estándar común utilizado

para determinar la concentración de fenol de varios analitos, como los
fenólicos que se encuentran en el vino. El ensayo de Folin­Ciocalteau (FC)
utiliza un reactivo redox (una mezcla de fosfomolibdato y fosfotungstato) para el
ensayo colorimétrico. Tras la reducción del reactivo FC, se desarrolla un complejo
de color azul (cromógeno) que se absorbe fuertemente a 740 nm y, por lo tanto,
puede detectarse espectrofotométricamente.2 Como resultado, la
concentración total de fenol de las muestras de vino puede cuantificarse
mediante el espectrofotómetro UV/Vis LAMBDA PDA. .

Figura 1. Parámetros del instrumento y configuración del método.

2
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Reactivos y aparatos Resultados

1. 5 muestras de vino tinto y 2 muestras de vino blanco

Las Figuras 4 y 5 muestran los espectros y la curva de calibración de los
2. agua desionizada estándares de ácido gálico respectivamente. El coeficiente de regresión lineal
(R2 ) obtenido de la curva de calibración, que se muestra en la Figura 5, es
3. Espectrofotómetro visible/UV PDA LAMBDA
mayor que 0,999, lo que indica un alto nivel de correlación de datos.
465 (o LAMBDA 265)

4. Software de laboratorio UV

5. Cubeta (paso óptico de 1 mm)

6. Soluciones de 0 ­ 500 mg/L de ácido gálico

7. Reactivo de Folin­Ciocalteu 0,2 N

8. Solución saturada de carbonato de sodio.

Experimental
Utilizando el software UV Lab en modo Cuantificación, los
parámetros del instrumento LAMBDA 465 se configuraron como se
muestra en la Figura 3.

Figura 4. Espectros UV/Vis de estándares de calibración de ácido gálico.

Figura 3. Parámetros del instrumento para la medición de fenol total.

Las muestras de vino tinto se diluyeron por un factor de 6, mientras que no

se requirió dilución para las muestras de vino blanco. Cada uno de los
estándares de concentración conocida (0 – 500 mg/L de ácido gálico) y
muestras de vino diluidas desconocidas se trataron de la misma manera
antes de la medición. Inicialmente se añadieron 5 ml de reactivo FC a 1 ml
de cada uno de los estándares y muestras y se dejó un tiempo de espera
R^2: 0,99973 Función: Y = 9,30E­0,4X + 4,41E­03
de 3 ­ 5 minutos. A continuación se añadieron 4 ml de Na2NO3 y se dejaron
las soluciones durante dos horas. Se construyó una curva de calibración

tomando la absorbancia de cada uno de los estándares a 740 nm. Finalmente

se midieron los valores de absorbancia de cada una de las muestras de Figura 5. Curva de calibración de estándares de ácido gálico.
vino, permitiendo así determinar la concentración de fenoles totales.

3
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Cálculo de la concentración total de fenoles en el vino Conclusión

Utilizando la curva de calibración de la Figura 5, se obtuvo la
concentración de fenol total de cada muestra de vino como
se muestra en la Tabla 2. En el caso de las muestras de vino tinto,
fue necesario tener en cuenta el factor de dilución de 6 y
por tanto, la concentración de fenol determinada a partir de la
curva de calibración se multiplicó por el factor de dilución. Se
observó que las muestras de vino tinto presentaron una mayor
concentración de fenoles totales, oscilando entre 1000 ­ 3000 mg/
L, mientras que los vinos blancos oscilaron entre 200 ­ 300 mg/L.
Tabla 2. Concentración de fenoles totales en muestras de vino tinto y blanco.
Concentración (mg/ Absorbancia a
740 nm
L)
La versatilidad de los instrumentos es cada vez más importante para
ayudar a optimizar el gasto de capital y el espectrofotómetro UV/Vis
LAMBDA 265 PDA de bajo costo ha demostrado ser un instrumento
particularmente versátil para múltiples aplicaciones, todo ello
utilizando un espacio mínimo en la mesa de trabajo. El funcionamiento
del instrumento es sencillo con el software UV Lab y en el ejemplo
anterior, los espectros de los vinos se obtuvieron rápidamente y la
intensidad del color del vino y el tono del vino se determinaron
mediante cálculos de ecuaciones simples. La cuantificación del
contenido de fenol total en vinos también se puede determinar utilizando
el LAMBDA 265. El LAMBDA 465 ofrece mayor sensibilidad para
Original
Dilución estas mediciones y es el instrumento ideal para una variedad de
Concentración (mg/
Factor
L) aplicaciones más exigentes en entornos de investigación y pruebas de rutina.

vino tinto 1 453.69 0,427 6 2722.14

Referencias
vino tinto 2 332,99 0.314 6 1997.94
1. Scalbert, A; Johnson, yo; Saltmarsh, M. (2005) Polifenoles:
vino tinto 3 198,84 0,189 6 1193.04 antioxidantes y más. Moléculas. 81 (1).
vino tinto 4 397,80 0.375 6 2386.80
2. Blainski, A; Lopes, GC; Palacio de Mello, JC. (2013)
vino tinto 5 169,72 0.162 6 1018.32 Aplicación y Análisis del Método de Folin Ciocalteu para la
Determinación del Contenido Fenólico Total de Moléculas
Vino Blanco 6 277,63 0.263 1 277,63
de Limonium Brasiliense L. 18 (6).
Vino Blanco 7 210.02 0.200 1 210.02

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