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Técnicas de Siembra de un Medio de Cultivo

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MÉTODOS PARA AISLAR CULTIVOS PUROS
Técnicas de siembra por estrías en placa

Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de
siembra se toma una muestra de la población mixta y se hacen estrías sobre la superficie de un
medio sólido preparado en una placa Petri. Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa,
cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, se
flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra
con la misma técnica,

Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo viene a ser un cultivo puro.
Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada cultivo se observa al microscopio o
mediante cultivo para verificar que es puro

1. Siembra con rastrillo

2. Siembra con asa de cultivo

• Diseminación de superficie
• Agotamiento de superficie

Tubos en profundidad o picada

3. Siembra con torula

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Técnica de extensión en placa:

Las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de agar, extendiéndolas

con ayuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. La suspensión se absorbe en el agar, dejando las
células microbianas sobre la superficie. Como en el método de siembra por estría, no existe la
seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el agar
solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita
el proceso.

MÉTODOS GENERALES:

1) Siembra por dilución:

Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y
se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriológico, se agita, con
movimientos moderados.

2) Siembra por estrías en superficie:

Se siembra el material en la superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende
por toda la superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material
a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte
más profunda de la superficie inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del
tubo.

3) Siembra por estría por agotamiento:

Con este procedimiento se puede conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas
fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en la caja de Petri y se deja solidificar.
Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga
sobre la superficie del medio formando estrías.

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4) Por picadura o punción:

Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio
semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual
la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.

5) Siembra en TSI:

(Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa,
sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo fenol. En este medio sembraremos por
picadura y estrías en superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirán en
superficie y profundidad.

TÉCNICAS DE SIEMBRA (TUBO)

Siembra por inoculación o agitación:

Con un asa bacteriológica, esterilizada, se toma cantidad de inoculo, se introduce en el centro del
medio líquido, agitándose, no tocando la pared del tubo.

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Siembra por estría (en tubos de agar inclinado):

Muestra de material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por superficie más profunda.

Siembra por picadura:

Asa recta, tomar la muestra, sembrar en agar semisólido, en el tubo de ensayo hasta que la muestra
quede bien impregnada al agar.

Siembra por vertido en placa:

Diluciones en varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilución, agregar tubo de ensayo estéril, se
agrega medio licuado, mantener a 55°C, movimientos rotatorios, solidificar.

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