Proyecto Conicet MDP - Canntek Sa

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PROYECTO DE INVESTIGACION Y DESARROLLO PARA LA PRODUCCION DE

CANNABIS SATIVA
Título del proyecto
"Proyecto de estandarización de producción de extractos de Cannabis con

propiedades medicinales"
CANNTEK S.A. es una empresa biotecn °lógica conformada por un equ ipo mu Itidisciplinado
con experiencia de varios años en el estudio, cultivo e industria del Cannabis con fines
industriales y medicinales en la República Oriental del Uruguay yen el ámbito del territorio
nacional argentino.
A raíz de las experiencias satisfactorias recolectadas en el desarrollo de la actividad, es

C7,5
que tenemos como objetivo adaptar las técnicas de producción de Cannabis a la realidad
argen tina. A través de la experiencia adquirida, tenemos la capacidad de producir Can nabis
en forma estandarizada. Es decir que, a través del control de los parámetros de producción,
logramos la estandarización de la genética vegetal, lo que conlleva a producir variedades
con niveles consistentes de cannabinoides, flavonoides y terpenos. La estandarización
garantiza una composición de dosis uniforme, permitiendo a los pacientes y médicos
suscriptores poder adaptar la dosis correspondiente a cada prescripción.
Es por esta razón que lograr llevar adelante programas de investigación con institutos
nacionales, universidades, cooperativas cannábicas y ONGs nos permitiría probar la
seguridad, eficacia y resultados a través de múltiples ensayos clínico.
La misión de nuestra empresa es poder implementar nuestra experiencia y trayectoria en
la investigación y producción de Can nabis medicinal an Argentina, para lo cual entendemos
que este proceso debe ser certificado siguiendo los estándares más altos de calidad a nivel
internacional. Para esto último, las guías que marcan nuestro trabajo son aquellas que se
encuadran como BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS Y DE RECOLECCIÓN PARA
PLANTAS MEDICINALES Y BUENAS PRÁCTICAS DE FABRICACIÓN (GMP).
La realidad argentina actual en relación al nuevo mercado incipiente, pero plospero y las
últimas actualizaciones normativas en la materia nos brinda la posibilidad de realizar
nuestro proyecto en el país.
Por otra parte, las investigadoras del CONICET, la Dra. Sandra Churio y Dra. Alejandra
Fanovich forman parte de la Red Argentina de Investigadores en Cannabis Medicinal
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(RACME) desde su creación y son asesoras científicas de la ONG Cannabis Medicinal
Argentina (CAMEDA). Asimismo han participado como docentes colaboradoras en el
dictado del "Curso de formación sobre Cannabis sativa: De la planta a la formulación",
actividad de posgrado que se ofrece en la FCEyN de la UNMDP.
Sus antecedentes científicos en la temática se ven reflejados en la redacción de dos

capítulos de libro sobre Cannabis medicinal:.
"Ramírez C.L., M.A. Fanovich, M.S. Churio, "CANNABINOIDS: extraction methods,

analysis and physicochemical characterization", Chapter in Studies in Natural Products
Chemistry, Ed. Atta-u r-Rahman (2019) Elsevier, Vol.61, 143-173, ISSN 1572-5995, ISBN
9780444641830.
"Fanovich, M.A., Churio, M.S., Ramirez, C.L., "Medicinal cannabis: Pharmaceutical forms
and recent analytical methodologies", Chapter in Comprehensive Analytical Chemistry,
2020, 90, pp. 31-63. ISBN: 978-0-444-64341-4.
La Dra. Luciana Barbini tiene experiencia y antecedentes en el estudio de la actividad

biológica de extractos de diferentes plantas, en relación con la actividad citotóxica,
antitumoral antiviral en la salud humana. Sus investigaciones han sido plasrnadas en
diversas reuniones y publicaciones científicas, como ser:
Kott V, Barbini L, Cruañes M, Muñoz J de D, Vivot E, Martino V, Ferraro G, Cavallaro L,
Campos R. Antiviral activity in argentina medicinal plants. Jou m al of Ethnopharmacology

1999; 64:79-84.
Barbini L, Lopez P, Ruffa J, Martino V, Ferraro G, Campos R, Cavallaro L. In duction of
apoptosis on human hepatocarcinoma cell lines by an alkyl resorcinol isolated from

Lithraea molleoides. VVorld Jou rn al of Gastroenterology. 2006 Oct 7; 12(37):5959-63.
Martínez MJ, Andreu. A, Barbini L. Plan t polyphenolic extracts as potential human anti-
hepatocar-cinoma agents. Minireview, Plant Science Today 2014 Oct 1(4): 213-218.
http://dx.doLorg/10.14719/pst.2014.1.4.62
I Martínez MJ, Barbini L, Andreu AB. Chemical cha 'racterization of polyphenol extracts
from Andean and industrial Solanum tu berosum tu bers and their cytotoxic activity on
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•
h u man hepatocarcinoma cells. SDRP Jou mal of Food Science and Technology, 2018
Feb; 2(4205-217. Epub: Dec 2017. doi:10.25177/JEST.2.2.5.
Dentro de ese marco, ya los fines de ejecutar en forma conjunta y articulada los objetivos
dispuestos por la Ley Nacional 27.350/17 y la ley provincial 14924 , las partes acordaron
firmar el Convenio marco de cooperación: Convenio PR5679 (CONICET- CANNTEK S.A.),
Proyecto Desarrollo de productos controlados de Cannabis para us.o medicinal. EX-2022-

128192889-APN-GVT#CON ICET.
Por todo lo mencionado se tiene corno objeto inmediato solicitar a los organismos
nacionales correspondientes la Homologación del convenio de I+D celebrado entre
CANNTEK S.A Y CONICET para materializar dicho proyecto de investigación del
cultivo de Cannabis.
Se adjunta convenio aprobado de I + D entre CONICET y CANNTEK S.A., anexos 1 y

2 y adenda al convenio original.-
1.1 OBJETIVO GENERAL
Estandarizar la producción de extractos de Cannabis con propiedades medicinales en total

acuerdo con la normativa nacional vigente, siguiendo las directivas de la Organización
Mundial de la Salud (OMS) en materia de buenas prácticas agrícolas y de recolección de
plantas medicinales; y desarrollar nuevas formas de administración de extractos de
Cannabis medicinal.
1.11 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Al- Desarrollar técnicas que permitan el cultivo det:Variedades de Cannabis sativa y el

desarrollo del perfil genético de las variedades para su posterior aplicación en mon itoreo
de la descendencia. Estudiar la adaptabilidad de variedades de Cannabis de diversas
latitudes a la zona propuesta.
A.2- Desarrollar un protocolo estandarizado de obtención de extractos de Cannabis a partir

de tecnologías limpias. Estudiar y optimizar el proceso de obtención de extractos de
Cannabis utilizando tecnología de fluidos su percríticos. Comparar la eficiencia del método
con métodos convencionales de extracción.
A3.- Realizar una caracterización completa de los extractos obtenidos
A3a. Caracterización química.
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e
-Caracterizar y cuantificar por técnicas analíticas cromatográficas (HPLC y/o CG-p1S) los
componentes can nabinoides y terpénicos de los extractos de Can nabis sativa obtenidos
por distintas metodologías.

-Evaluarla capacidad antioxidante de los extractos en base a reacciones de inhibición de
especies radicales de prueba mediante Resonancia Paramagnética Electrónica (EPR). -
Determinar la estabilidad de los extractos en presencia y ausencia de iluminación ambiente
y saturación con aire.

-Explorar la capacidad de los extractos de fotosensibilizar la formación de especies
reactivas de oxígeno mediante irradiación con luz visible.
A3b. Caracterización biológica. Evaluar actividad citotóxica y antiviral.
-Determinarlas concentraciones citotóxicas de los extractos en diferentes líneas celulares
tu morales humanas, representativas de distintos tipos de cáncer.
-Establecer los mecanismos moleculares implicados en la actividad citotóxica.
-Determinar las concentraciones inhibitorias de la replicación viral de diferentes virus
humanos de importancia médica. -Establecer los mecanismos moleculares implicados en
la actividad antiviral.
A.4- Obtener prototipos de productos derivados de Can n abis.
Elaborar un protocolo para la preparación de aceites de Can n abis con concentraciones
controladas de los principios activos mayoritarios y contrastabsu bipeguivalencia con
productos certificados internacionales. Diseñar y evaluar la potencialidad de obtener
micropartícu las para contener los principios activos de cannabis.
11. DESCRIPCIÓN TÉCNCA DEL PROYECTO.
11,1 Etapas del proyecto

ETAPA 1
1) Cultivo de material biológico
1.a) Cultivo CANNTEK (la empresa es la responsable de esta actividad) z
La empresa es la responsable de la producción inicial del material vegetal para dar inicio a
la secuencia de actividades. A continuación, se brindan detalles de los materiales de
partida,.formas de cultivo, espacio disponible entre otros aspectos para generar el material
inicial.
Material de origen:
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Se utilizará germoplasma nacional de origen desconocido para trabajar en su
fitomejoramiento y lograr a posteriori su inscripción dentro del registro de variedades de
cannabis de INASE. La resolución que habilita a no declarar el origen de este tipo de
germoplasma es la Resolución Conjunta INASE - Ministerio de Salud N° 5/2 021.
Se importarán semillas del banco trilogene seeds y Dinafem Seed variedades tanto altas
en CBD y bajas en THC como altas en THC y bajas en CBD, esto para poder experimentar
con diferentes combinaciones de ambos can nabinoides dominantés para buscar la mejor
eficiencia en diferentes patologías.
Estas variedades pueden encontrarse sujetas a disponibilidad y a que el banco de semillas

esté dispuesto a enviar al país. Dg ser esto imposible se buscará otro banco de semillas
que pueda proveer semillas de similares características. Asimismo, las variedades pueden
ser modificadas con el fin de poder atender mejor las patologías necesarias, según se
converse con los diferentes entes in vorucrados. Cabe aclarar que simplemente se muestran
las variedades que se podrían conseguir con el fin de mostrar el interés de trabajar con
variedades que tengan fines medicinales.
Actualmente CANNTEK ha iniciado el trámite frente a INASE para darse de alta en el

Registro Nacional de Comercio y Fiscalización de Semillas (RNCyFS) como criadero de
semillas de can n abis. La selección del germoplasma y sus variables está a cargo del Ing.
Agrónomo Ignacio Luis Álvarez, matrícula 02528, resposable técnico del proyecto y frente
a INASE.
Técnicas de cultivo:
El Cannabis es una planta que se puede cultivar con distintas técnicas, nosotros
proponemos comenzar este proyecto con algunas ya utilizadas anteriormente en proyectos
anteriores (desarrollados en Uru guay) como son las teon icas de cultivo en invernaderos tipo
macrotunel, de tipo "palo y nailon" y parcelas a cielo abierto. En los invernaderos se
probarán métodos de cultivo en suelo orgánico vivo y cultivo hidropónico. Comenzando por
las más sencillas y probando con otras a medida que se crea conveniente.
Los hongos, insectos, bacterias y el estrés climáticos son los enemigos número uno de un
producto de calidad farmacéutica, es por ello que es de fundamental ifliportancia la
utilización de correctas técnicas de cultivo, la implementación de suelo vivo, hongos
benéficos, micorrizas y fertilización orgánica para lograr los estándares más altos de
calidad.
A continuación describiremos brevemente la técnica de cultivo en invernadero y a cielo

abierto que son las que se estiman más convenientes.
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Cultivo en invernadero:
La técnica de cultivo de can nabis en invernadero tipo macrotunel provee beneficios no sólo.
a nivel de cultivo sino también a nivel económico. Esta técnica consiste en la construcción
de invernaderos, con cubierta translúcida para poder aprovechar la 'luz solar al máximo
dismin u yendo el uso de luz artificial, ayudando con la protección del invernadero a controlar
plagas, humedal] y temperaturas requeridas por el cultivo. Se puede acompañar este
invernadero de focos de luz artificial para simulár las condiciones climáticas requeridas por
el cultivo en condiciones que el clima de la zona no los provea. También se puede contar
con sistemas de black out cuando se requiera regular las horas de luz que se desea que la
planta se encuentre expuesta para poder obtener el mejor rendimiento de cada cultivo.
Además, este tipo de invernadero debe _equ iparse con sistemas de ventilación natural y/o
forzada, sistemas de humidificación, calefacción por agua y/o aire caliente, así como
sistemas de control de clima, riego y fertirrigación. El cultivo en invernadero puede ser
llevado a cabo en macetas o a tierra directa, nosotros buscaremos utilizaramhos para poder
estudiar mejor las adaptabilidades de la planta a la zona con diferentes metodologias,
aprovechando los beneficios que cada una posee.

Cultivo a cielo abierto:
La técnica de cultivo a cielo abierto si bien se encuentra más limitada en materia de control
de la planta, provee numeroso beneficios a fin de obtener un cultivo de mayor tamaño.
Consiste en la obtención de plantin es de tamaño adecuado para que no sea vulnerable al
exterior, ubicado en parcelas de tierra para que puedan desarrollar raíces y tamaños
mayores que el que se lograría en las condiciones limitantes de una maceta. Esto limita a
plantar en diferentes épocas del año para poder aprovechar al máximo las condiciones
climáticas naturales, cuales Serán analizadas por el equipo técnico para determinar
cuáles son las más propicias para la zona. Se utilizará una superficie aproximada de 3000
m2 para la producción a cielo abierto..
llhétodo de producción:
Una vez obtenidas las semillas, las mismas se germinarán en un área especial para esta
-tarea.
A través de una selección rigurosa se elegirán las mejores plantas, teniendo en cuenta el
tamaño y el desarrollo que-las mismas vayan presentando. Estas serán trasladadas a otra
habitáculo, y se encontrarán en etapa de vegetación el tiempo necesario para poder obtener
la cantidad de esquejes requeridos para cumplimentar con el ciclo siguiente (los esquejes
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seleccionados de germoplasma nacional de origen desconocido se utilizarán además para
trabajar en su fitomejoramiento).
A medida que vamos obteniendo los esquejes los mismos serán colocados en pequeñas
macetas con tierra o jiffys donde las mismas se colocarán en las condiciones de
temperatura y humedad necesaria para poder generar las raíces propias. Una vez
desarrollados los esquejes y encontrándose en las condiciones necesarias para poder ser
trasplantadas las mismas se irán acomodando en macetas de un mayor tamaño dentro de
los invernaderos, yen la parcelas de exterior, para comenzar su desarrollo.
Dentro de los Invernaderos se instalarán distintos paneles de luz artificial que ayudarán al
crecimiento y desarrollo de las plantas en cuanto se necesite. Se buscará siempre utilizar
la menor cantidad de luz artificial necesaria, teniendo en cuenta que a mayor uso energético
mayores costos y mayor contaminación. Las plantas que se encuentren en parcela exterior
se acomodan en hileras, dejando un/paso entre hilera e hilera para poder revisar cada
planta en particular Y tener un control exhaustivo de las mismas debido a que el control en
exterior en cuanto a plagas o problemas de suelo puede ser de mayor complicación que
interior. Dicho esto, sabemos que el control en interior puede generar complicaciones en
cuanto a condiciones de humedad o temperatura que serán controladas con distintas
tecnologías, pero permite un mayor control para un mejor desarrollo, y en el. exterior el
desarrollo puede llegara presentar otras complicaciones las cuales serán estudiadas.
Una vez completado el ciclo de las plantas, las mismas serán cortadas y colocadas en un
cuarto de secado, donde tendrán que permanecer un tiempo estipulado de
aproximadamente un mes para completar el proceso de secado y curado. Este proceso
debe ser llevado a cabo en unas condiciones de humedad relativa del ambiente de 45% a
60% para prevenir la aparición de patógenos y a una temperatura de 15 y 18°C para
prevenir que se volatilicen diversos compuestos químicos.
Una vez que el porcentaje de humedad de la materia prima alcance el 10% de humedad,
se procederá al corte de flores (cogollos), los cuales serán separados de los tallos y las
hojas, proceso al cual llamaremos manicura o trimmeado. En este proceso una persona
con una tijera o una maquina separa los cogollos del resto de las plantas pudiendo así
separar las diferenies partes de la misma. Terminado el proceso de manicur, los cogollos
serán guardados en un habitáculo que presente las condiciones necesarias de temperatura
y humedad para su almacenamiento hasta que tengan que ser enviados al laboratorio
correspondiente para si estudio y producción de extractos.
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Es imposible realizar una estimación anticipada en relación con la cantidad de plantas y

definición de cuadros de cultivo por m2 , ya que las mismas se definen en función de
variables que se tienen en cuenta al momento exacto de su último trasplante.
Gestión de plagas
En cuanto a la gzstion de plagas, buscaremos tratar las mismas con insecticidasorgánicos,
siendo que tratamos con materia que en su posterioridad serán utilizadas Como objeto para
productos medicinales.No se puede detallarlos productos a ufilizardebido a que como nos
encontramos en etapa de investigación, se desconocen las plagas y otros tipos de
malestares que pueda presentar el cultivo en la zona en cuestión.
Gestión de residuos
En materia de residuos, sabemos que la planta de Cannabis tiene numerosos usos, no solo
en cuanto a usos medicinales sino también en numerosas industrias como la textil o
energética, por lo tanto lb que podríamos catalogar como residuos (tallos y hojas) serán
eventualmente entregados a los grupos de investigación asociados a este proyecto para
investigar nuevos y mejores usos.
En caso de tener excedente, los residuos serán depositados y acopiados en un sector
donde se estará generando tierra nueva, con mecanismes de compostaje. Esto nos
permitirá reciclar los residuos obteniendo tierra que será luego utilizada en la misma
plantación ,mejorando el suelo en el que se encuentran las plantas para su mejor desarrollo.
-frez abilida
Teniendo en mira la certificación en el momento oportuno de BUENAS PRACTICAS
AGRICOLAS (BPA) y BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA (BPM) (Disposición
3602/18 ANMAT, Disposición 3827/18 ANMAT) es que se implementará un sistema de
trazabilidad en la que cada plantín será etiquetado con un código de identificación para
poder realizar un seguimiento desde la semilla hasta la inflorescencia der'cannabis. El
manejo de la documentación en forma sistematizada colabora en la mejora cualitativa y
cuantitativa en la producción, y permite la evaluación de resultados frente a distintas
decisiones estratégicas y ayuda a la creación de confianza en la industria del carin abis.
Espacio físico (CANNTEK)
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CANNTEK cuenta con un predio de - 5 hectáreas, circunscripto este último dentro del
establecimiento estancia "La Trinidad", Ruta 2, km 396, (CP 7612) Carnet, Partido de
General Pu eyrredón,
cual se destinará para el desarrollo y ejecución del presente convenio.

Serán montados dos invernaderos, uno de tipo "palo y nylon" de aprox. 300 m 2 y otro con
alta tecnología de tipo macrotunel con acero galvanizado de aprox. 300 m 2. Con este último
tipo de invernáculo se intentará probar una mayor eficiencia en el control climático, ya que
más allá de sus características técnicas que permiten un mejor movimiento en el flujo del
aire, se instalarán equipos específicos de control climático, tales como iluminación artificial,
sistema de "black out", ventilaciónlY extracción forzada de aire, sistemas de aspersión de
vapor de agua y riego por goteo.
Por último, se instalará un espacio adecuado para el procesamiento de la materia vegetal

de alrededor de 40 m2 . Allí se realizará el corte, secado, cu rado":"' cierre al vacío, acopio y
almacenaje tanto de materia primas como de productos elaborados. El mismo será

equipado con sistemas de control de humedad, temperatura y flujo de aire, a fin de alcanzar
un rango de HR entre el 45 % a 55 'Yo y una temperatura de 16 a 19 °C.
Seguridad
CERCO PERIMETRAL: Un anillo de seguridad con un cerco olímpico romboidal de 2

pulgadas, 2 metros de alto y 2 filas de alambre de púas con postes cada 3 metros. Todo el
perímetro alambrado se encontrará cubierto con lona marítima para mayor seguridad.
Contará con portón automático, portero eléctrico y mon itoreada por cámaras para evitar
posibles ingresos no autorizados mientras ingresa el personal o proveedores.
CCTV: Se instalará un circu ito cerrado de 7 cámaras IP de alta resolución y visión nocturna
en todo el perímetro, interior de invernaderos y oficinas que se controlan desde el búnker
de seguridad. Las grabaciones se alojan en un lugar :
Seguro de las instalaciones con copia
en la nube por cualquier eventualidad.
BUNKER: En el predio se construirá un bunker para alojar el personal de seguridad desde

donde se monitorean las cámaras de seguridad, accesos etc., con comunicación
independiente y también están provistos de botones de pánico para guardils y personal
permanente que se conectan vía telefonía celular con la Comisaría de la zona.
ALARMA: El perímetro exterior de los invernaderos contará con barreras infrarrojas, el
interior de estos contará con sensores de movimiento que disparan una alarma lumín ica-
son ora en todo el predio y al bú n kerde seguridad. La alarma estará conectada con la Policía
de la zona.
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1.b) Cultivo modelo indoor (la empresa es la responsable de esta actividad junto
con la Dra. Fanovich)
Se procederá %armar un cultivo indoor de aprox. 60 m2 en el 4to piso del INTEMA,

ciudad de Mar del Plata. El mismo tiene comd objeto producir infiorescerícias de Cannabis
con los más altos estándares de calidad, controlando todos los factores ambientales de
manera artificial.
Dichas instalaciones disponen de: Iluminación artificial (led y hps), sistema de filtrado de
agua por osmosis inversa, sistema de riego por goteo, climatización con sistema de aire
acondicionado y ventilación forzada a los fines de regular las condiciones de humedad y
temperatura interna
Se contará con una sala de germinación, lugar en donde se germinarán las semillas y se
reproducirán 'esquejes de plantas madre seleccionadas (reproducción asexuada),
integrada esta última a una sala para crecimiento vegetativo de aprox: 20 m2 , una sala
de floración de aprox. 30 m2 y una sala de corte y secado de aprox. 10 m2 .
Sistemas de cultivo en indoor
Por un lado, se cultivará en macetas con sustrato vivo buscando un producto final
agroecológico. Para la mezcla del sustrato se utilizará humus, tierra, turba, perlita,
micorrizas, trichodermas, distintos hongos benéficos, algas marinas y microorganismos
eficientes. Se utilizarán fertilizantes orgánicos garantizando un óptimo desarrollo de las
raíces y de la masa vegetak- El sustrato vivo favorece a desarrollar plantas más
resistentes a plagas y enfermedades, aumenta la expresión de los terpenos y flavonoides,

se encuentra libre de químicos y enriquece los suelos evitando el agotamiento.
Por otro lado, se implementará un sistema de cultivo hidropOmico por goteo con sustrato
inerte. En este sistema el agua sirve como medio de cultivo cargado de nutrientes con un
pH y electro-conductividad determinadas y controladas a diario. Para lograr e; to, se
partirá utilizando agua de ósmosis inversa, a través de la utilización de un filtro y depósito
para estos fines. Al estar los nutrientes disponibles inmediatamente, y controlando las
necesidades nutricionales de la planta en forma constante se puede lograr un rendimiento
mayor en relación con la Masa (expresada en kg) x m2 de inflorescencias, en
comparación al cultivo en tierra. Además, este sistema mejora la calidad microbiológica
del producto final, ya que al estar utilizando un medio de cultivo inerte se reducen
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considerablemente las infecciones por plagas y enfermedades, garantizando un producto
totalmente inocuo.
Etapa de crecimiento vegetativo y floración
Una vez germinada la semilla y/o enraizados los esquejes seleccionados se harán dos
trasplantes, el primero a macetas de.3 litros donde continuarán su crecimiento hasta su
posterior trasplante a maceta final de 15 litros.
Se implementarán dos fotoperíodos distintos, uno de 18 h de luz y 6 h de oscuridad para

la etapa vegetativa, y otro de 12 h de luz y 12 h de oscuridad para la etapa de floración.
Se buscará cdhservar una temperatura entre el rango de 24 y 28 °C y una HR`)/0 del 60 al
80% para la sala de crecimiento vegetativo y del 45 al 60% para la sala de floración.
Sala de secado
En la misma se realizará el corte y secado del material vegetal. Será equipado con
sistemas de control de humedad, temPeratura y flujo de aire, a fin de alcanzar un rango
de HR entre el 45 % a 55% y una temperatura de 16 a 19 °C.
ETAPA 2
ACTIVIDAD N' 2: Recepción del material vegetal y caracterización inicial

(responsable Dra. Churio, Dra. Barbini, DQBQ)
El material vegetal suministrado por la empresa será evaluado documentando su estado y

calidad. Se procederá a la caracterización del material seco previo a la cuantificación de
humedad.
Se analizará la composición cuantitativa de los principales can nabinoides (THC, CBD,

THCA y CBDA) como así también de metales pesados (plomo y cadmio) y pesticidas.
Además, se verificará que las muestras sean aptas microbiológicamente. Se seguirá la
normativa vigente: Resolución 78 1/2022-MS y Disposición 6431/2022-ANMAT.
ACTIVIDAD N°3: Ensayos de extracción (responsable Dra. Fanovich, INTEMA)

Se realizarán ensayos de extracción a partir de material vegetal (cogollosjltratado y sin
tratar térmicamente en un equipo de alta presión (Pmáx:500 bar, V= 500 mL) HPU500
(Eurotechnica) de INTEMA. Se realizarán tratamientos térmicos a distintas temperaturas
para aumentarla descarsboxilación de las formas ácidas. Se propone tratar a las muestras
a 90, 110 y 140 grados, a tiempos que se optimizarán en la práctica
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Se evaluará el efecto de la presión del sistema, la temperatura, las condiciones de flujo,

como así también el tiempo de saturación en los diferentes compartimentos del equipo. Se
emplearán materiales con diferentes pre-tratamientos y diferentes concentraciones de co-
solvente (el cosolvente se. elegirá según las normas ICH de solvéntes residuales) para
facilitar los procesos de extracción con CO2-SC. Se confeccionarán protocolos de trabajo
para cada sistema estudiado con el objetivo de lograr la reproducibilidad de las condiciones
de operación en el proceso establecido y de lás características del produbto. Se analizarán
las cinéticas de extracción bajo las distintas condiciones del proceso. Se optimizarán las
condiciones de extracción teniendo en cuenta el rendimiento y la naturaleza de los
compuestos bioactivos extraídos. Se hallarán las condiciones específicas para lograr la
extracción de dos tipos de extractosl - Extractos de can nabinoides y 2- Extractos de
terpenos. Se realizarán ensayos de extracción convencionales (Soxhlet) con etanol para
comparar la calidad de los productos. (INTEMA).
Asimismo, se realizarán ensayos de extracción sobre el material gestionado por la empresa
como residuo de la producción (hojas y tallos) con el- objeto de evaluar la factibilidad de
obtener fracciones ricas en compuestos flavonoides de potencial aplicación como
ingredientes activos para la elaboración de formulaciones para protección solar.
ACTIVIDAD N°4: Ensayos de caracterización química de extractos (responsable Dra.

Churlo, DC1E30)
Perfil químico del extracto: Se determinará el perfil químico del extracto, priorizando
el análisis de.compon entes-Can nabinoides y toreen icos, a través del uso de cromatografías
líquida de alta performance (H PLC) y /o gaseosa acopiada a espectrometría de masas (CC -
MS)
Capacidad antioxidante de los extractos: Se evalurará el porcentaje de inhibición del
radical DPPH mediante EPR en función dela concentración de extracto, a fin de determinar
la concentración efectiva 50 (EC50), y comparar con el parámetro obtenido en las mismas
condiciones para antioxidantes de referencia .(ácido gálico o ácido ascórbico).
Estabilidad de los extractos: Se evaluará el efecto de la exposición a iluminación
ambiente y al aire sobre la concentración de los componentes característicoS de los
extractos. Los análisis se realizarán mediante espectrofotometría de absorción UV-visible y
HPLC.
Explorar la capacidad de los extractos de conducir reacciones de
fotosensibilización
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Se determinará la formación de especies reactivas de oxígeno, tales como como oxígeno
singlete, inducidas por irradiación de los extractos con LEDs en el azul y en'el verde (por
ej. 450 y 530 nm). Para ello se utilizará EPR y la técnica de las trampas de espín. La trampa
específica para evaluar oxígeno sin glete será el 4-IMP.
ACTIVIDAD N° 5: Ensayos de caracterización biológica de extractos (responsable

Dra. Barbini, DQBQ)
Todos los protocolos a utilizar están puestos a punto y disponibles en el Laboratorio. Los
detalles metocielógicos se describen a continuación.
Estudio de la actividad cito tóxica.
y
Los extractos obtenidos serán empleados en ensayos bioquímicos que permitan determinar
la actividad citotóxica sobre células tu morales hepáticas y además estudiar el mecanismo
de muerte (apoptosis/autofagia) mediante el cual se ejerce la_actividad. Asimismo, se
propone estudiar las vías intracelulares de transducción de señales involucradas en la
muerte celular inducida.
Se estudiarán líneas celu lares de hepatocarcinoma h u mano (HepG2, Hep3B, Huh -7). Las
células HepG2 y Hep3B, derivadas de hepatomas humanos, se obtuvieron de "American
Type Iissu,e Collection •(ATCC; HB 8065 and HB 8064, respectivamente). Se cultivarán en
medio mínimo esencial (MEM) suplementado con 100 ml/L de suero fetal bovino, 2 mmol/L
de glutamina, 1,5 g/L de bicarbonato de sodio, 1,0 mmol/L de aminoácidos no esenciales,
1,0 mmol/L de piruvato de sodio. Las células Huh -7, también derivadas de hepatoma
humano se cultivarán en medio base D-MEM suplementado como se describe
anteriormente. Todas las células se incubarán a 37 °C y 5 % de CO2.
a.- Detección de viabilidad. Se analizará la viabilidad de las líneas celulares tratadas con
los diferentes extractos. Se analizará el efecto tóxico de las mismas sobre las líneas
celulares de hepatoma. Para esto se analizará la viabilidad de las células tratadas con
diferentes concentraciones de los extractos, mediante el ensayo de MTS(3-(4,5-
dimethylth iazol -2-y1)-5-(3-carboxymethoxyph enyI)-2-(4-su Ifopheny1)-2H1etrazoli um-
compuesto de tetrazolio) (Promega), durante distintos tiempos. Este ensayo mide la

actividad de dehidrogenasas mitocondriales en las células viables, basánliose en una
reacción colorimétrica que permite medir la bioreducción de un compuesto de tetrazolio
(MTS) a formazán. La formación de este producto se mide a 490 nm en un
espectrofotómetro de placa multiwell. El valor de absorbancia es proporcional al número de
células viables. Se incluirán controles de células sin tratar y el porcentaje de viabilidad
celular se normalizará a los valores de absorbancia de estos controles, El porcentaje de
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viabilidad celular se normalizará a los valores de absorban cia de las células controles sin
tratar. Se determinará la concentración citotóxica 50 % y 90 % (CC50 y 0C90,
respectivamente) para los distintos extractos y líneas celulares.
U- Detección de la muerte programada por apoptosis. Tinción con naranja de acridina y
bromuro de etidio. Una suspensión celular se teñirá con naranja de acridina/bromuro de

etidio (4 ug/ml, Sigma). Se observará bajo microscopía de fluorescencia (Nikon Eclipse 400)
y se fotografiara (Nikon Coolpix 4500). Se calculará el porcentaje de células viables (verde
brillante), células apoptóticas tempranas (núcleo verde compacto), células apoptóticas
tardías (núcleo naranja/rojo brillante) y células necróticas (núcleo naranja/rojo difuso).
bi.- Detección del ADN fragmentado.
Se extraerá el ADN genómico de las células tratadas
con el kit Wizard Genomic DNA Purification (Promega), según las instrucciones del
fabricante. Los ADNs extraídos se almacenarán a 4 "C hasta su uso, y se separarán por
electroforesis en un gel de agarosa al 1 %. Las bandas o ladder del DNA clivado se
visualizarán en un transiluminador, mediante la tinción del gel con bromuro de etidio (0,5
ug/mL, BioRad).
Olí.- Análisis del ciclo celular
Se cosecharán las células tratadas, se teñirá el ADN con
ioduro de propidio (Sigma, 50 ug/mL) y se digerirá con RNAsa (Sigma, 0.5 mg/mL). Se
analizarán por citometría de flujo, detectando fluorescencia roja (48'8 nm de excitación y
detector de paso de banda de 620 ± 15 nm), proporcional al contenido de ADN. Se
colectarán un mínimo de 10000 células por muestra. En los histogramas de ADN se
detectarán los picos de fluorescencia, correspondientes al contenido de ADN en las
distintas fases del ciclo celular (GO/G1, S y 02/M) y a las células apoptóticas con un pico
"su bG0", el cual representazal ADN degradado.
c.- Determinación de vías intradelulares de transdu
—cción de señales implicadas en la
apoptosis.
Se estudiarán los posibles efectos sobre las siguientes vías: i) activación de
caspasas, ii) diferencias de expresión de proteínas regulatorias de la apoptosis, los
miembros de la familia de BcI-2 nhibidores (Bc1-2 y Bct-XL) o estimuladores (Bad, Bid, Bax)
de la apoptosis]. Para analizar los niveles de expresión de las proteínas sey utilizará la
técnica de VVestem Blot. Para ello, las células serán lisadas con un buffer de lisis
conteniendo in hibidores de proteasas. La concentración de proteín as totales se determinará
mediante el método de Bradford. Se realizarán SDS-Page de distintos porcentajes, en los
que se cargarán cantidades iguales de proteínas totales por calle. Estos geles se
electrotransferirán a membranas de PVDF (Immobilon-P, Millipore), las cuales serán
bloqueadas y posteriormente inmunodetectadas (anticuerpos primarios Santa Cruz
Biotechnology, segundo anticuerpo-peroxidasa Dako, revelado por
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electroquimioluminiscencia ECL Amersham), utilizando distintos anticuerpos primarios. Las
bandas resultantes de la in mu nodetección y del peso molecular correspondiente a cada
una de ellas se cuantificarán mediante densitometría de estas utilizando el programa
Image-J. Los valores de la cuantificación se normalizarán a un control de carga de proteínas
totales (beta-actina).
d.- Detección de autofagia: En las células tratadas con los extractos se determinará la
inducción de autofagia como consecuencia-de los tratamientos. Los controles negativos

serán las células sin tratar. Los controles positivos de la inducción de autofagia se
obtendrán mendiante la deprivación de nutrientes en los cultivos celulares. A) Mediante
microscopía electrónica de transmipión. En las células tratadas se estudiará la aparición de

u ltraestructu ras características de la autofagia (vesículas autofágicas: autofagosomas,
autolisosomas), visualiladas como vesículas doble membrana. B) Detección de autofagia
mediante microscopía confocal. En la t3 células transfectadas se,estudiará la presencia de
LC3 asociada al autofagosoma, por marcación con anticuerpo anti-LC3 fluorescente. La co-
localización de esta proteína con LAMP-1 (lysosome associated membrane protein -1),
detectada mediante un anticuerpo marcado con otro fluoróforo, permitirá demostrar la
fusión del lisosoma con el autofagosoma para formar los autolisosornas. C) Estudio de la
expresión de las proteínas asociadas al proceso de autofagia: LC3, beclina -1, p62 por
VVestern Blot. Se utilizarán anticuerpos específicos (Santa Cruz Biotechnology),
membranas PVDF (Immobilon-P, Millipore), segundo anticuerpo-peroxidasa (Dalo),
revelado por electroquimioluminiscencia (ECL GE Healthcare). Se usará beta -actina para
normalizar la carga de proteína total en los geles].
Estudio de la actividad antiviral.
Se estudiará la actividad antiviral frente a loS•siguien,tes virus: hepatitis B, herpes sirnplex-

1 (HSV-1), sincicial respiratorio (RSV) y adenovirus-7 (ADV-7).
Para HBV se emplearán las células .HepG2 2.15 (transfectadas de manera estable con
HBV, productoras de viriones infectivos), las cuales se cultivarán en medio base D -MEM
suplementado como se describe anteriormente y se incubarán a 37 "C y 5 % de CO2. Para
los otros virus se usarán células Vero y HEp-2, que se cultivarán en ‘medio MEM
suplementado yen las mismas condiciones de incubación.
a.- Determinación de la máxima concentración no citotóxica (MONO) de los extractos en las
diferentes líneas celulares. Se analizará el efecto tóxico de los extractos mediante MTS
(descripto anteriormente) y se determinará la MCNC de cada extracto para cada línea
celular.
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b.- Estudio de la inhibición en la replicación viral (actividd antiviral). Para HBV (virus no
cultivable) se determinará la inhibición de la secredión de antígenos virales. Las células se
tratarán con distintas concentraciones a partir de la MCNC y se cuantificará la producción
de HBsAg (antígeno de superficie) y HBeAg (antígeno e) en los sobrenadan tes de cultivos
tratados, mediante ensayos de ELISA. Además, se cuantificará del ADN viral por PCR en
tiempo real, tanto en los sobren adantes como en las células tratadas.
Para los otros virus (que son cultivables) se' realizarán ensayos de cuantificación viral.
Primero se hará un screening de actividad antiviral en los extractos. Para ello, diluciones
Seriadas en base 10 se sembrarán sobre las monocapas celulares crécidas en placas de
96 pocillos con diferentes concentraciones de los extractos, utilizando la MCNC como la
concentración más alta. Un control de lainfección se realizará en ausencia de los extractos.
Las placas se incubarán a 37 °C y 5 % de CO2 durante 72 horas. Luego, se fijarán, teñirán
con cristal violeta y se observará el efecto citopático. Los extractos se considerarán
positivos cuando el título viral se reduzca un 99% en su presencia con respecto al control
de la infección.
En segundo lugar, se determinará la DE 50% (dosis efectiva 50 %) por el método de placas,

determinando la reducción en el título viral o en las u nidades formadoras de placas por
mililitro (UFP/mL) en presencia de los extractos. Para ello, monocapas crecidas en placas
de 24 pocillos se infectarán con diluciones de los stock
S virales en presencia de
concentraciones crecientes de los extractos. Luego de una incubación de una hora, se
agregará medio de placa (medio de infección con metilcelulosa) y la incubación continuará
en presencia de los extractos. Luego de 72 horas, las monocapas se fijarán, teñirán y se
contarán las placas de lisiS'rgeneradas. La DE50 se calculará como la concentración del
extracto que reduce a un 50% el 'número de placas formadas (UFP) en comparación a las
placas generadas en el control de la infección (en ausencia del extracto).
ETAPA 3
ACTIVIDAD N° 6: Desarrollo de prototipos como productos medicinales derivados de

Cannabis
Protocolo de preparación de aceites: Se elaborará un protocolo para la preparación de
aceites de Can nabis con con centraciones controladas de los principios activos mayoritarios
y se contrastará su bioequ-ivalencia cón productos certificados internacionales. (DCIE3Q-
IFIMAR)
Evaluación de otros productos con Cannabis: Se desarrollarán microparticu las a partir
de la encapsulación de extractos utilizando polímeros biocompatibles como

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•
policaprolactona o quitosano comerciales mediante técnicas convencionales. Se estudiará

la liberación de los principios activos encapsulados mediante ensayos in vitro. Los ensayos
se llevarán a cabo empleando 100 mg de muestra (para cada material), los cuales serán
suspendidos en fluido corporal simulado (SBF) a 37 ± 1° C bajo agitación constante del
sistema (90 rpm). Para cada ensayo, las micropartícu las serán colocadas dentro de
membranas inertes de acetato de celulosa de 0.22 pm de tamaño de poro (Gamafil9). A
tiempos preestablecidos se tomarán alícuotas de la solución (3 mL), reponiendo el volumen
extraído con SBF fresco. Las alícuotas extraídas serán finalmente analizadas empleando
la solución SBF como blanco, a fin de determinar la cantidad máxima de principio activo
liberado. Se determinará la cantidad total de principio activo incorporado evaluando la
cantidad de sustancia liberada a tiempo "infinito" (esto es, hasta obtener un valor constante
liberado), y la cantidad retenida en cada sistema luego del ensayo a tiempo infinito. El
contenido de sustancia activa liberada a partir de una masa conocida de micropartícu las se
determinará por espectrofotometría UV-visible y por HPLC. La evaluación del contenido de
sustancia activa retenida se llevará a cabo a partir de la disolución de las micropartícu las
en solvente orgánico y la medición de las sustancias activas como en el caso del contenido
liberado. De acuerdo con la masa total obtenida (liberada + retenida), se determinará el
porcentaje en peso de su stan dia activa en cada sistema de micropartículas.(INTEMA)
RESULTADOS ESPERADOS Y CAMPO DE APLICACION DE LOS RESULTADOS

a) Resultados esperados: Con la ejecución de este proyecto se espera lograr una eficiente
sinergia entre el sector productivo y el sector académico en un área de relevancia socio-
económica como lo es el Can nabis medicinal.
Se plantea obtener:
Informe de resultados de caracterización inicial.

Informe de resultados sobre obtención de extractos de Can nabis.
Informe de caracterización química de extractos.
Informe de caracterización biológica de los extractos.
Informe interno entre las UE que contenga los protocolos desarrollados considerados
como know-how.
b) Campo de aplicación de los resultados: Se espera que los resultados puedan ser
aplicados a la industria farmacéutica.
IV.- CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

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Tarea MESES
IIII3 4 5 I
7 1111 11 II14 16 17 18
1
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4 III 111 y y
5 y l
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6
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10011 I
I'''.'' i
V V ../
V.- GRUPO DE INVESTIGAC ION
APELLIDO Y INSTITUCION CUIL CATEGORIA FUNCION

NOMBRE
.BARBINI CONICET 27-21802692-9 Investigadora Responsable técnica 1

Luciana Femand a
-,
CHURIO CONIC-ET 27-16226888-16 Investigadora Investigadora
María Sandra
GRANONE CONICET 20-34344654-4 CPA Técnico

Luis Ignacio
FANOV1CH CONICET 27-20062416-0 Investigadora Responsable técnica 11

María Alejandra
LERE CONICET 20-25265226-5 CPA técnico

Martín
VI.- PERSONAL: DE CANNTEK
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•
APELLIDO Y NOMBRE INSTITUCION CUIL
RACCA CANNTEK 20-34134268-7

Mardi]
BELTRAN DEPONTI CANNTEK 20-34768496-2

Matias Nicolas
PARODI CANNTEK 20-35621343-3

Tomas
GARRIGA LACAZE CANNTEK 20-36617008-2

Justo l'
ALVAREZ ,1 CANNTEK 20-37379830-5

Ignacio Luis
VII.- CONCLUSIÓN
En resumen, se puede decir que este proyecto tiene como objeto la investigación de la
planta de Can nabis con fines medicinales, buscando adaptar especies de Cannabis de
otras latitudes al suelo de la provincia de Buenos Aires.
Mediante el estudio e investigación se pretende identificar y patentar variedades de
germoplasma nacional, identificar y establecer una guía para la micropropagación de la
variedad, y de las diferentes materias obtenidas, lograr generar medicamentos certificados
por entes argentinos que puedan satisfacer a las necesidades que hoy se solicitan en el
área medicinal para diferentes patologías.
Para llevar a cabo el mismo se tendrán en cuenta ciertos pasos legales, obteniendo las
autorizaciones de los diferentes entes nacionales como ser Ministerio de Salud, Ministerios
de seguridad y generando convenios con diferentes•actores sociales tales como institutos,
universidades, cooperativas, ONGs, laboratorios que estudian la materia, y con otros entes
particulares que puedan ser de útil necesidad.
11,01
4//, 911151 Z10 9

fvh PSin
MINISTERIO DE SALUD DE LA NACION
DEPARTAMENTO
— P1,Mcc,IQ Worm( I com
MESA DE ENTRADAS Y NOTIPiCACIONM
ENTRÓ
SALIÓ 223 sG 19:15
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1 2 HAY 2023
f Página 19 de 61
CONVENIO ESPECIFICO DE INVESTIGACION E. DESARROLLO
Entro el Consejo Nacional de Investigaciones Climáticas y Técnicas, denominado en

adelante "CONICET", representado • en esto acto por su Gerente de Vinculación
Tecnológica, Sergio Romano, con domicilio legal en Godoy Cruz 2290, CASA. de la
Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina, por una parte: y fa empresa CANFITÉR
1.1.i denominada en adelante la "CONTIIAPARTE". representada en este acto por su
-&—all/[57 1.134.281. con domicilio legal en callo AcutWcié
WSIDENTE Meran Ra
CfRad Autonoma de Buen0s_giár.Taritir -1, por la otra. y
Ilgueroa.1332, dep_o 303:—
denominadas conjuntamente las 'PARTES', acuerdan celebrar el presente Convenio
sujeto a las siguientes cláusulas (y antecedentes):
PRIMERA. OBJETO:
b7ajtoc16 de
El presente Convenio de Investigación y desarrollo denominado O
-
lab s.con proa edadOsTnedicirialas oO4
----ricir
estandarización do--cirecitTirrdi-extr
p 81u
Cc o rj
tiene por Objeto es estandarizar la producción de extractos do Cannabis con
.9 Ov"
propiedades medicinales en total acuerdo con la normativa nacional vigente. siguiendo c
<
2
las directivas de la Organización Mundial de la Salud (OMS) en materia de buenas
prácticas agrIcolas y de recolección de plantas medicinales: y desarrollar nuevas formas
, el 'Proyecto"
de administración de extractos de Cannabls medicinal, en adelante'
SEGUNDA. PLAN DE TRABAJO:

Para el desarrollo de las actividades del presente convenio so establece un cronagráma
de tareas, entrega de informes de avance e Informe final y un grupo de trabajo que se
encuentran detallados en el Anexo I "Plan de Trabajo"-
TERCERA. INFORMES:
Se realizará un informe de avance al finalizar cada una de las etapas del trabajo objeto
de este convenio y un Informe final al concluir las tareas, según se detallan en el Anexo
I Plan do Trabajo-
CUARTA. UNIDAD EJECUTORA:

El CONICET designa como unidades ejecutoras de las tareas emergentes de este
ologla de Materiales
convenio al INTEMA Instituto de Investigaciones en Ciencia y Tecri.
- con domicilio en Av. Colón 10850, Mar del Plata, Provincia de Buenos Aires, Argentina.,
y al IFIMAR - Instituto de Investigaciones Asidas de Mar del Plata - con domicilio en
Come* natal, por Res 11757019 ir.2019-3179S/58-APN4VTOCONICET e

(10297114Yu2w0406219•62al(11,111,1110EJN10ET
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s.
Deán Funes 3350, Mar del Plata, Buenos Aires - Argentina , en adelante denominados
- 'UNIDADES EJECUTORAS -
QUINTA. REPRESENTANTES TÉCNICOS:

Con el fin de establecer canales permanentes y fluidos de comunicación, las parles
designan como representantes técnicos para este convenio a:
Por CONICET, Maria Alejandra Fanovich, investigadora independiente.

, coh lugar de trabajo en el INTEMA y Maria Luciana F.
mafanovi@findp.edu.ar
, con lugar do trabajo en el
Barbini, investigadora adjunta, lbarbini@rndp.edu.ar
Exactas y
Departamento de Ouimica y Bioquimica do la Facultad de Ciencias
Naturales (UNMDP)
la CONTRAPARTE, Martin Ruca, m racca@hormaii.com
Por
SEXTA. PRECIO— CRONOGRAMA DE PAGOS .

El presente convenio no implica erogaciones para CONICET
a. La CONTRAPARTE se compromete a abonar a CONICET la suma total de de
DOLARES Seis mil quinientos. USS 6.500. Cabo aclarar que las facturas se emitirán en
Pesos al valor de Dólar Oficial tipo vendedor cotización Banco Nación -
El pago se efectuará de la siguiente forma y una vez cumplida la condición que en cada
caso se indica: (elegir la opción que corresponda)

COTITITritabTfliti5RSC:porreWridieltItá lá sUrni:btlá DOLARES TRES MIL
OOSCISÑTOS. CINCUENTÁ (US5.3.250),que,serkpagadera dentro de los
:porte Oil 'Ministerio de
)57dia'i Pio li—ái57úblalóMarel-P-raa-eaa.-SoMidaio7P5r
Salud.-
ti. Segunda cuota de] 25%7
tcorrespondiente, a-id:siliMa de -DOLARES MIL
SEISCIENTOS VEINTICINCO (USS• 17625):cb-nad enibega del informe de la
Ségtindá Etapa.:
III. Tercera y última cuota del 25%, bertesjdondieniet a la Puma de DOLARES MIL
IEISCIENTOS,VEINTICINCID (11$3...1:625);( contra entrega del informe do la
Tercer Etapa.
SEPTIMA. ADMINISTRACIÓN DE LOS FONDOS:

Para la administración de la totalidad de los fondos que constituyen el piado pagado
por la CONTRAPARTE, CONICET designa a FUNDACION PARA LA
it
Convenio aprobado por Ras 70/2013. 1740 I 9,56.195755-AP tr•GbrinCONIC,Eli
GONVE452337040611W-CAWNWIERICONICET
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TRANSFERENCIA E INNOVACION TECNOLOGICA- INNOVA-T , en adelante la 'UVI"
/ 'ADMINISTRADORA DE FONDOS", con domicilio en Av. Rivadavla 1917 (CP
teléfono
C1033AAJ), Ciudad Autónoma de Buenos Aires (Mail: innoval@innoval.org.ar
.54 11 52187741 a144), que actuará como Unidad de Vinculación Tecnológica conforme
los términos de ta Ley N°23.877.

En tal sentido, emitirá por cuenta y orden do CONICET , facturas en Pesos al valor de
Dólar Oficial tipo vendedor cotización Banco Naden a la CONTRAPARTE, de acuerdo
a lo acordado en la Cláusula Sexta 'PRECIO — CRONOGRAMA DE PAGOS' del
presenie Convenio..
OCTAVA. EL CONICET SE COMPROMETE A•

(selecionar las opciones que correspondan).
O Cumplir con el objeto del presente Convenio y desarrollar las tareas previstas
en el plan de trabajo acordado en el Anexo L-

O Aportar los recursos humanos, permitir el uso de Instalaciones y/o el
equipamiento necesario para llevar a cabo las tareas acordadas en el plan de
trabajo del Anexo 1.

Ctil Entregar a la CONTRAPARTE a través de su representante 'técnico los
informes de avance e informe final acordados en el Anexo I del presente
convenio..
NOVENA. LA CONTRAPARTE SE COMPROMETE A:

(seleclonar las opciones que corresponda).
0 Pagar el precio a CONICET ; estando obligado a los pagos que se detallan en la
cláusula sexta "PRECIO — CRONOGRAMA DE PAGOS' del presente Convenio.

O Cumplir con los aportes detallados en el presupuesto acordado en el Anexo II.
O Cumplir con el objeto del presente Convenio y desarrollar las tareas provistas en
el plan de trabajo acordado en el Mexo I.

O Suministrar el lugar físico y la utilización del equipamiento existente con el objeto
de desarrollar' las tareas previstas en el Anexo I de este Convenio.

O Entregar a CONICET informes periódicos por medio del representante técnico.-
DECIMA. PROPIEDAD DE LOS RESULTADOS DE INVESTIGACION

a. Cada parte continúa siendo propietaria de sus propios conocimientos previos, su
know-hoW, sus sistemas de computación, diseños, modelos, marcas, obras, creaciones
ylu otros resultados protegidos o no, sea que estos hayan sido obtenidos con
1)-011 MIK; 9191C DNI C ET

Car"""Prntgrn " Rei 11711019 WidifinnengiMPN-
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anterioridad a la firma de este convenio, o desarrollados o adquiridos con independencia'
de las tareas previstas en el mismo.
13, Se entenderá por resultados de investigación les datos, conocimientos y/o

información, generados por el equipo de trabajo a partir do la ejecución de las acciones
previstas en el plan de trabajo del Anexo I. tangibles o intangibles, Cualquiera sea su
forma o naturaleza, asi como cualquier derecho unido
9 ellos, incluidos los derechos de
propiedad intelectual, tales como derechos de autor, derechos sobre diseños y modelos
industriales, patentes, u otras formas de protección semejantes que sean susceptibles
de protección por la legislación de patentes de invención o por otro tipo de registro legal,
aquellos resultados que no sean protegibles legalmente por patentes o por otro tipo
de registro pero que puedan ser utilizados en el proceso productivo y adquieran por ello
importancia económica.
c. La propiedad sobre los mencionados resultados de investigación surgidos del
o presente convenio pertenecerán a: CONICET y sus Instituciones Académicas/de ciencia

8 o ci
y Tecnología Asociadas (según cuando corresponda por convenio marco)
11.71
ta
1-•
DECIMO PRIMERA. USO DE LOS RESULTADOS:
En caso de que a partir del presente convenio surgieran resultados de investigación

susceptibles de explotación o con valor comercial, LA CONTRAPARTE tendrá la opción
de adquirir una licencia exclusiva para el uso y/o explotación comercial :de dichos
resultados por un plazo de hasta 90 días luego de finalizado el convenio. Durante este
plazo, CONICET se abstendrá de otorgar/negociar con terceros otras licencias para el
uso y/o explotación comercial de los resultados
La opción de licencia deberá ejercerse mediante notificación fehaciente a la Gerencia

de Vinculación Tecnológica dentro del plazo indicado. Si se eligiese ejercer la opción,
las partes darán inmediatamente comienzo a las negociaciones tendientes a celebrar el
contrato de licencia dentro del plazo máximo de 120 MÁS días contados a partir de la
fecha de ejercicio de la Opción.
Caso contrario los resultados de investigación la tecnologia y/o capacidad resultante

podrá ofrecerse a otro tercero interesado-
DECIMO SEGUNDA. PUBLICACIONES:
La CONTRAPARTE reconoce la necesidad del CONICET de efectuar publicaciones y

en general divulgar los resultados del Proyecto. Sin perjuicio de ello y a fin de proteger
también los derechos de la CONTRAPARTE, el Representante Técnico del CONICET
Convenio aprobado par Ros. mi nen I e IF.2019-36251756.APN-GV7CONICET

re
tIONY2~04061P62-CAlitPC9NICHNICET
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entregará al Representante Técnico do la CONTRAPARTE, el borrador quo será
sometido a publicación y/o la transcripción do la presentación a congreso
correspondiente con una antelación de veinte (20) días a la fecha do presentación. La
CONTRAPARTE deberá contestar en un plazo no mayor a los veinte (20) dias y en caso
de ausencia de respuesta CONICET podrá realizar la publicación pertinente.
Entes trabajos publicados conslarán.los autores, su grado de participación. asl como el
hecho de que el trabajo a publicar so origina en el presente Convenio. -
DECIMO TERCERA. UTILIZACIÓN DE LOGOS NOMBRES MARCAS `Ha
EMBLEMAS:
La CONTRAPARTE deberá utilizar el logo, nombre, marca y/o emblema de CONICET
en toda publicación o actividad de difusión do las tareas y/o resultados del presento
convenio. En los casos que los fines perseguidos sean comerciales, so deberá además
hacer una evaluación económica del uso del lego, nombre, marca y/o emblema de
CONICET conforme a lo establecido en la resolución 794/15. que so negociará en la o:
o
x
respective licencia: 8
o °u
te á r.,
=11^
o a
DECIMO CUARTA. CON FIDENCIALIDAD:
Las Partos se comprometen a no revelar a terceros ninguna información técnica
ni de ningún otro carácter, sea con fines comerciales o cientlficos. originada en
la otra Parte, anterior o subsiguiente a la fuma del presente'
Las Parles se comprometen a no revelar el resultado de las tareas quo
constituyen el objeto de este Convenio-

Las Partos se obligan a comprometer al personal que tuviera acceso a tal
información a no revelarla a terceros y mantenerla estrictamente confidencial,
asumiendo en forma personal quien asl obrare, la responsabilidad civil y/o penal
que le fuera aplicable'

La confidencialidad sobre los resultados regirá por el periodo de duración de este
convenio y durante cinco (5) años con posterioridad al mismo, salvo que las
partes do común acuerdo y por escrito sean relevadas sobre aspectos de la
información desarrollada que podrán divulgarse o pubficarse yen qué forma: o
luego de concluido el proyecto, en todos aquellos casos en que la información
hubiere caldo en dominio público.
DECIMO QUINTA. DURACION • PRORROGA:
V
CaInvenb artzblidO poi Res. 5170R019. IF.2019.36299756-4PH4VDCONCET
(10292SW33704061P624211MICURIC131s:ICET
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El presente Convenio tendrá una vigencia de 18,meseá - contados a partir de la fuma
del presente.-
De estimado conveniente, las partes podrán renovar el plazo del Convenio por el mismo
periodo y por única voz, previa solicitud y manifestación formal de común acuerdo, la
cual deberá materializarse a través de una Adenda al presente.-
DECIMO SEXTA. PROHIBICIÓN DE CESIÓN DE DERECHOS:

Las Partes no podrán ceder a terceros los derechos derivados del presente Convenio,
sin el consentimiento previo de la otra Parte.-
DECIMO SEPTIMA. RESCISION ANTICIPADA — RESOLUCIÓN SIN EXPRESIÓN DE
CAUSA:
Las Parles acuerdan que será causal de rescisión de este Convenio el incumplimiento '
de las obligaciones asumidas por alguna de las Partes. En caso que una de las partes
incumpla una obligación sustancial de este Convenio, y no. remedie o subsane dicho
incumplimiento dentro de los SCI-DTAS dias hábiles de recibida la notificación de la otra
parte exigiendo el cumplimiento de la obligación, dora derecho a la parte cumplidora a
resolver el contrato sin derecho a reclamo alguno de la parte incumplidora. A fin de
justificar que remedió o subsanó dicho incumplimiento deberá remitir dentro del plazo
mencionado notificación y documentación por escrito que acredite fehacientemente que
ha solucionado tal Incumplimiento. También podrá resolverse este 'Convenio cuando por
razones de fuerza mayor o debido al dictado de nuevas normas legales, impidan a
alguna de las parles el cumplimiento de las cláusulas del Convenio, sin que dicho
incumplimiento genere el derecho a reclamarse mutuamente compensación alguna.-
DECIMO OCTAVA. INDIVIDUALIDAD Y AUTONOMIA DE LAS PARTES. SEGUROS:

Las personas involucradas en las tareas que utilicen las instalaciones de la
UNIDAD EJECUTORA estarán sujetos a las normas y reglamentos internos de
aplicación al caso.-
En loda circunstancia o hecho que tenga relación con este Convenio las Partes
mantendrán la individualidad y autonomía de sus respectivas estructuras
técnicas y administrativas y asumirán individualmente sus responsabilidades. El
presente Convenio no constituye ningún tipo' de sociedad, asociación o relación
de dependencia o empleo entre las Parles, y parlo tanto, las Partes no serán
consideradas solidariamente responsables atar ninguna cuestión de

responsabilidad civil o laboral en las que hayan incurrido individualmente.-
Convenio aprobado obr Ros. 1170/2019. IF-2019-26298756-APN-GbCdCONICET vi

tiOn123;(211231.M3406,2p62-01/11114C113RICONICET
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de las Partes
c, Con respecto a los recursos humanos apodados por cada una
destinados a la ejecución del Convenio, so deja expresamente establecido quo
no existirá relación de dependencia, ni habrá vínculo laboral alguno cualquiera
sea su forma y/o naturaleza en relación a la otra Parto. En consecuencia, las
Parles se eximen recíprocamente de cualquier reclamo. aCción y/u obligación
respecto del personal dependiente y/o contratistas y/o subcontratistas do la otra
Parte.
d. Cada una do las Partes se comprometo a contar con las coberturas de seguro
legálrnente obligatorias de acuerdo a las actividades de su competencia. Estos
seguros deberán cubrir a los agentes de CONICET en los sitios donde se lleven
a cabo la ejecución de las tareas acordadas en el Plan do Trabajo.
El presente convenio no limita el derecho dalas Parles a la celebración de otros
e
convenios semejantes con otras instituciones.-
DECIMO NOVENA. SOLUCIÓN DE CONTROVERSIAS:

Ante cualquier controversia derivada do la aplicación o Interpretación del presente
Convenio, las Partes se comprometen a agotar las medidas tendientes a poner fin al
conflicto a través de sus representantes técnicos, en caso de no poder arribar a un
acuerdo se someterán a los Tribunales Federales de la Capital Federal.
VIGESIMA. COMUNICACIONES - NOTIFICACIONES:

A todos las efectos del presente Convenio. las Panes constituyen domicilio en los
o donde lo comuniquen fehacientemente en el
consignados en el encabezamiento,
futuro. Las enviadas a CONICET serán dirigidas a la atención de la Gerencia de
Vinculación Tecnológica.'
En prueba de conformidad se firman dos ( 2 ) ejemplares de un mismo lenor y a un solo

efecto, en la Ciudad Autónoma de Buenos Aires, a los DIA días del mes de MES del año
AÑO.-
Vil
Ca-neno aprobado pe< ReS 117(72011 IF.2019.36291156.APN:GVTKONCET
(101023P11721904062P62-0,1UMGIMICETNICE
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Anexo I
TITULO DEL TRABAJO:

"Desarrollo de productos controlados de Cannabis para
uso medicinal"
OBJETIVO DEL PLAN DE TRABAJO
OBJETIVO GENERAL
Estandarizar la producción de extractos de Cannabis con propiedades
medicinales en total acuerdo con la normativa nacional vigente, siguiendo las
directivas de la Organización Mundial de la Salud (OMS) en materia de buenas
prácticas agricolas y de recolección de plantas medicinales; y desarrollar nuevas
formas de administración de extractos de Cannabis medicinal.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Al- Desarrollar técnicas que permitan el cultivo de variedades de :Cannabis
sativa y el desarrollo del perfil genético de las variedades para su posterior
aplicación en monitoreo de la descendencia. Estudiar la adaptabilidad de
variedades de Cannabis de diversas latitudes a la zona propuesta.
Al- Desarrollar un protocolo estandarizado de obtención de extractos de

Cannabis a partir de tecnologias limpias. Estudiar y optimizar el proceso de
obtención de extractos de Cannabis utilizando tecnología de fluidos
supercríticos. Comparar la eficiencia del método con métodos convencionaled
de extracción.

A3a. Caracterización quimba.
-Caracterizar y cuantificar por técnicas analiticas cromatbgraficas (HPLC y/o
CG-MS) los componentes cannabinoides y terpénicos de los extractos de
Cannabis sativa obtenidos por distintas metodolcgias.
-Evaluar la capacidad antioxidante de lbs extractos en base a reacciones de
inhibición de especies radicales de prueba mediante Resonancia Paramagnética
Electrónica (EPR).
-Determinar la estabilidad de los extractos en presencia y ausencia de
iluminación ambiente y saturación con aire.
-Explorar la capacidad de los extractos de fotosensibilizar la formación de
especies reactivas de oxigeno mediante irradiación con luz visible.
A3b. Caracterización biológica. Evaluar actividad citotóxica y antiviral.
-Determinarlas concentraciones citotóxicas de los extractos en diferentes lineas
celulares tumorales humanas, representativas de distintos tipos de cáncer.
Convenio aprobado por Ros 11700019 19 2019 36298756 APN GVTOCONICE r

VIII
flt2t2SCEIEIP64061PN-CAIPIIICMTRICUNICET
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-Determinar las concentraciones Inhibitorias de la replicado viral de diferentes
virus humanos de importancia médica.
-Establecer los mecanismos moleculares implicados en la actividad antiviral.
A.4. Obtener prototipos de productos derivados de Cannabis.

Elaborar un protocolo para la preparación de aceites de Cannabis con
mayoritarios y contrastar
concentraciones controladas de los principios activos
su bioeqUivalencia con productos certificados internacionales. Disertar y
evaluar la potencialidad de obtener microparliculas para contener los principios
activos de cannabis.
C. PLAN DE ACTIVIDADES 4.RESPONSAB

3.ENTREGABL LE DEL
1 . ACTIVIDAD T. DESCRIPCION ES ENTREGABLE
Material vegetal MARTIN

E Curevo de 1.a. Cultivo CANNTEK
1 RACCA
material vegetal (CANNTEK)
tb. Cultivo modeb Indo«

A
(INTEMA)
1
ensayos Informe de CHURLO
Recepción del So rellailltátl
2
material -vegetal microbblogicos. de pesticidas,
Caracterización BARBINI
y caracterización metales pesados y de humedad
Inicial
inicial. sobre el material entregado por
CANNTEC para reportar las
características según la
normativa vigente. (DOBO)
Se realizarán ensayos de Informe sobre FaNOVICH

3 Ensayos do
extracción con co, superultico
Extractos
extracción (con y sin cosolventes) y con
solventes liquides mediante De Cannabls
técnicas convencionales Se
E buscará 'obtener extractos ricos
en terpenos y otros ricos en
cannabinoldes. (INTEMA)
Se determinará el perfil químico Intorme de CHUMO

4 Ensayos de
do los extractos mediante caracterización
caracterización
IX
0UCET
converie §prOb3d0 por Res. 11707019. IF.2019-352911756.APR4VDIC
UMVE41.11-2317.641)(1115.3-aMt1G91114CDNICET
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quIrnIca de métodos do análisis quimica de
extractos crornatográfico HPLC y GC-Ms
A extractos
apuntando a determinar
presencia y cantidades relativas
de cannabinoides y (arponas. Se
P evaluarán propiedades como:
actividad antioxidante (mediante
ol método de Inhibición del
radical DPPH mediante. EPR),
A
estabilidad quimica (por análisis
espectrofotométrico de
• absorción UV-visible en función
del tiempo y condiciones de
almacenamiento) y capacidad
2 folosensibilizadora (Por
irradiación estacionaria y
• detección de oxigeno singlete
mediante trampas do espin en
EPR) (DOBO.IFIMAR)
5 Ensayos de
Se analizará la actividad Informe de BARBINI
citotóxica de los extractos frente
caracterización caracterización
• biológica a diversas lineas celulares
de biológica de los
extractos tumorales humanas y se
extractos
analizará la acliizidad antiviral de
los mismos frente a virus
humanos de impedancia médica
(hepatitis, virus respiratorios.
herpes virus, etc.) (0000)
6 Desarrollo de Se elaborará un protocolo para la
prototipos corno preparación de aceites de
productos Cannabis con concentraciones Informe interno BAREINI
medicinales controladas de los principios entre las UE
E activos mayoritarios y se
derivados de CHuRIO
contrastará su bioequivalencia
r Cannabis con productos certificados
internacionales, (00110- FANOvICH
A IFIMAR)
Se desarrollarán micropaniculas
p conteniendo extractos do
Canimbis a padir de polímeros
A comerciales biocompatibles. Se
evaluará la liberación de
principios activos de Cannabis
en ensayos in vitro
estandarizados. (INTEMA)
•
Descripción de las actividades:
' ETAPA 1
n Cultivo de material biológico

1.a) Cultivo CANNTEK (la empresa es la responsable de esta actividad)
Corvrsts aprobado por Res. II 7012019 IF.201 9-3629S756-APN‘VTICONicEll
fig215VE42D2.357-040615WPOWNWCWIRICIEJNICET
P.jedir 10 de 23
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La empresa es la responsable de la producción Inicial del material vegetal para dar inicio
a la secuencia de actividades. A continuación, se brindan detalles do los materiales de
partida, formas de cultivo, espacio disponible entre otros aspectos para generar el
Material Inicial.
Material do origen:
A.- Se utilizará germoplasma nacional de origen desconocido para trabajar en su
fitomejoramiento y lograr a posteriori su Inscripción dentro del registro do variedades de
cannabis de INASE. La resolución que hebilla a no declarar el origen do este tipo de
germoplasma es la ResoluciónCon unta INASE - Mini tea de Salud • 5/2021.
B.. Se importarán semillas del banco.trilogone seeds y Dinatem Seed variedades tanto
altas en CBD y bajas en THC como altas en THC y bajas en CBD, esto para poder
experlInontar con diferentes combinaciones de ambos cannabinoides dominantes paro
buscar la mejor eficiencia en diferentes patologlas.
Estas variedades pueden encontrarse sujetas a disponibilidad y a quo el banco de
semillas
esté dispuesto a enviar al pais. De ser esto Imposible so buscará otro banco do semillas
que pueda proveer semillas do similares características. Asimismo, las variedades
pueden ser modificadas con el fin de poder atender mejor las patologlas necesarias,
según se converse con los diferentes entes involucrados. Cabo aclarar que simplemente
se muestran las variedades queso podrían conseguir con el fin do mostrar el interés do
trabajar con variedades que tengan fines medicinales. - a:
Actualmente CANNTEK ha iniciado el trámite frente 3 INASE para darse de alta en el 'd
Registro Nacional de Comercio y Fiscalización de Semillas (RNCyFS) como criadero de 8n
semillas de cannabis. La selección del germoplasma y sus variables está a cargo del 2o
c u•
Ing. Agrónomo Ignacio Luis Alvarez, matricula 02528, resposable técnico del proyecto y
.9 OZ
frente a INASE. r m.
5
Técnicas do cultivo: x
El Cannabis os una planta que se puedo cultivar con distinlas técnicas, nosotros A
proponemos comenzar este proyecto con algunas ya alzadas anteriormente en
proyectos anteriores (desarrollados en Uruguay) como son las técnicas de cultivo en
invernaderos tipo maccolunel. de tipo 'palo y nailon y parcelas a cielo abierto. En los
invernaderos se probarán métodos de cultivo en suelo orgánico vivo y cultivo
hidropónico. Comenzando portas más sencillas y probando con otras a medida queso
crea conveniente.
Los hongos, insectos, bacterias y el estrés climáticos son los enemigos número uno de
un producto de calidad farmacéutica, es por ello que es de fundamental importancia la
benéficos, mlcorrizas y fertilización orgánica para lograr los estándares más altos de
calidad.
La técnica de cultivo de cannabis en invernadero tipo macrolunel provee beneficios no
sólo a nivel de cultivo sino también a nivel económico. Esta técnica consiste en la
construcción de invernaderos, con cubierta translúcida para poder aprovechar la luz
solar al máximo disminuyendo el uso de luz artificial, ayudando con la protección del
invernadero a controlar plagas. humedad y temperaturas requeridas por el cultivo. Se
puede acompañar este invernadero de focos de luz artificial para simular las condiciones
climáticas requeridas por el cultivo en condiciones que el clima de la zona no los provea.
cuando se requiera regular las
También se puede contar con sistemas de black out
horas de luz que se desea que la planta se encuentre expuesta para poder obtener el
mejor rendimiento de cada cultivo.
T
co.wes, aprobado Pa Rol. 111C121)19. IP.20194629°.756-APH.GVTCCONCE
1:10211VPIria317-040617111-0WMG9TR4CONICET
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Además, este tipo do invernadero debe equiparse con sistemas de ventilación natural -
y/o forzada, sistemas de humidificación, calefacción por agua y/o aire caliente. asf como
sistemas de control do clima, riego y fertirrigaclon. El cultivo en invernadero puede ser
llevado a cabo en macetas o a tierra directa, nosotros buscaremos utilizar ambos para
poder estudiar mejor las adaptabilidades do la planta a la zona con diferentes
metodologlas, aprovechando los beneficios que cada una poseo.
La técnica do cultivo a cielo abierto si bien se encuentra más limitada en materia do
control de la planta, provee numeroso beneficios a fin de obtener un cultivo de mayor
tamaño. Consiste en la obtención de plantines de tamaño adecuado para que no sea
vulnerable al exterior, ubicado on parcelas de tierra para que puedan desarrollar raíces
y tamaños mayores que el que se lograda en las condiciones limitantes de una maceta.
Esto limita a plantar en diferentes épocas del año para poder aprovechar al máximo las
condiciones climáticas naturales, las cuales serán analizadas por el equipo técnico para
determinar cuáles son las más propicias para la zona. Se utilizará una superficie
aproximada de 3000 mf para la prodüccion a cielo abierto.
Método de producción:
tarea.
A través de una selección rigurosa se elegirán las mejores plantas. teniendo en cuenta
el tamaño y el desarrollo que las mismas vayan presentando. Estas serán trasladadas
a otro habitáculo, y se encontrarán en etapa de vegetación el tiempo necesario para
poder obtener la cantidad de esquejes requeridos para cumplimentar con el ciclo
siguiente (los esquejes seleccionados de germoplasnia nacional de origen desconocido
se utilizarán además para trabajar en su fitornejoramiento).
macetas con tierra o jilfys donde las mismas se colocarán en las condiciones de
desarrollados los esquejes y encontrándose en las condiciones necesarias para poder
ser trasplantadas las mismas se irán acomodando en macetas 'de un mayor tamaño
dentro de los invernaderos, y en la parcelas de exterior, para comenzar su desarrollo.
Dentro de los invernaderos se instalarán distintos paneles de luz artificial que ayudarán
al crecimiento y desarrollo de las plantas en cuanto se'necesite. Se buscará siempre
utilizar la nienor cantidad de luz artificial necesaria, teniendo en cuenta que a mayor uso
energético mayores costos y mayor contaminación. Las plantas que se encuentren en
parcela exterior se • acomodan en hileras, dejando un paso entre hilera e hilera para
poder revisar cada planta en particular y tener un control exhaustivo de las mismas
debido a que el control en exterior en cuanto a plagas o problemas de suelo puede ser
de mayor complicación que interior. Dicho esto, sabemos que el control en interior puede
generar complicaciones en cuanto a condiciones de humedad o temperatura que serán
controladas con distintas tecnologías, pero permite un mayor control para un mejor
desarrollo, yen el exterior el desarrollo puede llegar a presentar otras complicaciones
las cuales serán estudiadas.
Una vez completado el ciclo de las plantas, las mismas serán cenadas y colocadas en
un cuarto de secado, donde tendrán que permanecer un tiempo estipulado' de
aproximadamente un mes para completar el proceso de secado y curado. Este proceso
debe ser llevado a cabo en unas condiciones de humedad relativa del ambiente de 45%
a 60% para prevenir la aparición de patógenos y a una temperatura de 15 y 18°C para
prevenir queso volatilicen diversos compuestos químicos.
hojas, proceso al cual llamaremos manicura o trirnmeado. , En este proceso una persona
con una tijera o una maquina separa los cogollos del resto de las plantas pudiendo aSt
separar las diferentes partes de la misma. Terminado el proceso de manicura, los
Convenio aprob
Res' 11"1'110111991111519:77041043.712-01/11446113TRWONICET
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A?
cogollos serán guardados en un habitáculo que presente las condiciones necesarias de

temperatura y humedad para su almacenamiento hasta que tornan que ser enviados al
laboratorio correspondiente para su estudio y producción do extractos.
Es Imposible realizar una estimación anticipada en relación con la cantidad de plantas y
definición do cuadros do cultivo por rri', ya que las mismas so definen en (unción de
variables que se tienen en cuenta al momento exacto do su último trasplante.
Gestión do plagas
En cuanto a la gestión de plagas, buscaremos tratar las mismas con insecticidas
orgánicos, siendo que tratamos con materia que en su posterioridad serán utilizadas
como objeto para productos medicinales. No se puede detallar los productos a utilizar
desconocen las
debido a que como nos encontramos en etapa do Investigación. so
plagas y otros tipos de malestares quo pueda presentar el cultivo en la zona en cuestión.
Gestión de residuos la planta do Cannabis tiene numerosos usos. no

En materia de residuos, sabemos que numerosas industrias como la textil
solo en cuanto a usos medicinales sino también en
o °rimada& por lo tanto lo quo podríamos catalogar como residuos (tallos y hojas)
serán eventualmente entregados a los grupos do investigación asociados e este
proyecto para investigar nuevos y mejores usos.
En caso do tener excedente, los residuos serán depositados y acopiados en un sector
donde so estará generando tierra nueva, con mecanismos de compostaje. Esto nos
plantación, mejorando el suelo en el quo so encuentran las plantas para su mejor
desarrollo.
•
Traza/ir/Wad
AGRICOLAS (BPA) y BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA (BPM) (Disposición
3602/18 ANMAT. Disposición 3827/18 ANMAT) es que se implementará un sistema de
trazablüdad en la que cada plantln será etiquetado con un código de identificación para
poder realizar un seguimiento desde la semilla hasta la inflorescencia de cannabis. El
manejo de la documentación en forma sistematizada colabora en la mejora cualitativa y
decisiones estratégicas y ayuda a la creación de confianza en la industria del cannabis.

CANNTEK cuenta con un predio de - 1 hectárea, circunscripto este último dentro del
establecimiento estancia 'La Trinidad', Ruta 2, km 396, (CP 7612) Camal. Partido de
General Pueyrredón.
Serán montados dos Invernaderos, uno de tipo 'palo y nylon' de aprox. 300 rn' y otro
con alta tecnologia de lipo macrotunel con acero galvanizado de aprox. 300 rn'. Con
este último tipo de Invernáculo se intentará Probar una mayor eficiencia en el control
climático. ya que más allá de sus características técnicas que permiten un mejor
movimiento en el flujo del aire. Se Instalarán equipos especlficos de control climático.
tales como iluminación artificial. sistema de 'black out', ventilación y extracción forzada
do aire, sistemas de aspersión de vapor de agua y negó por goleo.
Por último, se instalará un espacio adecuado para el procesamiento de la materia
vegetal de alrededor de 40 ni'. Aill se realizará el corle. secado, curado, cierre al vado,
acopio y almacenaje tanto de materia primas como de productos elaborados. El mismo
será equipado con sistemas de control de humedad, temperatura? (lujo de aire, a fin de
alcanzar un rango de HR entre el 45% a 55% y una temperatura de 16 a19 'C.
Seguridad
Ccovenna aprobado /ny Ro 70.2019, IF.2019.38298756-APNLVTCCONICE1
tromp1!1s3704o6r96-QNeruficao1Ñffet-ÑICET
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pulgadas, 2 metros de alto y 2 filas do alambro do púas con postes cada 3 metros. Todo
el perímetro alambrado se encontrará cubierto con lona marítima para mayor seguridad.
Contará con portón automático, portero eléctrico y monitoreada por cámaras para evitar
posibles Ingresos no autorizados mientras ingresa el personal o proveedores.
CCTV: Se instalará un circuito cerrado de 7 cámaras IP de alta resolución y visión
nocturna en lodo el perímetro, interior de invernaderos y oficinas que se controlan desde
el bünker de seguridad. Las grabaciones se alojan en un lugar seguro do las
instalaciones con copia en la nutre por cualquier eventualidad.
BUNKER: En el predio se construirá un bunker para alojar el personal de seguridad
desde donde se monitorean las cámaras de seguridad, accesos etc., con comunicación
independiente y también están provistos de botones de pánico para guardias y personal
permanente que se conectan vía telefonía celular con la Comisaria de la zona.
interior de estos contará con sensores do movimiento que disparan una alarma luminica
sonora en todo el predio y al búnker de seguridad. La alarma estará conectada con la
Policia de la zona.
1.b) Cultivo modelo indoor (responsable Dra. Fanovich, INTEMA)

En colaboración con la empresa CANNTEK se procederá a armar un cultivo modelo (4
rn') en el laboratorio de Fluidos Supercriticos del INTEMA (3er piso Lab '333). El mismo
tiene la función de reproducir el cultivo de la empresa en el laboralorio con el fin de
generar insumos vegetales propios en pequeña escala e implementar modificaciones
en las variables de cultivo, Se utilizará el mismo material vegetal de•parfida que emplee
la empresa. Esta actividad contará con la dirección lécnica del Ing. Agrónomo Ignacio
Luis Alvarez (Matrícula 02528) y la responsable institucional será la Dra. Alejandra
Fanovich.
.ETAPA 2
ACTIVIDAD N° 2: Recepción del material vegetal y caracterización inicial
(responsable Dra. Churlo, Dra. Barbinl, DOBO)
El material vegetal suministrado por la empresa será evaluado documentando su estado

y calidad. Se procederá a la caracterización del material seco previo a la cuantificación
de humedad.
Se analizará la composición cuantitativa de los principales cannabinoides (THC, CBC),
TEICA y CEDA) como así también de metales pesados (plomo y cadmio) y pesticidas.
Además, se verificará'que las muestras sean aptas microbiológicamente. Se seguirá la
normativa vigente: Resolución 731/2022-MS y Disposición 6431/2022-ANMAT.
ACTIVIDAD N° 3: Ensayos de extracción (responsable Dra. Fanovich, INTEMA)

Se realizarán ensayos de extracción a partir del material vegetal (el de la empresa y el
del cultivo indoor) tratado y sin tratar térmicamente en un equipo de alta presión
(Pmáx:500 bar, V. 500 mL) HPU500 (Eurotechnica) de INTEMA. Se realizarán
tratamientos térmicos a distintas temperaturas para aumentar la descarboxilación de las
formas ácidas. Se propone tratar a las muestras a 90, 110 y 140 grados, a tiempos que
se optimizarán en la práctica.
Convenio aprobado poi Res 1170.2019<f '~~

unum-AVICIMIPNIGIIVN#CIACCFNICET
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Se evaluará el efecto de la presión del sistema, la temperatura, las condicionas de flujo,
como así también el tiempo do saturación en los diferentes compartimentos del equipo.
Se emplearán materiales con diferentes pre.tratamlentos y diferentes concentraciones
de co-solvente (el cosolvenle se elegirá según las normas ICH de solventes residuales)
para facilitar los procesos do extracción con COrsC. Se confeccionarán protocolos de
trabajo para cada sistema estudiado con el objetivo de lograr la reproducibilidad de las
condiciones de operación en el proceso establecido y de las características del producto.
Se analizarán las cinéticos de extracción bajo las distintas condiciones del proceso. Se
optimizarán las condiciones de extracción teniendo en cuenta el rendimiento y la
naturaleza de los compuestos bioactivos extraídos. Se hallarán las condiciones
especificas para lograr la extracción de dos tipos de extractos:1- Extractos de
cannabinoides y 2- Extractos de terpenos. So realizarán ensayos do extracción
convencionales (Soxhlet) con etanol para comparar la calidad de los productos.
(INTEMA).
Asimismo, so realizarán ensayos de extracción sobre el material gestionado por la
empresa como residuo de la producción (hojas y tallos) con el objeto de evaluar la
factibilidad de obtener tracciones ricas en compuestos flavonoides de potencial
aplicación como Ingredientes activos para la elaboración de formulaciones para
protección solar.
ACTIVIDAD W 4: Ensayos do caracterización qulmica do extractos (responsable

Dra. Churlo, 00130)
So determinará el perfil químico del extracto,
Perfil químico del extracto:
priorizando el análisis de componentes umnabinoides y terpénicos. a través del uso de
cromatografias liquida de alta performance (HPLC) y /o gaseosa acoplada a
espectrometría de masas (GC-MS). Se evaluará el porcentaje de inhibición
Capacidad antioxidante de los extractos:
del radical DPPH mediante EPR en función de la concentración de extracto. a fin de
determinar la concentración electiva 50 (EC50), y comparar con el parámetro obtenido
las mismas condiciones para antioxidantes de referencia (ácido gálico o ácido
en
ascárbico). Se evaluará el efecto de la exposición a iluminación
Estabilidad de los extractos:
ambiente y al aire sobre 13 concentración de los componentes caracteristicos de los
extractos. Los análisis so realizarán mediante espeetrofotomelria do absorción UV.
visible y HPLC. reacciones de
co Explorar la capacidad de los extractos do conducir
lotosensibilización
Se determinará la formación de especies reactivas de oxigeno, tales como como
oxigeno singlete, inducidas por irradiación de los extractos con LEDs en el azul y en el
verde (por ej. 450 y 530 nm). Para ello se utilizará EPR y la técnica de las trampas de
espin. La trampa especifica para evaluar oxigeno singlete será el 4-TMP.
ACTIVIDAD N 5: Ensayos do caracterización biológica do extractos (responsable

Dra. Barbinl, DOBO)
Todos los protocolos a utilizar están puestos a punto y disponibles en el Laboratorio.

Los detalles metodológicos se describen a continuación.
Estudio de la actividad cilotóxIca.
Los extractos obtenidos serán empleados en ensayos bioquímicos que permitan

determinar la actividad citotóxica sobre células tumorales hepáticas y además estudiar
Cómanlo &piando Por ea 11101201e IF.2019462987564"-GYUCOUCET

1302~02357640621%21/11~9NIICIDIs110 ET
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el mecanismo de muerte (apoplosisrauto(agia) mediante el cual se ejerce la actividad.
Asimismo, se propone estudiar las vías intracelulares de transduction de señales
involucradas en la muerte celular inducida.
Se estudiarán lineas celulares de hepalocarcinoma humano (HopG2, Hep313, Huh-7).

Las células HepG2 y Hep3B, derivadas de hepatomas humanos, se obtuvieron de
'American Type Tissue Collection (ATCC, HE 8065 and PIB 8064, respectivamente). Se
cultivarán en medio mínimo esencial (MEM) suplementado con 100 ml/L de suero letal
bovino, 2 mmol/L do glutamine, 1,5 g/L de bicarbonato de sodio, 1,0 mmol/L de
aminoácidos no esenciales, 1,0 mmol/L de piruvato de sodio. Las células Huh-7, también
derivadas de hepaloma humano se cultivarán en medio base D-MEM suplementado
como se describe anteriormente. Todas las células se incubarán a 37 *C y 5 % de CO2.
Detección de viabilidad. Se analizará la viabilidad de-las lineas celulares tratadas con

los diferentes extractos. Se analizará el efecto tóxico de las mismas sobre las lineas
celulares de hepatoma. Para esto se analizará la viabilidad dotas células tratadas con
dimethylthiazol-2-y1)-5-(3-carboxymelhoxypheny1)-2-(4-su1fophenyl)-2H-tetrazol1 um-
compuesto de tetrazolio) (Promega), durante distintos tiempos. Este ensayo mide la
actividad de dehldrogenasas mitocondriales en las células viables, basándose en una
reacción colorimétrica que permite medir la bioreducción de un compuesto de larvae°
(MTS) a formarán. La formación de este producto se mide a 490 rue en un
espectrofotómetro de placa inulti‘vell. El valor de absorbancia es proporcional al número
de células viables. Se incluirán controles de células sin tratar y el porcentaje de viabilidad
celular se normalizará a los valores de absorbancia de estos controles. El porcentaje de
viabilidad celular se normalizará a tos valores de absorbancia de las células controles
sin tratar, Se determinará la concentración cilotóxica 50 % y 90 % (CC50 y COSO,
respectivamente) para los distintos extractos y lineas celulares.
Detección de la muerte programada por apoplosis. Tinción con naranja de acridina y

bromuro de elidio. Una suspensión celular se teñirá con naranja de acridina/bromuro de
°lidio (4 ug/ml, Sigma). Se observará bajo microscopia de fluorescencia (Nikon Eclipse
400) y se fotografiará (Nikon Coolpix 4500). Se calculará el porcentaje de células viables
(verde brillante), células apopléticas tempranas (núcleo verde compacto), células
apopléticas tardías (nucleo naranja/rojo brillante) y células necréticas (núcleo
naranja/rojo difuso)
Detección del ADN fragmentado. Se extraerá el ADN genómico de las células

tratadas con el kit VVizard Genomic DNA Purification (Promega), según las instrucciones
del fabricante. Los ADNs extraídos se almacenarán a 4 'C hasta su uso, y se separarán
por electroforesis en un gel de agarosa al 1 Las bandas o ladder del DNA clivado se
visualizarán en un transiluminador, mediante la lindón del gel con bromuro de etidio (0,5
ug/mL, BioRad).
bit- Análisis del ciclo religar, Se cosecharán las células trátadas, se teñirá el ADN con
ioduro de propidio (Sigma, 50 tig/mL) y se digerirá con RNAsa (Sigma, 0.5 mg/rnL). Se
analizarán por citometría de flujo, detectando fluorescencia roja (488 nm de excitación
y detector de paso de banda de 620 ±. 15 nm), - proporcional al contenido de ADN. Se
colectarán un mínimo de 10000 células por muestra. En los histogramas do ADN se
Convenio apresen° por Res. 11750019. IF.20 19-36218756-APN-GVTICONICET XVI
tiONYEUTI113376406-2PW-CAIVIVIGUIPICDT\IICET
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Sc;anned vvith CamScanner
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detectarán los ateos de fluorescencia, correspondientes al contenido de ADN en las ,
distintas loses del ciclo celular (GO/G1, S y G211é) ya las células apoptóticas con un
, el cual representa al ADN degradado.
pico "subG0-
Determinación de vlas infracelulams de (ransducción de señalas implicadas en la
So estudiarán los posibles electos sobre las siguientes vías: I) activación do
apoplosis. diferencias do expresión do proteínas regulatorias do la apoptosis, los
caspasas,
miembros do la familia de Bc1-2 (inhibidores (BcI-2 y BcI-XL) o estimuladores (Bad, Bid,
Bax) de la apoplosis). Para analizar los niveles de expresión do las protelnas se utilizará
la técnica de Western Bid. Para ello, las células serán usadas con un buffer de tisis
conteniendo inhibidores de proleasas. La concentración de proteínas totales se
determinará mediante el método de firadford. Se realizarán SDS-Page de distintos
porcentajes, en los que se cargarán cantidades iguales do proteínas totales por callo.
Estos geles se elechotransferirán a membranas de PVDF (immobibruP. Mitlipore). las
cuales serán bloqueadas y posteriormente inmunodetectadas (anticuerpos primarios
Santa Cruz Blotechnology. segundo anticuerpo.peroxIdasa Dako, revelado por
electroquimiolumscencia ECL Amersham), utilizando distintos anticuerpos primarios.
Las bandas resultantes de la inmunoderocción y del peso molecular correspondiente a
cada una de ellas so cuantificarán mediante densitometda de estas utilizando el
programa Image-J. Los valores de la cuantificación se normalizarán a un control de
carga de protelnas totales (beta-actina).

En las células tratadas con los extractos se determinara la
Detección do autolegia:
inducción de outofagia como consecuencia de los tratamientos. Los controles negativos
serán las células sin tratar. Los controles positivos de la inducción de adefagia se
obtendrán mediante la deprivación de radiantes en los cultivos celulares. A) Mediado
microscopio electrónica de transmisión. En las células tratadas se estudiará la aparición
de ultraestructuras características de la adefagia (vesiculas autoragicas:
autofagosomas, autolisosomas). visualizadas como vesículas doble membrana. El)
Detección do autolagla mediante microscoPla confiada'. En las células transfectadas se
estudiará la presencia do LC3 asociada al autolagosoma. por marcación con anticuerpo
anti-LC3 fluorescente. La ce-localización de esta proteIna con LAMP.1 (lysosome
associated membrana proteinl ). detectada mediante un anticuerpo marcado con otro
fluoróforo. permitirá demostrar la fusión del lisosoma con el autolagosoma para lormar
los autolisosomas. C) Estudio de la expresión de las protelnas asociadas al proceso de
autolagia: LC3, beclina-1, p62 por Western Vol Se utilizarán anticuerpos especIficos
(Santa Cruz Biotechnology). membranas PVDF (lrnmobilon-P, Millipore), segundo
anlicuerpoperoxidasa (Dako), revelado por elechoquimiolumscencia (ECL GE
Healthcare). Se usará beta-actina para normalizar la carga de proteína total en los
geles!.
Estudio do la actividad antiviral.

Se estudiará la actividad antiviral frente a los siguientes virus: hepatitis B. herpes
simplex-1 (HSV-1). sincicial respiratorio (RSV) y adenovirus-7 (ADV-7).
Para HBV se emplearán las células HepG2 2.15 (transfectadas de manera estable con
HBV, productoras de viriones infectivos), las cuales se cultivarán en medio base D-MEM
XVII
comiso sarroso oí Res. II /0(2019. iF-2018.38298756.APIA4VICONICET
COY 7~04061 fit2-alleNt1C14117CE3T\110ET
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suplementado como se describe anteriormente y se incubarán a 37 'C y 5 % de CO2.
Para los otros virus so usarán células Vero y HEp-2, que so cultivarán en medio MEM
suplementada y en las mismas condiciones de incubación.
Determinación de/a máxima concentración no cito:tóxica (MONO) de los extractos en

las diferentes líneas celulares. Se analizará el efecto tóxico de los extractos mediante
M75 (descripto anteriormente) y so determinará la MONO do cada extracto para cada
línea celular.
Estudio de la inhibición en la replicación viral (aclividd °neve* Para diE3V (virus no

cultivable) se determinará la inhibición do la secreción de antígenos virales. Las células
se tratarán con distintas concentraciones a partir de la MONO y se cuantificará la
producción de FIE3sAg (antígeno de superficie) y HI3eAg (antígeno e) en los
Sobrenadantes de cultivos tratados, mediante ensayos de ELISA. Además, se
cuantificará del ADN viral por PCR en tiempo real, tanto en los sobrenadantes como en
las células tratadas.
Para los otros virus (que son cultivables) se realizarán ensayos de cuantificación viral.
seriadas en base 10 se sembraran sobre las monocapaS celulares crecidas en placas
de 96 pocillos con diferentes concentraciones do los extractos, utilizando la MCAIC corno
la concentración más alta. Un control de la infección se realizará en ausencia de los
extractos. Las placas so incubarán a 37 °C y 5 °/. de CO2 durante 72 horas. Luego, se
Ajarán, teñirán con cristal violeta y se observará el efecto citópático. Los extractos se
. considerarán positivos criando el título viral se reduzca un 99 % en su presencia con
respecto al control de la infección. •
En segundo lugar, se determinará la DE 50% (dosis efectiva 50 %) por el método de

placas, determinando la reducción en el titule viral o en las unidades forinadoras de
placas por mililitro (UFP/mL) en presencia de los extractos. Para clic, monocapas
crecidas en placas de 24 pocillos se infectarán con diluciones de los stocks virales en
presencia de concentraciones crecientes de los extractos. Luego dé una incubación de
una hora, se agregará medio de placa (medro de infección con metilcelelosa) y la
incubación continuará en presencia de los extractos. Luego de 72 horas, las monocapas
se fijarán, teñirán y se contarán las placas de lisis generadas. La DE50 se calculará
como idconcentración del extracto que reducea un 50 % el número de placas formadas
(UFP) en comparación a las placas generadas en el control de la infección (en ausencia
.
del extracto).
ETAPA 3
ACTIVIDAD N° 6: Desarrollo de prototipos como productos medicinales derivados

de Cannatils
Protocolo de preparación de aceites: Se elaborará un protocolo para la preparación

de aceites de Cannabis C011 concentraciones controladas de los principios activos
mayoritarios y so contrastará su bioequivalencia con productos certificados
intern'acionales. (DC113301FIMAR)
Convenro aprobado por Res 1700019. IF-2019-3029815firAP/TGVIaCONICEI
CIONVE4M23170406/2 19112-0M114CMTWICIJNICEET
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Evaluación de otros producíos con Cannabls: Se desarrollarán mictoparliculas a
partir do la encapsulación de extractos utilizando polímeros biocompalibles como
policaprolactona o quitosano comerciales mediante técnicas convencionales. Se
estudiará la liberación de los principios activos encaPsulados mediante ensayos in vitro.
Los ensayos se llevarán a cabo empleando 100 mg de muestra (para cada material), los
cuales serán suspendidos en fluido corporal simulado (SU) a 37± V C bajo agitación
constante del sistema (90 rpm). Para cada ensayo, las micropaniculas serán colocadas
dentro de membranas inertes de acetato de celulosa de 0.22 pm do tamaño de poro
(Gamali)t). A tiempos preestablecidos se tomarán alicuotas de la solución (3 mL),
reponiendo el volumen extraído con SSP Irasco. Las alicuotas extraídas serán
Finalmente analizadas empleando la solución SBF como blanco, a fin do determinar la
cantidad máxima de principio activo liberado. Se determinará la cantidad total de
principio activo incorporado evaluando la cantidad de sustancia liberada a tiempo
'infinito (esto es, hasta obtener un valor constante liberado), y la cantidad retenida en
cada sistema luego del ensayo a tiempo Infinito. El contenido de sustancia activa
liberada a partir de una masa conocida do microparticulas se determinará por
espectrololometria UV.visible y por HPIC. La evaluación del contenido de sustancia
activa retenida se llevará a cabo a partir do la disolución de las microparticulas en
solvente orgánico y la medición de las sustancias activas como en el caso del contenido
liberado. De acuerdo con la masa total obtenida (liberada 4. retenida), se determinará el
cada sistema de micropanlculas.(INTEMA)
porcentaje en peso de sustancia activa en
D. RESULTADOS ESPERADOS Y CAMPO DE APLICACION DE LOS

RESULTADOS
a) Resultados esperados: Con la ejecución de este proyecto se espera lograr una
área de
eficiente sinergia entre el sector productivo y el sector académico en un
relevancia socio-económica corno lo es el Cannabis medicinal.
Se plantea obtener:
informe de resultados de caracterización inicial.
informe de resultados sobre obtención de extractos de Cannabis.
informe do caracterización quImIca do extractos.
4. Informe de caracterización biológica de los extractos.
S- informe interno entre las UE quo contenga los protocolos desarrollados
considerados como know-how.
b) Campo de aplicación de los resultados: Se espera que los resultados puedan

ser aplicados a la industria farmacéutica.
E. C
Tarea MESES
15 In 1 18
2 1 3 1 4 1 5 6 7 1 8 9110 i11 1 12 I 13 I 14 I 15
, «I• / / / / / / /
'
XIX
Conroeo apretado por Ros. II /0/7019. IF.20151.36290754A9HGVTIIC01ICET
9-GlInViegYINC01910ET
ri~6413(íg901.
tigitil
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3' z
'4 .4 .4
5: .4
7 1 1 1 z
6 1/1
F. GRUPO DE TRABAJO
APELLIDO Y . INSTITUCIO CUIL.» . CATEGORIA FUNCION
.
NOMBRE ''' - N' ..., .. . •
BARBINI CONICET 27-21802692-9 Investigadora Responsable

Luciano técnica I
Fernanda
CHURIO CONICET 27-15226856-6 Investigadora Investigadora

María Sandia

Luis Ignacio
FANOVICH CONICET 27-20062416-0 Investigadora Responsable

Maria Alejandra técnica ll
LERE CONICET 20-25265226-5 CPA Técnico

Martin
G. PERSONAL DE LA CONTRAPARTE
APELLIDO Y NOMBRE INSTITUCION , CUIL ' .

Madin
BELTRAN DEPONTI CANNTEK 20-34768496-2

Mohos Nicolas
PARODI CANNTEK 20-35621343-3

Tomas

Justo
ALVAREZ CANNTEK 20-37379830-5

Ignacio Luis
Convenio aprobado por Raz. 1170/70 Id IF-2019-36291r755-APN-GineCONICET 8.8
CIONVV-SEW6406111962-0,111140111WEEICET
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Con »mbadopor Res. 1170019. iF,7019-362987564PNCoTeCONICEI XXI
U92117~040621962-G1/14 MIG@MODIYICEST
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•
Anexo Presupuesto
CANNTEK abonará a CONICET la suma total de 6500 USO (SEIS MIL QUINIENTOS
DOLARES) al tipo do cambio vendedor de Banco Nación para la elocución de la
totalidad do los trabajos objeto de este Convenio. Dicho monto se abonará en tres (3)
cuotas do la siguiente manera:
Cuota inicial del cincuenta por ciento (50%) quo será pagadera dentro de los 15 dias
de que el Ministerio de Salud apruebe por resolución el presente convenio:
Segunda cuota del veinticinco pos ciento (25 %) contra entrega del >informe de la
segunda etapa.
Una tercera y última cuota del veinticinco por ciento (25 %) contra entrega del informe
de la tercera etapa.
Tabla Pago/Aporte en Especie — Valor aproximado
• Importo total
L
. psw.92.13. ' Detalle 1 estimado
..,
Gastos do producción del material
Material vegetal vegetal US 60.000
Dos equipos de iluminación

Lumatek de 600v/.
Sistema de riego por goteo.
s Insumos cultivo Sistema do deshumidincacion de

indoor ambiente US 2.500
'•
s. Total, , „+,„_.,„ L .1. 115" 62.500 .,
Conv 'achaco pa Ro. II 74•2019. 17-70194829C/56.APN-CVleCONICE1 MAI
fP2129
. 5114231253704WIPM-GIPMCWIRIFCEJNICET
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o
República Argentina - Poder-Ejecutivo Nacional
1983/2023 -40 AÑOS DE DEMOCRACIA
floja Adicional de Firmas

Anexo
Número: IF-2023-03637647-APN-G121-14CONICET
CIUDAD DE BUENOS AIRES

Mutes 10 de Enero de 2023
Referencia: Documentación Adicional
El documento fue importado por el sistema CEDO con un iotal de 22.Paginds.
Doitath sign.° by. Gelioi Docum•tual Electoutca

Ore' 2073.01.10 12:55:10 03:00
ART114 RACCA
20341342687
CONVE-2:023-04062562-APN-GVTKONICET
'Digna y crynoti by Geshon DOnnental

Pág '
23 Cigi21051.(11.10 12:5,5:17 -03:00
IF-2023-54265679-APN-DD#MS
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e
República Argentina - Poder Ejecutivo Nacional

1983/2 023 -40 AÑOS DE DEMOCRACIA
Hoja Adicional de Firmas

Convenio
Número: CONVE-2023-04062.562-APN-GVTfiCONICET

Miércoles I I de Enero de 2023
Referencia: Convenio pre-aprobado de h1-D entre CONICET y CANNTEK S.A
El documentO fue importado por el sistema GEDO con un total de 23 pagina/s.
Dmiielly signad by Gagueo Documental EDatronice

Dele 2023 01.11 11'22.00 -03:00
Sari giya Ciaste]] Romano

Gerente
Gerencia de ViliCtl ración Tecnológica

Consejo Nacional ole I nvestipacioneS Ci en 1 incas y Técnicas
Digilally signad ay Deseen Documental

IF-2023-54265679-APN-DD#MS
Eleetronica
Da/e' 2023.01.11 1122:04 -03.00
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ADENDA AL CONVENIO DE I+D Pre-aprobado
entre CONICET y CANNTEK S.A
Entre el Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas, denominado

en adelante el "CONICET", representado en este acto por su Gerente de
Vinculación Tecnológica, Sergio Romano, con domicilio en. Godoy Cruz Nro. 2290
de la Ciudad Autónoma de Buenos Airés, por una parte; y la empresa CANNTEK
S:A, [30-71771538-8], denominada en adelante la "EMPRESA", representada en
este ácto por su Presidente, Dr. Martin Racca DNI 34.134.268, con domicilio en calle
Acuña de Figueroa 1332, Dpto. 305, Ciudad Autónoma de Buenos Aires Argentina,
por la otra; yen conjunto denominadas las "Partes", acuerdan celebrar a presente
Adenda, en adelante la "Adenda", el cual se sujetará a las siguientes láusulas y
condiciones:
PRIMERA. OBJETO: La presente Adenda tiene por objeto: cambio de plan 'de
trabajo — 'modificación de actividad y responsables de Etapa 1, del convenio pre-
aprobado de I+D enire CONICET y CANNTEK S.A, celebrado con fecha 11 de enero
de 2023 conforme se detalla en el ANEXO 1.
SEGUNDA. INALTERABILIDAD DE LAS CLAUSULAS: El resto de las cláusulas

que no se Modifican en la presente Adenda mantienen plena vigencia y se
mantienen inalterables.
En prueba de conformidad se firman 2 ejemplares de un mismo tenor y a un solo

efecto, en - la Ciudad Autónoma de Buenos Aires, a los ' dias del mes de
del año
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-.O ...:,i.. .--
ANEXO 1
A.TITULO DEL TRABAJO:
"Desarrollo de productos controlados de Cannabis para uso
medicinal"
B. OBJETIVO DEL PLAN DE TRABAJO
OBJETIVO GENERAL
Estandarizar la producción de extractos de Cannabis con propiedades medicinales en total

acuerdo con la normativa nacional vigente, siguiendo las directivas de la Organización
Mundial de la Salud (OMS) en materia de buenas prácticas agrícolas y de recolección de
plantas medicinales; y desarrollar nuevas formas de administración de extractos de
Cannabis medicinal.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
A.1- Desarrollar técnicas que permitan el cultivo de variedades de Cannabis sativa y el
"c71.
121 y desarrollo del perfil genético de las variedades para su posterior aplicación en monitoreo
o
oc de la descendencia. Estudiar la adaptabilidad de variedades de Cannabis de diversas
o i
c ro • latitudes a la zona propuesta.
%.€
U-
A.2- Desarrollar un protocolo estandarizado de obtención de extractos de Cannabis a partir

de tecnologías limpias. Estudiar y optimizar el proceso de obtención de extractos de
Cannabis utilizando tecnología de fluidos supercriticos. Comparar la eficiencia del método
con métodos convencionales de extracción.

A3a. Caracterización química.
-Caracterizar y cuantificar por técnicas analíticas cromatográficas (FIPLC y/o CG-MS) los
componentes cannabinoides y terpénicos de los extractos de Cannabis sativa obtenidos
por distintas metodologías.
-Evaluar la capacidad antioxidante de los extractos en base a reacciones de inhibición de
especies radicales de prueba mediante Resonancia Paramagnética Electrónica (EPR).
-Determinar la estabilidad de los extractos en presencia y ausencia de iluminación ambiente
y saturación con aire.
-Explorar la capacidad de jos extractos de fotosensibilizar la formación de especies reactivas
de oxígeno mediante irradiación con luz visible.
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Página 45 de 61 I Itertn-inna VI(ONICLT

O d-• •-• nn A I • 1.-•
A3b. Caracterización biológica. Evaluar actividad citótóxica y antiviral.
-Determinar las concentraciones citotóxicas de los extractos en diferentes líneas celulares
tumorales humanas, representativas de distintos tipos de cáncer.
-Determinar las concentraciones inhibitorias de la replicación viral de diferentes virus
humanos de importancia médica.
-Establecer los mecanismos moleculares implicados en la actividad antiviral.
A.4- Obtener prototipos dé productos derivados de Cannabis.

Elaborar un protocolo para la preparación de aceites de Cannabis con concentraciones
cOntroladas de los principios activos mayoritarios y contrastar su bioequivalencia con
productos certificados internacionales. Diseñar y evaluar la potencialidad de obtener
microparticulas para contener los principios activos de cannabis.
C. PLAN DE ACTIVIDADES
4.RESPONSABLE
1. ACTIVIDAD 1 DESCRIPCION 3.ENTREGABLES DEL

N9
ENTREGABLE
1 E Cultivo de material Material vegetal

Cultivo CANNTEK (CANNTEK) MARTÍN
T vegetal
A Cultivo modelo indoor (INTEMA) ' RACCA
P
1
A
1
2 Recepción del Se realizarán ensayos Informe de CHURIO
material vegetal y microbiológicos, de pesticidas. Caracterización BARBINI
caracterización metales pesados y de humedad sobre inicial
inicial, el material entregado por CANNTEC
para reportar las características
según la normativa vigente. (DOBO)
3 Ensayos de Se realizarán ensayos de extracción Informe sobre FANOVICH

E extracción con CO, supercritico (con y sin Extractos
cosolventes) y con solventes líquidos De Cannabis
T mediante técnicas convencionales Se
buscará obtener extractos ricos en
A terpenos y otros ricos en
cannabinoides. (INTEMA)
4 P Ensayos de Se determinará el perfil químico de Informe de CHURIO

caracterización los extractos mediante métodos de caracterización
A química de extractos análisis cromatográfico HPLC y GC-MS química de
apuntando a determinar presencia y extractos
cantidades relativas de
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cannabinoides y terpenos. Se
2
evaluarán propiedades como:
actividad antioxidante (mediante el
método de inhibición del radical
DPPH mediante EPR), estabilidad
química i(por análisis
espectrofotométrico de absorción
UV-visible en función del tiempo y
condiciones de almacenamiento) y
capacidad fotosensibilizadora •(por
irradiación estacionaria y detección
de oxígeno singlete mediante
trampas de espín en EPR) (0080-
IFIMAR)
Se analizará la actividad citotóxica de Informe de BARBINI
5i Ensayos de
caracterización
caracterización los extractos frente a diversas lineas
biológica de los
biológica de celulares turnorales humanas y se
eiitrac tos
extractos analizará la actividad antiviral de los
mismos frente a virus humanos de
importancia médica (hepatitis, virus
respiratorios, herpes virus, etc.)
(00130)
6 Desarrollo de Se elaborará un protocolo para la

preparación de aceites de Cannabis Informe interno . BARBINI
prototipos como
con concentraciones controladas de entre las UE
E productos CHURIO
T Medicinales los principios activos mayoritarios y FANOVICH
A derivados de se contrastará su bioequivalencia con
13 Cannabis . productos certificados
A internacionales. (DOE3Q-IFIMAR)
Se desarrollarán micropartículas
3 conteniendo extractos de Cannabis a
partir de polímeros comerciales
biocompatibles. Se. evaluará la
liberación de principios activos de
Cannabis en ensayos in vitro
estandarizados. (INTEMA)
Descripción de las actividades:
ETAPA 1
1) Cultivo de material biológico
1.a) Cultivo CANNTEK (la empresa es la responsable de esta actividad)
La empresa es la responsable de la producción inicial del material vegetal para dar inicio a
la secuencia de actividades. A continuación, se brindan detalles de los materiales de
partida, formas de cultivo, espacio disponible entre otros aspectos para generar el material
inicial.
Materia' I de origen:
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-, r' ..-.-c'
Se utilizará germoplasma nacional de origen desconocido para trabajar en su
fitomejoramiento y lograr a posteriori su inscripción dentro del registro de variedades de
cannabis de INASE. La resolución que habilita a no declarar el origen de este tipo de
germoplasma es la Resolución Conjunta INASE - Ministerio de Salud N° 5/2021.
Se importarán semillas del banco trilogene seeds y Dinafem Seed variedades tanto altas
en CBD y bajas en THC como altas en THC y bajas en CBD, esto para poder experimentar
con diferentes combinaciones de ambos cannabinoides dominantes para buscar la mejor
eficiencia en diferentes patologías.
Estas variedades pueden encontrarse sujetas a disponibilidad y a que el banco de semillas
esté dispuesto a enviar al país. De ser esto imposible se buscará otro banco de semillas
que pueda proveer semillas de similares características. Asimismo, las variedades pueden
ser modificadas con el fin de poder atender mejor las patologías necesarias, según se
converse con los diferentes entes involucrados. Cábe aclarar que simplemente se muestran
las variedades que se podrían conseguir con el fin de mostrar el interés de trabajar con
variedades que tengan fines medicinales.
Actualmente CANNTEK ha iniciado el trámite frente a INASE para darse de alta en el
Registro Nacional de Comercio y Fiscalización de Semillas (RNCyFS) como criadero de
semillas de cannabis. La selección del germoplasma y sus variables está a cargo del In.
Agrónomo Ignacio Luis Álvarez, matrícula 02528, resposable técnico del proyecto y frente
a INASE.
Técnicas de cultivo:
El Cannabis •es una planta que se puede cultivar con distintas técnicas, nosotros
proponemos comenzar este proyecto con algunas ya utilizadas anteriormente en proyectos
anteriores (desarrollados en Uruguay) como son las técnicas de cultivo en invernaderos tipo
macrotunel, de tipo "palo y nailon" y parcelas a cielo abierto. En los invernaderos se
probarán métodos de cultivo en suelo orgánico vivo y cultivo hidropónico. Comenzando por
las más sencillas y probando con otras a medida que se crea conveniente. •
Los hongos, insectos, bacterias y el estrés climáticos son los enemigos número uno de un
producto de calidad farmacéutica, es por ello que es de fundamental importancia la
benéficos, micorrizas y fertilización orgánica para lograr los estándares más altos de
calidad.
La técnica de cultivo de cannabis en invernadero tipo macrotunel provee beneficios no sólo
a nivel de cultivo sino también a nivel económico. Esta técnica consiste en la construcción
de invernaderos, con cubierta translúcida para poder aprovechar la luz solar al máximo
disminuyendo el uso de luz artificial, ayudando con la protección del invernadero a controlar
plagas, humedad y temperaturas requeridas por el cultivo. Se puede acompañar este
invernadero de focos de luz artificial para simular las condiciones climáticas requeridas por
el cultivo en condiciones que el clima de la zona no los provea. También sé puede contar
con sistemas de black out cuando se requiera regular las horas de luz que sé desea que la
planta se encuentre expuesta para poder obtener el mejor rendimiento de cada cultivo.
Además, este tipo de invernadero debe equiparse con sistemas de ventilación natural y/o
forzada, sistemas de humidificación, calefacción por agua y/o aire caliente, así como
sistemas de control de clima, riego y fertirrigación. El cultivo en invernadero puede ser
llevado a cabo en macetas o a tierra directa, nosotros buscaremos utilizar ambos para poder
estudiar mejor las adaplabilidades de la planta a la zona con diferentes metodologias,
aprovechando los beneficios que cada una posee.
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La técnica de cultivo a cielo abierto si bien se encuentra más limitada en materia de control
de la planta, provee numeroso beneficios a fin de obtener un cultivo de mayor tamaño.
Consiste en la obtención de plantines de tamaño adecuado para que no sea vulnerable al
exterior, ubicado en parcelas de tierra para que puedan desarrollar raíces y tamaños
mayores que el que se lograría en las condiciones limitantes de una maceta. Esto limita a
plantar en diferentes épocas del año para poder aprovechar al máximo las condiciones
climáticas naturales, las cuales serán analizadas por el equipo técnico para determinar
cuáles son las más propicias para la zona. Se utilizará una superficie aproximada de 3000
rn2 para la producción a cielo abierto.
Método de producción:
tarea.
A través de una selección rigurosa se elegirán las mejores plantas, teniendo en cuenta el
tamaño y el desarrollo que las mismas vayan presentando. Estas serán trasladadas a otro
habitáculo, y se encontrarán en etapa de vegetación el tiempo necesario para poder obtener
la cantidad de esquejes requeridos para cumplimentar con el ciclo siguiente (los esquejes
seleccionados de germoplasma nacional de origen desconocido se utilizarán además para
trabajar en su fitomejoramiento).
macetas con tierra o jiffys donde las mismas se colocarán en las condiciones de
desarrollados los esquejes y encontrándose en las condiciones necesarias para poder ser
trasplantadas las mismas se irán acomodando eh macetas de un mayor tamaño dentro de
los invernaderos, y en la parcelas de exterior, para comenzar su desarrollo.
Dentro de los invernaderos se instalarán distintos paneles de luz artificial que ayudarán al
crecimiento y desarrollo de las plantas en cuanto se necesite. Se buscará siempre utilizar
la menor cantidad de luz artificial necesaria, teniendo en cuenta que a mayor uso energético
mayores costos y mayor contaminación. Las plantas que se encuentren en parcela exterior
se acomodan en hileras, dejando un paso entre hilera e hilera para poder revisar cada
planta en particular y tener un control exhaustivo de las mismas debido a que el control en
exterior en cuanto a plagas o problemas de suelo puede ser de mayor complicación que
interior. Dicho esto, sabemos que el control en interior puede generar complicaciones en
cuanto a condiciones de humedad o temperatura que serán controladas con distintas
tecnologías, pero permite un mayor control para un mejor desarrollo, y en el exterior el
desarrollo puede llegar a presentar otras complicaciones las cuales serán estudiadas.
Una vez completado el ciclo de las plantas, las mismas serán cortadas y colocadas en un
cuarto de secado, donde tendrán que permanecer un tiempo estipulado de
aproximadamente .un mes para completar el proceso de secado y curado. Este proceso
debe ser llevado a cabo en unas condiciones de humedad relativa del ambiente de 45% a
60% para prevenir la aparición de patógenos y a una temperatura de 15 y 18°C para
prevenir que se volatilicen diversos compuestos químicos.
hojas, proceso al cual llamaremos manicura o trimmeado. En este proceso una persona
con una tijera o una maquina separa los cogollos del resto de las plantas pudiendo asi
separar las diferentes partes de la misma. Terminado el proceso de manicura, los cogollos
serán guardados en un habitáculo que presente las condiciones necesarias de temperatura
y humedad para su almacenamiento hasta que tengan que ser enviados al laboratorio
correspondiente para su estudio y producción de extractos.
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Es imposible realizar una estimación anticipada en relación con la cantidaCf de plantas y
definición de cuadros de cultivo por m 2 , ya que las mismas se definen • e,n función de
variables que se tienen en cuenta al momento exacto de su último trasplante.,
Gestión de plagas
En cuanto a la gestión de plagas, buscaremos tratar las mismas con insecticidas orgánicos,
siendo que tratamos con materia que en su posterioridad serán utilizadas como objeto para
productos medicinales. No se puede detallar los productos a utilizar debido a que como nos
encontramos en etapa de investigación, se desconocen las plagas y otros tipos de
malestares que pueda presentar el cultivo en la zona en cuestión.
Gestión de residuos
En materia de residuos, sabemos que la planta de Cannabis tiene numerosos usos, no solo
en cuanto a usos medicinales sino también en numerosas industrias como la textil o
energética, por lo tanto lo que podríamos catalogar como residuos (tallos y hojas) serán
eventualmente entregados a los grupos de investigación asociados a este proyecto para
investigar nuevos y mejores usos.
En cascHe tener excedente, los residuos serán depositados y acopiados en un sector
donde se estará generando tierra nueva, con mecanismos de compostaje. Esto nos
plantación, mejorando el suelo en el que se encuentran las plantas para su mejor desarrollo.
Trazabiiidad
j AGRICOLAS (BPA) y BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA (BPM) (Disposición
O 0<i 3602118 ANMAT, Disposición 3827/18 ANMAT) es que se implementará un sistema de
O ad
ce "Z trazabilidad en la que cada plantin será etiquetado con un código de identificación para
,C 04"NaT
tN
poder realizar un seguimiento desde la semilla hasta la inflorescencia de cannabis. El
na. manejo de la documentación en forma sistematizada colabora en la mejora cualitativa y
decisiones estratégicas y ayuda a la creación de confianza en la industria del cannabis.

CANNTEK cuenta con un predio de - 5 hectáreas, circunscripto este último dentro del
establecimiento estancia "La Trinidad", Ruta 2, km 396, (CP 7612) Carnet, Partido de
General Pueyrredón,
Serán montados dos invernaderos, uno de tipo "palo y nylon" de aprox. 300 rn 2 y otro con
alta tecnología de tipo macrotunel con acero galvanizado de aprox. 300 m 2. Con este último
tipo de invernáculo se intentará probar una mayor eficiencia en el control climático, ya que
más allá de sus características técnicas que permiten un mejor movimiento en el flujo del
aire, se instalarán equipos específicos de control climático, tales como iluminación artificial,
sistema de "black out", ventilación y extracción forzada de aire, sistemas de aspersión de
vapor de agua y riego por goteo. • 1
Por último, se instalará un espacio adecuado para el procesamiento de la 'materia vegetal
de alrededor de 40 m2. Allí se realizará el corte, secado, curado, cierre al vacio, acopio y
almacenaje tanto de materia primas como de productos elaborados. El mismo será
equipado con sistemas de control de humedad, temperatura y flujo de aire, á fin de alcanzar
un rango de HR entre el 45 % a 55 % y una temperatura de 16 a 19 °C.
Seguridad
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Página 50 de 61 01.401147~SI Mala. dinal70111

pulgadas, 2 metros de alto y 2 filas de alambre de púas con postes cada 3 metros. Todo el
perimet.ro alambrado se encontrará cubierto con lona marítima para mayor seguridad.
Contará con portón automático, portero eléctrico y monitoreada por cámaras para evitar
posibles ingresos no autorizados mientras ingresa el personal o proveedores.
CCTV: Se instalará un circuito cerrado de 7 cámaras IP de alta resolución y visión nocturna
en todo el perímetro, interior de invernaderos y oficinas que se controlan desde el búnker
de seguridad. Las grabaciones se alojan en un lugar seguro de las instalaciones con copia
en la nube por cualquier eventualidad.
BUNKER: En el predio se construirá un bunker para alojar el personal de seguridad desde
donde se monitorean las cámaras de seguridad, accesos etc., con comunicación
independiente y también están provistos de botones de pánico para guardias y personal
permanente que se conectan vía telefonía celular con la Comisaría de la zona.
interior de estos contará con sensores de movimiento que disparan una alarma lumínica-
sonora en todo el predio y al búnker de seguridad. La alarma estará conectada con la Policía
de la zona.
AGREGADO
1.b) Cultivo modelo indoor (la empresa es la responsable de esta actividad junto con la Dra.
Fanovich)
ti
É. Se procederá a armar un cultivo indoor de aprox. 60 m 2 en el 4to piso del INTEMA, ciudad
de Mar del Plata. El mismo tiene como objeto producir inflorescencias de Cannabis con los más
Oa
ce 1C altos estándares de calidad, controlando todos los factores ambientales de manera artificial.
N.
,5 O in‘2-
-C
"X U. Dichas instalaciones disponen de: Iluminación artificial (led y hps), sistema de filtrado de
2
agua por osmosis inversa, sistema de riego por goteo, climatización con sistema de aire
acondicionado y ventilación forzada a los fines de regUlar las condiciones de humedad y
temperatura interna.
Se contará con una sala de germinación, lugar en donde se germinarán las semillas y se
reproducirán esquejes de plantas madre seleccionadas (reprdducción asexuada), integrada esta
última a una sala para crecimiento vegetativo de aprox. 20 m 2, una sala de floración de aprox. 30
m 7 y una sala de corte y secado de aprox. 10 m 2.
Sistemas de cultivo en indoor
Por un lado, se cultivará en macetas con sustrato vivo buscando un producto final agro-
ecológico. Para la mezcla del sustrato se utilizará humus, tierra, turba, perlita, micorrizas,
trichodermas, distintos hongos benéficos, algas marinas y microorganismos eficientes. Se
utilizarán fertilizantes orgánicos garantizando un óptimo desarrollo de las raíces y de la masa
vegetal. El sustrato vivo favorece a desarrollar planta S más resistentes a plagas y enfermedades,
aumenta la expresión de los terpenos y flavonoides, se encuentra libre de químicos y enriquece los
suelos evitando el agotamiento.
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Página 51 de 61
o
Por otro lado, se implementará un sistema de cultivo hidropónico por goteo con sustrato
inerte. En este sistema el agua sirve como medio de cultivo cargado de nutrientes con un pH y
electro-conductividad determinadas y controladas a diario. Para lograr esto, se partirá utilizando
agua de ósmosis inversa, a través de la utilización de un filtro y depósito para estos fines. Al estar
los nutrientes disponibles inmediatamente, y controlando las necesidades nutricionales de la
planta en forma constante se puede lograr un rendimiento mayor en relación con la masa
(expresada en kg) x m2 de inflorescencias, en comparación al cultivo en tierra. Además, este
sistema mejora la calidad microbiológica del producto final, ya que al estar utilizando un medio de
cultivo inerte se reducen considerablemente las infecciones por plagas y enfermedades,
garantizando un producio totalmente inocuo.
Etapa de crecimiento vegetativo y floración
Una vez germinada la semilla y/o enraizados los esquejes seleccionados se harán dos
trasplantes, el primero a macetas de 3 litros donde continuarán su crecimiento hasta su posterior
trasplante a maceta final de 15 litros.
Se implementarán dos fotoperíodos distintos, uno de 18 h de luz y 6 h de oscuridad para la
etapa vegetativa, y otro de 12 h de luz y 12 h de oscuridadpara la etapa de floración.
Se buscará conservar una temperatura entre el rango de 24 y 28 2 C y una HR% del 60 al

80% para la sala de crecimiento vegetativo y del 45 al 60% para la sala de floración.
Sala de secado
En la misma se realizará el corte y secado del material vegetal. Será equipado con sistemas
de control de humedad, temperatura y flujo de aire, a fin de alcanzar un rango de HR entre el 45%
a 55 % y una temperatura de 16 a 19 °C.
ETAPA 2
ACTIVIDAD N° 2: Recepción del material vegetal y caracterización inicial

(responsable Dra. Churio, Dra. Barbini, DQBQ)
El material vegetal suministrado por la empresa será evaluado documentando su estado y

calidad. Se procederá a la caracterización del material seco previo a la cuantificación de
humedad.
Se analizará la composición cuantitativa de los principales cannabinoides (THC, CBD,
THCA y CBDA) como así también de metales pesados (plomo y cadmio) y pesticidas.
Además, se verificará que las muestras sean aptas microbiológicamente. Se seguirá la
normativa vigente: Resolución 781/2022-MS y Disposición 6431/2022-ANMAT.
j
ACTIVIDAD N° 3: Ensayos de extracción (responsable Dra. Fanovich, INTEMA)
Se realizarán ensayos de extracción a partir del material vegetal (el de la empresa y el del
cultivo indoor) tratado y sin tratar térmicamente en un equipo de alta presión (Pmáx:500
bar, V= 500 mL) HPU500 (EurOtechnica) de INTEMA. Se realizarán trhtamientos térmicos
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Página 52 de 61 MMIAlallmr•IntarP1110
a distintas temperaturas para aumentar la descarboxilación de las formas ácidas. Se
propone tratar a las muestras a 90, 110 y 140 grados, a tiempos que se optimizarán en la
práctica.
Se evaluará el efecto de la presión del sistema, la temperatura, las condiciones de flujo,

como asl también el tiempo de saturación en los diferentes compartimentos del equipo. Se
emplearán materiales con diferentes pre-tratamientos y diferentes concentraciones de co-
solvente (el cosolvente se elegirá según las normas ICH de soilventes residuales) para
facilitar los procesos de extracción con CO2-SO. Se confeccionarán protocolos de trabajo
para cada sistema estudiado con el objetivo de lograr la reproducibilidad de las condiciones
de operación en el proceso establecido y de las características del producto. Se analizarán
las cinéticos de extracción bajo las distintas condiciones del proceso. Se optimizarán las
condiciones de extracción teniendo en cuenta el rendimiento y la naturaleza de los
compuestos bioactivos extraídos. Se hallarán las condiciones específicas para lograr la
extracción de dos tipos de extractos:1- Extractos de cannabinoides y 2- Extractos de
terpenos. Se realizarán ensayos de extracción convencionales (Soxhlet) con etanol para
comparar la calidad de los productos. (INTEMA).
Asimismo, se realizarán ensayos de extracción sobre el material gestionado por la empresa
como residuo de la producción (hojas y tallos) con el objeto de evaluar la factibilidad de
obtener fracciones ricas en compuestos flavonoides de potencial aplicación como
ingredientes activos para la elaboración de formulaciones para protección solar.
ACTIVIDAD N° 4: Ensayos de caracterización química de extractos (responsable Dra.

Churlo, DQBQ)
a) Perfil químico del extracto: Se determinará el perfil químico del extracto, priorizando
a.
5 el análisis de componentes cannabinoides y terpénicos, a través del uso de cromatografias
to i liquida de alta performance (HPLC) y /o gaseosa acoplada a espectrometria de masas (GC-
o<
'lo- MS)-.
ce 0,,, b) Capacidad antioxidante de/os extractos: Se evaluará•el porcentaje de inhibición del
c ol, radical DPPH mediante EPR en función de la concentración de extracto, a fin de determinar
-ras
O a ii- la concentración efectiva 50 (EC50), y comparar con el parámetro obtenido en las mismas
> 1 condiciones para antioxidantes de referencia (ácido gálico o ácido ascórbico).
rt c) Estabilidad de los extractos: Se evaluará el efecto de la exposición a iluminación
ambiente y al aire sobre la concentración de los componentes característicos de los
extractos. Los análisis se realizarán mediante espectrofotometría de absorción Uy-visible y
HPLC.
d) Explorar la capacidad de los extractos de conducir reacciones de
fotosensibilización
Se determinará la formación de especies reactivas de oxigeno, tales corno como oxígeno
singlete, inducidas por irradiación de los extractos con LEDs en el azul y en el verde (por
ej. 450 y 530 nm). Para ello se utilizará EPR y la técnica de las trampas de espín. La trampa
específica para evaluar oxígeno singlete será el 4-TMP.
ACTIVIDAD N° 5: Ensayos de caracterización biológica de extractos (responsable

Dra. Barbini, DQBQ) .
Todos los protocolos a utilizar están puestos a punto y disponibles en el Laboratorio. Losl
detalles metodológicos se describen a continuación.
Estudio de la actividad citotóxica.
Los extractos obtenidos serán empleados en ensayos bioquímicos que permitan determinar
la actividad citotóxica sobre células tumorales hepáticas y además estudiar el mecanismo
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r. --.1 ....t_, r r
de Muerte (apoptosis/autofagia) mediante el cual se ejerce la actividad. Asimismo se
propone estudiar las vías intracelulares de transducción de señales involucradas en la
muerte celular inducida.
Se estudiarán Ilneas celulares de hepatocarcinoma humano (HepG2, Hep3B,I Huh-7). Las
células HepG2 y Hep3B, derivadas de hepatomas humanos, se obtuvieron de "American
Type Tissue Collection (ATCC, HB 8065 and HB 8064, respectivamente). Se cultivarán en
medio mínimo esencial (MEM) suplementado con 100 ml/L de suero fetal bovino. 2 mmolit.
de glutamlna, 1,5 gIL de bicarbonato de sodio, 1,0 /mon. de aminoácidos no esenciales,
1,0 mmol/L de piruvato de sodio. Las células Huh-7, también derivadas de hepatoma
humano se cultivarán en medio base D-MEM suplementado como ise describe
anteriormente. Todas las células se incubarán a 37 °C y 5 °A de 002.
Se analizará la viabilidad de las lineas celulares tratadas con
a.- Detección de viabilidad.
los diferentes extractos. Se analizará el efecto tóxico de las mismas sobre las líneas
celulares de hepaloma. Para esto se analizará la viabilidad de las células tratadas con
ny1)-2-(4-sulfopheny1)-2H-letrazolium-
dime thylthiazol-2-y1)-5-(3-carboxymethoxyphe
compuesto de tetrazolio) (Promega), durante distintos tiempos. Este ensayo mideuna la
en
actividad de dehidrogenasas milocondriales en las células viables, basándose
bioreducción de un compuesto de tetrazolio
reacción colorimétrica que permite medir la nm en un
(MTS) a formazán. La formación de este producto se mide a 490
absorbancia es proporcional al número de
espectrofotómetro de placa multivvell. El valor de
células viables. Se incluirán controles de células sin tratar y el porcentaje de viabilidad
celular se normalizará a los valores de absorbancia de estos controles. El porcentaje de
viabilidad celular se normalizará a los valores de absorbancia de las células controles sin
y 90 % (0050 y 0090,
tratar. Se determinará la concentración citotóxica 50 %
respectivamente) para los distintos extractos y líneas celulares.
Tinción con naranja de acridina y
g o •ri• b.- Defección de la muerte programada por apoptosis.
o
4c u bromuro de etidio. Una suspensión celular se teñirá con naranja de acridina/bromuro de
ez
etidio (4 pg/ml, Sigma). Se observará bajo microscoPia de
fluorescencia (Nikon Eclipse 400)
-c m. y se fotografiará (Nikon Coolpix 4500). Se calculará el porcentaje de células viables (verde
ri <u. brillante), células apoptóticas tempranas (núcleo verde compacto), células apoptóticas
2
tardias (núcleo naranja/rojo brillante) y células necróticas (núcleo naranja/rojo difuso).
Se extraerá el ADN genómico de las células tratadas
bi.- Detección del ADN fragmentado.
con el kit Wizard Genomic DNA Purificalion (Promega), según las instrucciones del
fabricante. Los ADNs extraídos se almacenarán a 4 *0 hasta su uso, y se separarán por
electroforesis en un gel de agarosa al 1 %. Las bandas o ladder del DNA clivado se
visualizarán en un transiluminador, mediante la tinción del gel con bromuro de etidio (0,5
pg/mL, BioRad).
Se cosecharán las células tratadas, se teñirá el ADN con
bii.- Análisis del ciclo celular.
ioduro de propidio (Sigma, 50 ug/mL) y se digerirá con RNAsa (Sigma, 0.5 mg/mL). Se
analizarán por citometría de flujo, detectando fluorescencia roja (488 nm de excitación y
detector de paso de banda de 620 ± 15 nm), proporcional al contenido de ADN. Se
colectarán un mínimo de 10000 células por muestra. En los histogramas de ADN se
detectarán los picos de fluorescencia, correspondientes al contenido de ADN en las
distintas fases del ciclo celular (GO/G1, S y G2/M) y a las células apoptólicasi con un pico
"subG0", el cual representa al ADN degradado.
c.- Determinación de vías inlracelulares de transducción de señales implicadas en la
apoptosis. Se estudiarán los posibles efectos sobre las siguientes vías: i) activación de
caspasas, H) diferencias de expresión de proteinas regulatorias de la apoptosis, los
miembros de la familia de Bc1-2 Unhibidores (BcI-2 y Bcl-XL) o estimuladores (Bad Bid Bax)
de la apoptosis). Para analizar los niveles de expresión de las proteínas se utilizará ' la
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técnica de Western Blot. Para ello, las células serán lisadas con un buffer de tisis
conteniendo inhibidores de proteasas. La concentración de proteínas totales se determinará
mediante el método de Bradford. Se realizarán SDS-Page de distintos porcentajes, en los
que se cargarán cantidades iguales de proteínas totales por calle. Estos geles se
electrotransferirán a membranas de PVDF (Immobilon-P, Millipore), las cuales serán
bloqueadas y posteriormente inmunodetectadas (anticuerpos primarios Santa Cruz
Biotechnology, segundo anticuerpo-peroxidasa Dako, revelado por
electroquimioluminiscencia ECL Amersham), utilizando distintos anticuerpos primarios. Las
bandas resultantes de la inmunodetección y del peso molecular correspondiente a cada una
de ellas se cuantificarán mediante densitometría de estas utilizando el programa Image-J.
Los valores de la cuantificación se normalizarán 8 un control de carga de proteínas totales
(beta-actina).
d.- Detección de autofagia: En las células tratadas con los extractos se determinará la
inducción de autofagia como consecuencia de los tratamientos. Los controles negativos
serán las células sin tratar, Los controles positivos de la inducción de autofagia se obtendrán
mediante la deprivación de nutrientes en los cultivos celulares. A) Mediante microscopía
electrónica de transmisión. En las células tratadas se estudiará la aparición de
ultraestructuras características de la autofagia (vesículas aulorágicas: autofagosomas,
autolisosomas), visualizadas como vesículas doble membrana. B) Detección de autofagia
mediante microscopía confocal. En las células transfectadas se estudiará la presencia de
LC3 asociada al autofagosoma, por marcación con anticuerpo anti-LC3 fluorescente. La co-
localización de esta proteína con LAMP-1 (lysosome associated membrane protein-1),
detectada mediante un anticuerpo marcado con otro fluoroforo, permitirá demostrar la fusión
del lisosoma con el autofagosoma para formar los autolisosomas. C) Estudio de la
expresión de las proteínas asociadas al proceso de autofagia: LC3, beclina-1, p62 por
Western Blot. Se utilizarán anticuerpos específicos (Santa Cruz Biotechnology),
membranas PVDF (Immobilon-P, Millipore), segundo anticuerpo-peroxidasa (Dako).
revelado por electroquimioluminiscencia (ECL GE Healthcare). Se usará beta-actina para
normalizar la carga de proteína total en los geles].
Estudio de la actividad antiviral.

Se estudiará la actividad antiviral frente a los siguientes virus: hepatitis B, herpes simplex-
1 (HSV-1), sincicial respiratorio (RSV) y adenovirus-7 (ADV-7).
Para HBV se emplearán las células HepG2 2.15 (transfectadas de manera estable con
HBV, productoras de viriones infectivos), las cuales se cultivarán en medio base D-MEM
suplementado como se describe anteriormente y se incubarán a 37 °C y 5 % de CO2. Para
los otros virus se usarán células Vero y HEp-2, que se cultivarán en medio MEM
suplementado y en las mismas condiciones de incubación.
Determinación de la máxima concentración no cilotóxica (MCNC) de los extractos en las
diferentes líneas celulares. Se analizará el efecto tóxico de los extractos mediante MTS
(descripto anteriormente) y se determinará la MCNC de cada extracto para cada linea
celular,
Estudio de la inhibición en la replicación viral (actividd antiviral). Para HBV (virus no
cultivable) se determinará la inhibición de la secreción de antígenos virales. Las células se
tratarán con distintas concentraciones a partir de la MCNC y se cuantificará la producción
de HBsAg (antígeno de superficie) y HBeAg (antígeno e) en los sobrenadantes de cultivos
tratados, mediante ensayos de ELISA. Además, se cuantificará del ADN viral por PCR en
tiempo real, tanto en los sobrenadantes como en las células tratadas.
Para los otros virus (que son cultivables) se realizarán ensayos de cuantificación viral.
seriadas en base 10 se sembrarán sobre las monocapas celulares crecidas en placas de
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pocillos con diferentes concentraciones de los extractos, utilizando la MCNC como la
ge
concentración más alta. Un control de la infección se realizará en ausencia de los extractos.
Las placas se incubarán a 37 °C y 5 % de CO2 durante 72 horas. Luego, se fijarán, teñirán
con cristal violeta y se observará el efecto citopático. Los extractos se considerarán
positivos cuando el título viral se reduzca un 99 % en su presencia con respecto al control
de la infección.
En segundo lugar, se determinará la DE 50% (dosis efectiva 50 %) por el método de placas,
determinando la reducción en el título viral o en las unidades formadoras de placas por
mililitro (UFP/mL) en presencia de los extractos. Para ello, monocapas crecidas en placas
de 24 pocillos se infectarán con diluciones de los stocks virales en Presencia de
concentraciones crecientes de los extractos. Luego de una incubación de 'una hora, se
agregará medio de placa (medio de infección con metilcelulosa) y la incubación continuará
en presencia de los extractos. Luego de 72 horas, las monocapas se fijarán, teñirán y se
contarán las placas de tisis generadas. La DE50 se calculará como la concentración del
extracto que reduce a un 50 % el número de placas formadas (UFP) en comparación a las
placas generadas en el control de la infección (en ausencia del extracto).
ETAPA 3
ACTIVIDAD N° 6: Desarrollo de prototipos como productos medicinales derivados de
Cannabis
Se elaborará un protocolo para la preparación de
Protocolo de preparación de aceites:
aceites de Cannabis con concentraciones controladas de los principios activos mayoritarios
y se contrastará su bioequivalencia con productos certificados internacionales. (DOGO-
IFIMAR)
Se desarrollarán microparliculas a partir
Evaluación de otros productos con Cannabis:
de la encapsulación de extractos utilizando polímeros biocompatibles como
policaprolactona o quitosano comerciales mediante técnicas convencionales. Se estudiará
la liberación de los principios activos encapsulados mediante ensayos in vitro. Los ensayos
se llevarán a cabo empleando 100 mg de muestra (para cada material), los Cuales serán
suspendidos en fluido corporal simulado (SBF) a 37 ± 1° C bajo agitación constante del
sistema (90 rpm). Para cada ensayo, las microparticulas serán colocadas dentro de
membranas inertes de acetato de celulosa de 0.22 pm de tamaño de poro (Garnafil®). A
tiempos preestablecidos se tomarán alicuotas de la solución (3 mL), reponiendo el volumen
extraido con SBF fresco. Las alicuotas extraidas serán finalmente analizadas empleando
la solución SBF como blanco, a fin de determinar la cantidad máxima de principio activo
liberado. Se determinará la cantidad total de principio activo incorporado evaluando la
cantidad de sustancia liberada a tiempo "infinito" (esto es, hasta obtener un valor constante
liberado), y la cantidad retenida en cada sistema luego del ensayo a tiempo infinito. El
contenido de sustancia activa liberada a partir de una masa conocida de micróparticulas se
determinará por espectrofotometría Uy-visible y por HPLC. La evaluación del contenido de
sustancia activa retenida se llevará a cabo. a partir de la disolución de las microparticulas
en solvente orgánico y la medición de las sustancias activas como en el caso d i el contenido
liberado. De acuerdo con la masa total obtenida (liberada + retenida), se determinará el
porcentaje en peso de sustancia activa en cada sistema de microparticulas.(INTEMA)
D. RESULTADOS ESPERADOS Y CAMPO DE APLICACION DE LOS RESULTADOS
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Srannpri with namgrannpr .
a) Resultados esperados: Con la ejecución de este proyecto se espera lograr una eficiente
sinergia entre el sector productivo y el sector académico en un área de relevancia socio-
económica como lo es el Cannabis medicinal.
Se plantea obtener:
Informe de resultados de caracterización inicial.
Informe de resultados sobre obtención de extractos de Cannabis.
Informe de caracterización química de extractos.
Informe de caracterización biológica de los extractos. •
Informe interno entre las UE que contenga los ,protocolos desarrollados
considerados como know-how.
b) Campo de aplicación de los resultados: Se espera que los resultados puedan ser aplicados a
la industria farmacéutica.
E. CRONOGRAMA DE ACTIV
Tarea MESES
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 .13 11 15 16 17 18
I 7 / 7 7 / .7( 7
7 V V V V
3 v 7 v / 7
o 4 v v 7 7 7 7 7
8oc' 5 7 7 7 7 7 7 7
o ti
ce< ^
co •
7
ten. 7 7 7 7
o au-
P-
F. GRUPO DE TRABAJO
APELLIDO Y 1NSTITUCION j CUIL CM'EGORIA FUNCION

NOMBRE
BARBINI CON10ET 27-21802692-9 Investigadora Responsable técnica 1
Luciana Fernanda
CHURIO CONICET 27-16226888-6 Investigadora Investigadora
María Sandra

Luis Ignacio
FANOVICH CONICET J 27-20062416-0 Investigadora Responsable técnica 11
María Alejandra
LE RE CONICET 20-75265226-5 CPA Técnico

Martín
IF-2023-54265679-APN-DD#MS
Página 57 de 61
o ...:+ dr`
G. PERSONAL DE LA CONTRAPARTE
_
APELLIDO Y NOMBRE INSTITUCION CU1L
1
_
Martin 1
BELTRAN DEPONT1 CANNTEK 20-3(1768496-2
Mallas Nicolas • 1 _
PARODI CANNTEK 2O-362J343-3
Tomas 1 _
Justo
_
ALVAREZ CANNTEK 20-37379830-5
Ignacio Luis
I
11
iti
Luciana Barbini
Dr. Guillermo Elicabe
Responsable Técnico I (por DQB(3) •
Direccor de INTEMA y Director de CCT Mar del Plata,
Mail: lbarbinili:mdp.edu.ar
Mail: gclicabeepgmail.com
Telérono: +54 9 223 579 8037
.14
./
-Fittainzg.-...—>
_ .1.../..___-
M.A. Fanovich.
. Responsable Técnico II (por 1NTEMA
Mail: malanoviaPti.mcip.eclu.ar José Luis Iguain
Teléfono: +5492235787169 Director del IFIMAk
Maria Sandra Churlo
IF-2023-54265679-APN-DD#MS
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M.Sancira Churio
Telefono: +54 9 223 522 2390
luis.l. Grarnme
Luis" Granone
Telefono: +54 9 223 456 13206
Mariin Enrique Lere
Martín .E. Lere
inlere(27:11.milp
Teléfonu: +54 9 223 681 6449
Martín RaCQ0
AGOGAIDO
11XVI FI 247 0,A;M:€1,P.
IF-2023-54265679-APN-DD#MS
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•
República Argentina - Poder Ejecutivo Nacional •

Hoja Adicional de Firmas.

Doeumetitación Técnica
Número: IF-2023-37939418-APN-GVT#CON10ET
CIUDAD DE 'BUENOS AIRES

Jueves Ó de Abril de 2623
Referencia: Convenio
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MARTI N RACCA
20341342687
CON VE-2023-460097 17-APN-GVT44CONICET
/,4Fried by Gavian Documenial

Dgilaly 1
Página 17 dliair.0.0 .06.11:0023-03:00

IF-2023-54265679-APN-DD#MS
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S".
Hoja Adicional de Fil;mas

Convenio
Número: CONVE-2023-46099717-APN-GVTICONICET

Martes 25 de Abril de 2023
Referencia: Convenid pre-aprobado de I+D entre CONICEry CANNTEK S.A ADENDA
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lIy 0!l']e0 by Guslion Documental Eleuryb

0812 2.523 04.25 0041 08 -03:00
Songa) liaston Rumano .

Gerente
Ciciuncia de Vinculación Tee:iieitdgiea
Consejo Nacin¿l de IEr003ljo:uruerneo Cieuiiítieas y Técnicas
signed by Gestiu^Documenial
Elecuonica
IF-2023-54265679-APN-DD#MS
Cale: 2023.0425 09'41:12 .03:00
Página 61 de 61
1983/2023 - 40 AÑOS DE DEMOCRACIA
Hoja Adicional de Firmas

Informe gráfico
Número: IF-2023-54265679-APN-DD#MS

Viernes 12 de Mayo de 2023
Referencia: Creacion de documento, peticion desde Expediente Electrónico EX-2023-54264329- -APN-DD#MS
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Federico Gabriel Rincón

Asistente administrativo
Dirección de Despacho
Ministerio de Salud
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Proyecto Conicet MDP - Canntek Sa

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1

PROYECTO DE INVESTIGACION Y DESARROLLO PARA LA PRODUCCION DE

Título del proyecto

"Proyecto de estandarización de producción de extractos de Cannabis con

A raíz de las experiencias satisfactorias recolectadas en el desarrollo de la actividad, es

Sus antecedentes científicos en la temática se ven reflejados en la redacción de dos

"Ramírez C.L., M.A. Fanovich, M.S. Churio, "CANNABINOIDS: extraction methods,

La Dra. Luciana Barbini tiene experiencia y antecedentes en el estudio de la actividad

Kott V, Barbini L, Cruañes M, Muñoz J de D, Vivot E, Martino V, Ferraro G, Cavallaro L,

Campos R. Antiviral activity in argentina medicinal plants. Jou m al of Ethnopharmacology

Barbini L, Lopez P, Ruffa J, Martino V, Ferraro G, Campos R, Cavallaro L. In duction of

apoptosis on human hepatocarcinoma cell lines by an alkyl resorcinol isolated from

Proyecto Desarrollo de productos controlados de Cannabis para us.o medicinal. EX-2022-

Se adjunta convenio aprobado de I + D entre CONICET y CANNTEK S.A., anexos 1 y

1.1 OBJETIVO GENERAL

Estandarizar la producción de extractos de Cannabis con propiedades medicinales en total

Al- Desarrollar técnicas que permitan el cultivo det:Variedades de Cannabis sativa y el

A.2- Desarrollar un protocolo estandarizado de obtención de extractos de Cannabis a partir

por distintas metodologías.

y saturación con aire.

11. DESCRIPCIÓN TÉCNCA DEL PROYECTO.

11,1 Etapas del proyecto

Estas variedades pueden encontrarse sujetas a disponibilidad y a que el banco de semillas

Actualmente CANNTEK ha iniciado el trámite frente a INASE para darse de alta en el

A continuación describiremos brevemente la técnica de cultivo en invernadero y a cielo

aprovechando los beneficios que cada una posee.

m2 para la producción a cielo abierto..

Es imposible realizar una estimación anticipada en relación con la cantidad de plantas y

Espacio físico (CANNTEK)

cual se destinará para el desarrollo y ejecución del presente convenio.

Por último, se instalará un espacio adecuado para el procesamiento de la materia vegetal

almacenaje tanto de materia primas como de productos elaborados. El mismo será

CERCO PERIMETRAL: Un anillo de seguridad con un cerco olímpico romboidal de 2

BUNKER: En el predio se construirá un bunker para alojar el personal de seguridad desde

Se procederá %armar un cultivo indoor de aprox. 60 m2 en el 4to piso del INTEMA,

resistentes a plagas y enfermedades, aumenta la expresión de los terpenos y flavonoides,

Etapa de crecimiento vegetativo y floración

Se implementarán dos fotoperíodos distintos, uno de 18 h de luz y 6 h de oscuridad para

ACTIVIDAD N' 2: Recepción del material vegetal y caracterización inicial

El material vegetal suministrado por la empresa será evaluado documentando su estado y

Se analizará la composición cuantitativa de los principales can nabinoides (THC, CBD,

ACTIVIDAD N°3: Ensayos de extracción (responsable Dra. Fanovich, INTEMA)

a 90, 110 y 140 grados, a tiempos que se optimizarán en la práctica

Se evaluará el efecto de la presión del sistema, la temperatura, las condiciones de flujo,

ACTIVIDAD N°4: Ensayos de caracterización química de extractos (responsable Dra.

ACTIVIDAD N° 5: Ensayos de caracterización biológica de extractos (responsable

compuesto de tetrazolio) (Promega), durante distintos tiempos. Este ensayo mide la

bromuro de etidio. Una suspensión celular se teñirá con naranja de acridina/bromuro de

inducción de autofagia como consecuencia-de los tratamientos. Los controles negativos

microscopía electrónica de transmipión. En las células tratadas se estudiará la aparición de

Estudio de la actividad antiviral.

Se estudiará la actividad antiviral frente a loS•siguien,tes virus: hepatitis B, herpes sirnplex-

En segundo lugar, se determinará la DE 50% (dosis efectiva 50 %) por el método de placas,

ACTIVIDAD N° 6: Desarrollo de prototipos como productos medicinales derivados de

de la encapsulación de extractos utilizando polímeros biocompatibles como

policaprolactona o quitosano comerciales mediante técnicas convencionales. Se estudiará

RESULTADOS ESPERADOS Y CAMPO DE APLICACION DE LOS RESULTADOS

Informe de resultados de caracterización inicial.

IV.- CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

V.- GRUPO DE INVESTIGAC ION

APELLIDO Y INSTITUCION CUIL CATEGORIA FUNCION

.BARBINI CONICET 27-21802692-9 Investigadora Responsable técnica 1

GRANONE CONICET 20-34344654-4 CPA Técnico