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Técnica de diluciones seriadas para disminuir la carga microbiana y realizar el proceso de siembra para cuantificación. Revisado en:
https://es.slideshare.net/nataliaizurieta/laboratorio-no-3-tcnicas-de-inoculacin-7504619
Universidad de Murcia. Higiene Alimentaria. Microorganismos marcadores: índices e indicadores. Revisado en:
https://www.um.es/nutbro/docs/hica/Microorganismos_marcadores.pdf
Anexo 2
Lista de cotejo
Lista de cotejo para evaluar Mapa mental
Concepto, clasificación e importancia en la industria de alimentos y cosmética de los microorganismos indicadores e índice
Si Parcialmente No
Portada: Nombre de la institución, del submódulo, del trabajo a entregar, del alumno (apellido paterno,
materno, nombre), nombre del docente, fecha
Contempla los aspectos principales del tema: Concepto, clasificación e importancia en la industria de
alimentos y cosmética de los microorganismos indicadores e índice
Se inicia desde el centro de la hoja colocando la idea central que está desarrollada hacia fuera de manera
irradiante.
Emplea imágenes para presentar la idea central y las secundarias, estas son nítidas y claras, además de ser
representativas del tema o subtema que se presenta, colocadas en sentido de las manecillas del reloj, según
su importancia
Temas y subtemas están articulados y jerarquizados según el sentido de las manecillas del reloj.
Las palabras clave se encuentran enmarcadas y tienen colorido para reforzar la estructura del Mapa mental.
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Utiliza diferentes colores para diferenciar los temas, sus asociaciones o para resaltar algún contenido
Utiliza flechas, iconos o cualquier elemento visual que permiten diferenciar y hacer más clara la relación entre
ideas
El Mapa Mental es creativo. Se emplea una presentación que atrae, con un aspecto excelente, interesante y
llamativo
Anexo 3
Mesófilos aerobios
Los microorganismos mesófilos aerobios son aquellos microorganismos que se desarrollan en presencia de oxígeno libre y a una temperatura comprendida
entre 20°C y 45ºC con una zona óptima entre 30°C y 40ºC
El método de recuento de microorganismos mesófilos se basa en la certeza de que un microorganismo viable presente en una muestra de alimento, al ser
inoculado en un medio de cultivo nutritivo sólido se reproducirá formando una colonia individual visible. Para que el conteo de las colonias sea posible se
hacen diluciones decimales de la suspensión inicial de la muestra y se inocula el medio nutritivo de cultivo. Se incuba el inóculo a 30ºC por 72 horas y luego se
cuenta el número de colonias formadas. El conteo sirve para calcular la cantidad de microorganismos por gramo o por mililitro de alimento.
El recuento de microorganismos mesófilos sirve para realizar una estimación del número total de bacterias que hay en un alimento, sin identificar los
diferentes tipos de gérmenes.
Esta determinación refleja la calidad sanitaria de los productos analizados indicando, además de las condiciones higiénicas de la materia prima, la forma como
fueron manipulados durante su elaboración. Tiene un valor limitado como indicador de la presencia de patógenos o sus toxinas. Un recuento total de
aerobios mesófilos bajo no asegura que un alimento esté exento de patógenos o de sus toxinas; tampoco un recuento total elevado significa, inevitablemente,
presencia de microbiota patógena. Excepto en productos que se elaboran mediante fermentación, altos recuentos microbianos se consideran poco
aconsejables para la mayor parte de alimentos.
Los resultados del análisis de mesofilicos aerobios permite
Verificar efectividad de los procedimientos de limpieza y desinfección
Determinar si las temperaturas aplicadas en los procesos fueron las adecuadas
Determinar el origen de la contaminación durante los procesos de elaboración
Verificar condiciones óptimas de almacenamiento y transporte
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Referencias
Biosanit (2019). Laboratorio de análisis agroalimentarios y ambientales. Revisado en: https://biosait.com/microorganismos-mesofilos-alimentos/
Food News Latam (2015). ¿Qué son los aerobios mesófilos? Revisado en: https://www.lacteoslatam.com/inocuidad/53-salud/2499-%C2%BFque-son-los-
aerobios-mesofilos.html
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA.OM-092-SSA1-1994
Se realiza un abstracto de la norma oficial mexicana
1. Objetivo y campo de aplicación
1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece el método para estimar la cantidad de microorganismos viables presentes en un alimento, agua potable y agua
purificada, por la cuenta de colonias en un medio sólido, incubadas aeróbicamente.
1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el Territorio Nacional para las personas físicas o morales que requieran efectuar este
método en productos nacionales y de importación, para fines oficiales.
2. Fundamento
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El fundamento de la técnica consiste en contar las colonias, que se desarrollan en el medio de elección después de un cierto tiempo y temperatura de
incubación, presuponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo de la muestra bajo estudio. El método admite numerosas fuentes de variación,
algunas de ellas controlables, pero sujetas a la influencia de varios factores.
8. Preparación de la muestra
Para la preparación de la muestra seguir la NOM-110-SSA1-1994, Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.
9. Procedimiento
9.1 Distribuir las cajas estériles en la mesa de trabajo de manera que la inoculación; la adición de medio de cultivo y homogenización, se puedan realizar
cómoda y libremente. Marcar las cajas en sus tapas con los datos pertinentes previamente a su inoculación y correr por duplicado.
9.2 Después de inocular las diluciones de las muestras preparadas según la NOM-110-SSA1-1994, Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su
Análisis Microbiológico, en las cajas Petri, agregar de 12 a 15 ml del medio preparado, mezclarlo mediante 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el
sentido de las manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6 de atrás a adelante, sobre una superficie lisa y horizontal hasta lograr una completa
incorporación del inóculo en el medio; cuidar que el medio no moje la cubierta de las cajas. Dejar solidificar.
9.3 Incluir una caja sin inóculo por cada lote de medio y diluyente preparado como testigo de esterilidad.
9.4 El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al diluyente hasta que finalmente se adiciona el medio de cultivo a las cajas, no
debe exceder de 20 minutos.
9.5 Incubar las cajas en posición invertida (la tapa hacia abajo) por el tiempo y la temperatura que se requieran, según el tipo de alimento y microorganismo de
que se trate, véase el cuadro 1.
CUADRO 1
9.6 En la lectura seleccionar aquellas placas donde aparezcan entre 25 a 250 UFC, para disminuir el error en la cuenta.
9.7 Contar todas las colonias desarrolladas en las placas seleccionadas (excepto las de mohos y levaduras), incluyendo las colonias puntiformes. Hacer uso del
microscopio para resolver los casos en los que no se pueden distinguir las colonias de las pequeñas partículas de alimento.
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1 A 250 178 16 18 X 104 Si están dentro del rango, se promedian los datos de la dilución 10-3 (184 -103 se
B 250 190 17 redondea a 18 x 104)
2 A 250 220 25 23 X 104 En este caso se promedian datos de la dilución 10-3(179x103, pasa a 180x103 o 18
B 250 138 28 x104). Por otra parte, se promedia datos de dilución 10-4 (27x104). Finalmente se
promedian los resultados de ambas diluciones y se redondea el resultado final
23x104
3 A 18 0 0 16 X 102 Se promedian datos de la dilución 10-2; aunque esta fuera de rango, son los más
B 14 0 0 cercanos. Se anota en el resultado “valor estimado”
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valor
estimado
4 A m 250 m 250 512 50 x 105 Se toma la más alta que se pueda contar, aunque sea en cuadrantes o cuadrícula y se
B m 250 m 250 495 valor anota en el resultado “valor estimado”
estimado
5 A 0 0 0 100 Se reporta como 1 en la dilución más baja que se utilizó, en este caso 10-2. Se registra
B 0 0 0 valor como “sensibilidad del método”
estimado
Reportar como se indica a continuación, con dos cifras significativas y potencias de 10:
Bacterias mesofílicas aerobias en placa en agar triptona extracto de levadura incubadas por ____ h. a _____ ºC: _______ UFC / g (o / mL) de muestra. Sustituir
“mesofílicas” por termofílicas, psicrofílicas o psicrotróficas, según corresponda, anotando el tiempo y la temperatura correspondientes.
Referencias
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA. Revisado en: http
Revisado en: http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Cuenta-en-placa_6527.pdf
Referencias
Bordenabe, Sylvia (2019). Calidad microbiológica alimentaria. Microorganismos marcadores, indicadores e índices. Revisado en: http://aulavirtual-
exactas.dyndns.org/claroline/backends/download.php?url=L1Rlb3JpYXMvVGVtYV8xMi5DYWxpZGFkX01pY3JvYmlvbG9naWNhX0FsaW1lbnRhcmlhX0NyaXRlc
mlvc19vX1BhcmFtZXRyb3NfTWljcm9iaW9sb2dpY29zXy9NaWNyb29yZ2FuaXNtb3NfaW5kaWNhZG9yZXNfLi4uLnBkZg%3D%3D&cidReset=true&cidReq=MICRO
ALIMENT
División de Carolina del Norte (2019). Bacterias Coliformes. Revisado en:
https://epi.dph.ncdhhs.gov/oee/docs/Las_Bacterias_Coliformes_WellWaterFactSt.pdf
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA.
Se realiza un abstracto de lo más relevante de la norma
1. Objetivo y campo de aplicación
1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número de microorganismos coliformes totales presentes en
productos alimenticios por medio de la técnica de cuenta en placa.
1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las personas físicas o morales que requieran efectuar este método
en productos nacionales o de importación, para fines oficiales.
2. Fundamento
El método permite determinar el número de microorganismos coliformes presentes en una muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en
el que se desarrollan bacterias a 35°C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la producción de gas y ácidos orgánicos, los cuales viran el indicador
de pH y precipitan las sales biliares.
4. Definiciones
Para fines de esta Norma se entiende por:
Coliformes, bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que a 35 ºC fermentan la lactosa con formación de ácido, ocasionando
en las colonias desarrolladas el vire del indicador rojo neutro presente en el medio y la precipitación de las sales biliares.
8. Preparación de la muestra
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La preparación de la muestra debe ser de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-SSA1-1994 "Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su
Análisis Microbiológico".
9. Procedimiento
9.1 Colocar en cajas Petri por duplicado 1 ml de la muestra líquida directa o de la dilución primaria, utilizando para tal propósito una pipeta estéril.
9.2 Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar, utilizando una pipeta estéril diferente para cada dilución.
9.3 Verter de 15 a 20 ml del medio RVBA fundido y mantenido a 45 ± 1,0°C en baño de agua. En el caso de utilizar cajas de Petri de plástico se vierte de 10 a 15
ml del medio. El tiempo transcurrido entre la preparación de la dilución primaria y el momento en que se vierte el medio de cultivo, no debe exceder de 20
minutos.
9.4 Mezclar cuidadosamente el inóculo con el medio con seis movimientos de derecha a izquierda, seis movimientos en el sentido de las manecillas del reloj,
seis movimientos en el sentido contrario al de las manecillas del reloj y seis de atrás para adelante, sobre una superficie lisa y nivelada. Permitir que la mezcla
solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una superficie horizontal fría.
9.5 Preparar una caja control con 15 ml de medio para verificar la esterilidad.
9.6 Después de que está el medio completamente solidificado en la caja, verter aproximadamente 4 ml del medio RVBA a 45 ± 1,0°C en la superficie del medio
inoculado. Dejar que solidifique.
9.7 Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35°C, durante 24 ± 2 horas.
9.8 Después del periodo especificado para la incubación, contar las colonias con el contador de colonias.
9.9 Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150 colonias. Las colonias típicas son de color rojo oscuro, generalmente se encuentran rodeadas de un
halo de precipitación debido a las sales biliares, el cual es de color rojo claro o rosa, la morfología colonial es semejante a lentes biconvexos con un diámetro
de 0,5 a 2,0 mm.
10. Expresión de los resultados
10.1 Cálculo del método
10.1.1 Placas que contienen entre 15 y 150 colonias características.
Separar las placas que contienen el número antes mencionado de colonias características en dos diluciones consecutivas. Contar las colonias presentes.
Calcular el número de coliformes por mililitro o por gramo de producto, multiplicando el número de colonias por el inverso de la dilución correspondiente,
tomando los criterios de la NOM-092-SSA1-1994. Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa.
10.1.2 Placas que contienen menos de 15 colonias características.
Si cada una de las placas tiene menos de 15 colonias características, reportar el número obtenido seguido de la dilución correspondiente.
10.1.3 Placas con colonias no características.
Si en las placas no hay colonias características, reportar el resultado como: menos de un coliforme por 1/d por gramo, en donde d es el factor de dilución.
11. Informe de la prueba
Informar: UFC/g o ml en placa de agar rojo violeta bilis, incubados a 35°C durante 24 ± 2 h.
En caso de emplear diluciones y no observar crecimiento, informar utilizando como referencia la dilución más baja utilizada, por ejemplo, dilución 10-1.
En caso de no observar crecimiento en la muestra sin diluir se informa: "no desarrollo de coliformes por ml".
Realizar el cálculo de acuerdo a como se manejó en el cuadro de cálculos correspondiente a mesofilicos aerobios
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Referencias
Camacho, A, et al (2009). Técnicas para el análisis microbiológico de alimentos. Determinación de coliformes totales por cuenta en placa, 2a. ed. Facultad de
Química, UNAM. México. Revisado en: https://docplayer.es/20784123-Determinacion-de-coliformes-totales-por-cuenta-en-placa.html
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA.
Revisado en: http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/113ssa14.html
Anexo 6. Lista de cotejo Misma que en el anexo 5, pero considerando el tema a desarrollar
Anexo 7
Placas petrifilm
Las placas 3M™ Petrifilm™ están diseñadas para satisfacer las necesidades científicas del sector alimentario de hoy.
El panorama de la seguridad alimentaria se encuentra en constante cambio. A diferencia de los métodos tradicionales con agar, las placas 3M™ Petrifilm™
están listas para usar. No es necesario prepararlas. Cada paquete compacto ofrece medios de prueba uniforme y consistente. Usar las placas es tan fácil como
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abrir el paquete y emplearlas. Las validaciones de terceros, como AOAC, confirman que el método se ha evaluado minuciosamente para demostrar su
fiabilidad, uniformidad y que ha ofrecido resultados iguales o mejores que el método de referencia con el que se comparó.
El empleo de estas placas consiste en tres sencillos pasos
Inocular. No es necesario preparar medios. Las placas contienen el medio deshidratado listo para emplear
Incubar. Dependiendo el tipo de placa será el tiempo y temperatura para incubar, las placas pueden ser apiladas y de esta manera ahorran espacio
Interpretar. Los tintes indicadores facilitan el recuento de las colonias
Placas petrifilm para aerobios totales
Las Placas Petrifilm para Recuento de Aerobios Totales (Aerobic Count, AC) son un medio de cultivo listo para ser empleado, que contiene nutrientes del Agar
Standard Methods, un agente gelificante soluble en agua fría y un tinte indicador de color rojo que facilita el recuento de las colonias.
Modo de empleo
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Para realizar el conteo en las placas petrifilm para aerobios totales el tinte indicador rojo que se encuentra en la placa colorea las colonias para su mejor
identificación. Contar todas las colonias rojas sin importar su tamaño o la intensidad del tono rojo. Las placas a contar son las que se encuentren en un rango
de 25 a 250 colonias, de acuerdo a lo que marca la NOM-092-SSA1-1994
Ejemplo Placas Petrifil para conteo de Mesófilos aerobios
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Recuento de coliformes y Escherichia coli Recuento de Coliformes Recuento de un número elevado de coliformes
Anexo 8
Lista de cotejo
Indicadores Si Parcialmente No
Presenta afirmaciones donde se menciona las semejanzas y diferencias más relevantes de los elementos a
comparar
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Indicador Si Parcialmente No
Demuestra total comprensión del tema, la respuesta es completa y lógica, con explicaciones clara y
coherentes
Muestra todos los pasos necesarios para resolver el ejercicio hasta llegar al resultado