La interleucina-2 (IL-2), que es una de las primeras citocinas identificadas y

miembro de la superfamilia de citocinas del haz de cuatro hélices, actúa en el

corazón de la respuesta inmunitaria ( 1 ) . La IL-2 y su receptor alfa, IL-2Rα, son
expresados por los linfocitos T después de la activación de los receptores de
linfocitos T por los complejos de histocompatibilidad principal-péptido. La
posterior interacción autocrina de IL-2 con sus receptores conduce a la
estimulación de las vías de transducción de señales que dan como resultado la
proliferación y expansión clonal de células T, células B y asesinas naturales (NK)
(2 ) .
Las actividades biológicas pleiotrópicas de IL-2 están mediadas por tres
receptores de superficie celular: la cadena IL-2Rα; la cadena IL-2Rβ; y la cadena
gamma común (γ c ), que también es receptor de IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21
( 3 ) . Estos receptores de superficie celular forman un complejo que emite
señales a través de la activación intracelular de la tirosina quinasa 3 de Janus
(Jak3) y el transductor de señales y activador de la transcripción 5 (STAT5)
( 4 ) . La cadena IL-2Rα, originalmente identificada como el antígeno Tac
(CD25) ( 5 - 7 ), es enigmática porque carece de las características distintivas de
la superfamilia de receptores de citoquinas ( 8 ). IL-2Rβ (p75) y el γ cambos son
miembros de la familia de receptores del factor de crecimiento hematopoyético,
que contienen la región de homología de unión a citoquinas (CHR) característica,
que se compone de dos repeticiones de fibronectina tipo III (FN-III) ( 2 , 8 ).
Los estudios bioquímicos muestran que el ensamblaje del complejo receptor de
IL-2 se inicia por la interacción de IL-2 con IL-2Rα, seguida por el reclutamiento
secuencial de IL-2Rβ y γ c ( 9 , 10 ) . IL-2Rα solo es el receptor de “baja
afinidad” (constante de disociación K  d ∼ 10 nM). Cuando se expresan juntas, IL-2Rα e IL-
2Rβ forman el receptor de seudo-alta afinidad ( Kd ∼ 30 pM). Finalmente, el
complejo IL-2Rαβγc forma el receptor de alta afinidad ( Kd ∼ 10 pM) que es el
complejo de  señalización que se encuentra en las células T activadas ( 2 ). La IL-2Rβ y
γ cLos sitios de unión de IL-2 se han mapeado en ubicaciones análogas a los
sitios de unión de citocinas del sitio I y el sitio II establecidos originalmente en el
sistema de la hormona del crecimiento humano (hGH) (11 ) . Sin embargo, según
el análisis de secuencias y los estudios de mutagénesis, se predice que la IL-2Rα
difiere de otros receptores de citoquinas tanto en su estructura como en su modo
de interacción con la IL-2 (12 ) .
IL-2Rα es un objetivo para la modulación terapéutica porque no se expresa en las
células T y B en reposo, sino que se expresa continuamente en las células T
anormales de pacientes con formas de leucemia, autoinmunidad y rechazo de
órganos trasplantados (13 , 14 ) . Un anticuerpo monoclonal antagonista de IL-
2Rα (anti-Tac) (Daclizumab) es eficaz para prevenir el rechazo de trasplantes de
órganos ( 15 ). También se han desarrollado inhibidores de molécula pequeña de
IL-2Rα ( 16 , 17 ). La propia IL-2 (Proleukin) se utiliza para aumentar la función
del sistema inmunitario y tiene eficacia en el tratamiento del carcinoma renal
metastásico y el melanoma ( 18 ). Sin embargo, existe una toxicidad grave
limitante de la dosis que se atribuye en gran medida a la activación de la βγforma
c del receptor en las células NK ( 18 ). Actualmente, no existe información

estructural para ninguno de los receptores de IL-2, y esta información podría

ayudar en el diseño de terapias mejoradas. Aquí presentamos una estructura
cristalina con una resolución de 2,8 Å de IL-2 humana en complejo con el
dominio extracelular de IL-2Rα ( 19 ).
En la estructura compleja, el ectodominio de IL-2Rα se asemeja a un brazo
doblado ~90° en el codo entre los dominios N- y C-terminal (D1 y D2,
respectivamente), acoplando IL-2 a lo largo de la parte inferior de D1 ( Fig. 1, A
y B ). La superficie de unión de IL-2 comprende la hélice A', la hélice B' y parte
del bucle AB. Los ejes largos de las láminas β de IL-2Rα están alineados en
paralelo con los ejes helicoidales de la citoquina. Esto difiere de la interacción
típica del receptor de citoquinas. Por ejemplo, en el complejo de hGH con su
receptor (hGH-R), el módulo CHR de hGH-R, compuesto por dos dominios FN-
III de sándwich β, forma una estructura similar a un brazo doblado
considerablemente más grande, pero similar ( Figura 1B ) ( 20). Sin embargo, la
región del codo que sobresale de hGH-R expone bucles que se unen a los lados
del haz de cuatro hélices de hGH ( 20 ) ( Fig. 1B ). Aunque sustancialmente
diferente, la similitud más cercana se puede encontrar en el contacto del sitio III
recientemente dilucidado entre las citocinas de clase gp130 y el dominio gp130
D1 ( 21 ). Sin embargo, en esa interacción, la citoquina forma contactos
exclusivamente a través de bucles en la punta de la citoquina, en lugar de con
residuos en las superficies helicoidales.
En la estructura de IL-2Rα, los dominios centrales D1 y D2 están separados por
un péptido enlazador entre dominios de 42 residuos (Thr 65 a His 103 ), y el segundo
dominio tiene un péptido de conexión de 54 residuos C-terminal adicional que
conduce a la membrana celular (Gly 165 a Glu 217 ). Ninguno de estos enlazadores
es visible en el mapa de densidad de electrones y, por lo tanto, no están incluidos
en el modelo IL-2Rα ( Fig. 1A). Estos segmentos enlazadores no contribuyen a la
unión del ligando. Así, se estructuran 120 residuos (dominios D1 y D2) del
dominio extracelular de 217 aminoácidos. Es posible que esta gran cantidad de
polipéptido flexible haya contribuido a las dificultades para obtener cristales
adecuados para la determinación de la estructura, ya que la cristalización del
complejo se informó originalmente en 1989 (22 ) .
IL-2Rα se desvía del plegamiento clásico del receptor de citoquinas, tanto en las
estructuras de los dominios individuales como en la topología de plegamiento
entre dominios ( Fig. 1A ). Cada uno de los dos dominios de IL-2Rα presenta una
homología de aminoácidos de ~30 % con un grupo de dominios de proteínas tipo
sándwich β denominados de diversas formas dominios sushi, repeticiones de
consenso corto (SCR) o repeticiones de proteína de control del complemento
(CCP) (23) ( Fig . 2B). Los dominios de sushi canónicos (∼65 aminoácidos en un
sándwich 2 en 3) pueden considerarse dominios de tipo FN-III "mini" (∼ 110
residuos en un sándwich 3 en 4). Al igual que los dominios de sushi, IL-2Rα D1
(residuos 1 a 64) y D2 (residuos 104 a 165) muestran una estructura de sándwich
β elíptica, que contiene varios residuos que están altamente conservados en los
dominios de sushi de varias proteínas relacionadas complementarias (Cys 3/30 /46/61 ,
Pro 7 , Tyr 20 , Gly 33 , Phe 34 y Trp 55 ) ( 24). Sin embargo, ambos dominios de IL-
2Rα se desvían sustancialmente de la topología canónica de sushi; son
sándwiches β de 1 a 4, en lugar de 2 a 3. La topología de plegamiento de IL-2Rα
también exhibe intercambio de cadenas β a través de los dominios tipo sushi N- y
C-terminal ( Fig. 2A ). Los hilos A y B se intercambian con los hilos F y G,
respectivamente, para dar la topología plegable F-on-GCDE para D1 y A-on-
BHIJ para D2. Los enlaces disulfuro entre dominios entre Cys 3 y Cys 46 de D1 y
Cys 147 y Cys 104 de D2 refuerzan el intercambio de hebras fijando la hebra A de
D1 a la hebra I de D2 y la hebra G de D2 a la hebra D en D1 (Figs. 1A
y 2A ) .). Este intercambio de cadenas no se ha visto entre las estructuras de tipo
sándwich β ( Fig. 2B ), o en los receptores de citoquinas de tipo FN-III
clásicos. El receptor IL-15 α es un único dominio de sushi, por lo que no existe la
posibilidad de un intercambio de cadena en ese caso.

Figura 1 . Estructura del complejo IL-2/IL-2Rα humano. ( A ) Vista lateral del complejo

que muestra IL-2Rα que cubre el surco entre el bucle AB y la hélice B '. El dominio D1 de

IL-2Rα es verde, el dominio D2 es cian e IL-2 es violeta. Los enlaces disulfuro de IL-2Rα

son de color rosa. Los residuos del núcleo hidrofóbico entre D1 y D2 se dibujan como

barras amarillas y azules, respectivamente. Las regiones de conexión desordenadas, que no

forman parte del modelo experimental, se muestran como líneas de puntos negros. Este

esquema de coloración se mantiene en las Figs. 1, 2 , 3 , 4 . ( B) El modo de unión entre IL-

2 e IL-2Rα frente al paradigma clásico del sitio I/II de hGH y su receptor, en el que el codo

del receptor se une a los lados del haz de cuatro hélices de citoquinas ( 20 ) . Se muestra

una representación de superficie semitransparente con cadenas receptoras en azul y

ligandos en violeta. Las ues de puntos negros indican las regiones del codo de IL-2Rα y

hGH-R.ABRIR EN EL VISOR

figura 2 Intercambio de dominios en IL-2Rα. ( A ) El modelo de IL-2Rα se separa en los

dominios D1 y D2, lo que revela las ubicaciones de las hebras A y B, y F y G

intercambiadas, respectivamente. Los óvalos semitransparentes en dos diagramas de los

dominios de sushi separados resaltan los hilos correspondientes, que están involucrados en

el intercambio de hilos. Una representación de superficie de IL-2Rα en el centro muestra la

molécula receptora completa. ( B ) Una estructura representativa de un dominio sushi, o

módulo CCP [segundo dominio de β   glicoproteína-1 (entrada 1QUB del banco de datos de
2

proteínas)] ( 23 , 32 ). Las hebras análogas a las involucradas en el intercambio de hebras

entre el dominio D1 y D2 de IL-2Rα son azules y están resaltadas por un óvalo

semitransparente.ABRIR EN EL VISOR

A pesar del péptido enlazador de 42 aminoácidos no estructurado en IL-2Rα, los

dominios D1 y D2 están en contacto íntimo entre sí a través de una extensa
interfaz entre dominios. Se forma un núcleo hidrofóbico grande entre las hebras
superiores intercambiadas en cada dominio, lo que probablemente imparte
rigidez a la estructura general ( Fig. 1A ). Estos compuestos aromáticos
expuestos en la superficie de las hebras superiores del sándwich β servirían como
el núcleo hidrofóbico interno entre las láminas superior e inferior de un dominio
de sushi canónico, si las hebras en IL-2Rα no se intercambiaran en el dominio.
La molécula de IL-2 tiene el plegamiento común de citoquinas ( 8 ), con la típica
topología de cuatro hélices arriba-arriba-abajo-abajo. La estructura de haz de
cuatro hélices de la molécula de IL-2 en el complejo IL-2/IL-2Rα se superpone
estrechamente con la molécula de IL-2 libre [desviación cuadrática media
(RMSD) de 0,74 Å en 76 posiciones Cα], pero con una menor adaptaciones
estructurales en el sitio de unión del receptor ( 25 , 26 ). El bucle CD de IL-2, que
suele estar desordenado en estructuras de IL-2 no complejadas, está
completamente ordenado en la estructura de IL-2 unida al receptor porque los
residuos Glu 106 a Asp 109 están implicados en la unión a IL-2Rα. La primera y
última vuelta de la hélice A' así como la última vuelta de la hélice B' están
parcialmente desenrolladas en comparación con la IL-2 libre (fig. S1).
La interacción entre IL-2 e IL-2Rα ocurre entre la lámina β de cuatro cadenas,
las cadenas GCDE y las hélices A' y B' de IL-2 (Fig. 3A ) . Como resultado de la
formación del complejo, 20 residuos de IL-2 y 21 residuos de IL-2Rα entierran
un total de 1868 Å (fig. S2 y tabla S2). Dos parches hidrofóbicos prominentes en
IL-2 son consistentes con las mediciones termodinámicas que indican que la
desolvatación de la superficie apolar es la principal fuerza impulsora energética
de esta interacción (aminoácidos rojos en la Fig. 3B y parches rojos en la Fig.
4A ). El primer parche está compuesto por Tyr 45 en el bucle AB de IL-2, que se
empaqueta en un bolsillo formado por los grupos metileno de Arg 35 y Arg 36.de la
cadena IL-2Rα C′. Este grupo hidrofóbico está rodeado de interacciones
polares. Las mutaciones de IL-2Rα Arg 35 y Arg 36 interrumpen la interacción con
IL-2 ( 27 ).
Figura 3 . Anatomía molecular de la interfase IL-2/IL-2Rα. ( A ) Residuos de contacto de

aminoácidos dentro de la interfase compleja. IL-2 (violeta) está en la parte superior y el

dominio D1 de IL-2Rα (verde) y el dominio D2 (cian) están en la parte inferior. Los

enlaces de hidrógeno aparecen como líneas punteadas rojas; los enlaces disulfuro son de

color rosa; los residuos de cisteína correspondientes están numerados; y las láminas β y los

bucles de conexión de IL-2Rα se etiquetan como se indica. ( B ) Representación de

superficie de "huella" de la interfaz IL-2Rα vista a través de las hélices de IL-2 en IL-

2Rα. Los residuos de contacto de IL-2 (barras violetas) se proyectan sobre la superficie

enterrada (naranja) de IL-2Rα. Los residuos de anclaje hidrofóbicos Phe   y Tyr  de IL-2

42 45

son de color rojo para orientar al lector a lo largo de la interfaz.ABRIR EN EL VISOR

Figura 4 . Comparación de unión de receptor versus fármaco a IL-2. ( A ) Representación

de la "huella" de la interfaz de IL-2 vista a través de las hebras β de IL-2Rα en la superficie

de IL-2. Los residuos de contacto de IL-2Rα (barras verdes y cian) se proyectan sobre la

superficie enterrada (naranja) de IL-2. Los residuos de anclaje hidrofóbicos Phe   y Tyr   de
42 45

IL-2 son rojos. ( B ) Vista de huella análoga del compuesto de fármaco 1 unido a IL-2. El

compuesto 1 se representa con barras azules [nombre de entrada del banco de datos de

proteínas 1M48 ( 17 )] proyectadas sobre la superficie enterrada (naranja) de IL-2. El

compuesto 1 utiliza IL-2 Phe   (parche rojo) como residuo de anclaje, evitando así que IL-
42

2Rα se una a IL-2.ABRIR EN EL VISOR

El grupo hidrofóbico más conspicuo y ubicado en el centro está compuesto por

Phe 42 y Leu 72 en el bucle IL-2 AB y la hélice B ', respectivamente, que se
insertan en un bolsillo empotrado en IL-2Rα compuesto por Leu 42 a Tyr 43 y
Met 25 (figura S4 y figuras 3B y 4A ). Varios puentes de sal y enlaces de
hidrógeno rodean este parche hidrofóbico ( Fig. 3A y tabla S2). Los estudios
mutacionales identifican esta segunda región hidrofóbica alrededor de IL-2
Phe 42 como el principal determinante energético en el epítopo de unión a IL-2
( 27 , 28). Las células T pueden expresar variantes de empalme de IL-2, que son
inhibidores naturales de la señalización de IL-2 a través del receptor αβγc de alta
afinidad ( 29 ). Las variantes de corte y empalme carecen del exón 2 (IL-2δ2),
que codifica de Asn 30 a Lys 49 , o del exón 3 (IL-2δ3), que codifica de Ala 50 a
Lys 97 . Debido a que estas regiones están involucradas en la interacción entre IL-
2Rα y la IL-2 de longitud completa, es casi seguro que las variantes de corte y
empalme no se unirían a IL-2Rα. Por lo tanto, el mecanismo de inhibición parece
ser la ocupación de los receptores IL-2Rβ y γc , evitando el reclutamiento de IL-
2Rα por parte de la IL-2 de tipo salvaje e inhibiendo la señalización en las
células T activadas a través del complejo αβγc .
La interrupción de las interacciones proteína-proteína con moléculas pequeñas ha
demostrado ser un objetivo extremadamente difícil para la industria farmacéutica
en comparación con la inhibición de los sitios activos de las enzimas. Sin
embargo, se han desarrollado potentes inhibidores de molécula pequeña de la
interacción IL-2/IL-2Rα ( 17 ). Una de estas pequeñas moléculas, el compuesto 1
( 16 ), encaja en un surco entre el bucle IL-2 AB y la hélice B', envolviéndose
alrededor de IL-2 Phe 42 como un residuo de anclaje hidrofóbico ( Fig. 4B )
( 17 ). Al unirse a IL-2, la molécula pequeña induce la reorganización de los
residuos Lys 35 , Arg 38 , Met 39 y Phe 42, en comparación con varias estructuras de
IL-2 sin ligando ( 17 ). En particular, un gran cambio en la conformación del
anillo aromático de IL-2 Phe 42 crea el canal rebajado que se usa para unir el
fármaco ( Fig. 4B ). Este ajuste conformacional no ocurre con la unión del
receptor; en contraste, Phe 42 es una perilla prominente que encaja en un bolsillo
en IL-2Rα. La superposición del complejo fármaco/IL-2 en el complejo IL-2/IL-
2Rα revela que, aunque una parte sustancial del fármaco cabe en el espacio
abierto de la interfase, existen choques estéricos con el bolsillo de unión de IL-2
Phe 42 . Aparentemente, la droga usa interacciones entálpicas altamente
favorables para compensar la penalización entrópica de la unión ( 17) y superar
su pequeña superficie enterrada. Por el contrario, la unión de IL-2Rα a IL-2 es
entrópicamente favorable. Por lo tanto, a pesar de que el fármaco y el receptor se
dirigen a un punto caliente hidrofóbico similar, utilizan soluciones
termodinámicas opuestas para la unión.
Los modos de unión previamente determinados entre las citocinas
hematopoyéticas y sus receptores implican combinaciones del sitio clásico I/II y
el modo del sitio III recientemente determinado para las citocinas gp130
( 21 ). Sugerimos que la geometría de acoplamiento distintiva de la interacción
IL-2/IL-2Rα es un cuarto modo de unión y ahora nos brinda ejemplos
representativos de todos los módulos de reconocimiento binario utilizados por los
receptores hematopoyéticos para reconocer las citocinas de cuatro hélices. Estos
cuatro módulos se pueden utilizar como bloques de construcción, en diferentes
combinaciones, para construir modelos topológicos de complejos entre todas las
citoquinas conocidas y sus receptores. Como se discutió, IL-2 también se une a
dos subunidades de receptor adicionales, IL-2Rβ y γ ccadenas, para formar un
complejo de señalización cuaternario. Los estudios funcionales y el modelado
molecular colocaron los epítopos de unión de IL-2Rβ y γc en las caras de las
hélices adyacentes A (IL-2 Asp 20 ) y D (IL-2 Gln 126 ), respectivamente
( 11 , 14 , 30 ) (figs. .S1 y S5). Se ha postulado que IL-2Rβ se unirá en
geometrías de tipo sitio I y γ c se unirá en geometrías de tipo sitio II ( Fig. 1B ,
complejo hGH). El sitio de unión de IL-2Rα es ideal para un acoplamiento inicial
de citoquinas, dejando los lados de las caras helicoidales abiertos para el
acoplamiento de IL-2Rβ y γ ccomponentes Al capturar inicialmente IL-2 en la
superficie celular, la IL-2Rα reduciría el costo entrópico para el reclutamiento
posterior de receptores adicionales ( 31 ).