Interciencia

ISSN: 0378-1844
interciencia@ivic.ve
Asociación Interciencia
Venezuela

García, Adriana; Cróquer, Aldo; Malaver, Nora

Algunas características funcionales de las comunidades bacterianas del mucus asociado a tejidos
sanos y con síndrome de banda amarilla en montastraea annularis
Interciencia, vol. 29, núm. 1, enero, 2004, pp. 39-45
Asociación Interciencia
Caracas, Venezuela

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=33908809

Cómo citar el artículo

Número completo
Sistema de Información Científica
Más información del artículo Red de Revistas Científicas de América Latina, el Caribe, España y Portugal
Página de la revista en redalyc.org Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
ALGUNAS CARACTERÍSTICAS FUNCIONALES
DE LAS COMUNIDADES BACTERIANAS DEL MUCUS ASOCIADO
A TEJIDOS SANOS Y CON SÍNDROME DE BANDA AMARILLA
EN Montastraea annularis

Adriana García, Aldo Cróquer y Nora Malaver

RESUMEN

Se caracterizaron y compararon algunas propiedades fun-
cionales de las comunidades bacterianas asociadas a la capa
de mucopolisacáridos en tejidos sanos y enfermos con banda
amarilla del coral Montastraea annularis. Tres colonias con
este síndrome fueron seleccionadas y se colectó una muestra de
mucus asociado a tejidos normales y afectados de cada indivi-
duo, succionando cuidadosamente la superficie de cada colonia
con jeringas estériles de 5ml. Se tomaron muestras de agua a
1m encima de cada colonia en frascos esterilizados de 10ml.
Las muestras se trasladaron al laboratorio en cavas con hielo
para el aislamiento de cepas bacterianas (48h) con métodos
microbiológicos estándar. Se seleccionaron aleatoriamente 25
cepas de cada muestra para realizar pruebas bioquímicas y es-
tudiar las características de las comunidades bacterianas
heterotróficas en cada compartimiento. Se estudió la hidrólisis
de azúcares, degradación de citrato, lípidos y proteínas, reduc-
ción de nitratos y actividad ureásica, y crecimiento aeróbico y
anaeróbico. Las características funcionales de cada comunidad
se compararon mediante análisis de agrupamiento. Las comuni-
dades bacterianas asociadas al mucus de tejidos enfermos tu-
vieron mayor proporción (60%) de bacterias capaces de degra-
dar lípidos y proteínas, y mostraron alta actividad ureásica
(40%) comparada con las muestras de agua (10%). Más del
70% de las cepas estudiadas redujeron nitratos a nitritos y
crecieron en condiciones aeróbicas y anaeróbicas. La alta ac-
tividad lipolítica y proteolítica, y la gran proporción de bacte-
rias capaces de desdoblar úrea en el mucus asociado a tejidos
enfermos pudieran estar relacionadas con el desarrollo del sín-
drome de banda amarilla y con la mortandad de tejidos en
colonias enfermas.

Introducción
Las bacterias son importan-
tes componentes del medio
ambiente arrecifal. En condi-
ciones naturales contribuyen a
la producción de carbono
(Ducklow, 1990), al reciclaje
de nutrimentos (D'Elia y
Wiebe, 1990) y representan
fuentes de alimento para una
gran variedad de organismos
de los arrecifes (Sorokin,
1990). No obstante, cuando
las condiciones ambientales
cambian como resultado de
algún disturbio, natural o an-
trópico, estas bacterias y es-
pecialmente las que se en-
cuentran asociadas a la capa
de mucopolisacáridos de los
corales escleractínidos, pue-
den convertirse en patógenos
potenciales, capaces de desen-
cadenar epidemias en diferen-
tes organismos arrecifales
(Peters, 1997; Rohwer et al.,
2001).
En las últimas décadas se
ha reportado un incremento
significativo en la incidencia
de enfermedades infecciosas
en comunidades arrecifales
del Caribe (Goreau et al.,
1998; Richardson, 1998; Weil,
2001; Weil et al., 2002; Cro-
quer et al., 2003). Según
Harvell et al. (1999, 2002).
Este incremento puede estar
relacionado con diversos fac-
tores que han cambiado las
características ambientales en
los arrecifes, entre los que se
pueden mencionar los cam-
bios climáticos globales que
han ocasionado el incremento
de la temperatura del agua, el
incremento en la intensidad y
frecuencia de eventos como el
Niño (Glynn y Colgan, 1992;
Rosemberg y Ben-Haim,
2002), el transporte de pató-
genos a través de las aguas
de lastre de los barcos que
atraviesan el Canal de Pana-
má, lo que representa la co-
nexión de provincias biogeo-
gráficas separadas por millo-
nes de años y nuevos patóge-
nos en contacto con nuevos
hospedadores (Harvell et al.,
1999, 2002), y la pérdida de
la calidad del agua debida a
la introducción frecuente de
nutrientes y aguas servidas en
los arrecifes (Tomascik y
Sanders, 1987; Connell,
1997). Estos factores proba-
blemente han contribuido a
incrementar la susceptibilidad
de los hospedadores y a am-
plificar la virulencia de los
patógenos (Ritchie et al.,
2001).
Las enfermedades que
afectan a corales escleractí-
nidos han sido reconocidas
como importantes fuentes de
mortandad en los arrecifes.
Sin embargo, solo en algu-
nos casos se ha logrado
identificar los agentes causa-
les de dichas enfermedades,
como por ejemplo la enfer-

PALABRAS CLAVE / Bacterias de Corales / Bacteriología / Banda Amarilla / Biología Marina /

Recibido: 22/09/2003. Modificado: 08/12/2003. Aceptado: 17/12/2003

Adriana García. Licenciada en
Biología, Universidad Central
de Venezuela (UCV). Estu-
diante de Maestría en Ciencias
Biológicas, Universidad Simón
Bolívar (USB), Venezuela. Di-
rección: Departamento de Bio-
logía de Organismos, USB.
Apartado Postal 89000, Cara-
cas 1080, Venezuela. e-mail:
adriana@intecmar.usb.ve
Aldo Cróquer. Licenciado en
Biología, UCV. Estudiante de
Doctorado en Ciencias Bioló-
gicas, USB. Investigador Aso-
ciado, Fundación Científica
Los Roques. Dirección:
Intecmar, USB. Apartado Pos-
tal 89000, Caracas 1080, Vene-
zuela. e-mail:
croquer@telnet.net.ve
Nora Malaver. Doctora en Ecolo-
gía, UCV. Directora, Instituto
de Zoología Tropical, Facultad
de Ciencias, UCV. e-mail:
nmalaver@strix.ciens.ucv.ve

JAN 2004, VOL. 29 Nº 1 0378-1844/04/01/039-07 $ 3.00/0 39

 SUMMARY

Some biochemical properties of bacterial communities asso-
ciated with mucopolysaccharides were described and compared
in both healthy and diseased tissues of the coral Montastraea
annularis attacked by the yellow blotch disease. Three colonies
affected by this syndrome were selected. For each colony, a
sample of mucus associated to normal and diseased tissues was
carefully taken with a 5ml syringe. Water samples were collected
in 10ml sterilized flasks, 1m away from each colony. Samples
were transported in ice coolers for posterior isolation (48 h) of
bacteria using standard microbiology methods. Eight biochemical
tests (sugar and starch fermentation, citrate, protein and lipid
degradation, nitrate reduction, urease reaction and aerobic-
anaerobic growth), were performed for each of the 25 bacterial
colonies randomly selected from each sample. The biochemical
features of these bacterial communities were compared by clus-
ter analysis. Bacterial communities associated with the muco-
polysaccharide layer of diseased tissues showed a higher per-
centage (60%) of bacteria able to degrade both proteins and lip-
ids. These bacteria also showed an important capacity to use
urea (40%) as compared to water bacterial communities (10%).
Most bacteria (70%) isolated from all samples were able to re-
duce nitrates to nitrites and growth in aerobic and anaerobic
conditions. The ability of bacteria to degrade proteins, lipids and
urea in the mucopolysaccharide layer might be related with the
mechanisms that produce the tissue mortality observed in the
yellow blotch syndrome.

RESUMO

Se caracterizaram e compararam algumas propriedades
funcionais das comunidades bacterianas associadas à capa de
mucopolisacáridos em tecidos sãos e enfermos com banda
amarela do coral Montastraea annularis. Três colônias con esta
síndrome foram selecionadas e colectou-se uma amostra de mu-
cus associado a tecidos normais e afetados de cada individuo,
succionando cuidadosamente a superfície de cada colônia com
seringas estéreis de 5ml. Se tomaram amostras de água a 1m
encima de cada colônia em frascos esterilizados de 10ml. As
amostras se trasladaram ao laboratório em caixas térmicas com
gelo para o isolamento de cepas bacterianas (48h) com métodos
microbiológicos estándar. Se selecionaram aleatoriamente 25
cepas de cada amostra para realizar provas bioquímicas e
estudar as características das comunidades bacterianas
heterotróficas em cada compartimento. Se estudou a hidrólisis
de açúcares, degradação de citrato, lípidos e proteínas, redução
de nitratos e atividade ureásica, e crescimento aeróbico e anae-
róbico. As características funcionais de cada comunidade se
compararam mediante análise de agrupamento. As comunidades
bacterianas associadas ao mucus de tecidos enfermos tiveram
maior proporção (60%) de bactérias capazes de degradar lípi-
dos e proteínas, e mostraram alta atividade ureásica (40%) com-
parada com as amostras de agua (10%). Mais de 70% das ce-
pas estudadas reduziram nitratos a nitritos e cresceram em
condições aeróbicas e anaeróbicas. A alta atividade lipolítica e
proteolítica, e a grande proporção de bactérias capazes de
desdobrar úreia em mucus associado a tecidos enfermos
puderam estar relacionadas com o desenvolvimento da síndrome
de banda amarela e com a mortandad de tecidos em colônias
enfermas.

medad de banda negra especies del complejo

(Antonius, 1973; Rützler y
Santavy, 1983), la plaga
blanca (Denner et al., 2003)
y en el caso de los octoco-
rales la aspergiliosis (Nage-
lkerken et al., 1997; Smith
et al., 1998). El síndrome de
banda amarilla (SBA) es uno
de los más ampliamente dis-
tribuidos en todo el Caribe.
Según Goreau et al. (1998),
éste fue reportado por pri-
mera vez en 1990 por Hayes
y Bush, asociado a corales
blanqueados en las islas Cai-
mán. No obstante, según
Bruckner (2002), la primera
observación fue realizada
por Reeves (1994) en los ca-
yos de Florida. Ha sido ob-
servado afectando a más de
10 especies (Garzón-Ferreira
et al., 2001) en la mayor
parte de las regiones de la
cuenca del Caribe (Bruckner,
2002; Weil et al., 2002).
Ataca principalmente a las
Montastraea annularis (M.
annularis, M. faveolata y M.
franksi; Garzón-Ferreira et
al., 2001). Se caracteriza por
producir la mortalidad pro-
gresiva de los tejidos afecta-
dos, los cuales comienzan a
palidecer y finalmente sufren
necrosis (Figura 1). A pesar
de su amplia distribución y
de la mortalidad que produ-
ce sobre las colonias afecta-
das, hasta la fecha no se co-
noce con certeza la causa de
la mortandad de los tejidos
(Green y Bruckner, 2000).
Cervino et al. (2001) encon-
traron una disminución sig-
nificativa en el índice
Figura 1. Colonia de Montastraea annularis afectada por el síndro-
mitótico de las zooxantelas
me de banda amarilla. El tejido sano esta separado por un aro de
asociadas a tejidos enfermos tejido pálido el cual avanza produciendo la necrosis y pérdida de
con SBA, concluyendo que tejido vivo (base de la colonia). Foto cortesía de E. Weil
el patógeno putativo podría
afectar a las zooxantelas y
producir de manera indirecta Existen evidencias que su- les de las comunidades bac-
la mortandad del tejido de gieren que la composición y terianas asociadas al mucus
coral. las características funciona- de tejidos sanos de corales

40 JAN 2004, VOL. 29 Nº 1

cambian significativamente
en condiciones de estrés fi-
siológico (Ritchie y Smith,
1995). La comparación de
las características funciona-
les de comunidades bacteria-
nas asociadas al agua, y a
las bacterias presentes en la
capa de mucopolisacáridos
de tejidos sanos y enfermos
podría representar una herra-
mienta útil para el posterior
aislamiento e identificación
de patógenos potenciales. En
este sentido, si se conocen y
describen los principales
cambios que ocurren en es-
tas comunidades y además
se identifican las cepas bac-
terianas cuyo potencial bio-
químico difiera de las bacte-
rias asociadas a tejido sano,
podrían seleccionarse algu-
nos morfotipos para realizar
posteriores experimentos de
re-infección que cumplan
con los postulados de Koch.
Si las comunidades bacte-
rianas asociadas al mucus de
tejidos sanos, enfermos con
SBA y agua son diferentes,
se esperaría que el potencial
bioquímico de cada una de
estas comunidades fuese de
igual forma distinto. El ob-
jetivo de este trabajo fue
analizar de forma comparati-
va algunas características
funcionales de las comunida-
des bacterianas asociadas al
agua y al mucus de los teji-
dos sanos y afectados por el
SBA de la especie construc-
tora de arrecifes M. annula-
ris.
Área de Estudio
El presente trabajo se rea-
lizó en el Parque Nacional
Archipiélago de Los Roques
(PNALR), un complejo arre-
cifal situado a 110km al
norte del puerto de La
Guaira, Venezuela, entre
11º58'36'' y 11º44'30''N, y
entre 66º33'30'' y 66º57'27''O
(Hung, 1985; García et al.,
2002). El PNALR es la for-
mación coralina más impor-
tante de Venezuela. Es un
sistema arrecifal con carac-
terísticas oceánicas, cobertu-
ras coralinas ubicadas entre
17 y 38%, y poca influencia
continental (Zubillaga,
JAN 2004, VOL. 29 Nº 1
2001). Este sistema arrecifal
es considerado como uno de
los más importantes de la
región del Caribe en térmi-
nos de diversidad y cobertu-
ra coralina, con valores ubi-
cados entre 40 y 70% (Weil,
2002).
Materiales y Métodos
A fin de comparar las ca-
racterísticas funcionales de
las comunidades bacterianas
asociadas al mucus de teji-
dos sanos, de tejidos afecta-
dos por el SBA y del agua
cercana a las colonias del
coral Montastraea annularis
Ellys & Solander, 1786
(Cnidaria, Scleractinea), se
realizaron pruebas bioquími-
cas relacionadas con la ca-
pacidad de degradación de
diferentes substratos por par-
te de las comunidades bacte-
rianas asociadas a cada uno
de los compartimientos men-
cionados.
Recolección de las muestras
para cultivos bacteriológi-
cos
Las muestras fueron reco-
lectadas en el arrecife costa-
nero del cayo de Dos Mos-
quises Sur, ubicado al SO
del archipiélago, a (Garassini, 1962, 1967; Ha-
11º48'03''N y 66º53'30''O. Se
seleccionaron tres colonias
de M. annularis con signos
de SBA, ubicadas a 5m de
profundidad. Las muestras se
recolectaron evitando la re-
moción de sedimentos en el
agua y el depósito sobre la
superficie de la colonia. El
orden de recolección de
muestras fue de agua circun-
dante primero, luego de mu-
cus asociado a tejido enfer-
mo y finalmente de mucus
asociado a tejido sano.
Las muestras de agua se
colectaron con frascos esté-
riles de 10ml, los cuales se
abrieron y llenaron comple-
tamente a 1m por encima de
cada colonia. Las muestras
de mucus asociados a tejido
sano y enfermo se extrajeron
succionando cuidadosamente
la superficie de las colonias
con jer ingas estériles de
5ml, evitando la producción
excesiva de mucus de las
colonias seleccionadas. Las
muestras de mucus sobre te-
jido con signos de SBA fue-
ron colectadas sobre el área
intermedia de la banda, entre
tejido necrótico y sano,
mientras que las muestras de
mucus en los tejidos aparen-
temente sanos se colectaron
a 30cm de las áreas afecta-
das. Una vez colectadas, las
muestras fueron almacenadas
en hielo y trasladadas al la-
boratorio donde fueron pro-
cesadas en las próximas 24-
48h.
Aislamiento de las cepas
bacterianas
Las muestras de mucus
del tejido y de agua de las
tres colonias fueron coloca-
das, por separado, en fiolas
estériles y homogeneizadas
al ser sometidas a agitación
manual por 30seg. A partir
de cada muestra se realiza-
ron diluciones seriadas (1:10
y 1:100), en solución salina
peptonada (SSP). Posterior-
mente, se sembraron por in-
clusión alícuotas de 1ml de
las muestras sin dilución,
1:10 y 1:100 por triplicado
en agar nutritivo (AN) colo-
cados en placas de Petri
rrigan y McCance, 1968).
Las placas de AN fueron in-
cubadas a temperatura am-
biente por 48h.
Luego del período de in-
cubación, se llevó a cabo el
conteo y aislamiento de to-
das las colonias de bacterias,
de cada triplicado, y se re-
portaron como unidades for-
madoras de colonias bacte-
rianas (UFC). Cada UFC fue
repicada para obtener cepas
puras de acuerdo a procedi-
mientos microbiológicos es-
tándar (Garassini, 1962;
1967; Harrigan y McCance,
1968). Para cada triplicado,
fueron seleccionadas 25 ce-
pas al azar, utilizando una
tabla de números aleatorios.
Se obtuvo una muestra re-
presentativa de 75UFC, por
cada colonia de M. annula-
ris, 25 del tejido sano, 25
del tejido enfermo y 25 del
agua circundante.
Caracterización funcional
de las comunidades
bacterianas heterotróficas
(pruebas bioquímicas)
Para cada cepa selecciona-
da en cada compartimiento,
se aplicaron 8 pruebas bio-
químicas (Tabla I). La selec-
ción de estas pruebas se rea-
lizó en función de la com-
posición química del mucus
de los corales escleractíni-
dos, reproduciendo alguna
de las fuentes de carbono
que frecuentemente se en-
cuentran en el mucus. Éste
representa un aporte impor-
tante de carbono y energía;
tales como hidratos de car-
bono, lípidos, proteínas y
otros compuestos nitrogena-
dos, los cuales son utiliza-
dos por las bacterias
heterotróficas asociadas a la
capa de mucopolisacáridos
de los escleractínidos
(Ducklow y Mitchell, 1979a,
b). Además, las pruebas se-
leccionadas son comunes en
el estudio de la caracteriza-
ción bioquímica de las co-
munidades bacterianas aso-
ciadas al mucus de tejidos
sanos y enfermos de corales
(Ritchie y Smith, 1995), así
como también en la caracte-
rización bioquímica de pató-
genos de enfermedades de
corales (Denner et al.,
2003).
Análisis estadísticos
Con la finalidad de deter-
minar la similitud o disimili-
tud de los grupos funciona-
les aislados a partir de cada
uno de los compartimentos
(agua, tejido sano y enfer-
mo) se aplicó un análisis de
agrupamiento de distancias
euclídeas (vecino más cerca-
no). Para ello se construye-
ron matr ices con valores
asignados de 1 (cepas que
respondieron positivamente a
la prueba), 2 (cepas que res-
pondieron negativamente), 3
(cepas con capacidad de hi-
drólisis total de almidón), 4
(cepas con hidrólisis parcial
de almidón), 5 (cepas facul-
tativas) 6 (cepas aeróbicas) y
7 (ce pas anaeróbicas). A
partir de estas matrices se
41
 TABLA I
PRUEBAS BIOQUÍMICAS EMPLEADAS PARA LA CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL
DE LAS COMUNIDADES BACTERIANAS

Prueba bioquímica Medio empleado Identificación positiva Referencia

Fermentación azúcares
Hidrólisis de almidón
Degradación de citrato
Reducción de nitrato
Reacción de ureasa
Licuefacción gelatina
(actividad proteolítica)
Actividad lipolítica
Crecimiento de anaeróbios
estrictos y facultativos
Agar hierro de Kligler Precipitación de sulfuro ferroso negro (MacFaddin, 1980)
Agar Nutritivo y Agar Almidón Cambio de azul oscuro a claro (Harrigan y McCane, 1968)
(hidrólisis total) y pardo rojizo
(hidrólisis parcial)
Agar Citrato Incremento alcalinidad, cambio (MacFaddin, 1980)
del medio de verde a azul
Agar Nitrato Cambio a rosado claro o rojo intenso (MacFaddin, 1980)
Caldo Urea Producción de amonio, (MacFaddin, 1980)
cambio de amarillo a rosa claro
Agar Gelatina Medio se licua, pierde consistencia (MacFaddin, 1980)
Tween (80) Precipitación de sales de Ca y Mg, (MacFaddin, 1980)
color opaco en el medio.
Caldo Tioglicolato Crecimiento bacteriano en el medio (Merck, 1994)

generaron diagramas de poco utilizadas por las cepas paces de utilizar las distintas las colonias bacterianas aso-
agrupación por columnas aisladas de los tejidos sanos fuentes de C y N 2 en cada ciadas al mucus de tejido en-
(comparación de substratos y el agua (0-4%), y más uti- compartimiento estudiado. En fermo fueron capaces de uti-
independientemente del com- lizadas por las cepas asocia- el tejido enfermo el porcenta- lizarlo. Con relación a las
partimiento: tejido sano, en- das a los tejidos enfermos je de utilización de glucosa fuentes de N 2 , en el mucus
fermo y agua) y diagramas (0-20%). La actividad (69%), lactosa (67%) y almi- del tejido enfermo se observó
de agrupación por filas lipolítica y proteolítica de dón (40%) fue mayor compa- una mayor actividad ureásica
(comparación entre cada las bacterias se presentó en rado con el mucus extraído (40%) comparado con el
compartimiento: tejido sano, los tres compartimentos ana- de tejido sano y en el agua. agua (10%), mientras que la
enfermo y agua). lizados, pero mayoritaria- Asimismo, la actividad pro- capacidad de reducir nitratos
mente en el mucus asociado teolítica (38%) y lipolítica fue similar (33%) en los tres
Resultados a tejido enfermo al igual (40%) en el mucus extraído compartimientos. La propor-
que la capacidad de degra- del tejido enfermo fue mayor ción de cepas bacterianas ca-
En la Tabla II se muestra dar el citrato como única que en tejido sano y agua. paces de crecer en
el porcentaje de UFC capaz fuente de C. La misma tendencia se ob- tioglicolato fue similar (33%)
de degradar cada uno de los En la Figura 2 se muestran servó en la utilización de entre los distintos comparti-
substratos utilizados. La ma- los porcentajes de las colo- citrato como única fuente de mientos, indistintamente de
yor parte de las cepas aisla- nias de bacterias aisladas ca- C, donde cerca del 60% de las condiciones de anaerobio-
das del mucus de tejidos sa-
nos, enfermos y agua se ca- TABLA II
racterizaron por ser capaces PORCENTAJE DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC) OBTENIDOS PARA
de crecer en el medio de CADA UNO DE LOS COMPARTIMENTOS ANALIZADOS
tioglicolato en condiciones
aeróbicas y anaeróbicas. Por Proporción de UFC (%)
su parte, de las fuentes de
N 2, el nitrato fue más utili- Tejido Sano Tejido Enfermo Agua circundante
zado. Entre 38 y 96% de las Sustratos C1 C2 C3 C1 C2 C3 C1 C2 C3
cepas aisladas fueron capa-
ces de reducirlo a nitritos, Glucosa 4 0 4 0 20 4 0 4 0
mientras que para la úrea Lactosa 4 0 4 0 20 0 0 4 0
los porcentajes oscilaron en- Almidón 0 16 8 4 20 24 12 8 4
tre 0 y 8%. Con relación a Citrato 16 16 8 4 64 8 16 4 0
los carbohidratos la fuente Nitrato 56 80 80 38 92 92 64 96 88
de C más utilizada fue el al- Úrea 8 0 4 4 4 8 0 4 0
midón, independientemente Gelatina 12 0 12 0 28 12 4 4 8
del compartimiento observa- Tween(80) 20 20 0 36 32 8 8 16 8
do (tejido sano, enfermo y Tioglicolato 100 92 100 100 92 92 100 92 96
agua), con porcentajes que Producción de SH2 20 0 0 8 4 0 16 4 4
oscilaron entre 0 y 24%. La
glucosa y la lactosa fueron C1, C2 y C3 identifican a las tres colonias de corales a las que se aplicaron las pruebas.

42 JAN 2004, VOL. 29 Nº 1

Figura 2. Potencial bioquímico expresado en porcentajes (%), de las
cepas bacterianas asociadas al mucus de tejido sano (TS, n= 25) y
enfermo (TE, n= 25) de Montastraea annularis y al agua circundan-
te (A, n= 25) en diferentes sustratos.
sis. Finalmente, la proporción
de cepas productoras de sul-
furo de hidrógeno fue menor
en tejido enfermo.
En la Figura 3 se muestran
los resultados del análisis de
agrupamiento por substratos
suministrados a las cepas
bacterianas independiente-
mente del compartimiento del
que fueron aisladas. Con re-
lación a los carbohidratos, el
uso de lactosa y glucosa fue
similar entre las comunidades
bacterianas analizadas. El al-
midón fue el único hidrato
de carbono que se diferenció
del grupo de los azúcares en
función de su preferencia.
Por su parte, tanto el citrato
como el Tween 80 se agrupa-
ron en el mismo nodo, indi-
cando un porcentaje similar
de cepas bacterianas capaces
de utilizar estos sustratos. En
cuanto a las fuentes de N2, el
nitrato y la úrea se ubicaron
en posiciones diferentes del
espacio representado en el
análisis de agrupamiento, in-
dicando que las comunidades
bacterianas asociadas al mu-
cus de tejido enfermo y sano
y el agua se diferenciaron en
función del uso de estos
sustratos. La mayor diferen-
cia entre los substratos admi-
nistrados, independientemente
de los compartimentos mues-
treados, fue obtenida para el
tioglicolato y el nitrato, los
cuales se diferenciaron visi-
blemente de las restantes
fuentes de C.
En la Figura 4 se muestran
los resultados del análisis de
agrupamiento por substratos
suministrados para cada una
JAN 2004, VOL. 29 Nº 1
Figura 3. Análisis de agrupamiento por fuentes de carbono y subs-
tratos utilizados por las cepas bacterianas aisladas. GLU: glucosa,
de las comunidades bacteria- LAC: lactosa, GAS: producción de gas, ALM: almidón, CIT: citrato,
nas asociadas al mucus tejido NIT: nitrato, GEL: gelatina, TW80: Tween 80, TIO: tioglicolato.
sano, enfermo y agua. El
crecimiento en los medios de
tioglicolato y nitrato fue si- sica, y por degradar citrato. degradar carbohidratos, la
milar para los tres comparti- La capacidad de crecer en preferencia entre cada una de
mientos y se diferenció de condiciones aeróbicas y las comunidades bacterianas
las restantes fuentes de C su- anaeróbicas y de utilizar ni- no fue clara, en especial en
ministradas. De forma similar trato fue común para las co- el caso de la glucosa y la
el uso de glucosa y lactosa munidades bacterianas aso- lactosa, en general la mayor
fue similar entre las comuni- ciadas a los compartimientos parte de las bacterias aisladas
dades bacterianas asociadas analizados (tejido sano, en- del mucus de tejidos sanos,
al mucus de tejido sano, en- fermo y agua), lo cual evi- enfermos y agua fueron ca-
fermo y agua. Por su parte, dencia el potencial funcional paces de crecer en dicho me-
la actividad lipolítica, proteo- de la comunidad bacteriana dio de cultivo.
lítica, la capacidad de degra- en el ciclo del N2 (reducción Las bacterias y otros mi-
dar polisacáridos como el al- de nitratos a nitritos). Con croorganismos viven asocia-
midón y de utilizar citrato relación a la capacidad de dos al mucus producido por
fue similar para las
comunidades bacte-
rianas asociadas a te-
jidos sanos y agua y
se diferenció de las
comunidades asocia-
das a tejidos con sig-
nos de SBA.
Discusión
Las comunidades
bacterianas asociadas
al mucus de tejidos
sanos, enfermos (con
signos de SBA) y el
agua resultaron fun-
cionalmente diferen-
tes con respecto a la
capacidad de utilizar
algunos substratos
como fuentes de C y
energía. Las comuni-
dades bacterianas
asociadas al mucus Figura 4. Análisis de agrupamiento por compartimientos (mucus de tejido
de tejidos enfermos sano, enfermo y agua) y sustratos (n= 3 colonias de coral). SAN: aislados
se caracterizaron por bacterianos del mucus de tejido sano, ENF: aislados bacterianos del mucus
presentar una mayor de tejido enfermo, AGU: aislados bacterianos del agua circundante, GLU:
actividad lipolítica, glucosa, LAC: lactosa, GAS: producción de gas, ALM: almidón, CIT: citrato,
proteolítica y ureá- NIT: nitrato, GEL: gelatina, TW80: Tween 80, TIO: tioglicolato.
43
los corales, así como también
a sus tejidos (Schiller y
Herndl, 1989; Saffo, 1992;
Paul et al., 1996; Rohwer et
al., 2001). El mucus produci-
do por estos organismos po-
see cantidades significativas
de polisacáridos (hexosa,
pentosa, glucosa y galactosa),
proteínas y lípidos, entre
otros componentes, ofrecien-
do substratos ideales para el
crecimiento bacteriano (Pas-
cal y Vacelet, 1981). No obs-
tante, la estructura de las co-
munidades bacterianas puede
cambiar dependiendo de las
condiciones ambientales y el
estado fisiológico del animal
(Rohwer et al., 2001). Por
ejemplo, durante el día el te-
jido de los corales representa
un medio ambiente caracteri-
zado por altos niveles de sa-
turación de O 2, debido a la
actividad fotosintética de las
zooxantelas que se encuen-
tran alojadas en el gas-
trodermo, mientras que en la
noche las condiciones pueden
ser diferentes, con menores
niveles de O 2 en los tejidos
(Lesser, 1997). Por lo tanto,
las bacterias asociadas a es-
tos ambientes se encuentran
adaptadas a rápidos cambios
micro-ambientales siendo ca-
paces de utilizar diferentes
substratos para su metabolis-
mo en las condiciones que
prevalecen en un momento
determinado (Ducklow y
Mitchell, 1979b; Ritchie y
Smith, 1997).
Ducklow y Mitc hell
(1979a) demostraron que las
respuestas fisiológicas de las
bacterias asociadas al mucus
de los corales se encuentran
estr echamente ligadas al
estatus metabólico del coral
hospedador. La condición fi-
siológica de los corales es
extremadamente variable y
las características funciona-
les de las comunidades bac-
terianas pueden variar inclu-
sive entre especies de coral
que se ubican en distintas
zonas del arrecife (Ritchie y
Smith, 1997). Los factores
ambientales que intervienen
regularmente en la dinámica
de los sistemas coralinos
(sedimentación, temperatura,
calidad de luz, salinidad,
44
etc.) pueden inducir incre-
mentos en la producción de
mucus, eventos de blanquea-
miento y mortalidad parcial
sobre las colonias coralinas
(Kushmaro et al., 1996).
Ritchie y Smith (1995), pro-
pusieron que los cambios
ambientales que producen
alteraciones en el estatus fi-
siológico de los corales,
como en el caso del blan-
queamiento, pueden producir
cambios significativos en la
composición y abundancia
de las comunidades bacteria-
nas asociadas a las capas de
mucopolisacáridos de los co-
rales. Ésto a su vez podría
conducir a patologías capa-
ces de producir la mortali-
dad parcial de los tejidos.
En el caso específico del
SBA, el tejido comienza a
decolorarse y posteriormente
se produce necrosis, llevando
a la muerte del área afectada
y con el tiempo, en algunos
casos, de toda la colonia.
Cervino et al. (2001) encon-
traron una disminución signi-
ficativa de la densidad de zo-
oxantelas y del índice mi-
tótico de las mismas en áreas
afectadas por SBA. Esto con-
duce a la pérdida de más de
90% del C, el cual es obteni-
do a partir de la actividad
fotosintética de estas algas.
Las diferencias en la den-
sidad de zooxantelas reporta-
da entre los tejidos sanos y
enfermos con SBA, podrían
generar los cambios observa-
dos en las características fun-
cionales de las comunidades
bacterianas asociadas al mu-
cus presente en tejidos sanos,
enfermo y agua. En este es-
tudio se evidenció un alto
porcentaje de bacterias con
metabolismo facultativo (uso
de rutas metabólicas aeróbi-
cas y/o anaeróbicas). Ritchie
y Smith (1997) encontraron
que las comunidades bacte-
rianas normalmente asociadas
a las especies M. annularis y
Diploria strigosa eran capa-
ces de oxidar más eficiente-
mente compuestos complejos
como el Tween 80 y el
Tween 40 en comparación
con comunidades bacterianas
asociadas a otras especies de
coral.
Como se mencionó ante-
riormente el porcentaje de
cepas bacterianas con capa-
cidad lipolítica y proteolítica
(degradación de Tween 80 y
gelatina) incrementó en más
de 10% en tejidos afectados
por SBA. Estos resultados
sugieren que las bacterias
asociadas al tejido enfermo
hacen un mayor uso de
fuentes de C provenientes de
lípidos y proteínas del mu-
cus, lo que podría estar rela-
cionado con el deterioro de
los tejidos.
Asimismo, las bacterias
asociadas al mucus de tejido
con SBA presentaron una
alta actividad ureásica. Den-
ner et al. (2003) observaron
un comportamiento similar
para Aurantimonas coralici-
da, el patógeno de la enfer-
medad de plaga blanca. En
este trabajo se relacionó la
actividad ureásica con el me-
canismo que produce la
mortalidad de los tejidos ge-
nerado por dicha enfermedad
En cuanto a la preferencia
en la degradación de citrato,
Ritchie y Smith (1995) men-
cionan que las bacterias aso-
ciadas a la enfermedad de
banda blanca (EBB) mostra-
ron preferencia por los áci-
dos cítricos, los cuales son
intermediarios metabólicos en
los ciclos del glioxilato y del
ácido tricarboxílico. Por su
parte, el ácido acético, el D-
L-láctico y el metilpirúvico,
los cuales son substratos co-
munes para bacterias sulfo-
reductoras, también fueron
preferidos por las bacterias
aisladas de los tejidos afecta-
dos por EBB (Ritchie y
Smith, 1995).
El análisis de las caracte-
rísticas metabólicas de las
comunidades bacterianas ape-
nas comienza a ser utilizado
en el estudio de las enferme-
dades que afectan a corales
escleractínidos (Ritchie y
Smith, 1995; Denner et al.,
2003). Los cambios en las
características metabólicas
normales de las comunidades
bacterianas, esto es, en la
preferencia de utilización de
fuentes de C y otros sus-
tratos, podría ser una res-
puesta a cambios ambienta-
JAN 2004, VOL. 29 Nº 1
les, a la introducción de al-
gún patógeno o también un
indicativo del estado fisioló-
gico del hospedador (Ritchie
y Smith, 1995). La identifi-
cación de cepas bacterianas
cuyas habilidades bioquími-
cas difieran de las caracterís-
ticas metabólicas de la comu-
nidad presente en mucus de
los tejidos sanos, podría faci-
litar la selección de patóge-
nos potenciales en experi-
mentos de reinfección, lo que
contribuiría a su identifica-
ción a través de los postula-
dos de Koch.
En conclusión, las caracte-
rísticas metabólicas de las
comunidades asociadas al
agua y al mucus presente en
tejidos sanos y enfermos con
SBA, fueron diferentes. Las
comunidades bacterianas aso-
ciadas al SBA se caracteriza-
ron por presentar una mayor
proporción de bacterias capa-
ces de degradar citrato y con
actividad lipolítica y proteolí-
tica en comparación con las
comunidades bacterianas aso-
ciadas al mucus de los teji-
dos sanos y agua. La capaci-
dad de reducir nitratos a
nitritos y de crecer en condi-
ciones aeróbicas o anaeróbi-
cas fue una característica co-
mún de las comunidades bac-
terianas asociadas a los com-
partimientos analizados. Se
requiere de más estudios que
exploren el uso de otras
fuentes de C para una mejor
caracterización bioquímica de
las comunidades bacterianas
normales, lo que contribuiría
a detectar de forma más pre-
cisa los cambios que en éstas
ocurren cuando se presenta el
SBA. Es necesario identificar
las cepas que difieran del
comportamiento natural de
las comunidades bacterianas
en mucus de tejido sano, y
posteriormente incluirlas en
experimentos de reinfección
que satisfagan los postulados
de Koch.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen a
Sheila Marques por su contri-
bución en los muestreos de
campo, a Juan Carlos Fernán-
dez y la Fundación Científica
Los Roques por el apoyo
logístico prestado, a Ernesto
Weil por la facilitación de
material fotográfico y biblio-
gráfico, a Jesús Ramos y
Andreina Arias del IZT, UCV
por su ayuda en el trabajo
microbiológico, a Pablo Mata,
Melchor, Francisco, Jesús y
Alex, de la Estación de Biolo-
gía Marina de Dos Mosquises
Sur, por su apoyo en las cam-
pañas de muestreo, y al Insti-
tuto Nacional de Parques Na-
cionales (INPARQUES).
REFERENCIAS
Antonious A (1973) New observa-
tions in coral destruction in
reefs. Assoc. Isl. Mar. Lab.
Carib. 10:3.
Bruckner AW (2002) Priorities for ef-
fective management of coral dis-
eases. NOAA Technical Memo-
randum NMFS-OPR-22. US
Dept. of Commerce. Washington
DC, EEUU. 54 pp.
Cervino J, Goreau TJ, Nagelkerken
I, Smith GW, Hayes R (2001)
Yellow band and dark spots
syndromes in Caribbean corals.
Hydrobiologia 460: 53-63.
Connell JH (1997) Disturbance and
recovery of coral assemblages.
Coral Reefs 16 (Suppl.): S101-
S113.
Cróquer A, Pauls SM, Zubillaga
AL (2003) Coral disease out-
break in a coral reef at Los
Roques National Park. Rev.
Biol. Trop. 51 (Supl. 6): 39-45.
Denner EBM, Smith GW, Busse
HJ, Schumann P, Narzt T,
Polson SW, Lubitz W, Rich-
ardson LL (2003) Aurantimo-
nas coralicida gen. nov. sp.
nov., the causative agent of
white plague type II on Carib-
bean scleractinian corals. Int.
J. Syst. Evol. Microbiol. 53:
1115-1122.
D'Elia CF, Wiebe WJ (1990) Bio-
geochemical nutrient cycles in
coral-reef ecosystems. En Du-
binsky Z (Ed.) Ecosystems of
the world (coral reefs). Else-
vier. Amsterdam, Holanda. pp.
49-70.
Ducklow HW (1990) The biomass
production and fate of bacteria
in coral reef. En Dubinsky Z
(Ed.) Ecosystems of the world
(coral reefs). Elsevier. Amster-
dam, Holanda. pp. 265-296
Ducklow HW, Mitchell R (1979a)
Composition of mucus released
by coral reef coelenterates.
Limnol. Oceanogr. 24: 706-714.
Ducklow HW, Mitchell R (1979b)
Bacterial populations and ad-
aptation in the mucus layers
JAN 2004, VOL. 29 Nº 1
on living corals. Limnol.
Oceanogr. 24: 715-725.
Garassini L (1962) El suelo y su
microflora. Facultad de Agro-
nomía. Universidad Central de
Venezuela. Maracay, Venezue-
la. 225 pp.
Garassini L (1967) Microbiología
Agraria. Facultad de Agrono-
mía. Universidad Central de
Venezuela. Maracay, Venezue-
la. 646 pp.
García A, Cróquer A, Pauls SM
(2002) Relación entre la
incidencia de enfermedades y la
estructura de tallas y especies
en corales del Parque Nacional
Archipiélago de Los Roques.
Interciencia 27: 448-453.
Garzón-Ferreira J, Gil-Aguledo DL,
Barrios LM, Zea S (2001)
Stony coral disease observed
in southwestern Caribbean
reefs. Hydrobiologia 460: 65-
69.
Glynn PW, Colgan MW (1992)
Sporadic disturbances in fluc-
tuating coral reef environ-
ments: El Niño and coral reef
development in the Eastern Pa-
cific. Am. Zool. 32: 707-718.
Goreau TJ, Cervino J, Goreau M,
Hayes R, Hayes M, Richardson
LL, Smith GW, DeMeyer K,
Nagelkerken I, Garzón-Ferreira
J, Gil-Aguledo DL, Peters EC,
Garrison G, Williams GH,
Bunkley J, Quirolo C, Patterson
K (1998) Rapid spread of dis-
ease in Caribbean coral reefs.
Rev. Biol. Trop. 46: 157-172.
Green EP, Bruckner AW (2000)
The significance of coral dis-
ease epizootiology for coral
reef conservation. Biol. Conser.
96: 347-361.
Harrigan WF, McCance M (1968)
Métodos de laboratorio en mi-
crobiología. Editorial Acade-
mia. León, España. 458 pp.
Harvell CD, Kim K, Burkholder
JM, Colwell RR, Epstein PR,
Grimes DJ, Hofmann EE,
Lipp EK, Osterhaus ME,
Overstreet RM, Porter JM,
Smith GW, Vasta GR (1999)
Emerging marine diseases–
Climate links and anthropo-
genic factors. Science 285:
1505-1510.
Harvell CD, Mitchell CE, Ward
JR, Altizer S, Dobson AP,
Ostfeld RS, Samuel MD
(2002) Climate warming and
disease risk for terrestrial and
marine biota. Science 296:
2158-2162.
Hayes RL, Bush P (1990) Micro-
scopic observations of recovery
in the reef building scler-
actinean coral, Montastrea
annularis, after bleaching on a
Cayman reef. Coral Reefs 5:
201-204.
Hayes RL, Goreau NI (1998) The
significance of emerging dis-
eases in the tropical coral reef
ecosystem. Rev. Biol. Trop. 46
(Supl. 5): 173-185.
Hung M (1985) Los corales
pétreos del Parque Nacional
Archipiélago Los Roques.
Tesis. Escuela de Biología.
Universidad Central de Ven-
ezuela. Caracas, Venezuela.
150 pp.
Kushmaro A, Loya Y, Fine M
(1996) Bacterial infection and
coral bleaching. Nature 380:
396.
Lesser MP (1997) Oxidative stress
causes coral Bleaching during
exposure to elevated tempera-
tures. Coral Reefs. 16: 187-
192.
MacFaddin YF (1980) Pruebas
Bioquímicas para la identifica-
ción de bacterias de importan-
cia clínica. Panamericana. Ar-
gentina. 301 pp.
Merck (1994) Manual de medios
de cultivo. Frankfurter Strasse.
Alemania. 364 pp.
Nagelkerken I, Buchan K, Smith
GW, Bonair K, Bush P,
Garzón-Ferreira J, Botero L,
Gayle P, Harvell CD, Heberer
C, Kim K, Petrovic C, Pots L,
Yoshioka P (1997) Widespread
disease in Caribbean sea fans:
II Pattern of infection, and tis-
sue loss. Mar. Ecol. Prog. Ser.
160:255-263.
Pascal H, Vacelet E (1981) Bacte-
rial utilization of mucus on the
coral reef of Aqaba (red sea).
Internat. Coral Reef Symp.
(Manila). Vol 1. pp. 669-677.
Paul JH, DeFlaun MF, Jeffrey WH
(1996) Elevated levels of mi-
crobial activity in the coral
surface microlayer. Mar. Ecol.
Prog. Ser. 33: 29-40.
Peters EC (1997) Disease of coral-
reef organisms. En Birkeland
C (Ed.). Life and death of
coral reefs. Kluwer. Massachu-
setts, EEUU. pp. 114-136.
Reeves L (1994) Newly discovered:
yellow band disease strikes
keys reefs. Underwater USA
11: 16.
Richardson LL (1998) Coral dis-
eases: what is really known?
Trends. Ecol. Evol. 13: 438-
443.
Ritchie KB, Smith GW (1995)
Preferential carbon utilization
by surface bacterial communi-
ties from water mass, normal
and white-band diseased
Acropora cervicornis. Mol.
Mar. Biol. 4: 345-352.
Ritchie KB, Smith GW (1997)
Physiological comparison of
bacterial communities from
various species of scleractinean
corals. Proc. 8 th Coral Reef
Symp. (Panamá). Vol 1. pp.
521-526.
Ritchie KB, Shawn W, Polson W,
Smith GW (2001) Microbial
disease causation in marine in-
vertebrates. Hydrobiologia 460:
131-139.
Rohwer FM, Breitbart J, Azam-
Jara, F, Knowlton N (2001)
Diversity of bacteria associated
with the Caribbean coral Mon-
tastraea franksi. Coral Reef.
20: 85-91.
Rosemberg E, Ben-Haim Y (2002)
Microbial diseases of corals
and global warming. Environ.
Microbiol. 4: 318-326.
Rützler K, Santavy DL (1983) The
black band disease of Atlantic
reef corals. I. Description of
the cyanophyte pathogen.
P.S.Z.N.I: Mar Ecol 4: 301-
319.
Saffo MB (1992) Invertebrates in
endosymbiotic associations.
Amer. Zool. 32: 557-565.
Schiller C, Herndl JH (1989) Evi-
dence of enhanced microbial
activity in the interstitial space
of branched corals: possible
implication for coral metabo-
lism. Coral Reef. 7: 179-184.
Smith GW, Harvell CD, Kim K
(1998) Observations on the
pathogenesis of sea fans in-
fected with Aspergillus sp. Rev.
Biol. Trop. 46: 205-208.
Sorokin YI (1990) Aspects of
trophic relations, productivity
and energy balance in coral
reef ecosystems. En Dubinsky
Z (Ed.) Ecosystems of the
world (coral reefs). Elsevier.
Amsterdam, Holanda. pp.401-
408.
Tomascik T, Sanders F (1987) Effects
of eutrophication on reef-building
corals II. Structure of scler-
actinean coral communities on
fringing reefs, Barbados, West
Indies. Mar. Biol. 94: 53-75.
Weil E (2001) Caribbean coral reef
diseases. En McManus J (Ed.)
Status and research needs. In
Priorities for Caribbean Coral
Reef Research. National Center
for Caribbean Coral Reef Re-
search. RSMAS. University of
Miami. Florida, EEUU. 10 pp.
Weil E (2002) The corals and coral
reefs of Venezuela. En Cortes
J (Ed.) Latin American Coral
Reefs. Elsevier. Amsterdam,
Holanda. pp. 305-330.
Weil E, Urreiztieta I, Garzón-Ferreira
J (2002) Geographic variability
in the incidence of coral and
octocoral diseases in the wider
Caribbean. Proc. 9 th Internat.
Coral Reef Symp. (Bali, Indone-
sia). Vol 2. pp. 1231-1238.
Zubillaga AL (2001) Evaluación
del efecto de las actividades
de buceo recreativo en la es-
tructura comunitaria de algu-
nos arrecifes coralinos del
Parque Nacional Archipiélago
de Los Roques. Tesis. Escuela
de Biología. Universidad Cen-
tral de Venezuela. Caracas, Ve-
nezuela. 121 pp.
45