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Determinación de Metales en Bebidas Brasileñas

Listas para Tomar (Bebidas Heladas) por
Espectrometría de Emisión Óptica de Plasma
Acoplado Inductivamente
Roberta E.S. Froes-Silvaa*, Waldomiro B. Netob, Clésia C. Nascentec y José B.B. da Silvac aDepartamento de
Química, Universidad Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, MG-Brasil, 35400-000 bInstituto de
Química, Universidad Federal de Uberlandia,
Uberlandia, MG-Brasil 38400-902
cDepartamento de Química, Universidad Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG-Brasil, 31270-901

INTRODUCCIÓN
Las bebidas alcohólicas listas para
el consumo (RTD) también se
conocen como FAB (bebidas
alcohólicas aromatizadas).
Estas bebidas se introdujeron en el
mercado mundial a mediados de
los años noventa. Suelen consistir
en algún tipo de bebida destilada
(vodka, ron, licores, alcohol de
cereales) y zumos de frutas o
refrescos. Su contenido alcohólico
oscila entre el 4 y el 7% y están
disponibles en varios sabores y
marcas (1). Las bebidas RTD más
comunes son los alcopops o
refrescos con alcohol (2). Las
investigaciones han demostrado
que el consumo de bebidas como
los alcopops es el mercado de más
rápido crecimiento en el mundo (3)
y que los consumidores suelen
tener edades comprendidas entre
los 18 y los 25 años.
Se han utilizado muchos
métodos analíticos para determinar
los elementos inorgánicos en las
bebidas alcohólicas. La
voltamperometría de redisolución
anódica fue utilizada por Barbeira
et al.
(4) para determinar trazas de Zn, Pb
y Cu en aguardientes de caña de
azúcar. Canuto et al. (5) emplearon
la espectrometría de absorción
atómica electrotérmica (ETAAS) y el
rutenio
como modificador permanente para
determinar la presencia de Sb y Cr
en 53 muestras de aguardiente de
caña de azúcar. Se utilizaron la
espectrometría de absorción
atómica de llama y la generación de
hidruros (FAAS y HG- FAAS) para
determinar As, Cd, Pb, Cu, Zn, Fe y
Mn en 31 aguardientes de ciruela
viejos serbios (6). RESUMEN
Se empleó la espectrometría de
emisión óptica por plasma El consumo de bebidas listas
acoplado inductivamente (ICP-OES) para el consumo (RTD) no ha
(7) para el análisis dejado de aumentar. Sin
embargo, el control de los
elementos tóxicos y esenciales
para este tipo de bebidas
*Autor corresponsal.
Correo electrónico: requiere el empleo de métodos
robertafroes@hotmail.com, Tel: (55) analíticos adecuados.
31 355)-1233 Se empleó la espectrometría de
emisión óptica de plasma
acoplado inductivamente (ICP-
OES) para investigar elementos
tóxicos y esenciales en bebidas
RTD. Este tipo de bebidas tiene
una composición alcohólica que
oscila entre el 4 y el 7%, por lo
que es necesario optimizar las
condiciones del plasma para el
análisis de las muestras. Se
obtuvieron condiciones robustas
cuando la potencia aplicada se
mantuvo en 1,4 kW. Los caudales
de muestra y de gas de
nebulización utilizados fueron
1,0 mL min-1 y
0,6 L min-1 , respectivamente. Se
trazó una curva de calibración con
etanol al 6% (v/v) y HNO al 2%
(v/v)3 . Se obtuvieron valores LOD
y LOQ satisfactorios para Al, Ba,
Ca, Cd, Cr, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na,
Ni, Pb, Sn y Zn. Las recuperaciones
fueron aceptables y oscilaron
entre el 80 y el 120%. Se realizó
un análisis exploratorio utilizando
un análisis jerárquico de
conglomerados (HCA) y un análisis
de componentes principales (PCA)
que permitió clasificar las
muestras en función de la marca y
el tipo de bebida destilada
de contenida en la RTD.
varias bebidas alcohólicas con un
contenido alcohólico que oscilaba
entre el 40 y el 55%. Emplearon dos
métodos estadísticos (análisis
canónico dis- criminante - ACD y
árboles binarios de clasificación -
TBC) para evaluar los parámetros de
diferen- cia entre las bebidas
alcohólicas.
Espectroscopia atómica
Vol. 36(1), enero/febrero 2015
de las muestras de bebidas. Fer-
nandes et al. (8) utilizaron ICP-
OES para determinar 15
elementos en bebidas
espirituosas de caña de azúcar
mediante un análisis
exploratorio. Sólo verificaron la
diferencia entre bebidas
espirituosas industriales y
caseras. Jurado et al. (9), que
emplearon ICP-OES y varios
métodos de reconocimiento de
patrones para la clasificación de
muestras, investigaron la
composición química de bebidas
anisadas españolas. Souza et al.
(10) utilizaron la espectrometría
de masas de ionización por
electrospray de infusión directa
en el modo de iones negativos
para diferenciar las muestras de
bebidas espirituosas.
Encontraron cuatro grupos que
se caracterizaban por el tipo de
barriles de madera utilizados.
El análisis RTD mediante
técnicas multielementales como
ICP- OES permite el control de
elementos tóxicos y esenciales
en este tipo de bebidas. El ajuste
de las condiciones de ICP permite
el análisis directo de la matriz
alcohólica y evita así la extinción
del plasma.
Los datos obtenidos con este
método pueden interpretarse
mediante métodos
quimiométricos de análisis
exploratorio, como el análisis
jerárquico de conglomerados
(HCA) y el análisis de
componentes principales (PCA).
Estos métodos permiten la
clasificación y separación de las
muestras e indican los elementos
responsables de la distinción de
las muestras (11,12). Este trabajo
presenta la optimización de las
condiciones experimentales y
parámetros de mérito para el
análisis RTD por ICP- OES para la
cuantificación de
15 elementos en 30 muestras. El
análisis exploratorio de los datos
obtenidos proporcionó una mejor
visualización y, por tanto, permitió
separar las muestras en diferentes
grupos.
1
EXPERIMENTAL
Instrumentación
Para todas las mediciones se
empleó un PerkinElmer Optima™
2000 DV ICP-OES con configuración
radial y axial (PerkinElmer, Inc.,
Shelton, CT, EE.UU.). El
instrumento estaba equipado con
una fuente de radiofrecuencia de
40 MHz, rejilla Echelle (79 líneas
nm-1 ), detector de estado sólido,
antorcha de plasma con una
inyección de 2,0 mm de diámetro
inter- nal y un nebulizador de flujo
cruzado acoplado a una cámara de
nebulización tipo Scott de doble
paso. Se utilizó una interfaz (gas de
cizallamiento) que introducía un
flujo de aire elevado perpendicular
a la antorcha para eliminar la baja
temperatura al final del plasma.
Para la introducción de las
muestras se utilizó un sistema
automuestreador 90 Plus
(PerkinElmer). En la tabla I se
indican las condiciones de
funcionamiento de los
instrumentos, los elementos y las
longitudes de onda utilizadas.
Soluciones, reactivos y muestras
Se prepararon soluciones que
contenían un 6% (v/v) de etanol
para simular la concentración
alcohólica original de las RTD
comerciales. Se prepararon
soluciones de referencia de Al, Ba,
TABLA I
Parámetros de
funcionamiento de ICP-OES
Parámetros
Potencia de RF 1,4 kW
Flujo de gas de nebulización 0,4 - 1,1 L min-1a
Flujo de muestra 1,0 mL min
Flujo de gas auxiliar-1 0,2 L min
Flujo de gas plasma -1 15 L min-1
Diámetro del tubo inyector 2,0 nm
Interfaz Gas de
cizallamiento
Líneas de emisión (λ / nm) Al (I=396,15), Ba
(II=455,403),
Se utilizaron Ca, Cd, Cr, Cu, Fe, K,
Mg, Mn, Na, Ni, Pb, Sn y Zn (1000
mg L-1 ) de alta pureza analítica
(CertiPUR® ICP Standard, Merck,
Alemania) para preparar las
soluciones multiele- mentales que
contenían 100 mg L-1 de los
analitos en HNO al 2% (v/v)3
(VETEC, São Paulo, Brasil) 70%).
Estas soluciones se emplearon
para la construcción de curvas de
calibración ajustadas a la matriz y
soluciones de ensayo en (6%, v/v)
de agua desionizada obtenida con
un
Para preparar todas las soluciones
se utilizó el sistema Milli-Q®
(Millipore Corpora- tion, Bedford,
MA, EE.UU.). Las muestras
comerciales de RTD se diluyeron
(1:1, v/v) con HNO al 2%3 (v/v) y se
introdujeron en el
automuestreador. Para la
determinación de Na, Ca y K, se
utilizó una dilución de (1:10, v/v)
para todas las muestras. En la Tabla
II se enumeran las muestras de RTD
analizadas y sus especificaciones.
Procedimiento
Optimización de las condiciones
de ICP-OES
Se realizó una optimización
univariante para las condiciones
ICP-OES mediante la medición de
la relación Mg(II)/Mg(I) como
criterio de robustez.
a
Valores optimizados durante los
experimentos. I = Línea atómica II =
Línea iónica
2
La potencia aplicada se fijó en
1,4 kW y el caudal de gas de
nebulización varió de 0,4 a
1,1 L min-1 . Todas las mediciones se
realizaron en vista axial y radial.
Cifras analíticas de mérito
Las cifras de mérito analíticas se
basaron en experimentos tal como
se proponen en la bibliografía
(13,14). La estabilidad a corto plazo
se determinó realizando 15
mediciones consecutivas de la
intensidad de emisión en la línea de
Mg(II) 280,265 nm.
La estabilidad a largo plazo se
evaluó controlando la línea de
emisión durante un período de
dos horas en el que se realizaron
mediciones de 8 minutos con un
intervalo de 15 minutos.
La relación señal/fondo (SBR), la
concentración equivalente de fondo
(BEC), el límite de detección (LOD) y
el límite de cuantificación (LOQ) se
calcularon siguiendo las
recomendaciones de la IUPAC (14):
(Irs - IBlank) Crs
SBR = BEC =
IBlank SBR
TABLA II
Ca (I=317,93), Cu (I=324,75),
Fe (II=238,2), K (I=766,49),
Na (I=589,59), Mg (I=285,21),
Mn (II=257,61), Sn (II=189,99)
Descripción de las muestras listas para beber
analizadas
Marca Descripción Marca Descripción
A1 Alcohol de cereales D1 vodka
A2 Alcohol de cereales D2 vodka
B1 Vodka E1 Aguardiente de
caña de azúcar
B2 Vodka E2 Aguardiente de
caña de azúcar
B3 Vodka E3 Aguardiente de
caña de azúcar
B4 Vodka E4 Aguardiente de
caña de azúcar
B5 Vodka F1 vodka
B6 Vodka F2 vodka
B7 Vodka F3 vodka
B8 Vodka F4 vodka
C1 Vodka G1 Ron
C2 Vodka G2 Ron
C3 Vodka H1 Aguardiente de
caña de azúcar
C4 Vodka H2 Aguardiente de
caña de azúcar
C5 Vodka I1 Vodka

2

3 x RSDBlank x BEC
LOD =
100
10 x RSDBlank x BEC
LOQ =
100
donde Irs = Intensidad de la solución
de referencia; IBlank = Intensidad de
la solución en blanco; Crs =
Concentración de la solución de
referencia; RSD = desviación
estándar relativa de 10 mediciones
de la solución en blanco.
La precisión del método se
evaluó con una solución RTD de
0,5 y 2,0 mg L-1 de metales
añadidos. Los análisis exploratorios
mediante HCA y PCA se realizaron
ejecutando PLS Toolbox 3.0 for
Mat- lab® (Mathworks, Inc.,
EE.UU.) (15). Estos métodos se
utilizaron para evaluar la similitud
entre las muestras de RTD
formando diferentes grupos según
los tipos.
RESULTADOS Y DEBATE
Optimización de las condiciones
de ICP-OES
La influencia de la velocidad de
flujo del gas de n e b u l i z a c i ó n
sobre la robustez del plasma se
evaluó mediante el método
Relación Mg(II)/Mg(I). El término
robustez representa la eficiencia de
la transferencia de energía cuando
la excitación
y se modifican las condiciones de
ionización del plasma (14,16). En
este experimento, la potencia
aplicada se fijó en 1,4 kW y el flujo
de gas de nebulización varió de 0,4 -
0,5 kW.
1,1 L min-1 . El valor más alto de la
relación Mg(II)/Mg(I) se obtuvo con
un caudal de gas de 0,6 L min-1 en
vista axial (Figura 1). En vista radial,
el mejor valor de Mg(II)/ Mg(I) se
obtuvo con el caudal de gas de 0,9 L
min-1 . El uso de valores bajos de
flujo de gas aumenta la robustez
del plasma, pero deben evitarse
valores inferiores a 0,5 L min-1
porque el tiempo de residencia del
analito es elevado y puede
producirse autoabsorción (17,18).
La condición de robustez (caudal
de muestra 1,0 mL min-1 ; potencia
de RF 1,4 kW; caudal de gas de
nebulización 0,6 L min-1 ; vista
axial) se adoptó en estudios
posteriores.
Cifras analíticas de mérito
Para la vista axial y radial, la
estabilidad a corto plazo
proporcionó una RSD de 1,03 y
1,10%, respectivamente; la
estabilidad a largo plazo fue de
0,91% y 1,7%. Considerando que
en matriz acuosa otros autores
(14)
3
Vol. 36(1), enero/febrero. 2015
obtuvo una RSD de 0,7 y 1,5 para
la estabilidad a corto y largo
plazo, respectivamente, los
valores de RSD
obtenidos en este estudio fueron
satisfactorios.
Las cifras analíticas de mérito
y los resultados de cuantificación
de 30 muestras de RTD (SBR,
BEC, LOD,
LOQ, rango de concentración y
recuperación) se enumeran en la
Tabla III. Se obtuvieron buenos
valores para el SBR, BEC, LOD y LOQ
para la mayoría de las líneas
analíticas investigadas.
Las recuperaciones observadas
fueron satisfactorias, con un valor
máximo de recuperación entre el
80 y el 120% del valor esperado
(19). El rango de concen- tración de
las muestras fue inferior al LOQ
para Cr y Mn.
Para el Na (que es uno de los
elementos cuyos niveles pueden
llegar a ser peligrosos para el
consumidor), los valores obtenidos
oscilaron entre 11,58 y 276,8 mg L-1 .
Los elevados valores obtenidos para
el Na pueden estar asociados a la
adición de con- servadores y/o
edulcorantes con sodio.
Análisis exploratorio
Análisis jerárquico de
conglomerados (HCA)
Se utilizó el HCA para establecer
posibles similitudes entre las
muestras. Las muestras se
clasificaron en cuatro grupos, que
se presentan en la figura 2. Los dos
primeros grupos incluyen muestras
con una base de vodka (C4, C1, B8,
B7, B3, B6, B5) y una base de
alcohol de caña de azúcar (E2, E1,
E4); el tercer grupo contiene
muestras con una base de alcohol
de cereales (A2, A1, I1); y el cuarto
grupo son muestras con una base
de alcohol de caña de azúcar (H2,
H1).
Las muestras de ron (G1 y G2) se
incluyen en el primer grupo debido
a las similitudes en su composición.
La marca C son muestras
contenidas en distintos envases: C1
y C4 en botellas de vidrio y C2, C3 y C5 en latas.

Fig. 1. Efecto del caudal de gas de nebulización sobre la relación Mg(II)/Mg(I) (potencia de RF 1,4 kW).

3
 CUADRO III Análisis de componentes
Figuras analíticas de mérito para el análisis de productos listos principales (ACP)
para beber mediante ICP-OES: BEC, SBR, LOD, LOQ, rango de En el ACP se utilizó el mismo
concentración y recuperación procedimiento de separación que
Elemento SBR BEC LOD LOQ Concentración Rango de en el ACP. Se construyó un modelo
(µg L )- (µg L )- recuperación (µg L-1 ) (%) con tres componentes principales
1 1 (n=3) (PC) que explica el 99,97% de la
Al (I) 603.6 0.0083 6.8 22.8 40-230 104.2 varianza total. Los elementos
discriminantes para PC1 y PC2
Ba (II) 79.9 0.03 4.3 14.3 <LOQ - 60 110.3
fueron K y Na (Figuras 3a y 3b),
Ca (I) 17 0.29 120.3 401.1 610-20600 103.9 mientras que para PC3 fueron Ca y
Cd (II) 25566.5 0.0002 0.4 1.3 2-8 103.1 Mg (Figura 3c). Estos elementos
Cr (II) 15273.4 0.0003 0.2 0.5 <LOQ 116.2 discriminantes explican la
Cu (I) 4165.1 0.001 0.2 0.7 4-48 111.3 separación obtenida en la Figura 4,
Fe (II) 340.6 0.015 0.6 1.9 40-510 108.6 que muestra la misma separación
que el dendrograma de la Figura 2.
K (I) 758.6 0.0066 2.0 6.9 1200-112000 93.6 Las muestras de aguardiente de
Mg (I) 351.8 0.014 6.3 21.0 40-4700 109.8 caña de azúcar se separaron de las
Mn (II) 869.1 0.0058 0.3 0.96 <LOQ 105.6 demás bebidas debido a una mayor
Na (I) 13165.8 0.0004 3.7 12.3 11580-276800 91.6 concentración de K y una menor
Ni (II) 489.1 0.01 1.7 5.6 20-120 99.4 concentración de Na. Por otro lado,
una menor concentración de K y
Pb (II) 3042.6 0.002 3.6 12.4 <LOQ-24 115.6 una mayor concentración de Na
Sn (II) 262.3 0.019 11.7 39.1 40-500 96 diferencian las muestras de alcohol
Zn (II) 1893.1 0.003 0.3 1.03 3-10 110.5 de cereales de las demás bebidas.
Las muestras de vodka presentaban
SBR = Relación señal/fondo
concentraciones intermedias de K y
BEC = Concentración equivalente de fondo LOD
Na. En cada clase, las muestras de
= Límite de detección
la región inferior poseen
LOQ = Límite de cuantificación
concentraciones bajas de Ca y Mg y
valores más altos de los mismos
elementos en la región superior.

CONCLUSIÓN
El ajuste de las condiciones de
funcionamiento del ICP-OES
permite un método de trabajo
para el análisis directo de muestras
listas para beber (RTD).
En estas condiciones se obtuvieron
buenas cifras de mérito analítico y
se realizó el análisis de 30 muestras
reales de RTD. La evaluación de los
datos mediante el análisis
jerárquico de conglomerados (HCA)
y el análisis de componentes
principales (PCA) permitió
identificar las muestras en grupos y
los elementos discriminantes de
cada grupo.
ICP-OES, junto con los métodos
estadísticos exploratorios de PCA y
HCA, ha demostrado ser una
herramienta útil para proporcionar
una metodología sencilla, rápida y
Fig. 2. Dendrograma de bebidas listas para el consumo.. precisa para la diferenciación de

4
muestras RTD. Como señalan también los resultados preliminares, esta
técnica puede utilizarse con confianza para un control de calidad eficaz de las
bebidas.

4
 Vol. 36(1), enero-febrero de
2015
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Respostas Técnicas - Aditivos na
fabricação de bebida alcoólica
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http://www.sbrt.ibict.br
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6. M. Bonic, V. Tesevic, N. Nikicevic, J.
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9. J.M. Jurado, A. Alcázar, F. Pablos,
M.J. Martín y A.G. González,
Talanta 66, 1350 (2005).
10. P.P. Souza, H.G.L. Siebald, D.V.
Augusti, W.B. Neto, V.M. Amorim,
R.R. Catharino, M.N. Eberlin, y
R. Augusti, J. Agric. Food Chem.
Fig. 3(b). Gráfico de variables de las muestras de bebidas listas para el consumo 55, 2094, (2007).
etiquetadas: PC2
Desenvolvimento Científico e
ACUSE DE RECIBO Tecnológico (CNPq) y la Fun- dação
de Amparo à Pesquisa do Estado de
Los autores desean agradecer a Minas Gerais (Fapemig) por su apoyo
la Fundación Ezequiel Dias (FUNED) financiero; y al Dr. Jason G. Taylor
la donación de material de (UFOP) por sus perspicaces
laboratorio para esta investigación; discusiones y por revisar el
a la Coordenação de manuscrito para su uso en inglés.
Aperfeiçoamento de Pessoal de
Nível Superior (CAPES, Brasil), Recibido el 1) de agosto de 2014.
Conselho Nacional de
5
11. D.L. Massart, B.G.M. Vandeginste,
L.M.C. Buydens, S. De Jong, P.J.
Lewin y J. Smeyers-Verbeke,
Handbook of Chemometrics and
Qualimetrics: Parte B Elsevier,
Ams- terdam, Países Bajos (1998).
12. R.E.S. Froes, W. Borges Neto,
M.A. Beinner, C.C. Nascentes y
J.B.B. Silva, .Food Anal. Methods
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Spectrosc. 49, 12-18 (1995).
14. F.V. Silva, C.L. Trevisan, C.S. Silva,
A.R. Nogueira, J.A. Nóbrega. Spec-
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Inc., Naslick, MA, EE.UU.
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J.B.B. Silva, At. Spectrom. 28(1), 8
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S. Cadore, y J.A. Nóbrega,
Microchem. 77, 185 (2004).
19. Agencia de Protección del Medio
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Methods Devel- opment and
Fig. 3(c). Diagrama de variables de las muestras de bebidas listas para el Methods Validation for the RCRA
consumo etiquetadas: PC3 Program SW-846 Meth- ods (1992).

Fig. 4. Gráfico de puntuaciones de las muestras de bebidas listas para el consumo en el espacio de los tres primeros PC.