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UNIDAD 6

INTRODUCCION A LA VIROLOGIA

La Virología es una parte de la Microbiología y rama de la Biología, que se ocupa del estudio
de los virus.

6.1 Etimología

La palabra virus viene del latín virus que significa "zumo de plantas nocivo para la salud", o
sea veneno. De ahí también las palabras virulento y virulencia. La palabra virus latina se
asocia con la raíz indoeuropea *weis- (fluir, veneno) y con el griego ἰός (ios = veneno).

6.2 Virus. - Definición. -

Para conceptualizar la palabra “virus” se pueden tomar en cuenta a varios estudiosos de

los cuales Lwoff (1957) establece como entidad estrictamente celular y potencialmente
patogénica con una fase infecciosa

1. un solo tipo de ácido nucleico,

2. incapaz de crecer y reproducirse por fisión binaria,

3. carente de enzimas para producir energía".

Por otra parte Luria y Darnell (1967) Definen a virus como “son entidades cuyo genoma son
elementos de ácido nucleico que se replican dentro de células vivas usando la maquinaria
de síntesis celular, determinado la formación de elementos especializados que permiten la
transferencia del genoma viral a otras células".

Resumiendo, los virus son partículas infecciosas muy pequeñas, constituidas por un solo
ácido nucleico DNA o RNA, poseen una organización estructural simple y se replican por
un mecanismo particular dentro de una célula viva.

6.2.1| Características generales. -

Las primeras características diferenciales de los virus con otros agentes fueron: el tamaño
estimado por su capacidad de atravesar f iltros que retienen a las bacterias y la incapacidad
para reproducirse en medios biológicos inertes (como medios de cultivos para bacterias),
requiriendo para su propagación de animales o cultivos celulares.

Los virus son elementos genéticos que pueden replicarse independientemente de los
cromosomas de una célula, pero NO independientemente de dicha célula, por lo que se
dice que son: Parásitos intracelulares obligados. Deben entrar en la célula en la cual puedan
replicarse, a la que se denomina hospedadora. Se caracterizan también por tener una forma
infecciosa madura que es típicamente extracelular
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Los virus poseen un solo tipo de ácido nucleico de tamaño relativamente pequeño con
respecto a otros agentes biológicos, rodeado por una cáscara o cápside formada por
numerosas copias de una proteína o de un número limitado de ellas. Algunos grupos de
virus presentan por fuera de la cápside una envoltura lipídica de origen celular en la que se
insertan glicoproteínas. No presentan sistemas enzimáticos propios, por lo que por sí solos
no son capaces de replicarse y requieren para su propagación y mantenimiento de células
animales, vegetales o bacterias para cumplir su ciclo de reproducción, lo que define su
parasitismo celular obligatorio.

6.3 ESTRUCTURA DE LOS VIRUS. -TAMAÑO Y FORMA

6.3.1. Estructura

Los virus están constituidos en la parte central están constituidos por el genoma o
nucleoide, (llamado también core viral) que se encuentra rodeado por una cubierta
proteica denominada cápside.

➢ La cápside (del griego capsa, caja) está formada por subunidades proteicas más
pequeñas, denominadas capsómeros o unidades morfológicas que pueden
presentar formas esféricas o prismáticas; (a su vez, están constituidos por los
protámeros, que se encuentran en la superficie de la partícula en los virus
desnudos, cuya función es la de cubrir y así proteger al core de la acción de agentes
físicos y químicos, además contribuye en la forma y tamaño del virus. Tanto en los
virus desnudos como en los envueltos pueden algunos de ellos, contener
proyecciones que, en los desnudos, están insertadas en un capsómero y en los
cubiertos en la membrana del virus. Estas proyecciones reciben el nombre de
ESPÍCULA (de naturaleza glucoproteica) en los virus envueltos; y en los virus
desnudos tienen designaciones específicas, como por ejemplo FIBRA. O ADENO o
SIGMA en los denominados REOVIRUS.

Cuyas funciones son las de proyección, receptor, antígeno, sirven de fijación dado
que son las estructuras que se unen a los receptores de las células que van a ser
infectadas. También se pueden unir a glóbulos rojos y provocar la aglutinación in
vitro (hemaglutinación). La envoltura hace que los virus que la poseen sean
sensibles a los solventes lipídicos, los detergentes, la desecación o la acidez.
Cuando un virus envuelto pierde la envoltura deja de ser infectivo.

➢ En algunos virus se agrega otra estructura externa, llamada envoltura y los virus
que la poseen se clasifican como virus envueltos. Cuando no existe una envoltura,
se dice que se trata de un virus desnudo.

La envoltura es una bicapa lipoproteica, de composición similar a la de la membrana

celular infectada, ya que los virus la adquieren de esta. La presencia o no de
envoltura determina la resistencia de los virus al medio externo y esto es de
fundamental importancia en la forma de transmisión de las enfermedades virales.
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La función de la envoltura es la de protección de la nucleocápside, la adherencia a los

receptores celulares y la antigenicidad.

Como toda macromolécula, los virus poseen lo que se denomina peso molecular, al cual
contribuye la cápside.

Los virus al infectar, generan defensas del organismo infectado ( anticuerpos). La cápside
es la principal formadora de anticuerpos por ser un buen antígeno. Los capsómeros pueden
ser de forma esferoidal hueca (adenovirus) o en forma de prisma con una zona hueca
central (herpesvirus)

Las funciones/ propiedades de las proteínas de la cápside son:

• Protección del ácido nucleico del medio externo, de la desecación y de las enzimas
tisulares.
• Presentar estructuras que permiten la unión del virus a los receptores de membrana
de la célula hospedadora.
• Actuar como antígenos que estimularan la respuesta inmune del hospedador.
• Reprimir la expresión de genes virales tempranos.
• Proveer interacciones espaciales con las polimerasas virales en ciertos casos.
• Y la cápside como tal f acilita la adsorción de virus desnudos a los receptores
celulares
• Otorga la simetría viral de acuerdo con la disposición espacial de los capsómeros

El conjunto formado por el nucleoide y la cápside recibe el nombre de nucleocápside

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➢ El genoma viral contiene el ácido nucleico, sea este DNA o RNA. Tanto el DNA
como el RNA pueden ser de una sola cadena o de dos, es decir monocatenarios o
bicatenarios. En términos generales, la mayoría de los genomas con DNA son
bicatenarios y con RNA son monocatenarios, salvo algunas excepciones.

Esta única cadena de RNA puede tener polaridad positiva (+) o negativa (–). En la
replicación viral el genoma viral RNA (+) actúa como el RNA mensajero.

En los de polaridad negativa (–) la secuencia es inversa o de antimensajero.

También existen virus con genoma RNA con polaridad mixta o ambisentido.

En el genoma viral se encuentra toda la información genética y es responsable de

la capacidad infecciosa del virus. Algunos genomas contienen 4 a 8 genes y los
más grandes pueden llegar a contener centenares de genes. Los ácidos nucleicos
pueden estar dispuestos en forma lineal, circular o segmentado en fragmentos (cada
uno de los cuales codifica un gen específico)

El ácido nucleico que lleva la información genética y que constituye el genoma viral
puede tener varias formas. Como ya se mencionó, una partícula viral tiene en su
estructura un solo tipo de ácido nucleico ADN o ARN, pero la forma de estos puede
ser de doble o simple cadena, segmentado o no, circular, lineal determinando, pues,
una gran diversidad, lo cual también es ampliamente utilizado en la taxonomía viral.
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En la Figura siguiente se representa un cuadro con los principales virus animales, en el que
se puede observar que la diversidad de estructura (con envoltura o sin ella, con simetría
helicoidal o icosahédrica) y composición del ácido nucleico pueden combinarse de
diferentes maneras para determinar varios grupos de virus.

6.3.2.Tamaño

Los virus pueden tener diferentes tamaños es así, que se puede observar un tamaño entre
28 nm en los virus más pequeños denominados precisamente picornavirus (pico de
pequeño) hasta 300 nm en los virus más grandes que se conocen como son los poxvirus
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6.3.3 FORMA.-

En los virus no se habla de formas sino de simetrías. La simetría es la disposición de la

nucleocápside en el espacio y de acuerdo con ello se observan distintos tipos:

a) Helicoidal, esta estructura presenta los capsómeros se acomodan en una hélice que
asemeja a una escalera en caracol. Los virus con esta simetría pueden presentar
una nucleocapside cilíndrica extendida (virus del mosaico del tabaco, bacteriografo
M13 ambos son virus desnudos), o bien la nucleocápside esta arrollada sobre si
misma y recubierta por una envoltura (virus influenza)

b) Cubica o icosaédrica, Son poliedros regulares con 20 caras triangulares, 30 aristas

y 12 vértices. Pueden ser desnudos (poliovirus o adenovirus), o estar recubiertos de
envoltura (herpesvirus o togavirus).

c) Se denominan virus de simetría compleja a aquellos que no son ni helicoidales ni

icosaédricos, no contienen cápsides claramente identificables, ejm. Poxivirus
(viruela) que poseen forma de ladrillo. Algunos autores denominan de simetría
binaria o combinada a la observada en algunos bacteriograf os que poseen una
cabeza con simetría icosaédrica y una cola con simetría helicoidal.
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6.4 CLASIFICACION DE LOS VIRUS. -

Los virus pueden clasificarse tomando en cuenta varios aspectos, tales como la morfología,
tipo de ácido nucleico, modo de replicación, huésped y tipo de enfermedad que causan.
Actualmente existen 2 tipos de clasificaciones principales que son:

• Clasificación del ICTV (International Commitee on Taxonomy of Viruses)

Clasificacion taxonómica (ICTV).-

Este sistema basa la clasif icación en ordenes, familias, subfamilias, géneros y especies.
Por lo tanto, la estructura general de la taxonomía es la siguiente:

Orden (virales)
Familia (viridae)
Subfamilia (virinae)
Genero (virus)
Especie (virus)

• Clasificación de Baltimore

Esta clasificación distribuye los virus en 7 grupos fundamentales en función de la naturaleza

del ácido nucleico viral y en el mecanismo de producción de ARNm.

Todos los virus deben generar cadenas positivas de ARN a partir de sus genomas para
producir proteínas y replicarse a sí mismos, pero se utilizan distintos mecanismos en cada
uno de los 7 grupos.
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6.5.1 Clasificación según su estructura. -

➢ Virus desnudos. - (Tienen solo nucleocápside)

La estructura de los virus más simples está compuesta por un solo tipo de ácido nucleico
(ADN o ARN) rodeado de una cáscara proteica que se denomina cápside (del griego capsa
que significa caja) que resulta de la reunión de subunidades proteicas codificadas por el
genoma viral que se ensamblan basados en principios geométricos y pueden determinar
diferentes tipos de simetrías (icosahédrica o helicoidal, principalmente).

Esta estructura básica de ácido nucleico y cápside recibe el nombre de nucleocápside y

constituye en los virus desnudos la partícula viral completa o virus que se diferencian del
término virión el cual es utilizado para aquellas partículas virales o virus potencialmente
infecciosas.

Cuando se observa al microscópico una cápside viral, pueden observarse estructuras

morfológicas denominadas capsómeros que resultan de la unión por enlaces de las
subunidades proteicas. La forma de distribución de los capsómeros, así como el número de
ellos depende de cada tipo de virus.

Caracteristicas.-

• Son liberados de la célula que infectan por lisis

• Carecen de envoltura lipídica, siendo más estables a condiciones ambientales como
temperatura, acidez proteasas, detergentes desecación.
• Pueden encontrarse con facilidad sobre fómites, manos, polvo, pequeñas gotitas
etc, (resistentes a condiciones adversas)
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Resistencia.-

• Los virus desnudos, son más resistentes, pueden permanecer y transmitirse a

través del medio ambiente como los virus de la poliomielitis o de la hepatitis A.
• La mayoría de los virus desnudos son resistentes al medio externo, a la desecación
y a solventes de lípidos (eter, cloroformo, sales biliares, detergente, etc)
• Si se desecan conservan su infectividad, pueden superar condiciones adversas del
intestino, ser resistente a los detergentes y aguas residuales insuficientemente
tratadas.
• Su curación depende de la inmunidad humoral.

➢ Virus envueltos. - (Nucleocápside con manto: influenza herpes etc))

La estructura de las partículas virales del grupo de virus denominados envueltos, está
formada además de la nucleocápside por una envoltura que la rodea de origen celular, y
que los virus envueltos modifican la membrana celular durante la replicación y se liberan de
la célula infectada por brotamiento o gemación sin necesidad de matar a la célula para
diseminarse y en ocasiones lo hace por lisis celular.

En dicha envoltura se insertan glicoproteínas de origen viral que reciben el nombre de

espículas o glicoproteínas de superficie y que tienen un importante papel de reconocimiento
de receptores específicos de la superficie celular en el paso inicial de relación con la célula
huésped para la multiplicación viral.

Estos virus tienen la característica de inactivarse en presencia de agentes físicos y

químicos, debido la fragilidad de la envoltura, por lo que la transmisión entre huéspedes se
hace por contacto íntimo de persona a persona, como en el virus de la gripe, el virus del
herpes y otros.

Caracteristicas.-

• Necesitan humedad, no sobreviven en el tracto intestinal, se diseminan por gotitas

grandes, secreciones o trasplante de órganos o sangre.
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• Curación depende de la respuesta humoral y celular. Frecuentemente su capacidad

patógena se debe a una respuesta inmunocelular.

Resistencia.-

Por el contrario, los virus envueltos son muy lábiles a la desecación y a los solventes de
lípidos, son alterados por la acidez y detergentes por ello, para su transmisión se requiere
contacto directo de persona a persona o a través de fómites (Elementos inertes
contaminados) La presencia de envoltura determina la sensibilidad a los solventes de
lípidos, lo que constituye uno de los criterios de la clasificación de los virus.

6.5 FASES DE LA INFECCIÓN VIRAL:

A un tipo de infección viral productiva se contrapone una forma abortiva. Esta cumple un
ciclo incompleto en el cual no se forman partículas virales infecciosas. Una infección
productiva culmina con la generación de una progenie viral infecciosa; este proceso
requiere una serie de pasos o etapas, las cuales tienen diferencias en los distintos tipos de
virus. Las etapas fundamentales de la infección viral son:

• Adsorción
• Penetración
• Denudación
• Eclipse
• Replicación
• Maduración
• Liberación

1.Adsorción

Intervienen varios factores. Hay una atracción por fuerzas iónicas. A pH 7 los virus y las
células tienen cargas negativas de modo que es necesario la presencia de iones positivos,
cumpliendo muy eficazmente este requerimiento los iones de Magnesio. Otro f actor
importante en esta etapa es la interacción de sitios específicos de la partícula viral con
receptores celulares específicos, es decir que existe interacción virus-célula, no puede
infectar a todas las células de un mismo organismo, ni a todas las especies animales. Esto
determina la especificidad de algunos virus para crecer en células de origen específico, por
ejemplo, el virus de polio sólo puede crecer en células de origen humano y de primates.

Otros virus presentan estructuras especializadas en su superficie que les permiten cumplir
con esta etapa de forma muy especializada. Estas estructuras son glicoproteínas las cuales
reconocen receptores celulares específicos y se pueden aislar hoy día esos elementos en
forma de complejos virus-célula.
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Luego de adsorbidos a una célula, los virus pueden ser recuperados conservando sus
caracteres de partícula libre, potencialmente infectante. Los poliovirus pueden ser
separados de las células con altas concentraciones salinas o detergentes, y los mixovirus
(virus de gripe) que utilizan una estructura especializada se separan de las células
hospederas por acción de la neuraminidasa.

2. Penetración
La penetración de los virus una vez adsorbidos, puede realizarse de varias maneras

a. Por viropexis o endocitosis

Es un proceso de fagocitosis, por el cual se produce una invaginación de la membrana
plasmática, de modo que el virus queda englobado en una vesícula dentro del citoplasma
celular para luego ser liberado. Es el mecanismo más común de penetración de los virus.

b. Por penetración directa

En algunos, la penetración acontece por un simple cruce de la membrana plasmática, así

la partícula viral queda directamente incluida en el citoplasma. No hay fusión de membrana,
ni formación de vesículas. Inyección directa del ácido nucleico viral. Esto sucede con virus
desnudos y pequeños.

c. Por fusión
Otro tipo de penetración se da por fusión de la envoltura viral con la membrana
citoplasmática, y libera la cápside al interior de la celula. También en este caso el virus es
directamente incorporado al citoplasma.
Se da en virus envueltos, las glicoproteínas de los virus se unen a los receptores de
membrana y ocurre una fusión de ambas capas fosfolipídicas.
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3. Denudación y eclipse

En esta etapa se produce la desintegración del virus, dejando libre al ácido nucleico, que
comanda su propia replicación y la de las proteínas necesarias para integrar nuevas
partículas. La forma en que un virus pierde la cápside y su envoltura, en el caso de
tenerla, es característico de cada grupo de virus.

En los poliovirus parece existir una integración con los constituyentes celulares, tales como
los receptores. En otros virus, como los poxvirus y los reovirus el proceso es más complejo.
Los poxvirus pierden parte de su envoltura en las vacuolas fagocíticas, en tanto que un
ARNm es sintetizado por una transcriptasa lo que culmina con la producción de una nueva
enzima que completa la denudación. Los reovirus penetran en los lisosomas: allí enzimas
proteolíticas eliminan la cápside y promueven la transcripción del genoma.

Los fenómenos descritos (adsorción, penetración y denudación) culminan con la

desintegración de las partículas, pero no siempre el proceso progresa hasta la repl icación
viral. Si interrumpimos el ciclo en esta etapa llamada eclipse, el ácido nucleico liberado de
sus envolturas puede recobrarse por disrupción de la célula huésped, pero habría perdido
su infectividad (a pesar que algunos autores opinan que aún puede recobrarse intacto). Si
el proceso normal continúa, comienza la replicación del ácido nucleico y síntesis de las
proteínas estructurales y no estructurales necesarias para la producción de virus

4. Replicación del ácido nucleico. –

La replicación de los virus es un proceso muy particular por el cual un virus penetra en una
célula que, a partir de ese momento, pone todos sus mecanismos a disposición de ese
virus, del cual se producen muchas copias en su interior. En este aspecto los virus se
diferencian notoriamente de las bacterias dado que una bacteria solo origina dos y de un
solo virus puede haber hasta 100 000 copias, pero solo un 1 al 10% de ellas llegará a ser
infecciosa.

La replicación es un fenómeno muy heterogéneo por cuanto existe mucha variedad en los
ácidos nucleicos de origen viral; se recordará que hay ADN y ARN muy diferentes, de una
o dos hebras, segmentados o no, etc. En todos los casos, el genoma viral es el elemento
capaz de gobernar su autorreplicación y de trasmitir la información estructural y funcional a
la progenie resultante de una infección. No obstante, la diversidad señalada, intervienen en
la replicación elementos comunes que vale la pena destacar, tales como la formación de
un ARN mensajero capaz de traducir en el ribosoma celular las proteínas codificadas por el
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genoma viral. Además, sea cual sea el ácido nucleico, siempre se diferencian dos conjuntos
de genes, los precoces y los tardíos. Los primeros serían los encargados de codificar
proteínas necesarias para la copia de la molécula de ácido nucleico, y los tardíos
encargados de codificar proteínas estructurales y proteínas para el ensamblaje.

La replicación puede producirse en el núcleo o en el citoplasma de la célula, y eso

dependerá del tipo de ácido nucleico que constituye el genoma viral. Los virus que
contienen ARN se replican en el citoplasma, mientras que aquellos que tienen ADN
se replican en el núcleo, excepto en el caso del grupo del virus de la viruela, que a pesar
de tener ADN su replicación se realiza en el citoplasma.

Los virus ADN sintetizan un ARN mensajero por intermedio de una polimerasa que pasa al
citoplasma donde se producirá la síntesis proteica; de estas proteínas algunas tienen
funciones estructurales y formarán los capsómeros que al unirse constituirán la cápside.

Otras proteínas tendrán funciones enzimáticas, de polímeros, y se introducirán en el ácido

nucleico promoviendo la replicación del ADN vírico.

El tipo de replicación es semiconservadora, y los intermediarios replicativos, serán lineales

o cíclicos dependiendo de que la molécula de ADN sea lineal o cíclica respectivamente.

Como ejemplo de virus ADN podemos citar al grupo de los herpesvirus, quienes en el
citoplasma pierden la cápside y penetran al núcleo iniciando la replicación del ácido
nucleico. Hay síntesis de ARN mensajeros inducidos por el virus, enzimas relacionadas a
la síntesis y quiebra de ADN. Los pasos biosintéticos descritos pueden relacionarse con el
desarrollo de cuerpos de inclusión nucleares y la formación de partículas virales.

Los virus con ARN revisten un interés especial por la diversidad de formas de replicación
que existen: esto depende de que ARN pueda actuar como mensajero y se le denomina
convencionalmente de polaridad positiva o, por el contrario, que posea una secuencia de
bases complementarias del mensajero y se le denomina de polaridad negativa. Cuando
consideramos un ARN con polaridad positiva, el ARN actúa como mensajero, entrando en
el ribosoma celular e iniciando una traducción de proteínas polimerasas, necesarias para
iniciar la replicación del ácido nucleico, luego actuará la parte tardía del ARN traduciendo
proteínas para la formación de la cápside y ensamblaje de la partícula viral.

Un ejemplo de este tipo de replicación son los poliovirus que tienen como genoma un ARN
de hebra única, con ácido poliadenílico en un extremo que sirve inicialmente como molécula
de ARN mensajero para la síntesis de replicasa de ARN, produciéndose el intermediario
replicativo de ARN que sirve para la síntesis de moléculas de ARN virales de los
descendientes. La replicación del ARN viral es independiente de las síntesis d e ADN de la
célula hospedadora.
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En el caso de ARN con polaridad negativa, por el contrario, la molécula no tiene función
mensajera, de modo que sintetiza una molécula complementaria de la original para poder
esta copia entrar en el ribosoma con función mensajera. En este grupo de virus, aparece
un nuevo concepto en la estructura viral, ya que para sintetizarse la copia se necesita una
ARN transcritasa ARN dependiente que no se encuentra en las células y, por consiguiente,
vemos que en estos virus además de su genoma y proteínas estructurales son sintetizadas
otras proteínas que luego son incorporadas a la partícula viral.

5.Maduración y liberación

Hay virus cuya única cubierta es la cápside, son virus desnudos, en contraposición a
aquellos que poseen envoltura por fuera de la cápside que son los virus envueltos. Es
conveniente considerarlos por separado en este punto que significa la culminación en la
formación de una progenie viral.

Para los virus desnudos, el fenómeno de maduración consiste simplemente en la unión

de los capsómeros para formar la cápside y la posterior unión de esta con el genoma.

Parece existir una diferencia en la maduración de este grupo de virus dependiendo de que
el ácido nucleico sea ADN o ARN.

Para los que tiene ADN, la síntesis del ADN se realiza con anticipación a la aparición de
elementos estructurales, mientras que para los virus ARN se ha demostrado con
aminoácidos radioactivos que las cadenas polipeptídicas son reunidas muy p ronto en
capsómeros y rápidamente estas en cápsides, y que existe concordancia con la síntesis de
la molécula de ARN.
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Los virus para infectar, replicarse y expandirse cumplen los pasos anteriormente citados
de manera común, pero de acuerdo a sus particularidades se pueden observar que
existen dos tipos de procesos o ciclos que son:

Ciclo litico:
Este proceso necesita de una célula hospedadora que le facilite materia y energía al virus
para sintetizar sus nuevos ácidos nucleicos y sus capsómeros, este ciclo presenta todas
las fases citadas de manera correlativa sin detenerse.
La característica principal de este ciclo es que el virus para replicarse destruye (provoca
lisis de la célula hospedera, se caracterizan por ser virus virulentos.
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Ciclo lisogénico:

Existen virus que en lugar de iniciar un ciclo lítico incorporan su acido nucleico al ADN
celular (lisogenia) y se multiplican del ADN celular. A estos virus se les conoce como
profagos (Provirus). La principal característica de este ciclo es que el virus permanece en
estado de latencia en todas las células infectadas, pero solo hasta que se produzca un
estimulo capaz de “despertar” a los profagos que iniciaran un ciclo litico Ejm. El VIH . Las
fases que sigue este ciclo son: Adsorcion, penetración, integración (lisogénica) y
multiplicación.
El virus para replicarse no destruye a la célula hospedadora por eso se los llama virus
templados o atenuados.
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6.6 ALTERACIONES CELULARES PRODUCIDAS POR INFECCION VIRAL

Las células pueden responder de varias formas frente a una infección viral:

1. En algunos casos no se observa ninguna alteración aparente,

2. El ingreso del virus puede provocar efecto citopático, es decir muerte de la célula
por lisis celular, hiperplasia, seguida de muerte, como en el caso de los poxviurs,

3. solamente hiperplasia como la transformación viral para células malignas,

oncogénicas.

6.6.1 Efecto citopático

El efecto citopático consiste en alteraciones morfológicas de las células teniendo como

resultado la muerte celular. El efecto citopático es muy diferente debido al tipo de virus. En
cultivos infectados con adenovirus, las células se redondean y se agrupan como un racimo
de uvas, los poliovirus también se redondean, pero se retraen y se lisan, liberando mucha
cantidad de virus. El virus respiratorio sincicial, produce la fusión de membranas celulares
dando como resultado grandes sincicios.

6.6.2 Cuerpos de inclusión

Los cuerpos de inclusión son acúmulos intracelulares de material nuevo. Algunos se

producen por acumulación de viriones o de subunidades virales no reunidas. Esos cuerpos
de inclusión pueden romper la estructura celular o cambiar la función de tal modo que
produce la muerte celular. Otros corpúsculos pueden desarrollarse en sitios de antiguas
síntesis virales pero no contienen viriones detectables, son ejemplos los corpúsculos
eosinófilos intranucleares en células infectadas por virus del herpes simple.

6.6.3 Transformación celular (oncogénesis y transformación inducida por virus)

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Una alteración resultante de ciertos virus es la producción de tumores o de leucemia. Dichos

virus pueden presentar varios efectos sobre las células: estimulación de síntesis de ADN
celular (virus del polioma), alteraciones de superficie que pueden ser evidenciadas por
nuevas especificidades antigénicas (distintas de aquellas pertenecientes a las subunidades
de los viriones); aberraciones cromosómicas, y alteraciones de las propiedades de
crecimiento de las células.
Se da por la inserción del genoma viral en la célula. Puede haber daño a los receptores que
regulan el crecimiento celular (aumento o disminución). El virus causa los desarreglos, la
célula pierde sus mecanismos de regulación y entonces prolifera por sí sola. En la mayoría
de tumores ya no hay virus después de 10 generaciones.

Hay tres familias de virus claramente relacionados con el cáncer : el EBV (Epstein Barr
Virus), HBV (Hepatitis B Virus) , Papiloma virus, Adenovirus, CMV (Citomegalovirus),
Retrovirus.

6.7 VIAS DE TRANSMISION VIRAL. -

Dentro de las vías de penetración de los virus al organismo debemos citar la piel, la vía
digestiva, el tracto respiratorio, conjuntiva y el tracto genital. De las nombradas
anteriormente las más frecuentes son las vías respiratoria y digestiva.

a) Tracto respiratorio

El contagio se da por contacto directo con un sujeto infectado, por ejemplo por inhalación,
Es importante recordar aquí los mecanismo de defensa que juegan un rol importante en la
detención de la infección:

• La capa mucociliar cumple un papel protector que se ve disminuido por el frio, el

tabaco, la polucion ambiental y por ciertos virus que tienen afinidad por el epitelio
respiratorio (sarampión), influenza).
• Los macrófagos de los alveolos pulmonares
• La IgA secretora.

Las células secretoras de mucus ayudadas por el epitelio ciliado limpian las vías
respiratorias del material extraño a través de su continuo movimiento hacia el exterior del
tracto respiratorio. Tanto mecanismos de inmunidad humoral como celular actúan para
proteger al huésped de las infecciones virales.

Los virus responsables de enfermedades respiratorias producen alteración o necrosis del

epitelio, permanecen localizados en el tracto respiratorio (rinovirus, adenovirus,
influenzavirus, parainfluenza virus, virus sicicial). Por el contrario, otros virus penetran por
esta vía, dan sintomatología clínica local en mayor o menor grado (virus de la viruela,
varicela, sarampión, paperas, rubeola, etc) pero las manifestaciones clínicas más
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relevantes se producen en otros órganos blandos del organismo. Estas son las infecciones
generalizadas a punto de partida respiratorio.

b) Tracto digestivo. -

La transmisión se realiza por ingestión de agua, alimentos y objetos contaminados (fomites)

Para iniciar una infección a través del tracto digestivo un virus debe tener las siguientes
propiedades:

• Estabilidad al acido
• Resistencia a la perdida de infectividad en presencia de sales biliares y
• Resistencia a la inactivación por enzimas proteolíticas.

La mayor parte de los virus envueltos son destruidos por el HP acido del estomago y de las
sales biliares antes de llegar al intestino delgado. Solo virus resistentes pueden infectar las
células del tracto intestinal, que es su sitio de multiplicación primario. Los anticuerpos IgA
secretorios locales son un medio de defensa importante para el intestino.

Algunas infecciones permanecen localizadas en el intestino (gastroenteritis a rotavirus o a

agente de Norvalk), otros virus luego de multiplicarse en las cé lulas intestinales se
diseminan a partir del foco intestinal dando una infección generalizada. Ejem: Enerovirus.
La mucosa orofaringea puede ser una puerta de entrada para ciervtos virus como Herpes
Simplex y algunos coxackivirus.

c) Piel

Cuando no está alterada es una barrera infranqueable para los virus. Sin embargo, una
lesión mínima puede ser la puerta de entrada. Algunos virus no se transmiten más que a
través de la piel y producen infecciones localizadas en el tejido cutáneo, como los cirus de
las verrugas humanas (Papovaviridae) o el virus del molluscum contagiosum (poxviridae)
Otros virus penetran directamente en los tejidos subcutáneos y luego se deseminan dando
enfermedades generalizadas.

La barrera cutánea se puede sobrepasar por una picadura de un artrópodo (Arbovirus) o

por la inoculación accidental (agujas cortantes) o terapéutica (transfusiones), también
puede sobrepasarse en el caso de mordedura de animales (virus rábico)

d) Conjuntiva

Los virus depositados mecánicamente en los ojos por los pañuelos, los dedos, las
servilletas, pueden ser eliminados por las lágrimas, pero en un cierto número de casos la
conjuntiva es infectada.
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Los adenovirus tipo 8 son transmitidos por los instrumentos de oftalmología, o en las
piscinas, el virus herpes simplex tipo 1, el virus de la viruela vacuna, el Enterovirus 70 dan
también patología ocular. Las conjuntivas del recién nacido son muy sensibles al virus
Herpes simplex que puede estar presente en las vias genitales de la madre.

e) Tracto genital

Las infecciones del tracto genital permanecen en general localizadas (Herpes Simplex tipo
2, papilonavirus genital). Algunos otros virus pueden ser transmitidos por otras vias además
de la sexual (Citomegalovirus, virus de la Hepatitis B, HIV)

f) Infección del feto

Esta infección implica modos de transmisión particulares.

Los agentes virales que causan infección del feto o del recién nacido pueden ser agrupados
en relación con el momento del embarazo en que se produce la transmisión.

Un grupo lo constituyen los virus de transmisión transplacentaria, que provocan las

llamadas infecciones congénitas. Estos son virus que producen viremias o infectan células
circulantes, mecanismo por el cual llegan hasta la placenta. El virus atraviesa la placenta
mediante la infección de las células coriónicas o por microinfartos que alteran su
permeabilidad. La indemnidad estructural de la placenta y una inmunidad adecuada son
factores importantes para evitar la transmisión al feto. Los virus que han sido asociados a
transmisión transplacentaria son: rubeola, Citomegalovirus, VIH, Herpes simplex, varicela
zoster, parotiditis, viruela, Hepatitis B, parvovirus B 19 y Enterovirus.

El segundo grupo es el de aquellos virus que se transmiten durante el parto, provocando

infecciones perinatales y son Enterovirus, papilomavirus, varicela zoster), durante la
lactancia (CMV, hepatitis B, HIV), en transfusiones de sangre (hepatitis B, Hepatitis C, HIV,
CMV) y en forma nosocomial (Rotavirus, Enterovirus, influenza, virus respiratorio sincicial
CMV, HSV).

Las consecuencias de infecciones en útero son variadas: aborto malformaciones

congénitas, signos de fetopatía, o misma ausencia total de signos clínicos al nacer

Las infecciones virales provocadas por el hombre son las más conocidas por el impacto
que provocan que pueden deberse a la defectuosa esterilización de los materiales usados
en las transfusiones de sangre, hemodiálisis o actos quirúrgicos practicados por los
médicos y/o por los odontólogos..

6.8 VIAS DE EXCRECION VIRAL. -

Es importante conocer las vias de salida para comprender la contaminación del medio
exterior y la de otros individuos. La excreción se realiza por:
 98

a) El tracto respiratorio. -

A través de la tos o del estornudo (sarampión, gripe, viruela)

b) La saliva.-

Los virus que infectan las glándulas salivales pueden ser excretados y transmitidos por la
saliva, en los niños, por los dedos o los objetos recubiertos de saliva (virus de las paperas),
y en los adolescentes y adultos jóvenes también por el beso (virus de Epstein -Barr).

El virus de la rabia se transmite por la saliva de los animales infectados.

c) La piel. -

Cuando hay erupción vesicular (viruela, herpes, varicela) se eliminan virus al exterior al
rascarse las vesículas y las costras.

También se pueden liberar al exterior a partir de verrugas cuando hay una lesión por
abrasión.

d) Tracto intestinal. -

Todos los virus que infectan las células intestinales se eliminan por la materia fecal y
contaminan al agua y los alimentos: Enterovirus, virus de la Hepatitis A, Rotavirus.

e) Orina. -

Es una forma importante de excreción viral hacia el medio ambiente en el caso de virus de
la papera, del sarampión, rubeola, citomegalovirus y los arenavirus.

f) Líquido seminal. -

Por esta vía se excretan los virus de Hepatitis B, el Citomegalovirus y HIV.

g) Leche materna. -

Transmite el Citomegalovirus, virus de las paperas, (virus Urleano), ciertos Retrovirus

humanos. HIV.

6.9 TIPOS DE INFECCIONES:

Entre los tipos de infecciones producidas por los virus podemos citar a:

Infecciones agudas:
 99

Las mismas que se caracterizan por que el virus ingresa en el organismo humano y se
multiplica (con o sin síntomas) para luego ya no ser detectado. Ej.: Paperas, Sarampión,
Varicela.

Infección lítica:
El virus experimenta múltiples ciclos de replicación lo que da como resultado la muerte de
la célula huésped que actúa como fabrica para la producción viral Ejm. Polivirus, v irus
influenza, etc.

Infecciones persistentes:
Cuando invaden organismo del hospedero y el sistema inmune no puede controlarlos y el
virus se excreta por mucho tiempo. Ejemplos: Hepatitis B, Citomegalovirus.

La desaparición de los síntomas y de la enfermedad no siempre está acompañada de la

eliminación del virus, sino que se prolonga con la persistencia del material genómico viral
de alguna forma. Eso puede traer como consecuencia la recurrencia de la forma aguda de
la enfermedad o una enfermedad de progresión lenta que puede parecerse o no a las
condiciones originales.

El mecanismo preciso por el cual los virus persisten in vivo habitualmente no es bien
comprendido a nivel molecular.

Las enfermedades virales persistentes se dividieron tradicionalmente e n dos categorías:

• Infecciones persistentes (crónicas productivas)

En ellas los virus infecciosos están presentes y pueden ser recuperados por métodos
biológicos convencionales. Ej. Infecciones virales persistentes con producción continua del
virus: Hepatitis B.

• Infecciones latentes
Se denominan así porque el virus al ingresar dentro la célula permanece durante toda la
vida del ser humano. Se caracteriza porque mientras dure la infección primaria se puede
aislar al virus, luego se ingresa a una fase en la que el virus es indetectable, para luego
reactivarse para ser detectado nuevamente. Ej. Herpes virus.

Son infecciones en las cuales el genoma viral está presente, pero las partículas infecciosas
no se producen más que en periodos intermitentes de episodio s de reactivación.

Infecciones lentas:
Son infecciones virales con periodos de incubación muy largo.

7. ENFERMEDADES PROVOCADAS POR VIRUS.-

 100

Existe una gran variedad de virus. En ocasiones su clasificación puede parecer confusa. Ya
conocemos los fundamentos actuales de clasificación. Algunos autores prefieren
distribuirlos en capítulos basándose en criterios morfológicos; otros se refieren a ellos de
acuerdo a los síndromes que producen. Algunos ejemplos son:

Adenovirus. TEM. Identif icados por primera vez en adenoides

humanas, de ahí su nombre. Son DNA virus, con simetría
icosahédrica. Los síndromes que producen se asocian a dif erentes
serotipos. Entre las enf ermedades que producen se encuentran:
inf ecciones gastrointestinales, queratoconjuntivitis epidémica, f iebre
f aringoconjuntival, neumonías en pacientes inmunodeprimidos, cistitis
hemorrágica, enterocolitis necrotizante y meningoencefalitis.

Coronavirus. TEM. Su nombre proviene del término en latín corona.

Son RNA virus (el mayor genoma de RNA en seres humanos) y
pleomórficos. Las enfermedades que causan se asocian a 2 serotipos.
Producen hasta el 10% de los resf riados comunes y pueden causar
complicaciones en pacientes con bronquitis crónica o asma. También
son agentes causales de SARS.

Paramyxovirus. TEM. Virus sincicial respiratorio (conocido con las

siglas RSV). Altamente contagioso; da lugar a bronquiolitis y/o
neumonía.

Orthomyxovirus. TEM. de influenza A. El nombre de influenza deriva,

aparentemente, del término "influencia". Estos virus se clasifican en
tipos A, B y C. Af ectan el sistema respiratorio. Son RNA virus con
envoltura lipídica. El potencial del virus de la influenza A para producir
pandemias se relaciona con su capacidad para generar "rearreglos"
en los 8 segmentos de su genoma, con contactos entre especies
animales. El virus de la inf luenza B se ha asociado al Síndrome de
Reyé. Las f ormas severas de la enf ermedad son causadas por los
tipos A y B.

Rotavirus. TEM. Género de la f amilia Reoviridae. Su nombre proviene

del latín "rota", que significa rueda (las proyecciones que emite desde
el centro dan la impresión de dicha forma). Son RNA virus. Su cápside
tiene doble cubierta, la interna icosahédrica. Existen 6 serotipos, pero
la mayor parte pertenece al grupo A. Produce gastroenteritis,
principalmente en niños pequeños y en ancianos.

Rubivirus. TEM. El único género de la f amilia Togoviridea no

transmitido por artrópodos. El virus de la rubeóla tiene un genoma de
RNA y existe 1 serotipo. Su nombre proviene del término rubellus, que
significa rojizo (color de la erupción cutánea que produce). Puede dar
lugar a anormalidades f etales severas cuando se adquiere in utero y
en el adulto se complica con poliartritis.
 101

Poxvirus. TEM. Virus del molusco contagioso. La f amilia Poxviridae

incluye 2 géneros que producen enf ermedad en el hombre. Tienen
genoma de DNA y su estructura es compleja. El molusco contagioso
se caracteriza por lesiones nodulares umbilicadas en piel; también se
puede adquirir por contacto sexual.

Poliovirus. TEM. Es uno de los miembros de la familia Picornaviridae

más importantes. Esta f amilia comprende 5 géneros. Pico significa
pequeño y, en efecto, se trata de virus muy pequeños. Son RNA virus
con simetría icosahédrica. El género Enterovirus incluye a 3 poliovirus.
Se transmiten de manera oro- fecal, por lo que la enfermedad es más
f recuente en zonas pobres del mundo. Afecta principalmente a niños.

Herpesviridae es una f amilia de virus que comprende a 3 sub -familias:

Alphaherpesvirinae (imagen: TEM Herpex simplex), Betaherpesvirinae
y Gammaherpesvirinae. Son DNA virus con simetría icosahédrica.

Filovirus. TEM. De la f amilia Filoviridae. Virus Marb urg. Su nombre

proviene del término filum (filamento).Tienen un genoma de RNA y su
simetría es helicoidal. Son pleomórficos (adoptan f ormas extrañas,
ramif icadas, circulares). Pueden llegar a tener un tamaño mayor al de
una bacteria. Inf ectan varios órganos, principalmente hígado y bazo,
resultando en degeneración, necrosis, daño a células endoteliales, con
el consiguiente aumento en la permeabilidad vascular, lo que conduce
a las hemorragias masivas que les son características. La mortalidad
oscila entre 2 - 90%.

Filovirus. Virus Ebola. (Resultan interesantes las historias

novelizadas "The Hot Zone", del autor Richard Preston y "Ebola").

HIV-1. TEM. De la f amilia Retroviridae. La instalación de signos y

síntomas es larga e insidiosa. Posee un genoma de RNA y es de
estructura compleja. Virus del VIH. Sintetiza ADN a partir de ARN
mediante la acción de una transcriptasa inversa Produce SIDA.
 102

CLASIFICACION DE LAS ENFERMEDADES PROVOCADAS POR LOS VIRUS

CONSIDERANDO SU ACIDO NUCLEICO
VIRUS ADN
Familia Género Ejemplo Comentario
Herpes simplex
Alphaherpes- Encefalitis, estomatitis aguda, llaga
Herpesviridae virus type 1 (aka
virinae labial del resfríado.
HHV-1)
Herpes simplex
virus tipo 2 (aka Herpes genital, encefalitis
HHV-2)
Varicella zoster
Varicela, Herpes Zóster
virus (aka HHV-3)
Gammaherpes- Epstein Barr Mononucleosis hepatitis, tumores (BL,
virinae virus (aka HHV-4) NPC)
Sarcoma de Kaposi,
asociado al Probablemente: tumores, inc. Sarcoma
herpesvirus, de Kaposi (KS) y algunos linfomas de
KSHV (aka Human células B
herpesvirus 8)
Cytomegalovirus
Mononucleosis, hepatitis,
Betaherpes-virinae Humano (aka HHV-
pneumonitis, congénitas
5)
Human Roseola (aka E. subitum),
herpesvirus 6 pneumonitis
Human
Algunos casos de reseola?
herpesvirus 7
Adenovirus 49 serotipos (especies); infecciones
Adenoviridae Mastadeno-virus
Humano respiratorias.
Papillomavirus
Papovaviridae Papilloma-virus 70 especies; verrugas y tumores
Humano
usualmente poco graves; JC causa
Polyoma-virus JC, BK viruses
PML en SIDA
Virus de la
Hepatitis (crónica), cirrosis, tumores
Hepadnaviridae Hepadna-virus
hepáticos.
Hepatitis B
Poxviridae Orthopox-virus Vaccinia virus Virus de la vacuna de la viruela
Enfermedad como la viruela, zoonosis
Monkeypox virus muy rara (un brote reciente en el
Congo; 92 cases desde 2/96 - 2/97)
Parapox-virus Orf virus Lesiones dérmicas ("pocks")
Exantema. infecciosa. (5ª
Parvoviridae Parvo-virus B19 parvovirus emfermedad), crisis aplástica, pérdida
fetal.
Virus Adeno- Util para terapia génica; se integra en
Dependo-virus
asociado el cromosoma
 103

VIRUS ARN
Familia Género Ejemplo Comentario
3 tipos; meningitis aséptica,
Picornaviridae Entero-virus Polioviruses
poliomielitis paralítica
Echoviruses 32 tipos; Aseptic meningitis, rashes
29 types; meningitis aséptica,
Coxsachieviruses
miopericarditis
Virus de la
Hepatitis aguda (propagación
Hepato-virus
fecal-oral)
Hepatitis A
Rhino-virus Human rhinoviruses 115 tipos; Resfríado común
Caliciviridae Calici-virus Norwalk virus Enfermedad gastrointestinal.
Virus de la
Hepatitis aguda (propagación
Hepe-virus
fecal-oral)
Hepatitis E
4 tipos; Resfríado común,
Paramyxoviridae Paramyxo-virus Parainfluenza viruses
bronquiolitis, neumonía
Paperas: parotitis, meningitis
Rubula-virus Virus de las Paperas
aséptica (raro: orquitis, encefalitis)
Sarampión: fiebre, exantema (raro:
Morbilli-virus Virus del sarampión
encefalitis, SSPE)
Virus Sincitial Resfríado común(adultos),
Pneumo-virus
respiratorio bronquiolitis, neumonia (niños)
Flu: fiebre, mialgias, malestar
Orthomyxoviridae Influenza-virus A Influenza virus A
general, tos, neumonia
Flu: fiebre, mialgias, malestar
Influenza-virus B Influenza virus B
general, tos, neumonia
Rabia: incubación larga y después
Rhabdoviridae Lyssa-virus Virus de la Rabies
enfermedad del SNC y muerte.
Virus de
Filoviridae Filo-virus Fiebre hemorrágica, muerte
Ebola and Marburg
No muy claro; relacionado con
Bornaviridae Borna-virus Borna disease virus enfermedades tipo:ezquizofrenia
en algunos animales.
Human T- Leucemia de células T del adulto.
Retroviridae Onco-virinae lymphotropic virus (ATL), paraparesia espástica
type-1 tropical (TSP)
Human foamy
Spuma-virinae No se conoce patología
viruses
Virus type1 y 2 de la
Lenti-virinae inmunodeficiencia SIDA, enfermedad del SNC
humana
Exantema; malformaciones
Togaviridae Rubi-virus Virus de la Rubeóla
congénitas.
Virus de la Encefalitis
Transmitida por mosquitos,
Alpha-virus equina (WEE, EEE,
encefalitis
VEE)
Virus de la Fiebre Mosquito-born; fever, hepatitis
Flaviviridae Flavi-virus
Amarilla (yellow fever!)
 104

Transmitida por mosquitos;

Virus del Dengue
hemorrhagic fever
Virus de la Encefalitis Transmitida por mosquitos;
de San Luis encephalitis
Virus de la
Hepatitis (con frecuencia: crónica),
Hepaci-virus
cáncer hepático
Hepatitis C
Reoviridae Rota-virus Rotaviruses Humano 6 tipos; Diarrea
Virus de la Fiebre de
Colti-virus Garrapatas de Transmitido por garrapatas; fiebre
Colorado
Ortho-reovirus Reoviruses Humanos Enfermedad leve
Propagado por roedores;
Síndrome Pulmonar
Bunyaviridae Hanta-virus enfermedad pulmonar (puede ser
por Hantavirus
letal, Ej brote de las "4 esquinas")
Propagado por roedores; fiebre
Hantaan virus
hemorrágica con síndrome renal.
Phlebo-virus

8 DIAGNOSTICO VIROLOGICO. -

TOMA DE MUESTRA PARA EL DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO

La probabilidad de obtener un buen rendimiento diagnóstico depende de la calidad de la

muestra recibida en el laboratorio. Para obtener muestras de alta calidad debemos conocer,
por ejemplo, el sitio o lesión donde se sospecha esté el agente, de manera de pedir la
secreción o el tejido donde el virus (o parte de éste) esté presente. Es importante también
estimar el período en que se encuentra la infección, tanto para solicitar la muestra en el
momento de mayor replicación viral, como para estimar en los casos en los que
necesitemos evaluar la respuesta inmune del hospedero. Por otro lado, son determinantes
la cantidad y calidad de la muestra, además de las condiciones en la que es mantenida y el
tiempo en la que es transportada al laboratorio

TIPOS DE MUESTRAS E INSTRUCCIONES PARA CORRECTA OBTENCIÓN Y

TRANSPORTE PARA DIAGNÓSTICO VIRAL

Tipo de
Material de recolección Instrucciones y precauciones
muestra
Se recogen células epiteliales (piel o
Hisopado o
• Tórula o cepillo flexible mucosas) donde está ocurriendo la
cepillado
• Medio de transporte viral• replicación activa del virus.
(células
Unidad refrigerante Tórula o cepillo de preferencia de dacrón
epiteliales)
o plástico. En caso de necesitar
 105

Tipo de
Material de recolección Instrucciones y precauciones
muestra
aislamiento viral, la muestra debe enviarse
en medio de transporte viral. Mientras se
espera traslado a laboratorio conservar a
4 °C (no congelar).

Los volúmenes requeridos dependerán de

• Tubo sin anticoagulante
(tapa roja) para pruebas en
SUERO.• Tubo con
Sangre
anticoagulante (tapa lila)
para pruebas en sangre total,
leucocitos o plasma.
las técnicas. Técnicas moleculares
requieren menor volumen. Se recomienda
en general entre 5 y 10 ml en adultos.
Evitar hemólisis. Mantener a 4° en caso
de que el transporte al laboratorio tome
más de un día (no congelar).

En caso de muestras respiratorias, deben

• Trócar para punción (LCR)
o sonda fina (aspirado
Fluidos o
nasofaríngeo o traqueal) •
secreciones
Medio de transporte viral•
Unidad refrigerante
• Frasco estéril o limpio•
Deposiciones
Unidad refrigerante
ser puestas en medio de transporte viral.
LCR, orina o leche materna no necesitan
medio de transporte. Mientras se espera
traslado a laboratorio conservar a 4 °C (no
congelar).
Se recomiendan al menos 4 gr. de
deposiciones. Mientras se espera traslado
a laboratorio conservar a 4 °C (no
congelar).

6.5 METODOS DE ESTUDIO DE LOS VIRUS

El desarrollo del conocimiento sobre la multiplicación de los virus animales ha sido posible
por la utilización en el laboratorio de varios sistemas de aislamiento de virus en los cuales
se puede estudiar el proceso de multiplicación viral.

Una partícula viral puede encontrarse en dos estados: inactiva o activa.

Para demostrar el estado inactivo, basta incluir una suspensión de virus en un medio de
cultivo y observar que son incapaces de cumplir actividades metabólicas necesarias para
su multiplicación. Se deduce de ello, que los virus carecen como ya se mencionó
anteriormente de maquinaria enzimática que les permita autorreplicarse, aun cuando se les
brinde nutrientes que serían adecuados para la propagación de las bacterias más
exigentes.

Pero si una partícula viral es incorporada a células vivas sensibles, se comporta en forma
activa, y por lo tanto tomará el comando de la maquinaria enzimática de la célula huésped
logrando así su replicación. La multiplicación de los virus animales, vege tales y
 106

bacteriófagos resulta similar en sus principios, pero, cada una de ellas tiene
particularidades; esto basado principalmente en las diferencias entre las células que
infectan.

Como los virus son parásitos intracelulares obligados necesitan células vivas para
replicarse y es por eso que para su estudio se utilizan los huevos embrionados, los animales
de laboratorio y los cultivos celulares.

En los huevos embrionados de gallina o de pato, se perfora la cáscara del huevo, se

inyecta en él una suspensión viral o un tejido que presuntamente contiene un virus y se
incuba a 37 °C. El desarrollo viral se detecta por la muerte del embrión o lesiones en las
distintas membranas del huevo. Este método era muy utilizado para el aislamiento viral, en
la actualidad se los usa para cultivar los virus para algunas vacunas.

Los animales de laboratorio más usados en virología son ratones, ratas, cobayos,
hámsters y conejos. Se los inocula por distintas vías, se los observa para detectar signos
de enfermedad y se los sacrifica para examinar los tejidos infectados. Los animales se
utilizan cada vez menos por el costo del mantenimiento de los bioterios y el riesgo en la
manipulación. Actualmente los animales se usan en la investigación de patogenia,
oncogenicidad e inmunidad viral, ensayos de vacunas y en la preparación de antisueros
para diagnóstico.

Los cultivos celulares son los más utilizados en la actualidad, consisten en células
desarrolladas en medios especiales en el laboratorio y se pueden propagar y manejar de
manera similar a los cultivos bacterianos.

Los medios para el crecimiento celular tienen aminoácidos, vitaminas, sal, glucosa, suero
de ternera o suero fetal bovino, antibióticos para evitar la contaminación bacteriana y un
sistema buffer (generalmente bicarbonato). Los cultivos se incuban a 37 °C con una
atmósfera de 5% de dióxido de carbono. Estos medios permitirán la multiplicación celular
con una división cada 24 o 48 h. Se utilizan recipientes especiales, como frascos planos,
policubetas o placas de petri de un material especial para cultivos celulares, y se trabaja
dentro de cabinas de seguridad biológica

Existen 2 tipos básicos de cultivos celulares: los cultivos primarios y las líneas celulares. Un
cultivo primario se inicia al tratar un corte de tejido animal con enzimas –como la tripsina–
para separar las células, después se lavan, se suspenden en el medio de cultivo, se colocan
en un recipiente y se incuban a 37 °C. Cuando estas células se ponen en contacto con una
superficie de vidrio o de plástico, se adhieren y se multiplican hasta formar una monocapa.
En ese momento dejan de dividirse por un fenómeno de inhibición de contacto.

Cuando se realizan cultivos virales de rutina en el laboratorio se usan líneas celulares

continuas que se pueden mantener durante una cantidad indefinida de pasajes sucesivos,
por eso se dice que son inmortales, ya que pueden ser subcultivadas indefinidamente,
 107

Estas líneas se asemejan mucho a células transformadas debido a su gran potencial de

crecimiento y a su aneuploidía

7.1 Técnicas diagnósticas:

Actualmente la evolución en el diagnóstico de los virus ha logrado llegar al campo de la

biología molecular como alternativa efectiva para tal efecto, sin descartar otras más.

Ante la necesidad de solicitar exámenes de diagnóstico virológico debemos recordar que

los virus son organizaciones macromoleculares que constan esencialmente de genoma
(ácidos nucleicos de tipo ARN o ADN) y proteínas. Algunos de ellos presentarán además
lípidos en su manto e hidratos de carbono unidos a las proteínas virales, existen técnicas
de laboratorio específicas para la detección de la partícula viral completa, los antígenos
virales (proteínas) y del genoma viral. Además, podemos detectar y caracterizar la
respuesta inmune antiviral específica.

a) PARTICULA VIRAL:

• Aislamiento viral. -

En cuanto a la detección de la partícula viral completa, las técnicas de aislamiento viral

o microscopia electrónica sólo están disponibles en laboratorios especializados en virología
y se encuentran generalmente reservadas para fines de investigación. Estas técnicas
clásicas han sido reemplazadas en la práctica clínica por técnicas moleculares o
inmunoensayos que requieren menor infraestructura e implican un menor tiempo en la
entrega de resultados.
 108

La característica de los virus de ser parásitos intracelulares implica que para el

aislamiento viral se deban utilizar líneas de cultivos celulares, los cuales son “infectados”
por el virus viable presente en la muestra observando cambios morfológicos de las células
hospederas o efectos citopáticos, como consecuencia de una replicación viral efectiva.

Todo aislamiento viral debe ser confirmado mediante técnicas de inmunodiagnóstico

(inmunofluorescencia) o moleculares específicas, debido a que ningún efecto citopático es
patognomónico de un virus en particular. Una de las mayores ventajas del aislamiento viral
es la posibilidad de obtener altas concentraciones de virus completo, para posteriores
estudios de caracterización genómica y antigénica, de sensibilidad antiviral y para
conservación en biorepositorios.

1. Download full-size image Figura 2.

b) ANTÍGENOS VIRALES. –

• Inmunoanalisis

Para detectar antígenos virales disponemos de múltiples técnicas de inmunoanálisis, las

cuales se basan en la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo. En todas estas
técnicas es necesario conocer el antígeno a detectar, para definir el anticuerpo específico
para dicho fin.

La detección puede realizarse mediante métodos directos o indirectos. en el método

directo, el anticuerpo específico contra el antígeno a detectar está acoplado a un marcador.

En el método indirecto, el anticuerpo anti-antígeno no posee marcador, y la formación del

complejo antígeno-anticuerpo se evidencia mediante un segundo anticuerpo marcado,
llamado anticuerpo secundario conjugado. De esta forma, la denominación de las técnicas
de inmunoanálisis se basa en el tipo de marcador utilizado para evidenciar la unión del
anticuerpo con el antígeno:

• Inmunoflorescencia: el anticuerpo está unido a una molécula que emite fluorescencia).

Inmunofluorescencia indirecta
 109

1. Download full-size image

• Radioinmunoanálisis: el marcador en este caso es un isótopo radioactivo.

• ELISA (ensayo inmuno enzimático): técnica en la que el anticuerpo está acoplado a

una enzima que al reaccionar con un sustrato produce un producto coloreado visible.

Técnicas de inmunoanálisis, métodos directo e indirecto.

1. Download full-size image

Otras técnicas de inmunoanálisis se basan en la simple aglutinación que ocurre al unirse

el antígeno con el anticuerpo, formándose grandes complejos que sedimentan. Esta
sedimentación es fácilmente visible, por lo que la técnica es rápida y sencilla.

• Inmunocromatográfica.-
 110

Por otro lado, la técnica rápida de inmunocromatografía (inicialmente utilizada para test
de embarazos) se basa en la detección del complejo antígeno -anticuerpo sobre una
membrana de nitrocelulosa. La muestra se hace migrar por capilaridad sobre esta
membrana, la que tiene los anticuerpos antivirales específicos fijados y que evidenciarán la
unión del antígeno mediante una banda de color oscuro. Ambas pruebas requieren mínima
infraestructura y pueden estar disponibles en cualquier centro de salud.

c) GENOMA VIRAL. -

La detección de genoma viral en la actualidad es la técnica de elección en la mayoría de

las infecciones virales que requieren de diagnóstico virológico certero y rápido. Se basa en
la identificación de secuencias específicas de ADN o ARN viral y puede ser virtualmente
utilizada para cualquier virus. Más aún, la masificación y perfeccionamiento de estas
técnicas de amplificación de ácidos nucleicos (TAAN) nos ha llevado al descubrimiento de
nuevos virus desde la detección de su genoma.

Los análisis pueden ser específicos para un virus o bien para un grupo de ellos. Entre sus
principales ventajas están el poder detectar virus que no pueden ser aislados en cultivos
celulares, o en aquellas infecciones en las que la carga antigénica es muy baja como para
ser detectada por inmunoanálisis. Además, debido a la estabilidad del ADN, la detección
de virus con este tipo de genoma es posible a pesar de que las condiciones de la muestra
no sean las óptimas.

La desventaja principal es la posibilidad de contaminación y falsos positivos.

• PCR.-

La técnica prototipo de las TAAN es la PCR, o reacción en cadena de la polimerasa, en la

que se amplifican segmentos de ADN utilizando partidores específicos y una ADN
polimerasa termoestable (Taq polimerasa). Cabe mencionar que en los casos en que se
deba detectar ARN viral, la amplificación debe estar precedida por un paso de transcripción
reversa, donde el ARN es copiado a un “ADN copia (ADNc)”. Este ADNc será el templado
que se utilizará en el posterior proceso de amplificación por la polimerasa.

Los productos de amplificación podrán ser visualizados mediante distintos métodos:

electroforesis en el caso de PCR convencional; mediante sondas fluorescentes que
permiten la detección en la medida que ocurre la amplificación (PCR en tiempo real), o
mediante la hibridación en plataformas que permiten la detección de múltiples virus a la vez.

Además de su importante rol en el diagnóstico virológico, la amplificación del genoma viral

ha permitido caracterizar las secuencias nucleotídicas de los agentes detectados
mediante técnicas de secuenciación nucleotídica que se han perfeccionado enormemente
en el último tiempo. Esta valiosa herramienta nos entrega información que permite clasificar
a los virus (genotipificación), conocer su distribución y transmisión en las poblaciones, y
detectar mutaciones asociadas a resistencia a drogas antivirales o a manifestaciones
 111

clínicas inusuales. Es uno de los pilares de diagnóstico, estudio y caracterización viral

durante brotes epidémicos como los ocurridos con influenza pandémica el 2009, MERS
2012 y ébola 2014. Las autoridades de salud se basan en estas técnicas para rastrear virus
emergentes. Por otro lado, la caracterización genética nos acerca a los cambios que
pueden ocurrir en las proteínas virales que influyen en la patogénesis y nos orienta hacia
los mecanismos que tienen los virus para escapar de la respuesta inmune del hospedero
(presión inmunológica), siendo ampliamente utilizada en investigación. Las técnicas de
secuenciación han avanzado enormemente en los últimos años, siendo la “secuenciación
de nueva generación (NGS)” una promesa para avanzar en el conocimiento de la
patogenia viral y para descubrir y rastrear nuevos o desconocidos virus.

d) RESPUESTA INMUNE ANTIVIRAL. -

Por último, a pesar que actualmente no representa uno de los pilares del diagnóstico
virológico, la detección y caracterización de la respuesta inmune antiviral continúa siendo
necesaria para determinar infección aguda en algunas infecciones virales, para caracterizar
la susceptibilidad de los individuos a potenciales infecciones (pre-trasplante, pacientes
oncológicos), en la vigilancia de la seroconversión en individuos vacunados y en población
general y en la caracterización de los perfiles de respuesta a infecciones crónicas como en
la infección por virus hepatitis B. Las técnicas de inmunoanálisis utilizadas en estos casos
son de tipo indirecto, dado que se marcará la unión antígeno-anticuerpo específico (el que
está presente o no en el suero del paciente) mediante la unión de un segundo anticuerpo
que evidenciará la formación del complejo. Los ensayos más utilizados son
inmunofluorescencia, ELISA y Western blot.
 112

MUESTRAS A RECOLECTAR, EXÁMENES A SOLICITAR SEGÚN CUADROS INFECCIOSOS

FRECUENTES EN LA PRÁCTICA CLÍNICA
Cuadro clínico Muestra Virus a estudiar Técnica (s) sugerida (s) Observaciones
Infección Aspirado, lavado o Virus respiratorio • Inmuno- • Alta sensibilidad
respiratoria en cepillado sincicial, rinovirus, fluorescencia especialmente en
niños nasofaríngeo influenza, época de epidemia
Lavado bronquio - parainfluenza, (VRS) y bajo costo.
alveolar metapneumovirus, • Requiere
adenovirus, microscopio de
coronavirus, fluorescencia y
bocavirus. personal
entrenado.
• Test rápidos • Técnicas de fácil
de detección de implementación,
antígenos bajo costo y
sensibilidad alta en
epidemia
• Técnicas de • Alta sensibilidad,
amplificación puede detectar
de ácidos genoma sin virus
nucleicos viable.
• Recomendable
en pacientes
críticos e
inmunosuprimidos•
Requiere
infraestructura y
personal
especializado
• Mayor costo
Infección Aspirado, lavado o Virus respiratorio • Técnicas de • Alta sensibilidad,
respiratoria en cepillado sincicial, amplificación lo que es deseable
adultos nasofaríngeoLavado influenza, de ácidos en estos pacientes
bronquio-alveolar parainfluenza, nucleicos que excretan
metapneumovirus, menor cantidad d e
rinovirus, virus.
adenovirus, • Puede detectar
coronavirus, genoma sin virus
bocavirus. viable.
• Requiere
infraestructura y
personal
especializado
• Mayor costo
Infección Deposiciones Rotavirus, • ELISA • Alta sensibilidad
gastrointestinal calicivirus, • Test de en episodio agudo,
adenovirus, aglutinación debido a la alta
astrovirus. excreción viral (109
a 1010 partículas
virales por gramo
de deposición)
• Bajo costo
• Fácil
implementación
• Técnicas de • Útil para
amplificación caracterización
de ácidos genómica y
nucleicos epidemiología
molecular (estudio
de brotes
epidémicos)• Alta
 113

sensibilidad, puede
detectar genoma
sin virus viable•
Requiere
infraestructura y
personal
especializado
• Mayor costo
Sídrome Sangre**Suero en Virus Epstein Barr • Detección de • Detección de
mononucleósico determinación de (VEB), anticuerpos respuesta IgM en
anticuerpos y Citomegalovirus mediante primo-infecciones
sangre total en (CMV), Virus de ELISA o IF o de IgG para
TAAN inmunodeficiencia determinar
humana (VIH) seroconversión o
susceptibilidad a
infección
• Detección de
anticuerpos anti
VIH requiere de
confirmación
diagnóstica según
normas del ISP
• Técnicas de • Alta sensibilidad y
amplificación especificidad
de ácidos • Se recomiendan
nucleicos técnicas
cuantitativas para
determinar carga
viral• Requiere
infraestructura y
personal
especializado
• Mayor costo
• Aislamiento • De elección en
viral, Shell vial sospecha de CMV
en recién nacidos y
eventualmente en
niños y adultos.
Implica virus
viable, replicando.
Precauciones en
manejo de la
muestra para
conservar
viabilidad viral
Hepatitis Sangre (suero) Virus hepatitis • Detección de • Detección de
(VH) A, B, C, D, E. anticuerpos respuesta IgM en
específicos o primo-infecciones
antígenos o de IgG para
virales determinar
mediante seroconversión o
inmunoensayos susceptibilidad a
infección
• En VHB se
realiza seguimiento
con antígeno de
superficie (HBsAg),
y anticuerpos
específicos anti
AgS (Ac anti-HBs)
y anti core (Ac anti-
HBc)
 114

• Técnicas de • Alta sensibilidad y

amplificación especificidad
de ácidos • Confirmación de
nucleicos VHC, con
determinación de
genotipo viral
• Se recomiendan
técnicas
cuantitativas para
determinar carga
viral en
seguimiento de
tratamiento
Infecciones Hisopado de Virus herpes • Técnicas de • Alta sensibilidad y
virales lesiones en piel simplex (VHS) 1 y amplificación especificidad
mucocutáneas (vesículas) o 2, virus varicela de ácidos • Permite
mucosas (úlceras) * zoster (VVZ), nucleicos genotipificación en
Cepillado o biopsia+ Enterovirus, virus VPH
Muestra papiloma humano • De elección en
nasofaríngea o (VPH). detección de VHS,
deposiciones VVZ y enterovirus
Sangre (suero) • Requiere
infraestructura y
*VHS-VVZ personal
+ VPH especializado
# Enterovirus • Mayor costo
• Detección de • Detección de
anticuerpos respuesta IgM en
mediante primo-infecciones
ELISA o IF • Detección de IgG
(VHS y VVZ) para determinar
seroconversión (2
muestras) o
susceptibilidad a
infección
• Recordar latencia
viral. IgG positiva
implica que el
paciente está
infectado (o
vacunado) y el
virus puede
reactivarse
Infecciones Sangre Sarampión, • Detección de • Detección de
exantemáticas o Muestra respiratoria rubéola, VVZ, anticuerpos respuesta IgM en
sistémicas en la parotiditis, mediante primo-infecciones
infancia parvovirus B19, ELISA o IF o de IgG para
enterovirus. determinar
seroconversión o
susceptibilidad a
infección.
• Técnicas de • Útil para
amplificación caracterización
de ácidos genómica y
nucleicos epidemiología
molecular (estudio
de brotes
epidémicos)
• De elección en
infecciones por
VVZ y Enterovirus.
Útil en etapas
 115

tempranas de
parvovirus B19
• Alta sensibilidad,
puede detectar
genoma sin virus
viable
• Requiere
infraestructura y
personal
especializado
• Mayor costo
Infección de Líquido Virus VHS 1 y 2, • Técnicas de • Alta sensibilidad y
sistema cefalorraquídeo VVZ, CMV, virus amplificación especificidad
nervioso central (LCR) herpes humano 6, de ácidos • Resultado rápido
enterovirus, nucleicos • En LCR la
parotiditis, presencia de
parechovirus genoma viral
implica replicación
activa. Útil en
monitorización de
la terapia antiviral
• Requiere
infraestructura y
personal
especializado

GLOSARIO DE TERMINOS . -

• Provirus.-
Genoma viral que se incorpora al de la célula hospedante.

• Virión.-
Partícula viral completa con capacidad infectante

• Virus defectivo.-
Virus que no se puede replicar sin la coinfección por otros virus

• Prion o agente infeccioso no convencional. -

Consistente en solo hebras de proteínas, con capacidad de infectar y altamente resistentes
a los desinfectantes y métodos de esterilización.

• Bacteriografo.-
Se llama así al virus bacteriano con simetría binaria. Los bacteriografos producen lisis
bacteriana o estado de lisogenia. En este ultimo caso alteran las propiedades del
microorganismo, se trata de un fago lisogénico o atemperado.