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Molina J ct aJ.(2022)
Notulae Botanical Horti Agrobotanici Cluj-Napoca
Volumen 50,Número 1, Artículo número 12645
Notulae Botanicae Horti
DOI:10d.15835/n ha501126o5 Agrobotanici Cluj-Napoca

Efecto del ácido acetilsalicílico y del sulfato amónico sobre

los parámetros productivos y fisiológicos de Sfipa caudara en
condiciones de escasez de agua

Julio MOLINA12 *,Sara GONZÁLEZ-ORENGA 1 ',Oscar

VICENTE',
Monica BOSCAIU 1 *
Josep V.LLINARES1 ,Francisco ZAMBRANO',
,
Claudia SANTIBÁÑEZ

francisco.zambraiio@urnayor.cJ
Uliiversiclacl Mayor, Esc neta che Ingeniería en Meclio Ambiente Sustentabiliclacl, tacultacl che Ciencias, Sanriago 8580745, CIú1e,-
ribaiiez@urnayor.cl

Resumen

Stipa caudara es una gramínea nativa de zonas poco lluviosas de Argentina y Chile, considerada un
excelente candidato potencial para la producción de biocombustibles o para programas de restauración de
suelos. Este estudio tuvo como objetivo analizar los efectos del sulfato de amonio (AMS) y del ácido
acetilsalicílico (ASA) sobre la productividad y los rasgos bioquímicos de plantas de esta especie en
condiciones de escasez de agua. El trabajo experimental se llevó a cabo en plantas cultivadas al aire libre
utilizando un diseño de parcelas de bloques al azar. Se analizaron varios parámetros de rendimiento y
bioquímicos relacionados con la resistencia a la escasez de agua en plantas tratadas con MGA o ASA. Las
plantas de los tratamientos con ASA y AMS presentaron un mayor contenido total de clorofila que las demás.
En cuanto al contenido en iones, las plantas con escasez de agua tratadas con AMS presentaron valores
similares a las plantas de regadío. En cuanto a los osmoprotectores y antioxidantes, las plantas tratadas
presentaron mayores concentraciones de prolina y flavonoides totales. Bajo estrés hídrico, las plantas presentaron
mayor actividad APX y hubo una interacción A x B para la actividad CAT y SOD. Los resultados obtenidos
muestran que el uso deASA y AMS en algunos cultivos o en programas de restauración ambiental podría ser una
herramienta útil para hacer frente a futuros escenarios climáticos de escasez de agua.

Palabras clave: estrés oxidativo; Stips caudsts,- condiciones de escasez de agua

Introducción

Las últimas proyecciones chilenas sobre el cambio climático prevén un aumento de las temperaturas y un
Disminución de las precipitaciones en gran parte del norte y el centro del país, lo que ha provocado la
desertificación y la reducción de los recursos hídricos.
Recibido: 24 Jun 2022. Receivecl en ievisecl Luto: 21 Web 2022. Aceptación: 24 de junio de 2022. Publicación en línea: 0 de mayo de 2022.
A partir del volumen 49, número 1, 2021, la revista Notulae Botanicae Horti Agrobotanici Cluj-Napoca utiliza números de
artículo en lugar del método tradicional de paginación continua a lo largo del volumen. La revista seguirá apareciendo trimestralmente,
como hasta ahora, con cuatro números anuales.
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para las plantas(IPCC,2000; Masson-Delmotte,2018). El estrés hídrico es uno de los principales problemas
ambientales que afectan a los cultivos. Se asocia con varios efectos fisiológicos y bioquímicos celulares, incluido
el daño oxidativo por el aumento de la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS), lo que
reduce el crecimiento y la productividad de las plantas (Osakabe er aJ., 201s; Sun er aJ., 2020).
Stipa caudara Trin. es una gramínea originaria de Chile y Argentina, adaptada a zonas de baja pluviosidad
anual (100
- 300 mm/año) y suelos agrícolas infértiles y erosionados. La especie es una buena candidata para los programas de
restauración de suelos y producción de biocombustibles. Las plantas tolerantes al estrés hídrico pueden
responder mediante diversos cambios fisiológicos, como el aumento de los niveles de osmoprotectores o la
activación de sistemas antioxidantes. En condiciones de estrés, las plantas aumentan la síntesis de osmolitos, como
la prolina, un aminoácido implicado en las respuestas a diversos estreses (Magdy er aJ., 2017; Vargas-Ortiz er
aJ., 2021). Los mecanismos antioxidantes se basan en la síntesis de metabolitos con fuerte actividad antioxidante,
como los compuestos fenólicos y especialmente el subgrupo de los flavonoides, y la activación de enzimas
antioxidantes como la superóxido dismutasa (SOD), la catalasa (CAT), la ascorbato peroxidasa (APX) o la
glutatión reductasa (GR), que ayudan a mantener las funciones metabólicas de la planta, minimizando la
inhibición del crecimiento (Apel y Hirt, 200a).
Para mitigar las limitaciones medioambientales en las zonas secas, el uso de diversos aditivos ha
dado resultados prometedores. Por ejemplo, el nitrógeno y el azufre son elementos minerales esenciales
para las plantas, en parte porque participan en la síntesis deglutatión, un tripéptido implicado en la
desintoxicación de ROS (Neuberg er at., 2010). Además, dado que la asimilación del nitrógeno es crucial para la
absorción de iones y la síntesis de aminoácidos y proteínas, el sulfato de amonio es uno de los fertilizantes
nitrogenados más importantes. Por otra parte, el ácido acetilsalicílico (ASA) es un precursor del ácido
salicílico, una fitohormona que desempeña un papel esencial en la señalización de las plantas en respuesta a
diversas situaciones de estrés, incluido el estrés hídrico (Nazar er aJ., 2015).
Sin embargo, existe muy poca información sobre las respuestas fisiológicas para aumentar la resistencia y
la producción de biomasa en condiciones de déficit hídrico en Stipa caudara. Se sabe aún menos sobre los posibles
efectos de estrategias sostenibles como la aplicación de sulfato de amonio (AMS) o ácido acetilsalicílico
(ASA) a plantas sometidas a estrés hídrico. Este estudio representa una primera evaluación de la resistencia de
Stipa caudara al estrés hídrico y del alivio de este estrés mediante estrategias sostenibles y de bajo coste.
Por lo tanto, este trabajo tuvo como objetivo evaluar los efectos de la aplicación de AMS y ASA en la
producción de biomasa y la activación de mecanismos específicos de tolerancia al estrés de las plantas de
Stipa caudsts en condiciones de déficit hídrico mediante (i) el análisis de los parámetros de crecimiento en las
plantas control y estresadas; (ii) la cuantificación de los contenidos foliares de clorofila total, iones y
osmolitos; (iii) la determinación de los compuestos fenólicos totales y las concentraciones de flavonoides
en los brotes; (iv) la medición de las actividades específicas de varias enzimas antioxidantes (superóxido
de
dismutasa, catalasa, ascorbato peroxidasa y glutatión reductasa).

Materiales y métodos

Condiciones txt de la experiencia final en el lugar del estudio

El experimento se realizó en condiciones de campo en septiembre de 2018, en las instalaciones de
Bosque Santiago, Ministerio de Vivienda y Urbanismo, Gobierno de Chile, ubicado en Camino La Pirimide
6.000, Huechuraba, Región Metropolitana, Chile (33° 22′ 38,6″ S 70° 36′ 3,36,8″ O). El
rango de temperatura estuvo entre 28 a 31,6 °C, con una media de 22 °C y una humedad relativa media
de 67,2%, sin precipitaciones (Agromet, 2018).
Los análisis se llevaron a cabo en la Facultad de Ciencias de la Universidad Mayor de Santiago de
Chile y en el COMAV de la Universidad Politécnica de Valencia (España).

Las plantas de Stipa caudara fueron extraídas del suelo en La Pintana, Región Metropolitana, Santiago
de Chile(33° 26′ a0.a2″ S;70° 39′ 3.43″ O),donde crecen espontáneamente.Posteriormente,
fueron
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2
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transferidos a macetas de 10 L llenas de suelo muestreado del piedemonte de la comuna Rinconada de

Los Andes,
V Región deYalparaíso, Chile(32° 52′ 00,02′ S 70° 03′ 37,29′ O; Suppl. Tabla 1).
Antes de iniciar el experimento, las plantas se acondicionaron durante seis semanas al aire libre,
regándolas diariamente hasta capacidad de campo (CC) con agua de riego procedente de la instalación Bosque
Santiago. La fertilización basal se realizó 23 días después del trasplante con una solución nutritiva a base de
0,1% de N total y 3% de K a una dosis de1,5 L/ha. La misma dosis se repitió el día 37 después del trasplante.
Las plantas se podaron dos veces y se cortaron a una altura de10 cm del suelo; la primera poda se realizó el
mismo día que la primera fertilización basal y la segunda el día de inicio de los tratamientos.
El diseño experimental utilizado fue un diseño de parcelas de bloques al azar (RBLP) con cuatro
repeticiones por tratamiento. La parcela principal correspondía al estado hídrico (con o sin riego), y
la subparcela a los tratamientos con sulfato amónico y ácido acetilsalicílico.
Las plantas se trataron al inicio del experimento en macetas de plástico de 10 L que contenían un
19% de arcilla, un 26% de cal y un 55% de arena y suelo isólico (pH = 7,2, CE = 0,a7 dS/m, C" =
1,5 %) con 0,5 mM de ASA (0,09 g/planta) diluido en 30 mL de agua destilada y 2 g por maceta de AMS
en los grupos con riego y sin riego. En el tratamiento con riego, las plantas se regaron cada dos días
hasta alcanzar el peso en maceta correspondiente a la FC.En el tratamiento de estrés hídrico, el
periodo de estrés consistió en la suspensión del riego durante 19 días, cuando aproximadamente el 90% de
las plantas no regadas mostraron síntomas de clorosis general grave. Cada planta de Stips caudara en
una maceta representaba una unidad experimental (n = 32). En el cuadro 1 se indica el diseño experimental
consistente en cuatro bloques aleatorizados, cada uno con dos variantes: con y sin riego.

Tabla 1.Los bloques al azar utilizados para el crecimiento de Stipa caudata vn parcelas andisol suelo bajo riego
(Regadío) y estrés hídrico (EH)
Parcela principal Parcela principal Parcela principal Parcela principal
1 2 3 O
Regadío WS Regadío WS Regadío WS Regadío WS
T1 T3 T T2 T3 T3 T1 T2
T T T1 T1 T2 T1 T Ta
T2 T2 T2 T T1 T2 T2 T1
TS T1 TS TS T3 T3
T1 = ASA + AMS;T2 = ASA;T3 = AMS;T4 = Control.

La longitud de los brotes vegetativos vivos por planta se determinó con una regla. El número de espigas
se
también se registraron cada semana. Al final del experimento, se cosecharon las plantas, parte de la biomasa
aérea se
congelado, y el resto se secó en un horno a 65 °C hasta alcanzar un peso constante.
El contenido total de clorofila se midió según un método descrito previamente (Walinga er aJ., 1989).
El material del tallo (0,1 g de peso fresco) se machacó en un mortero en presencia de Nz líquida.Para la extracción
se utilizó 1 ml de acetona fría al80%. Las muestras se agitaron a 9 °C durante toda la noche y luego se
centrifugaron a 12.000 rpm durante 10 min. El sobrenadante se diluyó 10 veces en acetona al 80%. Para
las mediciones se utilizó un espectrofotómetro (VWR UV-1600PC).
Los contenidos de iones (Na+, Cl, K+ y Ca2 +) se determinaron de acuerdo con Weimberg (1987),
en extractos acuosos de hojas obtenidos calentando material vegetal seco y molido (0,15 g en 10 mL de
agua) en un baño de agua durante 1 h a 95ºC.
°C. Los cationes se analizaron con un fotómetro de llama (Corning 010 C), y el Cl se midió con
un cloruro de
analizador (Corning 926).
El contenido de prolina (Pro) se determinó al final del período experimental en 0,2 g de material vegetal
fresco mediante el método de ácido ninhidrina-acético descrito por Bates (1973). Brevemente, Pro se extrajo
en ácido sulfosalicílico acuoso al 3%, y el extracto se mezcló con solución de ninhidrina ácida, se incubó durante
1 h a 95°C, se enfrió en hielo y se extrajo con dos volúmenes de tolueno. La absorbancia de la fase orgánica
se midió a 520 nm, utilizando tolueno como blanco. La concentración de pro se expresó en mmol1 DW.
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El contenido de MDA se analizó en 0,1 g de material foliar fresco, molido en un mortero hasta obtener
un polvo fino y extraído con 1,5 ml de metanol al 80%. Las muestras se agitaron suavemente durante
toda la noche a 7 °C. El sobrenadante
se recogió por centrifugación a 13.300 g durante 10 min a o °C y se almacenó a -20 °C hasta su
utilización en los ensayos.
El MDA en los extractos se cuantificó por el método del ácido tricloroacético/tiobarbitúrico, tal como se ha
descrito anteriormente.
(Hodges er aJ., 1999).
Los compuestos fenólicos totales (CFT) y los flavonoides totales (FT) se midieron en los
mismos extractos de metanol utilizados para la determinación del MDA. Los CFT se cuantificaron midiendo la
absorbancia a 765 nm tras la reacción con el reactivo de Folin-Ciocalteu (Blainski er aJ., 2013), y se expresaron
como equivalentes de ácido gálico (mg eq GA / g DW), utilizados para obtener la curva estándar. Los TF se
midieron siguiendo el procedimiento descrito por Zhisen er aJ. (1999), basado en la nitración de anillos
aromáticos con un grupo catecol y su reacción con AlCls en condiciones alcalinas. Tras la reacción, se midió
la absorbancia de la muestra a 510 nm y el contenido de flavonoides se expresó como equivalentes de
catequina (mg eq. Catec. g1 DW).

Se prepararon extractos de proteína bruta a partir del material foliar, almacenados congelados a -75
°C, tal y como describe Gil er at. (2019). La concentración de proteínas en los extractos se determinó
según Bradford (1976) utilizando el reactivo Bio-Rad y albúmina sérica bovina (BSA) como patrón.
La actividad de la superóxido dismutasa (SOD) se determinó de acuerdo con un protocolo publicado
(Beyer y Fridovich, 1987) mediante la monitorización espectrofotométrica de la inhibición de la
fotorreducción del nitroazul tetrazolio (NBT). Las mezclas de reacción (1 ml) contenían 50 mM de tampón
fosfato potásico, pH 7,8, 9,9 mM de L-metionina, 58 mM de NBT, 0,025% (v/v) de Triton X-100, 2,0 mM de
riboflavina (como fuente de radicales superóxido) y el extracto proteico. Tras añadir la riboflavina, las
mezclas de reacción se irradiaron (300 mmol m2 s1 , proporcionados por tres lámparas fluorescentes
compactas (Osram DULUX PRO 23 W) durante 10 min a 25 °C, y la absorbancia se midió a 560 nm
utilizando como blanco una mezcla de solución no irradiada. Una unidad de SOD se definió como la
cantidad de enzima que causa una inhibición del 50% de la fotorreducción de NBT en las condiciones del
ensayo. La actividad de la catalasa (CAT) se determinó a partir de la disminución de la absorbancia a 200
nm que acompañaba al consumo de HzOz tras la adición de extractos de proteínas a una solución de 10
mM de HzOz en 50 mM de Tris-
HCl (pH 7,0). Una unidad CAT se definió como la cantidad de enzima que descompone un mmol de HzOzper
minuto a 25 °C (Aebi, 198a).
La actividad de la ascorbato peroxidasa (APX) se determinó midiendo la disminución de la
absorbancia a 290 nm a medida que el ascorbato se oxida en la reacción (Nakano y Asada, 1981). Una
unidad APX se definió como la cantidad de enzima necesaria para consumir un mmol de ascorbato por
minuto a 25 °C.
La actividad de la glutatión reductasa (GR) se determinó según Connell y Mullet (1986) tras la
oxidación del NADPH, el cofactor en la reducción catalizada por la GR del glutatión oxidado (GSSG).
En un volumen final de 1 ml, las mezclas de reacción contenían 100 mM Hepes, pH 7,5, 1 mM EDTA, 3
mM MgClz,
0,5 mM de GSSG y los extractos de proteínas. Las reacciones se iniciaron añadiendo NADPH hasta
una concentración final de
de 0,2 mM. Las muestras se incubaron a 25 °C y se midió la disminución de la absorbancia a 300 rim al
cabo de 25 min. Se incubaron reacciones de control sin extracto proteico en paralelo para corregir la
oxidación no enzimática del NADPH. Una unidad GR se definió como la cantidad de enzima que oxidará un
mmol de NADPH por minuto a 25 °C.

Análisis estadístico
Los resultados de los experimentos se analizaron utilizando modelos lineales y mixtos para evaluar si
existían diferencias significativas entre tratamientos, y una prueba de Fisher para la comparación de medias, con
un 95% de confianza, para determinar las diferencias entre tratamientos. La correlación temporal de las
variables crecimiento de los brotes, número de espigas, pH y CE se tuvo en cuenta en el modelo al realizar
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los análisis. El análisis estadístico se realizó con InfoStat, versión 2019 (Universidad de Córdoba,
Argentina).
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Resultados

vsziab1es vegetativo
Las longitudes de los tallos se comprobaron cada semana durante el tratamiento de estrés. La figura 1
muestra la interacción entre los tratamientos AMS/ASA (A)x Condición hídrica (B)para el incremento de
la longitud del tallo al final del experimento. Las plantas tratadas con la mezcla AMS y ASA regadas
mostraron el mayor incremento en lengrh. A su vez, las plantas con AMS,ASA o la mezcla de ambos, presentaron
los mayores niveles de lengrh del tallo independientemente de la condición hídrica en la que se
encontraban. Finalmente, las plantas control sin tratamientos y sin riego mostraron los valores más
bajos de incremento de lengrh del tallo.

AB
ABC ABC BC CD CD

20
0
'0 15

10

0
AMS + ASA ASA AMS AMS ASA Control AMS + ASA Control

Regadío Regadío Regadío Regado

Interacción AxB
Figura 1. Interacción entre Interacción entre Tratamientos (A)x Condición del agua (B)para el incremento
medio de la longitud de
Stipa candata
Letras distintas indican diferencias significativas según la prueba de Fisher (p< 0,05). Las barras verticales indican la norma
eiioz.

La figura 2 muestra el número de espiguillas medido al final del experimento. Las plantas de control
regadas y tratadas con AMS + ASA mostraron un aumento del número de espiguillas por planta en comparación
con las demás plantas. Al mismo tiempo, en condiciones de restricción hídrica, las plantas tratadas con AMS
mostraron el mayor número de espiguillas por planta. Sin embargo, cuando se realizaron análisis estadísticos
teniendo en cuenta todas las plantas regadas y sometidas a estrés hídrico, sólo fue significativo el efecto del
tratamiento, pero no el del régimen hídrico. De todos los tratamientos, el menor número de inflorescencias se
registró en las plantas tratadas con ASA, significativamente diferente del de las plantas de control
(Figura 2).

Contenido de Ch1orof'hy11
El contenido total de clorofila medido en brotes de S. caudara en los cuatro tratamientos se indica en
la Figura
3. Al igual que para el rasgo anterior analizado, la ausencia de riego no disminuyó significativamente el contenido
de clorofila total, pero el efecto del tratamiento fue significativo. Las plantas cultivadas en suelos
fertilizados con la mezcla de AMS y ASA presentaron valores de concentración de clorofila total
significativamente superiores a los de las plantas testigo o a los de los tratamientos con AMS y ASA
por separado.
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20 A
18
16 AB
AB
espigas(unidad) 14
12
10
Planta de

8 B

2
0
Control AMS + ASA AMS ASA
ar
Tratamient
os
Figura 2. Número medio de espiguillas por planta en Stipa candata al final del experimento Número medio de
espiguillas por planta en Stipa candata al final del experimento.
Letras distintas indican diferencias significativas según la prueba de Fisher (p<0,0 5). Las barras verticales indican la norma
eiioz.

120 A

100
B B
°° 80 B

60

O 20

0
AMS + AMS Control ASA
ASA ar
Tratamient
os
Figura 3. Contenido total de clorofila en brotes de Stipa cantata al final del experimento Contenido total
de clorofila en brotes de Stipa cantata al final del experimento.
Letras distintas indican diferencias significativas según la prueba de Fisher (p<0,05). Las barras verticales indican la norma
eiioz.

IOR CORteRtS O ShOOtS

Se cuantificaron los cationes monovalentes y divalentes (Na+, K+ y Ca2 +) y el anión monovalente Cl
en los brotes de las plantas al final del experimento. En general, el efecto de los tratamientos y de las condiciones
hídricas no fue significativo.
La única interacción significativa entre el tipo de tratamiento (A) y la condición del agua (B) fue
encontrado para los brotes Ca2 +contenido, como se muestra en la Figura 9.
μ μ μ μ
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Table 3. Concentraciones de prolina (Pro), malondialdehído (MDA), compuestos fenólicos totales

(TFC) y fiavonoides totales (TF) en brotes de Stipa caudata al final del experimento.
Tratamient TFC TF Pro MDA
Estado del agua (A) os (mg eq. GA (mg eq.catequin g1 FW) (mg g' FW) (nmol
(B) g'FW) g'FW)
Regadío AMS + ASA 11.87+3,24 c o.73+ 1.66+0,23 28.13+2,92
1,03
Regadío AMS 13,86+3,2a be 5.10+ 1,03 0.58+0,25 13.89+ 2,5o
Regadío ASA 26,05J 3,70 a 8. 5+1,19 0.10+0,05 8.02+2, 8
Regadío Controla 17,65+3,2a ib 5.80+ 1,03 0.21+0,03 47,05+o5,5o
r
AMS + ASA 21,20+3,29 ab 7.67+ 5.70+0,02 109.05+
1,03 56,o8
AMS 25.01+3,24 a 7. 6+1,03 2.65+0,02 95. 2+ 5,5
ASA 19,73+3,2a ib 8.27+ 1.79+0,53 120.53+o8,92
1,03
Controla 21,23+3,29 ab 7.62+ 5.03+0,20 64,99ño5,5o
r 1,03

Estadísticas
Tratamientos A N.S N.S N.S N.S
Estado del agua B
AxB N.S N.S N.S
Se indica la significación estadística del efecto del tratamiento (A) y la condición del agua (B) y su interacción (A x B).
* Indica diferencias significativas según la prueba de Fisher (p< 0,05). N.S indica que no hay diferencias significativas.

A
120
100

60

q 40

Z 20
0
WS I fragata
Tratamientos d
Tratamient
os
(a) (b)
Figura S. (a) y (b) muestran el efecto de la condición hídrica en la concentración de prolina (Pro) y
malondialdehído (MDA) en brotes de Stipa cantata al final del experimento.
Letras distintas indican diferencias significativas según la prueba de Fisher (p= 0,0 5). Las barras verticales indican
error.

En cuanto a los antioxidantes no enzimáticos, el patrón de variación según el régimen hídrico fue
similar para los fenoles totales (TFC)y los flavonoides totales (TF), con un aumento en las plantas sometidas a
estrés hídrico de todos los tratamientos. En el caso de los TFC, se detectaron también diferencias
significativas según los distintos tratamientos y la interacción entre tratamientos y régimen hídrico.
La Figura 6 muestra la interacción de Tratamientos (A) x Régimen hídrico (B)para el contenido de TFC en
brotes medido al final del experimento. El total de plantas tratadas con ASA, AMS o la mezcla de ambos en
la condición de restricción hídrica, junto con las plantas tratadas con ASA con riego, presentaron niveles
más altos deTFC que las plantas tratadas con la mezcla ASA-AMS con riego.

8
 35
A A
30
TFC (mg eq. GA g-1 FW )- AB AB ABC
25 ABC

20 BC
C
15
10
5
1

0
ASA AMS Control + AMS+ ASA ASA Control AMSAMS +
ar ASA
Regadío WS WS WS WS Regadío Regadío Regadío
Interacción AxB

10 A
TF (catequin g-1 FW )-

8 B

6
4
2
0
1

WS
Regadí
o
Tratamientos
 1200 A A
A A
1000 A AB
800
SOD (unidades mg-1

600 AB
400 B
200
proteín)

0
Control Control AMS ASA AMSAMS + ASA AMS+ ASA ASA
Regadío WS Regadío WS WS WS Regadío Regado
Interacción AxB
 25000
A
20000 AB AB
AB AB
CAT (unidades mg-1

BC
AB
15000
C
10000
proteín)

5000

0
ControlAMS + ASA AMS ControlAMS+ ASA ASA
ASA AMS
Regadío Regado WS WS WS WS Regadío Regado

Interacción AxB

600 A
500
APX (unidades mg-1

400
300
B
200
proteín)

100
0
WS
Regadí
o
Tratamientos
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Los resultados anteriores muestran la interacción AxB en los factores estudiados. Se observó que
las plantas de AMS y ASA en régimen de restricción hídrica produjeron una altura de tallo similar a las de
regadío. A su vez, las plantas de AMS mostraron los mayores contenidos de clorofila.
Se han registrado resultados positivos en la altura y la biomasa de plantas sometidas a estrés
hídrico tratadas con ASA o AMS en tomate (Rodríguez et al., 2020), judía (Seranatna er at., 2000), trigo
(Kareem er at., 2017), garbanzo (Hussain er at., 2020) y Eragrostis plana (Bastiani er at., 2021). Sin embargo,
varios estudios (Kabiri y Naghizadeh, 2015) no encontraron ningún efecto en la altura de la cebada. Por
otro lado, las plantas con restricción hídrica presentaron mayores contenidos de MDA que las plantas
regadas. A su vez, las plantas con AMS y ASA mostraron mayor contenido de clorofila total que el resto de
tratamientos. Observaciones similares se han reportado con tratamientos de MGA o ASA en maíz (Gunes
er at, 2007), A?!iun1 sativunl (Zeinali y Moradi, 2015), mostaza (Giansoldati er aJ., 2012) y garbanzo
(Hussain er aJ., 2020).
Los resultados anteriores sugieren que las aplicaciones de ASA o AMS podrían aumentar algunos
parámetros de crecimiento en plantas con estrés hídrico, ya que pueden tener un efecto sobre el cierre
estomático y el mantenimiento del flujo de agua relacionado con el crecimiento (Vargas-Ortiz er aJ., 2021).
Es probable que aplicaciones de bajas dosis de estos suplementos al inicio de un déficit hídrico puedan
tener también un efecto sinérgico sobre los sistemas de defensa frente al estrés. En este sentido, Jopia er
aJ. (2020) demostró que el déficit hídrico podría disminuir el crecimiento al reducir el potencial hídrico. El
cierre estomático y la reducción del flujo de agua conducen a cambios fisiológicos y bioquímicos también a
través de la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Las concentraciones elevadas de ROS
aumentan la peroxidación lipídica, la muerte celular programada y disminuyen las funciones fotosintéticas
debido a la degradación de la clorofila (Okuma er aJ., 2011). Se han descrito resultados similares en
plantas sometidas a estrés nutricional (Molina y Covarrubias, 2019). Sin embargo, los resultados indicaron
que AMS y ASA aliviaron los efectos de la reducción de agua en el crecimiento vegetativo y la producción
de clorofila. Informes recientes han mostrado relaciones sinérgicas entre el AMS y la actividad nitrato
reductasa estimulada por nitrógeno, que está implicada en la síntesis de óxido nítrico precursor del sulfato
de amonio, aliviando así los síntomas de estrés hídrico al mejorar los sistemas de defensa y el potencial
hídrico (Kaya, 2021).

Ion sccumml tlOR

De todos los iones analizados, el análisis estadístico reveló una interacción AxB significativa sólo
para el contenido de Ca2 +. Sin embargo, se observó que cuando el AMS estaba presente las plantas con
restricción de agua y las de regadío mostraban una acumulación similar de Ca2 en los brotes.
Los resultados sugieren que las aplicaciones de sulfato amónico podrían incrementar la acumulación
de Ca" bajo déficit hídrico. La captación y el transporte de Ca disuelto2 + en la solución del suelo se
produce por transpiración siguiendo las diferencias en los potenciales hídricos con respecto a la atmósfera.
Ca2 +es un elemento mineral esencial que actúa como un segundo mensajero celular señalizando respuestas
fisiológicas y transcripcionales a condiciones de estrés (Kudlak ct at., 2010). También actúa potenciando la
regulación estomática y activando una serie de enzimas. Estudios recientes han demostrado que el
nitrógeno es un elemento que promueve la resistencia al estrés actuando sinérgicamente con la
acumulación de Ca2 (Zhang er aJ., 2018).

Osni oprotectsn ts y no -enzkm stlC HRt1OX1 3RtS

Aunque en general las plantas tratadas presentaron una mayor concentración de Pro y TF, sólo el
efecto del régimen hídrico fue estadísticamente significativo. Al mismo tiempo, se detectó una relación
significativa entre el régimen hídrico y el tratamiento para el TCF. Sin embargo, se observó que las plantas
con tratamientos y restricción hídrica presentaron valores similares en cuanto a incrementos de TCF
respecto a las plantas regadas.
Se han descrito ampliamente resultados positivos en la acumulación de osmoprotectores en plantas
estresadas del género Stipa (Yang er at., 2021). En la misma dirección, otros resultados mostraron que el
ASA o el sulfato amónico aumentan la concentración de prolina, flavonoides y compuestos fenólicos en
Poaceae, como Festuco orundinsces (Neuberg er at 2010) o en dicotiledóneas como Simaroubs glsucs (Awate
er aJ., 201a) y garbanzo (Hussain er aJ., 2020).
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Los resultados anteriores sugieren que las aplicaciones deASA o sulfato amónico a plantas
bajo déficit hídrico podrían estimular la síntesis deosmolitos y compuestos antioxidantes en sus células,
como prolina, flavonoides y compuestos fenólicos. Estos compuestos tienen una gran capacidad para
degradar las especies reactivas del oxígeno (ROS) producidas bajo estrés (Farooq er al., 2009; Akinci y
Lösel, 2012). La prolina es un precursor proteico con actividad antioxidante que actúa en la
desintoxicación y protección a través de la homeostasis celular proporcionando un equilibrio redox
adecuado. La prolina también induce una serie de gènes responsables de la activación de enzimas
antioxidantes, mejorando el potentiel hídrico en las plantas(Neuberg er al., 2010; Nazar er al.,
2015). Por otra parte, los fenoles y flavonoides pueden quelar ionesdemetales de transición, eliminar
directamente las especies activas de oxígeno molecular y apagar la peroxidación lipídica atrapando el
radical alcóxido. Además, los flavonoides y los fenilpropanoides son oxidados por la peroxidasa y
actúan en el sistema HzOzuptakesystem, fenólico / AsA / POD (Kaya, 2021). Otros resultados en
diferentes especies y diferentes condiciones experimentales indican que ASA o sulfato de amonio
mejoran la síntesis de prolina, flavonoides y compuestos fenólicos contra el estrés hídrico (Nazar er al.,
2015; Kaya, 2021).

An tioxidsnt enzème octivity

El aumento de ROS como Oz, O; o HzOz se produce en las plantas en condiciones de estrés. Estos
radicales producen peroxidación lipídica en la célula y en altas concentraciones pueden causar la muerte celular.
Como defensa, los organismos responden aumentando la actividad de enzimas antioxidantes como la SOD, la
CAT y la APX, actuando la SOD en primera línea de acción catalizando la dismutación de Oz a HzOz mediante su
neutralización por la adición de dos iones de hidrógeno reduciendo la formación deOH a través de la reacción
de Haber-Weiss. Por otro lado, CAT y APX catalizan la conversión de HzOz a HzO y Oz aliviando el daño
(Apel y Hirt, 200s; Das y Roychoudhury, 201s; Noctor er al., 2018; Farooq er al., 2020).
De las cuatro enzimas analizadas, sólo se detectó una mayor actividad APX bajo restricción hídrica.
Por otra parte, hubo una interacción AxB para la actividad CAT y SOD. El patrón de variación de las
enzimas antioxidantes varía según la especie estudiada o el tipo de estrés aplicado. En una especie del mismo
género, S. lagascae, se registraron aumentos en APX y GR pero disminuciones en la actividad de SOD en
condiciones salinas (Abdellaoui er al., 2017), mientras que la actividad de las enzimas antioxidantes varió en
juncus no solo en función de la especie, sino también dentro de la especie según los tratamientos de estrés hídrico
o salino aplicados (Al Hassan er al., 2017).
En cuanto al efecto del ácido acetilsalicílico y el AMS sobre la actividad de las enzimas antioxidantes,
no hay informes en el género Stipa y sólo unos pocos datos publicados en plantas monocotiledóneas. El trigo
mostró una mayor actividad de SOD, CAT y APX cuando se trató con ASA (Hassanein er al., 2015).
Sin embargo, no se han reportado tendencias claras en la actividad enzimática bajo estrés abiótico
tratado con ASA. En este sentido, mientras que en Oryza sativa se encontró una disminución de SOD,CAT
bajo estrés hídrico(Guo er al., 2007)en Spartins slternihors se reportaron aumentos en la actividad de
CAT,SOD y APX con tratamientos con amonio (Hessini et al., 2013) y no se reportaron tendencias
claras en la actividad de enzimas antioxidantes en maíz(Zhang er al., 2007).
Nuestros resultados sugieren que las aplicaciones de ASA o AMS podrían mejorar la actividad de SOD
y CAT en algunas especies en condiciones de estrés. La SOD y la CAT son enzimas encargadas de degradar
sistemáticamente las ROS y reducir su nivel tóxico a niveles cada vez más bajos.

Conclusiones

Nuestros resultados indican que el estrés hídrico tuvo un mayor efecto sobre el crecimiento de las plantas
cultivadas en ausencia de AMS y ácido acetilsalicílico o su combinación. Las plantas tratadas con
estos compuestos o su combinación presentaron mayores concentraciones de prolina y flavonoides totales,
pero las plantas tratadas bajo restricción hídrica mostraron valores similares en cuanto a fenoles totales.
La actividad de APX aumentó en condiciones de restricción hídrica, y se detectó una interacción AxB para
la actividad de CAT y SOD. Sin embargo, las plantas

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tratados con ácido acetilsalicílico y sulfato amónico bajo restricción hídrica mostraron reducciones similares
en la actividad de ambas enzimas en comparación con los regados/ASA.
Los resultados obtenidos muestran que estos aditivos pueden mejorar las respuestas al déficit hídrico
en Stips c:indata,
una especie con un gran potencial en programas de restauración medioambiental o de producción de
biocombustibles. Sin embargo, quedan abiertos varios interrogantes sobre el papel relativo de laASA y laAMS
en otros mecanismos fisiológicos y bioquímicos como la regulación del potencial hídrico del xilema, la
actividad fotosintética y la producción de materia seca aérea.

Contribuciones de los autores

Conceptualización, OV y CS; metodología, JM y SGP,software, JM..; validación, JM,SGO y

FZ;análisis formal, JM;investigación,JM, SGO;recursos JL, CS; conservación de datos, JM; redacción-
redacción del borrador original, JM; redacción-revisión y edición, MB y OV; visualización,JM;
supervisión, MB, JL y CS; administración del proyecto, CS;obtención de financiación, JM y CS.
Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.

Aprobación ética (para investigaciones con animales o seres humanos)

No se aplica.

Agradecimientos

Esta investigación no ha recibido ninguna subvención específica de ningún organismo de financiación de los
sectores público, comercial o sin ánimo de lucro.

Conflicto de intereses

Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses en relación con este artículo.

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