UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTAD MULTIDISCIPLINARIA ORIENTAL

DEPARTAMENTO DE MEDICINA
LICENCIATURA EN LABORATORIO CLINICO

QUIMICA CLINICA

DIARIO DE LABORATORIO

ESTUDIANTE

SANDOVAL LOZA, FANY SOFIA

CICLO II-2020

CIUDAD UNIVERSITARIA ORIENTAL, LUNES 26 DE OCTUBRE DE

2020
 PRÁCTICA N° 7

DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA EN SUERO

OBJETIVOS:

1. Determinar los valores de bilirrubina en una muestra desconocida de suero o plasma.

2. Analizar la importancia de la determinación de bilirrubina en el diagnóstico clínico.

3. Investigar la concentración de bilirrubina en una muestra de suero problema, mediante el uso de factor de
calibración.

BILIRRUBIN D+T LIQUICOLOR

PRUEBA FOTOMÉTRICA PARA BILIRRUBINA DIRECTA (D) Y BILIRRUBINA TOTAL (T).

Método Modificado Jendrassik/Gróf.

La bilirrubina reacciona con el ácido sulfanílico diazotizado (DSA) formando un color rojo. La absorbancia de
este color a 546 nm es directamente proporcional a la concentración de bilirrubina en la muestra. Los
glucoronidos de la bilirrubina solubles en agua reaccionan directamente con DSA mientras la bilirrubina
“indirecta” conjugada con albúmina reacciona sólo en la presencia de un acelerador.
Bilirrubina total = Bilirrubina directa + Bilirrubina indirecta.

Acido sulfanílico + nitrito de sodio DSA

Bilirrubina + DSA directa azobilirrubina DIRECTA

Bilirrubina + DAS + acelerador azobilirrubina TOTAL

CONTENIDO:

TBR 1 X 100 ml Reactivo de bilirrubina total

(Tapa blanca)

Acido Sulfanílico 14 mmol/l

Acido clorhídrico 300 mmol/l

Cafeína (acelerador) 200 mmol/l

Benzoato de sódio 420 mmol/l

TNR 1 x 9 ml Reactivo T-nitrito

(Tapa blanca)

Para La determinación de bilirrubina total

Nitrito de sodio 390 mmol/l

(Xn, R 22)

DBR 1 x 100 ml Reactivo de bilirrubina directa

(Tapa azul)

Acido Sulfanílico 14 mmol/l

Acido Clorhídrico 300 mmol/l

DNR 1 x 9 ml Reactivo D-nitrito

(Tapa azul)

Para La determinación de bilirrubina directa

Nitrito de sodio 25 mmol/l

PREPARACIÓN Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS:

Ambos reactivos y las soluciones de nitrito están listos para su uso.

Ambos reactivos y las soluciones de nitrito son, aún después de haberse abierto, hasta la fecha de
caducidad y almacenados de 15…25° C. Debe evitarse la contaminación.

MUESTRAS:

Suero o plasma con heparina

PROCEDIMIENTO
PARA
PARA BILIRRUBINA
BILIRRUBINA TOTAL
TOTAL

TBR
1000 uL TBR
Incubar 5min
1000 uL TNR
1 GOTA

Aprox

40 uL

MUESTRA
100 uL Incubar a T ambiente
10 a 30 min
Leer frente al
blanco a 546
nm

PARA BILIRRUBINA
DIRECTA
1gota.
Aprox. 40 ul
DBR DBR
1000 uL 1000 uL

Añadir
muestra
dentro de 2
min.
 Leer absorbancia
frente al blanco a
Incubar a T ambiente 546 nm
Exactamente 5 min
100 ul
muestra

CÁLCULOS:

Calcular La concentración de bilirrubina total y directa usando el factor 13,0

C = ΔΑ546 x 13,0 = mg/dl

[mg/dl] x 17,1 = [μmol/l]

 CUESTIONARIO DE LA PRÁCTICA N° 7

1. ¿Cómo es la solubilidad de la bilirrubina libre en agua y cómo es en solventes orgánicos?

Es muy poco soluble en agua mientras que si presenta solubilidad frente a solventes orgánicos como el alcohol
metílico,

2. ¿Cuál es la bilirrubina que se encuentra normalmente en sangre?

Es la bilirrubina indirecta o no conjugada ligada a la albúmina.

3. ¿Cuál es la muestra preferencial para hacer la determinación de bilirrubina?

Suero o plasma sanguíneo.

4. Características que debe presentar el suero o plasma para que pueda ser utilizado en la
determinación de bilirrubina.

Debe ser suero o plasma con heparina y debe estar protegido de la luz y evitar la hemólisis.

5. ¿Por qué la determinación de bilirrubina debe hacerse lo más pronto posible y no después de
2 o 3 horas de haberse coagulado la sangre?

Porque se destruyen los glóbulos rojos e interfiere en la prueba.

6. Si la determinación de bilirrubina no puede hacerse en el momento en que se coagula la sangre.

¿Qué precaución debe tomarse con el suero?

Debe almacenarse protegida de la luz en refrigeración de 2 a 8 ºC

7. Escriba las condiciones del paciente para la extracción de la muestra de sangre.

Relajado, en ayuno de 8 horas, correcta postura, notificar el consumo de medicamentos que interfieran en la
prueba.

8. ¿A qué clase de método pertenece la determinación de bilirrubina realizada en el laboratorio?

Método colorimétrico y fotométrico.

9. Explique el fundamento del método utilizado en el laboratorio para la determinación de

bilirrubina.

La bilirrubina reacciona con el ácido sulfanílico diazotizado (DSA) formando un color rojo. La absorbancia de
este color a 546 nm es directamente proporcional a la concentración de bilirrubina en la muestra. Los
glucoronidos de la bilirrubina solubles en agua reaccionan directamente con DSA mientras la bilirrubina
“indirecta” conjugada con albúmina reacciona sólo en la presencia de un acelerador.
 BIBLIOGRAFIA

https://www.cun.es/enfermedades-tratamientos/pruebas-diagnosticas/bilirrubina

https://ateuves.es/extraccion-y-procesado-de-muestras-de-sangre/

https://www.scielo.sa.cr/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1409-
00152019000100073#:~:text=La%20bilirrubina%20no%20conjugada%20es,la%20alb%C3%BAmina%2
0sea%20neurot%C3%B3xica%2026.

https://fhu.unse.edu.ar/carreras/obs/anatomo/metabili.pdf