Mejoramiento genético mediante la

utilización de biotécnicas
reproductivas

Nicolás Mucci, Méd. Vet., M.Sci.

Técnicas reproductivas

• Inseminación artificial (1930-1940)

• Congelación de semen (1950-1960)

• Tratamientos hormonales para inducción y sincronización del

celo (1960-1970)
• Producción in vivo de embriones (1970)
• Criopreservación y transferencia embrionaria (1980)

• Producción in vitro de embriones (1980-1990)

• Micromanipulación de gametas y embriones (1990)

• Clonación por transferencia nuclear (1996)
• Células Madre y Generación de animales genéticamente
modificados (1980-2012-2016)
 Producción de embriones
bovinos

Producción in vivo por superovulación

Producción in vitro en laboratorio
Fecundación in vitro
Clonación
Proceso de producción in vitro de embriones

Fundamento
Estadio de dos células

Zona
Utero Mórula pelúcida

Primera división

Oviducto

Blastocisto
Fecundación
Ovario
Blastocisto
protruído Ovulación Fibrias

1 Día 2º Día 3º Día 3º-8º Día

Maduración Fecundación Desempaque Cultivo

Día -1 Día 0 Día 1 Día 1-6

Maduración de los ovocitos

Orígen de los ovocitos •Ovarios de vacas faenadas

•Ovarios de vacas castradas
•Punción folicular en vacas vivas

Transporte y
acondicionamiento de los
ovarios

1 Día 2º Día 3º Día 3º-8º Día

Maduración Fecundación Desempaque Cultivo

Día -1 Día 0 Día 1 Día 1-6

Maduración de los ovocitos

Obtención de ovocitos
•Ovum pick up

1 Día 2º Día 3º Día 3º-8º Día

Maduración Fecundación Desempaque Cultivo

Día -1 Día 0 Día 1 Día 1-6

Maduración de los ovocitos

Búsqueda, selección y lavado

de los ovocitos

Maduración de ovocitos
en estufa durante 24 hs

Medio enriquecido
con suero y homonas
(FSH, LH y E2)
1 Día 2º Día 3º Día 3º-8º Día

Maduración Fecundación Desempaque Cultivo

Día -1 Día 0 Día 1 Día 1-6

Fertilización de los ovocitos

Utillización de semen congelado-

descongelado

Coincubación de ovocitos
y espematozoides en
estufa 24 hs.
Medio suplementado
con BSA en inductores
de la capacitación
1 Día 2º Día 3º Día 3º-8º Día

Maduración Fecundación Desempaque Cultivo

Día -1 Día 0 Día 1 Día 1-6

Cultivo de los ovocitos fertilizados. Cultivo embrionario

Cultivo hasta el día 6-8 PI

Medio de cultivo cubierto

con aceite mineral

Evaluación final de producción

Transferencia en fresco
Criopreservación
Investigación

1 Día 2º Día 3º Día 3º-8º Día

Maduración Fecundación Desempaque Cultivo

Día -1 Día 0 Día 1 Día 1-6

Producción in vitro de embriones

Aplicaciones/Ventajas

• Aumenta y estandariza su producción

• Facilita el progreso genético (puede duplicar la producción in vivo por
superovulación)
• Optimiza el uso de semen de alto valor
• Aprovechar donantes

• Modificación genética • Clonado

CLONACIÓN
Proceso de clonación

Fundamento
Estadio de dos células

Zona
Utero Mórula pelúcida

Primera división

Oviducto

Blastocisto
Fecundación
Ovario
Blastocisto
Ovulación Fimbrias
protruído

1 Día 2º Día 3º-8º Día

Maduración Clonación Cultivo

Clonación. Equipos específicos necesarios

Estación de clonado
. Microscopio invertido equipado con luz ultravioleta
(epifluorescencia)
. Dos micromanipuladores
. Platina térmica
. Microinyectores
 Circuito biotecnológico de la
clonación
Clonación por
transferencia nuclear
Cultivo
primario de
células

Ovocitos bovinos
Cultivo embrionario
Eliminación del material
genético de los óvulos

Transferencia a hembras receptoras

PRODUCCIÓN DE ANIMALES
GENÉTICAMENTE
MODIFICADOS
.
 Núcleo

Cromosomas Célula

aattggaatatagccctgaaggtcctagtcagtcaactgacttgaccaacgtaactgccatggattcacattgctagctaattggaat
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Qué es un animal o GENÉTICAMENTE
MODIFICADO?

Célula
Cromosomas

ADN

animal TRANSGÉNICO
Qué es un animal o GENÉTICAMENTE
MODIFICADO?

Célula
Cromosomas

ADN

animal KNOCK OUT

En INTA

La leche bovina no se ajusta absolutamente a los

requerimientos humanos

Déficit (lisozima – Lactoferrina)

Exceso (Caseínas – B-Lactoglobulina)

Es posible producir una LECHE

BOVINA IDEAL??
Carencia/Déficit
Bovinos productores de lisozima y lactoferrina humana por
separado
Rosita ISA. Primer bovino bitransgénico productor de lisozima
y lactoferrina humanas mediante tecnología de expresión
bicistrónica
Exceso
B-Lactoglobulina (βL) PRINCIPAL ALERGENO / INDUCTOR
DE DIABETES / INDUCTOR DE NEOPLASIAS
Hidrolizados enzimáticos/knock outs vía Zinc Fingers y ARN
de interferencia

Tecnologías anticuadas,
cuestionables e ineficientes.
 Promotor Lactoferrina IRES Lisozima

MCS

HSV TK S<V 40 ori

SV 40 ori Kan/Neo pUC ori
Poly A

? Célula
 Generación de bovinos Knock
Outs para β-Lactoglobulina
Mejora de la calidad de vida de las personas
que presentan la enfermedad
Disminución del número de las que la
desarrollan
2013

30/30/30
 Quimeras

Xenotransplantes
Producción de embriones in vitro porcinos como base
para la edición génica en esa especie
 Genotipo Fenotipo Ambiente

Cruzamientos
Modificación genética
Cruzamientos/ Modificación
Genética
 Calidad Cantidad
Lana de lana de grasa

Tipo de
Carne Leche carne

Alérgenos Calidad
Huevos de grasa

Aumentar producción Aumentar calidad

Áreas de
aplicación
Otras aplicaciones Resistencia a enfermedades

BSE
Vacas sin cuernos Caballos más
rápidos

Gripe
SRRP
aviar

Producción de
vacunas
Mastitis
Muchas gracias
mucci.nicolas@inta.gob.ar