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TESIS
PRESENTA:
I.B.Q. LETICIA BETSAIDA RÍOS SALOMÉ
DIRECTORES DE TESIS:
..y uno empieza a aprender que los besos no son contratos y los regalos no son
promesas; y uno empieza a aceptar sus derrotas con la cabeza alta y los ojos
abiertos...
…con el tiempo te das cuenta de que los amigos verdaderos son contados, que valen
mucho más que cualquier cantidad de dinero y que el que no lucha por ellos, tarde o
temprano se verá rodeado sólo de amistades falsas
…con el tiempo aprendes que las palabras dichas en un momento de ira pueden
seguir lastimando a quien heriste durante toda la vida
..con el tiempo te das cuenta de que cada experiencia vivida con cada persona es
irrepetible
…con el tiempo comprendes que apresurar las cosas o forzarlas a que pasen,
ocasionará que al final, no sean como esperabas
…con el tiempo te das cuenta, de que en realidad lo mejor no era el futuro, sino el
momento que estabas viviendo justo en ese instante.
…con el tiempo verás, que aunque seas feliz con los que están a tu lado, añorarás
terriblemente a los que ayer estaban contigo y ahora se han marchado.
…con el tiempo aprenderás que intentar perdonar o pedir perdón, decir que amas,
decir que extrañas, decir que necesitas, decir que quieres ser amigo, ante una tumba
ya no tiene ningún sentido. Pero desafortunadamente... Sólo con el tiempo…
A mi mamá…
Por enseñarme a arriesgarme y por demostrarme que hay que ser valiente a pesar de las
circunstancias. Gracias por brindarme siempre cariño, apoyo y por confiar en mi…Te
quiero …
La adversidad alimenta el valor, nadie puede ser valiente
si en la vida no le han sucedido cosas maravillosas….
A mi papá….
Por que siempre has creído en mi, por tus palabras de aliento, por apoyarme en todas mis
decisiones…gracias…te quiero…lo sabes…
Gracias, por que han sido parte importante de todos mis logros, por que con sus
consejos y apoyo incondicional he logrado salir adelante cuando según yo, ya no
hay mucho por hacer…
A Oswaldo y Andrea…
Como hermanos y amigos, los mejores, gracias por su apoyo, su paciencia, por soportarme
tanto y por estar siempre conmigo…los quiero muchísimo!!!!!
A mi Cris…
Por que cambias mi día con el solo hecho de recordar tu sonrisa y por que desde que estas
aquí, eres un motivo más de alegría en nuestra casa… para ti que ocupas gran parte de mi
corazón desde mucho antes que llegaras…
por su paciencia, por la gran amistad que hemos fortalecido a través del
tiempo, por todas las cosas que hemos aprendido, por tener siempre una
sonrisa para mi y por que a pesar de todo seguimos aquí, caminando
juntos…
A Vero R y Vero P
por el gran apoyo que han sido durante todo este tiempo, por los consejos,
por compartir momentos buenos y por estar cerca en los momentos
difíciles, por contagiarme de su serenidad y por las palabras de aliento…
ÍNDICE DE TABLAS iv
ÍNDICE DE FIGURAS v
ABREVIATURAS vii
I. RESUMEN 1
II. ABSTRACT 3
III. INTRODUCCIÓN 4
[i]
V. JUSTIFICACIÓN 26
VI. OBJETIVOS 27
7.2 Métodos 28
VIII. CONCLUSIONES 79
IX. PERSPECTIVAS 81
X. BIBLIOGRAFÍA 82
[iii]
ÍNDICE DE TABLAS
PÁGINA
[iv]
ÍNDICE DE FIGURAS
PÁGINA
[v]
Figura 15. Explantes de hoja en medio MS adicionado con TDZ y ácido
ascórbico 58
[vi]
ABREVIATURAS
[vii]
pH Potencial de Hidrógeno
Picloram Ácido 4-amino -3,5,6-tricloropiridin-2-carboxílico
pm Parénquima en empalizada
ps Parénquima esponjoso
p/v Peso/volumen
re Retículo endoplásmico
RCV Reguladores de crecimiento vegetal
TDI Tratamiento digital de imágenes
TDZ N-fenil-N´1,2,3-tidiazolil-5-urea
uid A Gen que codifica para la β-glucuronidasa
v Vacuola
v/v Volumen/volumen
ZEA Zeatina
µA Velocidad específica de crecimiento del área (mm 2/d)
µP Velocidad específica de crecimiento del perímetro (mm/d)
ºC Grados centígrados
% Porcentaje
[viii]
I. RESUMEN
El cempaxúchil (Tagetes erecta) tiene una gran importancia a nivel industrial debido
perímetro, dimensión fractal y el factor elíptico. Con los datos de área y perímetro se
pudieron apreciar dos etapas, una de lento crecimiento que comprende del día 0 al 7
dimensión fractal del perímetro indicó que el día en que los explantes presentaron
una mayor rugosidad del perímetro fue en el día 15 y los valores del factor elíptico
indican que los explantes presentaron un valor máximo en el día 7. Con el análisis
[1]
micrografías muestran células que podrían estar en la fase de inducción y
órganos.
[2]
II. ABSTRACT
acid (IAA), from leaf explants, were studied. Images were captured of each
Changes in color, shape and size in both processes were observed, stages of
development were established for histological analysis, selected days after sowing
dimension and elliptic factor. Using data of area and perimeter, two stages were
identified, slow growth stage until the 7th day and a second stage from the 8th to
the 20th day, showing a fast growth. Fractal dimension of perimeter indicated the
highest explants roughness on the 15th day, and the elliptic factor indicated that the
differentiation process showed characteristic meristem like cells and mature cells
organogenesis process showed cells that might be in the induction phase and
[3]
III. INTRODUCCIÓN
los grupos de auxinas y citocininas, ya que regulan en gran medida los procesos
aproximadamente un 91% del total de los carotenoides, estos han sido empleados
[4]
Actualmente no se han realizado, estudios cualitativos ni cuantitativos de los
objetivo de este trabajo fue analizar los cambios que ocurren en explantes foliares
que es una técnica que presenta muchas ventajas, entre ellas que es una técnica
[5]
IV. REVISIÓN DE LITERATURA
individuo completo e idéntico a la planta madre (Fig. 1). En algunos casos, las
como callo, en otros casos, estarán presentes otras estructuras reconocibles como
brotes o raíces. Estas respuestas dependerán del medio de cultivo que se utilice y
[6]
A) B)
C)
[7]
tejidos vegetales cultivados in vitro deben ser similares a los que recibe la planta
en condiciones normales. Sin embargo, los nutrientes del medio son adquiridos a
1999).
tipo de tejido o para una determinada especie vegetal, otros medios pueden ser
utilizados con diversas especies y tejidos, entre los mas utilizados para la
(Gamborg y col., 1968). De manera general, todos los medios de cultivo están
tiamina, entre otras y un agente gelificante que no debe reaccionar con el medio ni
ser digerible por el tejido vegetal, los mas utilizados son el agar y el fitagel. Un
factor importante en los medios de cultivo es el pH, que debe ser ajustado entre
5.5 y 6.0 (Krikorian, 1991; Mroginski y Roca, 1991; Villalobos y Thorpe, 1991;
fitohormonas, los cuales son los encargados de inducir una respuesta en los
explantes.
[8]
4.1.2 Reguladores de crecimiento vegetal (RCV)
Los utilizados mas frecuentemente en los cultivos in vitro son aquellos que
puede observar que con el uso de altas concentraciones de auxinas con respecto
proceso de desdiferenciación del tejido (Fig. 2B) y con una concentración menor
[9]
Figura 2. Respuestas generalmente observadas de los explantes en cultivo in vitro por
1999).
[10]
4.1.2.1 Auxinas
4.1.2.2 Citocininas
yemas axilares haciéndolas brotar. Junto con las auxinas, las citocininas regulan la
división celular, por lo cual el balance entre éstas en un cultivo in vitro suele
col., 1999). Entre las citocininas mas utilizadas se encuentran la zeatina (ZEA) que
llamada callo, ocurre debido a la desdiferenciación del tejido; en este proceso, las
que no todos los callos tienen el potencial para diferenciarse (Pérez-Molphe y col.,
[12]
La regeneración de plantas directamente de los explantes o a partir de callos por
cuando primero se origina tejido calloso y luego se forman los órganos a partir de
éste (Pérez-Molphe y col., 1999). Estos órganos son inducidos a partir de una
[13]
depende de la adición exógena de RCV, en particular de auxinas y citocininas y en
la capacidad del tejido para responder a las señales hormonales (Sugiyama, 1999).
Jarret, 1991).
embriones son estructuras bipolares con un eje radical y uno apical, estas
basilicum L.), orquidea (Phalaenopsis amabilis), entre otras (Saji y Sujatha, 1998;
Singh y col., 2003; Mandal y Datta, 2005; Gopi y Ponmurugan, 2006 y Chen y
Chang 2006).
que esto depende del material utilizado y del explante empleado, en algunos
trabajos esta reportada la eliminación de la auxina del medio (Saji y Sujatha, 1998),
Las técnicas del CTV han sido utilizadas ampliamente para la propagación a gran
[16]
El cultivo de callos puede ser utilizado como modelo para el estudio de
las condiciones ambientales externas, como la estación del año, sequías, heladas,
hacer más productiva a la planta y esto puede ser realizado a partir del CTV.
estructuras que no pueden ser percibidas a simple vista, para realizar esto
barrido (MEB) (Fig. 3). El MEB permite obtener una imagen aumentada del objeto
[17]
A)
B)
[18]
Martínez-Palacios y col. (2003) y, Chen y Chang (2006) realizaron el análisis
identificaron la presencia de meristemos apicales y las zonas del explante que dan
imágenes esta siendo utilizada como una herramienta útil para la investigación en
biotecnología entre otras, debido a que es una técnica no destructiva y que puede
extraen los objetos, los cuales contienen la información de interés. Para obtener
[21]
México se emplea principalmente con fines ceremoniales durante las festividades
del Día de Muertos (Gommers y Geerligs, 1973) y también son conocidas sus
2000).
de alimentos para aves de corral, con el fin de pigmentar la piel de los pollos y la
yema de los huevos; peces y/o crustáceos para mejorar la calidad y aceptación de
a nivel mundial por mucho tiempo debido al tipo de pigmentos que sintetiza (Del
2000; Ye y col., 2000; Toledo de Oliveira y col., 2004); como el β-caroteno que
protege del daño provocado por los radicales libres, que son los responsables de
[22]
varias enfermedades degenerativas como arteroesclerosis, artritis y
Mohamed y col., 1999; Misra y Datta, 2001; Vanegas y col., 2002 y García-
Chavarría, 2007).
de callo friable y con coloraciones que varían entre amarillo, verde y café.
(1999) y Vanegas y col. (2002) emplearon AIA y BA; Misra y Datta (2001)
[23]
a partir del callo formado (organogénesis indirecta), en el trabajo de Misra y Datta
Algunos de los trabajos reportados han sido encaminados para obtener protocolos
Misra y Datta (2001), realizaron una comparación entre plantas formadas a partir
desarrollo de los embriones somáticos en callos inducidos hacia este proceso, sin
embriones.
distancia y presión, para evaluar la expresión transitoria del gen uid A en callos de
[25]
V. JUSTIFICACIÓN
reconocido las estructuras que acumulan los pigmentos y se tienen las condiciones
[26]
VI. OBJETIVOS
[27]
VII. MATERIALES Y MÉTODOS
Porte Bajo, donado por el Dr. Miguel Ángel Serrato de la Universidad Autónoma
Chapingo.
7.2 Métodos
por 15 minutos, entre cada lavado con etanol y cloro se enjuagaron las semillas
eliminó el exceso de agua secándolas con papel filtro estéril. Las semillas se
[28]
germinación y elongación de las plántulas, las que posteriormente se utilizaron
cempaxúchil
NIKON modelo SMZ 1500) acoplado a una cámara digital (modelo 3CCD marca
[29]
Se capturaron las imágenes de los 90 explantes diariamente durante 20 días, bajo
las mismas condiciones de captura (posición con respecto a un eje, luz, brillo,
Area: indica el espacio que ocupa un objeto. Perímetro: se refiere a la longitud del
contorno del objeto. Factor elíptico: si la relación entre el eje longitudinal mayor
la relación tiende a la unidad, el objeto tiene una forma circular. Dimensión fractal
del perímetro (Dfp): los fractales se caracterizan por que presentan la misma
aspectos que tan irregular es una línea o una superficie; es decir, en términos
prácticos es una medida de la irregularidad; en este caso, del perímetro del objeto
analizado
[30]
A B C
D E F
[31]
Estos descriptores se calcularon utilizando el programa Sigma ScanPro (V 5.0,
en este caso se utilizó papel milimétrico (una división = 1 mm) (Fig. 5), la imagen
es guardada nuevamente y de esta manera está calibrada y sirve para realizar las
mediciones de objetos capturados con el mismo aumento. Con los datos obtenidos
[32]
7.2.4.1 Organogénesis en explantes de hoja
mg/L, y 0.5, 1.0, 1.5 y 3.0 mg/L respectivamente), a partir de lo reportado por
Vanegas y col. (2002), quienes utilizaron 3.0 mg/L de AIA y BA. Los explantes
reportado por Martínez-Pulido y col. (1992), que es la relación que existe entre el
100
permitieron seleccionar los días en los que los explantes sufrieron cambios
0.020 mg/L, partiendo del trabajo reportado por Bespalhok y Hattori (1998), que es
los reportes de Saji y Sujatha (1998), quienes utilizaron ANA y BA para inducir
concentraciones de ANA y BA, las cuales fueron de 0.05, 0.1, 0.2 mg/L y 0.1, 0.5 y
emplearon tres concentraciones de cada regulador, las cuales fueron de 2.0, 4.0,
6.0 mg/L de 2,4-D y 1.0, 2.0 y 5.0 mg/L BA. De cada tratamiento se utilizaron
muestras tetraóxido de osmio (OsO4) al 1% (p/v), para fijar los lípidos presentes en
diluciones seriadas de etanol desde el 10 hasta el 100%, con cada solución las
lavados con soluciones 2:1, 1:1 y 1:2 de etanol absoluto y óxido de propileno (v/v)
realizó la preinclusión en una resina, para lo cual se prepararon soluciones 2:1, 1:1
y 1:2 de óxido de propileno y resina EPON 812 (v/v), se incubó el tejido por 1 h en
nm con una cuchilla de diamante, los cortes se colocaron sobre rejillas metálicas
4% (p/v); una diluida en etanol y otra en agua, las rejillas se dejaron en cada una
distancia en nm.
[36]
VIII. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Vanegas-Espinoza (2003).
medio MS adicionado con 2.0 mg/L de BA y 2.0 mg/L de 2,4-D; de manera similar
días de cultivo; las imágenes fueron capturadas diariamente. Durante los primeros
tres días no se observaron cambios evidentes en el tamaño y forma del tejido; sin
evidente en el día seis, llegando a tener callos con una coloración verde pálido
[37]
3X
3X
0 1 2
4 5 6
3 4 5
4 5 6
3X
2X
3X
0 6 7 8
4 5 6
1X
9 10 11
4 5 6
2X
12 13 14
4 5 6
15 16 17
4 5 6
18 19 20 1X
4 5 6
Figura 6. Fotomicrografías de los explantes de hoja de cempaxúchil
cultivados en medio MS con 2,4-D (2 mg/L) y BA (2 mg/L) durante el
proceso de desdiferenciación. La barra indica 2 mm.
[38]
durante la desdiferenciación del tejido con un decremento acelerado de la clorofila
a y b durante los primeros tres días; para el día 13 el contenido de clorofila en las
hojas disminuyó poco más de cuatro veces con respecto al día cero. Estos
encuentra en las etapas iniciales, por lo que la concentración del pigmento es baja
(Cayón, 2001).
En cuanto al tamaño del explante, a partir del día seis se presentó un incremento
tamaño con respecto al inicial y en el día 12, alcanzó al menos tres veces el
tamaño inicial (Fig. 6). Este comportamiento podría ser producto de la expansión
(Cosgrove, 1997).
[39]
determinaron los siguientes parámetros: área (A) y perímetro (P), factor elíptico
del perímetro fue de 0.30 mm/d. A partir del día ocho, los explantes crecieron con
mayor rapidez, a una velocidad para área de 2.01 mm2/d y para el perímetro 1.00
cinética hasta el día siete puede ser resultado de la adaptación del tejido
sabe que el callo está constituido por una alta proporción de células muy
observó un efecto similar al área; hasta el día siete, el incremento fue marginal
(2.6 mm) mientras que del día 8 al 30 el incremento fue aproximadamente cinco
2
µA= 2.01 mm /d
2
µA= 0.41 mm /d
[41]
Es interesante destacar que desde el día 0 al día 15, el perímetro creció de
manera paralela al área; sin embargo, a partir del día 16 la velocidad con
que se incrementaron los valores para este parámetro es menor con relación a la
del área (Fig. 7). Es decir, conforme aumenta la desdiferenciación del tejido, éste
tiende a incorporar mayor cantidad de agua, haciéndose más turgente y por ende,
el borde del tejido (perímetro), se hace más liso, pudiendo contener una mayor
que coincide con los valores obtenidos a partir del día ocho para área y perímetro
observar que los valores se incrementan desde el día 0 hasta el día 15 de 1.108 a
1.183, lo que indica que durante este periodo de tiempo el borde de los explantes
las células.
[42]
1.09
Dimensión fractal del perímetro (Dfp)
1.08
1.07
1.06
1.05
1.04
10
12
14
16
18
20
0
Tiempo (dias)
Figura 8. Valores para la dimensión fractal del perímetro de los explantes de hoja.
mismo explante
[43]
Esto ocasiona un agrandamiento celular, así como el incremento en la turgencia
de las células (Cosgrove, 1997) y por lo tanto el alisamiento del borde. En 1999,
transcurren los días y que los callos adoptan una forma mas irregular después de
irregularidad en el perímetro ocurrió a los siete días (168 h) coincidiendo con los
vacuolización celular y la incorporación de agua, lo que hace que los tejidos sean
c) Factor elíptico.- Este factor describe que tan elíptico es un objeto, mientras los
elíptico, por el contrario, si se acercan a uno indica que el objeto está adquiriendo
una forma mas redondeada. En la figura 9 se muestran los valores para este
en el día siete, a partir del día ocho los valores van disminuyendo hasta alcanzar
1.355 en el día 20, lo que indica que los explantes van adquiriendo una forma
pueden definir como el desarrollo de los explantes (Fig. 10), ya que durante este
[44]
1.55
1.5
Factor eliptico (FE)
1.45
1.4
1.35
1.3
1.25
0
10
12
14
16
18
20
Tiempo (Dias)
desdiferenciación.
[45]
A B C
)
D E
2 mm
[46]
proceso se pueden apreciar cambios que se dan de forma gradual y progresivo en
distintas concentraciones de AIA (1.5, 3.0 y 5.0 mg/L) y BA (0.5, 1.0, 1.5 y 3.0
mg/L) en medio MS, partiendo del trabajo reportado por Vanegas y col. (2002) en
[47]
En un primer experimento se pudo observar que a concentraciones de 5.0 mg/L de
experimento con concentraciones de 1.5 y 3.0 mg/L para AIA y 0.5, 1.0, 1.5 y 3.0
mg/L para BA, los parámetros que se evaluaron fueron el porcentaje de explantes
que las plántulas utilizadas como fuentes de explante, tenían dos meses de haber
experimentos.
que se obtuvo un mayor porcentaje de explantes con brotes fue con 3.0 mg/L de
AIA y 0.5 mg/L de BA (58%) (Tabla 1), para el número de brotes por explante y la
CFB la mejor combinación fue la de 3.0 mg/L de AIA y 1.5 mg/L de BA con valores
los explantes forman la mayor cantidad y tienen una mayor eficacia para la
3.0 mg/L de AIA y 3.0 mg/L de BA es en la que obtienen mejores resultados para
la formación de explantes con brote con un 69.4%, para el número de brotes por
explante y la CFB, la mejor combinación fue la de 1.0 mg/L de AIA y 3.0 mg/L de
valores más altos para el número de brotes por explante y para la CFB.
[48]
Tabla 1. Efecto del AIA y el BA sobre la producción de brotes a partir de explantes
de hoja de cempaxúchil
[49]
Se pudo observar claramente la formación de los brotes a los diez días para todas
BA y 1.5-1.0 mg/L para AIA y BA, los brotes estaban muy desarrollados y se
los brotes eran pequeños y aun no estaban muy desarrollados (Fig. 11). Vanegas
comparación con los explantes expuestos al medio solo nueve días. En este
para los siguientes experimentos, los explantes se expusieron solo diez días al
medio.
con formación de brotes, por lo que se eligió la concentración de 3.0 y 0.5 mg/L de
AIA y BA debido a que en esta combinación, antes de los diez días que duró el
explantes sembrados.
[50]
A
[51]
Una vez determinada la combinación de reguladores de crecimiento en la que la
de los brotes (Fig. 12).Se pudo observar que a partir del primer día en que los
centro del explante, en el día cinco se logró apreciar el crecimiento del explante de
casi el doble con respecto al tamaño inicial y la curvatura que adquirió en el primer
día se hace mas evidente; para el día seis se comenzó a observar la formación de
día siete se desarrollaron en brotes. En los días siguientes, estos brotes siguieron
creciendo junto con la aparición de callo en toda el área del explante (Fig. 12). Las
los que los cambios morfológicos fueron mas evidentes para realizar el análisis
fueron 0, 4, 7 y 9 después de la siembra (Fig. 13), los cuales coinciden con los
[52]
3X
0 1 2
2X
3 4 5
6 7 8
1X
9 10
mm.
[53]
A B
C D
2 mm
[54]
8.4.2 Embriogénesis somática en explantes de hoja y callo
Bespalhok y Hattori (1998), Saji y Sujatha (1998), Mandal y Datta (2005), quienes
utilizadas (Fig. 14). A los 12 días se apreció que las burbujas que antes eran color
previamente; a los 14 días los explantes presentaron una gran parte del tejido con
apreciar que las estructuras se necrosaron (Fig. 14). Por la forma de las
[55]
TDZ (mg/L)
8 días
15 días
21 días
[56]
repitió utilizando hojas cotiledoneales, las cuales se emplearon debido a que, por
ser tejido más joven no contienen compuestos fenólicos que son los que pudieron
estar promoviendo la oxidación; sin embargo, los resultados fueron los mismos
mantuvieron durante más de un mes sin presentar oxidación, sin embargo, éstas
parte del callo que estuvo en contacto directo con el medio (Fig. 16).
quienes utilizan 0.10 mg/L de ANA y 0.50 mg/L de BA, para este ensayo se
probaron dos concentraciones mas: 0.05 y 0.20 mg/L para ANA y 0.10 y 1.00 mg/L
para BA.
[57]
A
Figura 15. Explantes de hoja en medio MS adicionado con TDZ (0.020 mg/L) y
[58]
Figura 16. Formación de radículas en explantes de callo después de 21 días
[59]
En los explantes de hoja, se logró apreciar la formación de raíces para todas las
1.00 mg/L de BA y 0.10 mg/L de ANA-1.00 mg/L de BA, se formaron raíces en los
bordes del explante, y hubo una mayor formación de éstas en la que se empleó
una mayor concentración de ANA (Fig. 17B y D). Los callos desarrollados con las
amarillo.
(2005), quienes utilizaron 5.0 mg/L de 2,4-D y 3.0 mg/L de BA, para este ensayo
se probaron dos concentraciones mas: 4.0 y 6.0 mg/L de 2,4-D y 2.0 y 5.0 mg/L de
D (4.0, 5.0 y 6.0 mg/L) y BA (2.0, 3.0 y 5.0) no hubo crecimiento de alguna
[60]
A B
C D
Figura 17. Raíces formadas en explantes de hoja y callo en medio con ANA y BA.
Explantes de hoja (A) y callo (B) en 0.05 mg/L de ANA y 1.00 mg/L BA. Explantes de
hoja (C) y callo (D) en 0.10 mg/L de ANA y 1.00 mg/L BA, B) 0.10 -1.00 mg/L de ANA y
BA.
[61]
A
Figura 18. Explantes de hoja y callo en medio MS con 2,4-D (6.0 mg/L) y BA (2.0
explantes de callo.
[62]
8.5 Análisis histológico del proceso de desdiferenciación
Una vez seleccionados los días en que los explantes sufrían cambios notables en
En el día cero (Fig. 19A) se observó tejido característico del mesófilo, donde se
intercambio gaseoso (Bidwell, 1999) y una pared celular muy gruesa (Fig.19D) que
define el tamaño y la forma de las células (Segura, 2000). En el día cuatro (Fig.
formados por un núcleo central cristalino rodeado por un "manto pastoso” (20B y C;
tamaño superior a los 2 µm (Fig. 21C), este organelo se caracteriza por tener
[63]
A) B)
a
cl
2 mm
pm
C) D)
ps
ec
pc
ps
ps
100 nm
re
v
2 mm
C)
C)
cl a
a
m
[65]
A) B)
a
v n
n
v
a
v
cl a
C) D)
pc
v pc
lm
lm
m m
v
re
lm
v v
[66]
distintas formas tamaños y variar la composición de su contenido dependiendo de
del volumen total (Salisbury y Ross, 1992; Bidwell, 1999; Marty, 1999). Después
paredes bien definidas y se logró diferenciar la lámina media y los espacios entre
las células se hicieron más visibles (Fig. 21D). Para el día diez (Fig. 22A), se pudo
diferenciar células de mayor tamaño formadas por una sola vacuola o el conjunto
de varias que ocupaban gran parte del espacio (Fig. 22B y C), en un tejido
pequeñas, que aumentan de tamaño y se fusionan para formar una sola vacuola a
medida que la célula va creciendo y madurando (Marty, 1999), esto sugiere que
células maduras, una sola vacuola de gran tamaño. Se observó que las células
tuvieron formas mas ovaladas o irregulares; en estas últimas, los organelos como
entre las células (Fig. 22D y E). Para el día 15 se pudieron apreciar grandes
(Fig. 23).
[67]
A)
2 mm
B)
v pc C) pc
v
v 2 µm
3)
D) ei E)
v
V
V V Cl v
v
n v ei Cl
a cl ei v v
ei
a
ei
10 µm
[68]
A)
2 mm
B) v v C)
v
ec
cc
v
v
v v
pc pc
c
l n
3)
3) ec
D) E)
E)
cl
v a m
a
m
m
ec
pc
lm
v a
a a
cl
a
m
n
v
re
[69]
Los resultados obtenidos en este trabajo indicaron que durante el proceso de
pasa el tiempo, se fusionaron hasta formar sólo una de gran tamaño, lo que podría
célula presentó una sola vacuola que ocupaba la mayor parte del espacio, era una
jóvenes o de tipo meristemático (Litz y Jarret, 1991). Las células inmaduras están
formadas por paredes primarias que son las que permiten; al disminuir su rigidez,
(Cosgrove, 2000). Este fenómeno puede estar inducido por la adición de las
celular (Del Pozo y col., 2005). El aumento del tamaño de la vacuola incrementa la
importante que el explante utilizado para inducir el proceso sea tejido joven, ya
que esta reportado que la edad fisiológica del explante es importante para tener
una mejor respuesta, por que en este tipo de tejidos se encuentran células en
Roberts, 1982).
[70]
Algunos de los resultados de este trabajo coincidieron con lo reportado por Orbán
reportaron que entre los siete y nueve días, los organelos dejan de ser visibles y
datos obtenidos del tratamiento de imágenes: perímetro (P), área (A), dimensión
fractal del perímetro (Dfp), el factor elíptico (FE); y, las micrografías capturadas de
grado de desdiferenciación se hace más evidente. Para el día 15, el área aumentó
casi cinco veces y el perímetro aumentó poco más del doble con respecto al
tamaño inicial del explante. Esta característica indica que el tejido va aumentando
fractal del perímetro, se pudo observar que los explantes presentaron en el día
cero valores de 1.05 y para el día 15 de 1.08, lo que indica que el tejido va
adoptando una mayor irregularidad para el día 15, lo que coincide con el aumento
grado de desdiferenciación del tejido, debido a que los explantes van adquiriendo
A)
2 mm
P (mm)= 12.2 Df=1.05
2
A (mm )= 5.3 FE=1.414
B)
2 mm
P (mm)= 16.0 Df=1.06
2
A (mm )= 8.5 FE=1.475
C)
2 mm
D)
2 mm
[72]
Con el análisis histológico mediante MET se pudieron observar cambios en las
acuerdo con algunos autores (Litz y Jarret, 1991; Bidwell, 1999), es necesario para
que las células puedan rediferenciarse y formar órganos ya que funciona como
[73]
A)
2 mm
B) C)
ei v
n
v
v
n v
v
m
D) E)
ei
a a
v
a ei
cla v v n v
cl
pc
pc
a
cl 2µm
v
v
22µm
µm
v
[74]
de desdiferenciación, inducido por la adición de los RCV al medio. Es en esta
etapa donde las células se hacen competentes para formar los llamados
determinado.
inducido en medio MS adicionado con 3.0 mg/L de AIA y 0.5 mg/L de BA. En los
pasaron los días, las células tomaron formas irregulares con paredes gruesas
[75]
A)
2 mm
B) C)
ei
v
pc
v
10 µm 2 µm
D) E)
ei
pc
v
v n
[76]
1) 2) 3)
A)
2 mm
B)
2 mm
C)
2 mm
[77]
Mediante la captura de imágenes, en este trabajo, fue posible hacer un
observadas por MET para conocer la organización celular y relacionarla con los
las bases para identificar las etapas en que las células se encuentren competentes
[78]
VIII. CONCLUSIONES
observar dos etapas, una de lento crecimiento y una segunda etapa donde
[79]
Se observó a simple vista durante la formación de órganos, la disminución
[80]
IX. PERSPECTIVAS
cempaxúchil, con la finalidad de potenciar sus pigmentos y/o algún otro metabolito
a callo u órganos.
[81]
VII. BIBLIOGRAFÍA
Bidwell, R. G. S. 1999. Introduction: the organization of plants and plants cells. En:
Introduction to Plant Physiology. Hopkins, W. G., Ed. John Wiley &
Sons, Inc., Estados Unidos de América. pp 1-19.
[82]
Coenen, C. y Lomax, T. L. 1997. Auxin-cytokinin interactions in higher plants: old
problems and new tools. Trends in Plant Science Reviews 2:351-356.
Cosgrove, D. J. 1997. Assembly and enlargement of the primary cell wall in plants.
Annual Review of Cell and Developmental Biology 13:171–201.
Cosgrove, D. J. 2000. Expansive growth of plant cell walls. Plant Physiology and
Biochemistry 38:109-124
[83]
La modificación genética como alternativa. Revista Fitotecnia
Mexicana 30:109-118.
Gaspar, T.; Kevers, C.; Penel, C.; Greppin, H.; Reid, D. M. y Thorpe, T. A. 1996.
Plant hormones and plant growth regulators in plant tissue culture. In
vitro Cellular and Developmental Biology 32:272-289.
[84]
Guzmán-Maldonado, S. H. y Paredes-López, O. 1998. Functional products of
plants indigenous to Latin America: Amaranth, quinoa, common beans,
and botanicals. En: Functional Foods. Biochemical and Processing
Aspects. Mazza, G., Ed. Technomic Publishing Lancaster,
Pennsylvania, U. S. A.
Hof, K.; West, C.; Weststrate, J. y Hautvast, J. 2000. Dietary factors that affect the
bioavailability of carotenoids. Journal of Nutrition 130:503-506.
[85]
Mandal, A. K. A.; Datta, S. K. 2005. Direct somatic embryogenesis and plant
regeneration from ray florets of chrysanthemum. Biologia Plantarum
49:29-33.
[86]
Universidad Católica de Occidente Santa Ana, El Salvador, Centro
América. 2ª publicación, junio-septiembre de 2007.
Murashige, T. y Skoog, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays
with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum 15:472-497.
Orbán, N.; Boldizár, I. y Bóka, K. 2007 Structural and chemical study of callus
formation from leaves of Rubia tinctorium. Biologia Plantarum 51:421-
429.
Orbe-Rogel, J. C. 2009. Evaluación cuantitativa de la expresión transitoria del gen
uidA en callos de cempaxúchil (Tagetes erecta) por biobalística. Tesis
de Licenciatura. Instituto Tecnológico de Zacatepec. Zacatepec,
Morelos.
[87]
Pérez-Molphe, E. M.; Ramírez-Malagón, R.; Nuñez-Palenius, H. G. y Ochoa-Alejo,
N. 1999. Introducción al Cultivo de Tejidos Vegetales. Universidad de
Aguascalientes, Aguascalientes, México.
Roodembury, A.; Leenen, R. y Hof, K. 2000. Amount of fat in the diet affects
bioavailability of lutein esters but not of alfa-carotene, beta-carotene,
and vitamin E in humans. American Journal of Clinical Nutrition
71:1187-1193.
[88]
Rueb, S.; Leneman, M.; Schilperoort, R. A. y Hensgens, L. A. M. 1994. Efficient
plant regeneration through somatic embryogenesis from callus induced
on mature rice embryos (Oryza sativa L.). Plant Cell, Tissue and Organ
Culture 36:259-264.
Singh, N. D.; Sahoo, L.; Sarin, N. B. y Jaiwal, P. K. 2003. The effect of TDZ on
organogenesis and somatic embryogenesis in pigeonpea (Cajanus
cajan L. Millsp). Plant Science 164:341-347.
Toledo de Oliveira, T.; Nagem, T. J.; Rocha da Costa, M.; Marciano da Costa, L.;
Magalhaes, N. M.; Stringheta, P. C.; Queiroga de Lima, E.; Kling de
Morales, G. H. y Da Silva V. H. 2004. Propiedades biológicas de los
tintes naturales. Ars Pharmaceutica 45:5-20.
[89]
Van den Berg, H.; Faulks, R.; Granada, H. F.; Hirschberg, J.; Olmedilla, B.;
Sandmann, G.; Southon S. y Stahi, W. 2000. The potencial for the
improvement of carotenoid levels in foods and their likely systemic
effects. Journal of the Science of Food and Agriculture 80:880-912.
Ye, X.; Al-Babili, S.; Kloti, A.; Zhang, J.; Lucca. P.; Beyer, P. y Potrycus, I. 2000.
Engineering the provitamin A (β-carotene) biosynthetic pathway into
(carotenoid free) rice-endosperm. Science 287:303-305.
[90]