EXPOSICIÓN HOMENAJE A
D. PEDRO RODRIGUEZ PÉREZ

HIS TOLOGÍA
DESCUBRIENDO LO QUE ES LA HISTOLOGÍA
Instrumentos de observación en biología Actividad nº 1
Introducción :
Las limi
limitac
tacione
ioness del ojo humano hacen
hacen nece
necesar
saria
ia la utiliz
utilizaci
ación
ón de diversos
diversos
instrumentos que amplifiquen los objetos que miramos. De este modo podemos
comenza
comenzarr a conoce
conocerr estruct
estructuras
uras biológi
biológicas
cas imposi
imposible
bless de observar
observar a simple
simple
vista.

Supone
Suponemos
mos que sabes utilizar
utilizar la lupa, pero es probable que no tengas la misma
destreza en el uso del microscopio. Creemos que puede serte útil una sencilla
explic
explicación
ación del fundamento teórico, así como unas normas elementales
elementales sobre el
uso del microscopio.

Material necesario :
• Lupa simple.
• Estéreomicroscopio (Lupa binocular).
• Microscopio.

Objetivo:
El objetivo de esta actividad es que conozcas los fundamentos básicos de los
instrumentos de observación más usuales y te ejercites en su manejo. Además
expondremos brevemente los a aspectos
spectos teóricos del microscopio electrónico y su
aplicación en biología.
 

1.- LA LUPA
En óptica se conoce con el nombre de microscopio simple o lupa a
cualquier lente que amplifique los objetos que se ven a través de ella.

Todas ellas tienen forma biconvexa o plano-convexa y actúan como lentes

convergentes produciendo una imagen virtual y mayor que el objeto.

Las lupas se manejan orientando la cara menos curvada hacia el objeto y

colocándola tanto más próxima a él cuanto mayor se quiera la imagen.

El aumento viene indicado, normalmente, por el fabricante por medio de

un nú
núme
mero
ro seguid
seguidoo de
dell signo
signo x (por
(por ejem
ejempl
plo,
o, 10 x signi
signififica
ca tama
tamaño
ño
aumentado diez veces).

Con las lupas se puede llegar a obtener unos 50 aumentos, pero se

pu
pued
eden
en alca
alcanz
nzar
ar ha
hast
sta
a los
los 100
100 si se usan
usan sist
sistem
emas
as fo
form
rmad
ados
os po
por 
r 
asociación de varias lentes.

Ex
Exis
iste
ten
n mult
multititud
ud de model
modelos
os y varie
varieda
dades
des,, qu
quee se dife
difere
renc
ncian
ian en la
montura. Hay lupas de campo, de mesa, cuentahílos (llamadas así porque
se usan para detectar defectos de fabricación en las telas), etc.

Las lupas eran ya conocidas en la civilización asiria y fueron muy usadas

por los romanos, pero su gran impulsor
impulsor fue el holandés Leeuwenh
Leeuwenhoek,
oek, en
el siglo XVII. Con lentes fabricadas por él mismo, realizó multitud de
observaciones y se le reconoce el mérito de ser el primero en observar 
protozoos y bacterias.

Ejemplos de lupas

2.- ESTEREOMICROSCOPIO O LUPA

LUPA BINOCULAR
 

La lupa binocular , en realidad, se trata de una modificación de la lupa,

que nos ofrece grandes posibilidades para la observación de los pequeños
detalles morfológicos en animales y vegetales.

 Al poseer un gran campo de observación, permite una visión de conjunto

del objeto, pudiendo usarse incluso para ver pequeños seres vivos en su
med
medio
io ambient
ambiente.
e. La sensaci
sensación
ón de rel
relieve
ieve o visión
visión estereo
estereoscó
scópica
pica,, se
consigue porque la lupa binocular tiene dos sistemas ópticos diferentes,
que aportan a cada ojo una imagen por separado con la convergencia
necesaria para producir una visión perfecta.
Ejemplos de estereomicroscopio o lupa binocular 

3.- EL MICROSCOPIO
 

El microscopio
microscopio óptico es un instrumento destinado a la observación de
cuerpos transparentes. Está formado por la combinación de dos sistemas
de lentes, uno de ellos próximo al ojo del observador (ocular) que actúa
como una lupa y otro próximo al objeto, llamado objetivo.

El aume
aumento
nto tota
totall será,
será, po
porr tant
tanto,
o, igua
iguall al pr
prod
oduct
ucto
o de los
los aume
aument
ntos
os
conseguidos por cada una de las dos lentes individuales. Los aumentos
obtenidos por el microscopio pueden ser del orden de unos 2500 X, y
dependen fundamentalmente del objetivo. Para observaciones histológicas
corrientes nos basta con usar entre 500 X y 1000 X.

Una característica muy importante del objetivo es el llamado  poder de

resolución, que mide la capacidad
capacidad de ver separados dos puntos próximos.
Expresa la capacidad del objetivo para distinguir detalles muy finos y es
independiente del ocular empleado.

Co
Comomo el micro
microsc
scop
opio
io usa
usa luz
luz tr
tran
ansm
smititid
ida,
a, los
los obje
objeto
toss qu
que e vayam
vayamos
os a
observar deberán ser extrao
extraordinaria
rdinariamente
mente delgados y susceptibles
susceptibles de que
la luz los atraviese y llegue, pasando por una serie de lentes, hasta nuestro
ojo. La observación
observación microscópica
microscópica de los tejidos obliga normalmnormalmente
ente a la
prep
prepar
arac
ació
ión
n de cort
cortes
es de espe
espeso
sorr vari
variabable
le segú
segúnn el tipo
tipo de trab
trabaj
ajo
o
propuesto, para lo cual se requiere un instrumental apropiado (micrótomos)
y una preparación previa del material (englobar en parafina, celoidina,
congelación del material, etc).
 

Por otro lado, debido a que las est estruct

ructuras
uras bio
biológ
lógica
icas
s son inco
incolora
lorass y
carecen del contraste adecuado para poder distinguirlas, es  preciso aplicar 
colorantes que tiñan los objetos que se vayan a observar. La observación
directa
directa del mat
materi
erial
al citoló
citológico
gico se encuent
encuentrara notable
notablement
mentee enrique
enriquecid
cida
a
cuando dicho material es tratado previamente con ciertos reactivos, tiñendo
o diferenciando selectivamente ciertas estructuras.

La tinción vital, por colorante

colorantess que no matan a la célula, y la tinción
tinción previa
fijación, son los dos métodos clásicos empleados en citología, siendo el
seg
segund
undo
o de mámáss amampl
plia
ia ap
aplilica
caci
ción
ón pe
pero
ro de re
resul
sulta
tado
doss a veces
veces más
más
imprecisos dadas las posibles alteraciones de las formaciones celulares.

Para hacer la  preparación se dispone el material sobre una placa de vidrio

rectangular  (portaobjetos o  porta), se fija, ija, se tiñe
iñe en func
funció
ión
n de la
obser
observac
vació
ión
n que vayam
vayamosos a rereal
aliz
izar 
ar   y se colo
coloca
ca en
enci
cima
ma otro
otro vidr
vidrio
io
cuadrado, muy fino (cubreobjetos o cubre). Ahora ya podemos situar el
porta sobre la platina, mirar por el ocular y enfocar (el tornillo macrométrico
permite el enfoque grosero mientras que el micrométrico permite   el más
fino).

Se pueden mejorar las características de estos microscopios corrientes

adaptándoles una serie de dispositivos especiales que ofrecen mejores
resultados para determinadas observaciones. En este sentido, destacan los
llamados objetivos inmersión. Estos consiguen un mayor poder de
objetivos de inmersión.
resolución al aumentar el índice de refracción del medio existente entre la
preparación y el objetivo, para lo cual se coloca sobre el cubre una gota de
aceite de inmersión; que es un líquido con alto índice de refracción. Se baja
cuidadosamente el objetivo hasta sumergirlo en la gota de aceite y, a
continuación, se enfoca.
 

También existen otros tipos de microscopios: microsc

microscopio
opio de contra
contraste
ste de
fases (muy usado para preparaciones en fresco, sin teñir, de células y
diverso
diversoss microor
microorgani
ganismo
smos);
s); micros
microscopi
copio
o de polari
polarizaci
zación
ón (em
(emple
pleado
ado en
petrología), etc.

Ejemplos de microscopios
 

Ejemplos de micrótomos

4.- MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

Dic
Dicho
ho micros
microscopi
copioo utiliz
utiliza
a una corrien
corriente
te de electrones generada en un
electrones
cátodo caliente, dentro de un tubo en el que se ha hecho el vacío. Estos
electrones son acelerados por un potencial de alta tensión y terminan
produciendo una imagen visible al chocar con la cara interna, fluorescente,
de un
una
a pant
paCon
fotografía. ntal
alla
lael seme
semeja
jant
nte
e ala
microscopioalelectrónico
a de un telev
tese
levis
isor
or,, oa dando
llegan dando luga
lugar
resolver r a un
detallesuna
dea
pocos Angstroms (1A es igual a 10 -8 cm, o sea una diezmilésima de micra),
sobrepasándose el millón de aumentos.

Una de las exigencias de este microscopio es que las muestras precisan

de un
unaa técn
técnic
ica
a de prep
prepar
arac
ació
ión
n mu
muyy comp
compleleja
ja,, sólo
sólo al alca
alcanc
nce
e de
especialistas. En primer lugar, debido al escaso poder de penetración de
los ele
electro
ctrones
nes,, las mue
muestr
stras
as han de ser extraor
extraordin
dinaria
ariament
mente
e delgada
delgadass
(menos de 0,5 micras). Para solventar este problema hay que cortar las
células en capas de 30 a 50 nanómetros (el nanómetro es la milésima de
micra), con ultra micrótomos de gran perfección.

Esto requiere impregnar previamente el material biológico con diversas

 

resinas sintéticas que, al solidificar, forman un bloque susceptible de ser 

cortado de forma adecuada. Otra característica es que, para colocar la
mues
muestr
tra
a en un tubo
tubo de alto
alto vací
vacío,
o, ha de ser
ser prev
previa
iame
ment
nte
e fija
fijada
da y
deshidratada.

Una vez obtenida la imagen es necesario interpretarla, lo que no siempre

es fácil. Solamente la comparación repetida entre las imágenes ofrecidas
por
por el micro
microsc
scop
opio
io óptic
ópticoo y las
las del
del elec
electr
trón
ónico
ico,, perm
permititen
en inte
interp
rpret
retar 
ar 
correctamente los detalles de este último.

En el mic
microsc
roscopi
opio
o elec
electró
trónic
nico
o de barr
barrido
ido (sca
(scanni ng) los ele
nning) electro
ctrones
nes no
atraviesan la muestra, sino que chocan contra la superficie de ésta, la cual,
a su vez, emite electrones que se recogen en forma de puntos en una
pantalla. Da lugar a imágenes tridimensionales de gran detalle, que nos
ofrecen nuevas perspectivas del objeto.

Ejemplos de MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

 
 

5. APÉNDICES
 

En los siguientes esquemas se establece una comparación entre los aumentos de cada uno de
los microscopios descritos