I.

Bacteriofagos como indicadores de

contaminación ambiental
A. Origen de la virología
- 1898, Martinus W. Beijerinck, definió el agente infeccioso como un Contagium
vivum fluidum.
- Luego de que descubrió que el virus pasa fácilmente a través de un filtro, le hizo
pensar que eran más pequeños que las bacterias.
- observó que el agente infeccioso no puede ser cultivado, excepto en presencia
de organismos vivos.
B. Conceptos generales del los virus
a. Los virus se componen de ácido nucleico rodeado por una capa protectora
de proteína llamado cápside.

- El ácido nucleico de un virus lleva toda su información genética.

b. Los virus son parásitos intracelulares obligados, requiriendo completar su
ciclo de replicación a expensa de un organismo huésped.
c. Los virus atacan a todos los seres vivos, incluyendo:
i. bacterias, arqueas y eucariotas.
d. Los virus son agentes infecciosos que no son considerados organismos,
principalmente, por que son acelulares.
i. Clave: no tienen DNA, no tiene citoplasma, sobre del huésped,
reproducción a expensas de otros y no hacen procesos metabólicos.
e. Además, solo poseen un tipo de ácido nucleico y no poseen mecanismos
relacionados a la síntesis de proteínas.
 f. Para que el virus pueda infectar una célula huésped, la superficie externa del
virus tiene que interactuar químicamente con los receptores específicos de la
superficie de la célula.
C. Clasificación
a. Los criterios para la clasificación taxonómica son:
i. morfología
ii. tipo de ácido nucleico y cantidad de hebras
iii. con envoltura o no
iv. modo de replicación
v. organismos huésped
vi. tipo de enfermedad que causan
D. Virus y cuerpos de agua
a. Los virus son los más abundantes en sistemas marinos (Munn, 2004).
b. Son los principales parásitos de sistemas de agua dulce (Siege, 2005)
E. ¿Qué virus podemos obtener a través del consumo de agua?
a. Hepatoviruses- Hepatitis A
i. Material genético de RNA
ii. Se puede adquirir al consumir moluscos (almejas, ostras y mejillones)
crudos.
iii. La infección no causa una enfermedad hepática crónica, pero puede
causar síntomas debilitantes e insuficiencia hepática aguda que a
menudo es fatal.
iv. Rotavirus (RNA)- Es la causa principal de gastroenteritis infantil en
todo el mundo.
v. Norovirus (RNA)- Agente causal más común de gastroenteritis en el
mundo.
vi. Hepatitis E (RNA)- La infección no causa una enfermedad hepática
crónica, pero en mujeres embarazadas puede tener una alta
mortalidad.
F. Bacteriófagos
a. Los bacteriófagos fueron descubiertos en el 1917 por Felix d’ Herelle.
b. Para entrar en una célula, los fagos se acoplan a receptores específicos en la
superficie de la bacteria.
c. La capside no entra a la célula del huésped
 d. Los bacteriófagos son utilizados como indicadores ambientales al evaluar
la calidad del agua y/o la eficacia de los tratamientos de aguas residuales.
e. Por ejemplo, se utilizan para detectar la presencia de indicadores fecales
tales como Escherichia coli.
f. En otras palabras, donde hay colifagos, hay bacterias coliformes.
G. ¿Cómo se detectan los bacteriófagos en una muestra
a. El método clásico para enumerar fagos se basa en la formación de placas
de lisis en césped de huéspedes cultivados en platos Petri con agar.
b. Plato verde con los puntitos (lisos)
H. Concentración de bacteriofagos
a. Cada placa se designa como una Unidad Formadora de Placa (PFU).
b. Los PFU se utilizan para cuantificar el número de fagos en el cultivo.
i. 𝑷𝑭𝑼/𝒎𝑳 = 𝑵𝑷 (1/FD)
c. •Solo utilice la formula si tiene entre 30 a 300 placas.
d. Obtenga un promedio de PFU si tienes mas de un plato dentro del rango.
e. Si el número es mayor que 300 PFU se calcula y se identifica como TNTC.
f. Si es menor que 30 PFU se identifica como TFTC.

II. Hongos asociados a la filósfera de plantas

acuáticas

A. ORIGEN DEL REINO FUNGI

 a. 1957, Whittaker propuso los cuatro reinos.
b. Su mayor argumento, los hongos no podían estar clasificados junto a las
plantas, ya que no eran fotosintéticos.
c. Desde hace unos años, la filogenia del reino Fungi está en constante cambio.

B. CARACTERÍSTICAS
a. Su pared celular esta compuesta de quitina y glucano.
b. Son parasíticos o saprófitos.
i. Los saprófitos son aquellos que se alimentan de materia orgánica en
descomposición
c. Pueden ser unicelulares o multicelulares.
i. Unicelulares son las levaduras.
ii. Multicelulares son los filamentosos o mohos.
C. LEVADURAS
a. Las levaduras se dividen asexualmente por gemación.
b. Son 5 veces mas grandes que las bacterias.
D. FILAMENTOSOS
a. Los hongos filamentosos se reproducen sexual y/o asexualmente por
esporas.
b. Las esporas germinan y dan lugar a filamentos llamados hifas.
c. Las hifas son cilíndricas que pueden tener tabiques (septadas) o no tenerlos
(cenocíticas).
d. Además, las hifas pueden presentar pigmentos o no presentarlos (hialinas).
e. Las hifas se entrelazan para formar el micelio.
 f. El micelio: colonización, anclaje, asimilación y reproducción.
E. REPRODUCCIÓN
a. La reproducción sexual ocurre por fusión de hifas.
b. Como resultado tiene la producción de esporas sexuales con recombinación
genética.
c. Las esporas sexuales incluyen las zoosporas, zigosporas, ascosporas y
basidiósporas.
d. La reproducción asexual puede producir:
i. Conidiósporas- se desarrollan a partir del conidióforo.
ii. Esporangiosporas- se producen en un saco llamado esporangio
presente en el esporangióforo.
iii. Zoosporas- se desarrollan a partir del zoosporangio.
F. BASIDIOMYCOTA
a. Los Basidiomycota no son abundantes en cuerpos de agua dulce.
b. Se encuentran en la materia orgánica presentes alrededor de arroyos.
c. Son mas abundante en ambientes marino, comparado con ambientes de
agua dulce.
d. Llevan solo reproducción sexual.
e. Tienen hifas septadas.
G. ASCOMYCOTA
a. Son los más abundantes en sistemas marinos, pero no así en cuerpos de
agua dulce.
b. Lleva reproducción sexual y asexual.
c. Su hifas son septadas.
d. Aquí se encuentra parte del antiguo phylum de los Deuteromycota.
i. Aspergillus
ii. Penicillium
H. Mucoromycota
a. Se reproducen sexual y asexualmente.
b. Se caracterizan por ser simbiontes de plantas, descomponedores de restos
de plantas, patógenos de plantas y raras las interacciones con animales
(infecciones oportunistas).
c. Las hifas tienden a ser cenocíticas, excepto por la delimitación de las
estructuras reproductivas.
d. La mayoría de los grupos antes pertenecían al extinto phylum Zygomycota y
Glomeromycota.
e. Ejemplos
i. Glomeromycotina- Glomus
ii. Mortierellomycotina- Mortierella
iii. Mucoromycotina- Rhizopus
I. Zoopagomycota
a. La reproducción puede ser sexual o asexuales, similar a los Mucoromycota.
b. Zoopagomycota es el primer clado divergente del antigua phylum
Zygomycota.
c. Comprende tres subphylum en las que las asociaciones con animales forman
un tema ecológico común.
d. Diversas especies de varios linajes son micoparásitos.
e. Son difíciles de cultivar.
f. Los haustorios son producidos por algunos de los patógenos.
g. Las hifas pueden estar compartimentadas por tabiques.
h. Ejemplos
i. Entomophthoromycotina- Entomophthora
ii. Kickxellomycotina- Smittium
iii. Zoopagomycotina- Zoophagus
J. BLASTOCLADIOMYCOTA
a. La reproducción puede ser sexual o asexuales.
b. Son saprótrofos, así como parásitos de hongos, algas, plantas e
invertebrados.
c. Pueden ser anaeróbicos facultativos en entornos con escasez de oxígeno y
se encuentran en mayor número en aguas templadas.
d. Los saprótrofos se encuentran fácilmente en las frutas en descomposición y
la hojarasca.
e. Todos los miembros de este phylum tienen zoosporas.
K. NEOCALLIMASTIGOMYCOTA
a. Antes pertenecían a los Chytridiomycota.
b. Reproducción similar a los Chytridiomycota.
c. Son anaerobios obligados de ambientes anaeróbicos terrestres, acuáticos
y parte del microbioma de los rumiantes y el intestino posterior de la mayoría
de los herbívoros mamíferos grandes, incluidos todos los animales de granja.
d. Carecen de mitocondrias, pero contienen hidrogenosomas.
e. Son potentes productores de enzimas necesarias para degradar la celulosa.
f. Su propio metabolismo del carbono se basa en la fermentación de glucosa a
acetato, lactato, etanol e hidrógeno.
g. El organelo hidrogenosoma genera ATP y parece ser una mitocondria
degenerada.
L. MONOBLEPHARIDOMYCOTA
a. Saprófitos que viven sobre ramas sumergidas.
b. Características similares a Neocallimastigomycota.
M. CHYTRIDIOMYCOTA
a. Son organismos morfológicamente simples.
b. Son de ambientes acuáticos como arroyos, estanques, estuarios y sistemas
marinos.
c. Viven como parásitos de algas y organismos planctónicos.
d. Se encuentran en bosques terrestres, suelos agrícolas, desérticos y en
pantanos como saprótrofos en sustratos difíciles de digerir, como granos de
polen, quitina, queratina y celulosa.
e. Algunos son parásitos obligados de plantas vasculares.
f. Se reproducen por Zoosporas.
g. En el caso de los parasíticos, pueden ser endobióticos o epibióticos.
 N. MEDIO DE CULTIVO
a. Potato Dextrose Agar
i. Compuesto de infusión de papa deshidratada y de dextrosa.
ii. Posee pH ácido que inhibe el crecimiento bacteriano.
iii. El medio permite observar la pigmentación de las hifas y promover
el desarrollo de esporas.
iv. Se incuba a temperatura ambiente (25°C)por un periodo mínimo de
72hrs.

III. CALIDAD DE AGUA

A. Definición:
● Calidad de Agua: Es una medida de la condición del agua en relación con los
requisitos de una o más especies bióticas. (Johnson et al. (1997).
● Determinar el agua: Se debe analizar los parámetros fisicoquímicos y
determinar la presencia de ciertos organismos.

B. Transmisión de enfermedades
● El agua es uno de los mecanismos para la transmisión de enfermedades,
esto debido al mal manejo de desechos provenientes de animales y
humanos.
● Heces fecales = Microorganismos que provocan infecciones intestinales.
Bacterias:
 ➢ Vibrio cholerae – Causa cólera y se aloja en el intestino
delgado en donde libera una toxina que causa diarreas
intensas que llevan a la deshidratación en menos de 6 horas.
➢ Escherichia coli – Causa la diarrea del viajero
➢ Salmonella entérica – Causa la fiebre tifoidea

Protozoarios:
➢ Cyclospora cayetanensis (Cyclosporiasis) – Provoca diarrea
➢ Balantidium coli (Balantidiasis) – Provoca problemas
intestinales
➢ Cryptosporidium parvum y C. hominis (Criptosporidiosis) –
Provoca diarrea
➢ Giardia Iamblia (Giardiasis) – Provoca gastroenteritis
➢ Entamoeba hystolytica (Disentería Amebiana) – Provoca
diarrea
➢ Cystoisospora belli (Cystoisosporiasis) – Es una enfermedad
muy común en el trópico
C. Análisis del agua
● El agua es analizada para detectar la presencia de un organismo indicador.
D. Coliformes
● Bacterias Gram negativas
● Morfología de bacilo
● Aerobios o anaerobios facultativos
● No formadoras de esporas
● Fermentan lactosa y producen gas entre 35±2 °C por 24 a 48 horas
● Viven en el tracto intestinal de humanos y animales de sangre caliente.
● Ejemplos de géneros:
Escherichia, Citrobacter
Enterobacter, Erwinia
Hafnia , Klebsiella
Serratia, Yersinia
● Uno de los medios de cultivo comúnmente usado para enumerarlos en
m-Endo agar.
E. Coliformes fecales
● Son los presentes en las heces fecales de humanos y de otros animales de
sangre caliente.
● Uno de los medios de cultivo utilizado para su detección es el Eosin
methylene blue (EMB) agar.
● Según Bauman (2012), la Agencia de Protección Ambiental (EPA) exige que
por cada 100 mL de agua:
De consumo deben haber 0 UFC.
Recreacional debe haber 200 UFC.
F. Estreptococos fecales
● Son bacterias Gram positivas
● Morfología de coco que se agrupan en cadenas
● No formadores de esporas
● Catalasa negativa
 ● Son capaces de hidrolizar esculina
● Incluye bacterias residentes del intestino humano.
● Del 90 a 95 % son E. faecalis y del 5 a 10 % son E. faecium.
● Para su detección se utiliza el Bile Esculin Agar (BEA).
G. Clostridium perfringens
● Si los coliformes o los enterococos no son detectados, se pasa a la detección
de Clostridium perfringens.
● Por la producción de endoespora la detección de esta bacteria es necesario
para evaluar si los procesos de tratamiento de aguas residuales y los de
potabilización fueron efectivos.
● Se usa el medio de cultivo CP ChromoSelect Agar en donde las colonias se
observan de color verde.
H. Pruebas para la detección de coliformes
● Prueba de PresenciaAusencia (PresenceAbsence, P-A)
➢ Es un método cualitativo que nos indica la presencia de los coliformes
en una muestra.
➢ Esta prueba consiste de añadir la muestra de agua a analizar a un
frasco con dos sustratos:
➔ ONPG (o-nitrophenyl-ß-Dgalactopyranoside)
➔ MUG (4-methylumbelliferyl-ß-Dglucoronide)
➢ Ventaja: el método es rápido.
➢ Desventaja: no puede cuantificar coliformes.
● Filtración por membrana (Membrane Filtration, MF)
➢ Es un método cuantitativo.
➢ En esta prueba una muestra de 100 mL de agua es filtrada a través
de una membrana estéril (0.45 µm) que es capaz de retener las
bacterias.
➢ El filtro es colocado en un plato con m-Endo Agar, para observar la
presencia de colonias verde metálica.
➢ Ventaja: se pueden procesar muestras grandes, además los
resultados han demostrado ser reproducibles.
➢ Desventaja: no puede ser utilizado con muestras con alto contenido
de materiales suspendidos, ya que la membrana se puede romper o
tapar con dichos materiales.
● Número Más Probable (Most Probable Number, MPN)
➢ Es un método cuantitativo.
➢ Esta prueba consiste de tres pasos:
1. Prueba de presunción
➔ Se hacen tres series de 3 a 5 tubos con LB broth que
son inoculados con 10 mL, 1 mL y 0.1 mL de la
muestra de agua y, se incuban por 24-48 horas a 37
°C. Tras la incubación se observa la producción de gas
(tubo Durham) por parte de los coliformes al fermentar
lactosa. Luego se estima el número total de coliformes
en la muestra original usando una tabla de MPN que
muestra el número de coliformes por 100mL.
2. Prueba de confirmación
 ➔ La presencia de coliformes es confirmada inoculando
los positivos en platos o tubos con medios diferenciales
y/o selectivos para coliformes, como por ejemplo,
mEndo, que las colonias verde metálica confirman la
presencia de coliformes.
3. Prueba de terminación
➔ Se selecciona una colonia verde metálica y se inocula
en LB broth para observar la producción de gas en el
tubo Durham.
● Ventajas: se puede utilizar para todo tipo de muestra, además la precisión
puede ser elegida.
● Desventajas: si se realizan pocas réplicas, menor será la precisión.

I. Aislamiento de coliformes totales, fecales y estreptococos

● Los podemos aislar usando medios de cultivo selectivos y/o diferenciales.
➢ Selectivo- Contiene uno o más componentes que permite el
crecimiento favorable de un grupo de organismos, afectando el
crecimiento de los demás.
➢ Diferencial- Contiene un componente que puede ser utilizado por
algunos microorganismos, pero no por otros, permitiendo diferenciar
los organismos que crecieron debido a un indicador.
J. m-Endo Agar
● Medio selectivo y diferencial para enumerar coliformes en agua.
➢ Compuestos selectivo- lauril éter sulfato sódico y desoxicolato de
sodio que inhiben las bacterias Gram positivas.
➢ Compuestos diferencial- fermentación de lactosa a acetaldehído
provoca que fucsina básica y sulfito de sodio formen un color verde
metálico en las colonias.
K. MacConkey Agar
● Medio selectivo y diferencial para bacilos Gram negativos.
➢ Componente selectivo- cristal violeta y sales biliares
➔ Se asocia a bacterias Gram positiva evitando su desarrollo.
➢ Componente diferencial- lactosa
➔ Fermentadores o no fermentadores
L. Eosin Methylene Blue Agar
● Medio selectivo y diferencial para bacteria coliformes o entéricas.
➢ Componente selectivo- azul de metileno
➔ Se asocia a bacterias no coliformes y Gram positivas evitando
su desarrollo.
➢ Componente diferencial- lactosa
➔ Fermentadores o no fermentadores
M. Bile Esculin Agar
● Medio selectivo y diferencial para aislar enterococos.
➢ Componente selectivo- sales biliares
➔ Se asocia a bacterias Gram positivas que no sean
enterococos evitando su desarrollo.
➢ Componente diferencial- esculina
➔ Hidrolizan o no
IV. FORMACIÓN DE BIOPELÍCULAS
A. Definición:
- Biopelícula: matriz gelatinosa compuesta de microorganismos y sustancias
poliméricas extracelulares.
- Antoni van Leeuwenhoek: descubrió la primera bipelicula en el sarro dental
a traves de un microscopio simple.

B. Caracteristicas:
- Puede contener hasta 90% de agua en su matriz.
- Las bacterias predominan en las biopeliculas, pero hongos y algas tambien
pueden crecer.
C. Propiedades:
- Factor biológico: Especies microbianas que producen grandes cantidades
de sustancias polimericas extracelulares que facilitan la adhesion a la
superficie.
- Factor químico: Composición del fluido.
- la presencia de particulas inorganicas (arcilla) pueden
incorporarse a la biopelicula y hacerla mas resistente.
- Factor Físico: Se basa en las características ambientales como condiciones
hidrodinamicas, termicas, luz, caudal de agua y como estas provocan
variaciones.
- Rugosidad y la composicion de la membrana son factores
limitantes a su desarrollo.
D. Ventajas:
- Proximidad: provoca el desarrollo de microambientes con nutrientes
y un ph que afecta el metabolismo.
- Protección: formacion de una red, dificulta la difusion de sustancias
toxicas y mejora el movimiento de nutrientes.
- Selección Natural: crecimiento selectivo como resultado de las
condiciones de la matriz.
- Fenómenos Biológicos: transferencia horizontal o lateral de genes y
la comunicación entre células (quorum sensing).
E. Desarrollo
- Formación de la monocapa fina (mol. organicas en la superficie).
- Llegada, colonizacion de organismos y otras particulas.
- Fijación y crecimiento microbiano
- Transporte de sustratos desde fluido externo hasta la matriz.
- Reacciones biologicas en el interior de la Biopelicula.
- transferencia de los productos resultantes desde la biopelicula hasta
el fluido externo.
- Desprendimiento
 F. Biopelículas en la Naturaleza:
1. Yellowstone National Park: Alkaline thermal spring
- capa verde = cianobacterias
- capa roja-anaranjada = Roseiflexus
2. Mantos Microbiandos, Salinas de Sippewissett, Massachusetts
- en los mantos afluencia el agua de mar (+ cont. FeS y
metano)
- 4 o 5 capas, cuyos colores dependen de la
composición de los organismos y los procesos
bioquímicos
G. ¿Perjudicial o Beneficiosa?
- Las biopeliculas pueden dañar equipos, contaminar productos y
provocar infecciones médicas.
- Ofrecen un potencial biorremediativo.
- Desventajas:
a. Biopeliculas pueden resistir antibióticos
b. Sin higiene el esmalte dental es cubierto por
una placa dental constituida por Streptococcus
mutans y las sustancias poliméricas
extracelulares.
c. Pueden provocar daños en superficies
- Ejemplo: Caries en Dientes
- Beneficios:
- Tratamientos de Agua
- Primeros métodos de tratamiento: filtro de arena
- Filtro actua como soporte de fijacion y
crecimiento microbiana, da como resultado una
biopelicula para utilizar materia organica del
agua.
- Ej: las que se forman en el tratamiento aerobio
del filtro.
- El agua residual en tratamiento entra en
contacto directo con la biopelicula permitiendo
el intercambio de nutrientes y productos
metabólicos.

V. POTABILIZACIÓN DE AGUA

A. Origen del Tratamiento de Aguas

- El primer tratamiento de agua pura fue en India hace 4,000 años.
- Método : ebullición o la colocación de instrumentos de metal caliente
en el agua, para luego ser filtrado a través de arena o carbón.
- Hipocrates creo un filtro llamado la manga de Hipocrates para tratar
sus pacientes.
- Filtro consistia en una bolsa de tela, se vertia agua hervida y la
tela atrapaba las particulas.
B. Enfermedades transmitidas por agua
 - John Snow: probo que el sabor y la claridad del agua no es indicador
de pureza.
- Debido a la presencia de vibrio cholerae en aguas potables.

C. Filtración y Desinfección
- Primera planta de tratamiento por filtración se desarrollo en Escocia
siglo 18.
- Cloro: tratamiento importante de aguas municipales por casi 100
años. Alrededor del 98% usan cloro como desinfectante.
- Agua potable debe contener entre 0.2-0.6ug/mL de cloro.
- Yodo: mas efectiva en la inactivación de quistes de Giardia.

D. Potabilización del Agua

- Tratamiento para remover los microorganismos patógenos, disminuir
turbidez, eliminar mal olor-sabor y elementos como hierro y
manganeso.
- Pasos basicos: Coagulación, Floculación, Sedimentación, Filtración y
Desinfección.
- ¿Cómo inicia el proceso? Agua cruda llega hasta la cuenca de
sedimentacion donde polimeros anionicos como el alum (sulfato de
aluminio) y cloro son añadidos.