(Ok) 1 - Visión Moder de Micro-Alimentos Unfv PDF

FCNM-ESCUELA DE BIOLOGÍA
Semana N° 01:
Visión Moderna de
Microbiología de los Alimentos
Asignatura: MIROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS
MG. GISELA YUPANQUI SICHA
Semestre Académico 2022-1
U n iv e r s id a d N a c io n a l
Federico Villarreal
• https://www.youtube.com/watch?v=ssd_AmfNrmk
• Lab de Alimentos
• https://www.youtube.com/watch?v=ev3RoxwGeEM
• Laboratotio Microbiología
• https://www.youtube.com/watch?v=ynn8BcT1RA0 OK
CONTROL DE ALIMENTOS.
AUTOMATIZACION INTEGRAL
DEL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA
bioMerieux Industry
Barcelona, noviembre 2 009
¿Quiénes somos?
bioMérieux es una empresa de biotecnologia que

desarrolla, produce y comercializa reactivos y
equipos automatizados para el control de la calidad
microbiológica y control ambiental
n C LINICA.
n INDUSTRI
A:
• SECTOR ALIMENTACION.
• INDUSTRIA FARMACEUTICA.
• SECTOR COSMETICO.
• SANIDAD ANIMAL.
VIII WORKSHOP MOtodos Rapidos y AutomatizaciOn en Microbiologia A limentaria
2 Barcelona, 24 - 27 noviembre 2009
Objetivos bioMérieux
• Ofr ecer técni cas r ápidas y sencillas par a

la automatización integral del laboratorio.
• Gama completa: desde preparación de
muestra hasta genotipado.
• Prioridades: CALIDAD y SERVICIO.
• No sólo proveedores: también CONSULTORES.
• Formación al cliente: cursos a medida.

Calidad bioMérieux
- CERTIFICACION ISO 9001: 2000

- Rigurosos procedimientos de control y
aseguramiento de calidad.
- ISO 11133 - 1 y 2: fabricacion de medios de
cultivo.
- ISO 16140: validación métodos alternativos
(AFNOR, AOAC, ...).
- Centros de produccion auditados por
nuestros clientes.

4
Caracteristicas productos bmx
• Rapidez en la obtencion de resultados.

• Tecnicas fiables y eficaces.
• Automatizacion.
• Facilidad de uso.
• Poca manipulacion.
• Tecnicas validadas y estandarizadas.
• Trazabilidad.

Soluciones bioMérieux
• Preparacion de la muestra: •Completa gama de medios listos al

Pinch DILUTOR empleo en placa y frasco.
Medios
• Deteccion de ISO11133
patogenos: VIDAS.
• Identificacion: API,
VITECK2COMPACT
• Control
ambiental
delaire:AIRIDEL
• Recuento de IC: TEMPO.
• Genotipadomicrobiano:
DIVERSILAB (rep-PCR)
VIII WORKSHOP Metodos Rapidos y Automatizacion en Microbiologia A limentaria

Sistema automatic° para
deteccion de patogenos
miniVIDAS = VIDAS
VIII WORKSHOP Metodos Rapidos y AutomatizaciOn en Microbiologia A limentaria
Barcelona, 24 - 27 noviembre 2009
VIDAS
PRINCIPIO DE LA TECNICA
Sistema automático de inmunodetección rapida

de patógenos basado en la técnica ELFA
(Ensayo de fluorescencia ligado a enzima, una
técnica ELISA ligada a fluorescencia) y en
técnicas de inmunoconcentración

8
VIDAS
Inmuno = deteccion
Reactivos listos al empleo

en un cartucho de 1 0 pocillos
Anticuerpos especificos
recubriendo la pared interna del cono
VIDAS
Inmuno = deteccion
substrato
sandwich conjugado
VIDAS
Inmuno = deteccion
SPR
Strip
Washing buffer Substrate
Sample
Conjugate Photo
Diluent diode
(Prewash)

VIDAS
Solid Phase Receptacle (SPR) Inmuno = deteccion

VIDAS
Inmuno = concentracion
Captura Lavado Liberación
Las bacterias diana Las fases de lavado

arrastran las bacterias Una enzima especifica
de la muestra son rompe la union
no deseadas, mientras
capturadas por los los antigenos del Ag=Ac y deposita
Ac que tapizan la buscados siguen las bacterias vivas
pared del cono. unidos al Ac del cono en un pocillo

VIDAS
Parámetros
1 Day 2 Days
Environment
SLMX
Salmonella + + Boite
Listeria spp
LMX
L. monocytogenes
E. Coli 0157:H7
Campylobacter
Enterotoxina
S. aureus

Novedades VIDAS
➢ Una plataforma para la INNOVACION.

VIDAS = Robot = Soporte para desarrollo de
nuevas soluciones:
a Patogenos en 24h: S LM L.mono ( LMX) y,
L.spp ( LSX)
a Nuevas generaciones: LMO 2, SET 2,
a Soluciones combinadas: VIDAS DUO.
a Implementacion de nuevas tecnologias:
FAGOS (VIDAS UP)
a Etc...

Novedades VIDAS
4 FAGOS + equipo miniVIDAS/VIDAS

Novedades VIDAS
CARTUCHOS Y CONOS.
- Cartuchos con pocillos conteniendo
reactivos listos al empleo.
- Cono: pipeta + soporte.
• Si anticuerpos especificos Inmunodeteccion automática de

recubriendo la pared del cono patogenos mediante un ELISA
ligado a fluorescencia.
• Si FAGOS recubriendo la Deteccion rápida y automática de
pared del cono patogenos mediante tecnologia
FAGOS ligada a fluorescencia.
Se utiliza el robot VIDAS para automatizar e

implementar la tecnologia FAGOS

Novedades VIDAS
Resultado FAGOS+VIDAS:
- Aumento de sensibilidad:
- Fagos son 100 veces mas sensibles que los anticuerpos.
- Fagos concentran la bacteria diana desde el medio
d e enriquecimiento.
- Aumento de especificidad:
- Fagos son especificos de determinadas especies / cepas bacterianas.
- Fagos seleccionan la bacteria diana entre toda la flora competitiva.
- Acortamiento en el tiempo de obtencion de resultados.
- Disminucion de la manipulacion.

Novedades VIDAS
■ Presente: ya disponible VIDAS UP E. coli 0157:H7 .
Deteccion en 7 o 16 h.
■ FAGOS + VIDAS en desarrollo:

-VIDAS UP Salmonella spp.
- VIDAS UP L. monocytogenes.
- VIDAS UP Listeria spp.

Sistema automatico para el recuento
de indicadores de calidad
TEMPO
Definición
EQUIPO AUTOMATICO PARA E L RECUENTO

DE INDICADORES DE CA LIDAD BASADO EN LA
TECNICA DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP)
LECTURA: FLUORESCENCIA

Caracteristicas
• Multiparametrico: TVC, CT, EC, EB, LAB, STA y YM.

• Mismo protocolo para todos los parametros y todos los
alimentos.
• Validaciones internacionales.
• Aumento de capacidad de trabajo: 1 analista = 500
determinaciones / dia.
• Basada en microbiologia tradicional: metodo NMP
automatizado.

Caracteristicas
• Multiparametrico: TVC, CT, EC, EB, LAB, STA y YM.

• Mismo protocolo para todos los parametros y todos los
alimentos.
• Validaciones internacionales.
• Aumento de capacidad de trabajo: 1 analista = 500
determinaciones / dia.
• Basada en microbiologia tradicional: metodo NMP
automatizado.

Principio de la técnica
16 tubos
miniaturizados
2,25 pl
22,5 pl
225 pl
Tarjeta de recuento patentada: PVC moldeado

con pocillos de distinto volumen
Fluorescencia
= = = + + = = = = = + = + = = =
=+++++++++++++++
NMP
++++++++++++++++
obio logia A
limentariaBarcelona, 24 - 27 noviembre 2009
Combinación NMP
===++=====+=+===
=EEEEEEEEEEEEEE
++++++++++++++++
16/15/4
Tablas NMP +
DiluciOn
5.ufc/g
Reactivos Tempo
• Cajas de 48 test (24 x 24).

• Reactivos identificados con cOdigo de
barras y de color.
• Medio deshidratado esteril: selectivo (EC,
TC, EB, STA, LAB) o general (TVC).
FRASCODE
MEDIO DE
CULTIVO
TARJETA
VIII WORKSHOP
VIII MOtodos
WORKSHOP Rapidos
MOtodos y AutomatizaciOn
Rapidos enen
y AutomatizaciOn Microbiologia AA
Microbiologia limentaria
limentaria
Protocolo de trabajo
1 2
Preparacion de la Llenado y sellado

muestra madre: en Tempo Filler
DiluciOn 1/10
4
3
Lectura e
interpretacion Incubacion
automáticas en en estufa
Tempo Reader tradicional

Componentes
Estacion Preparacion:
• Tempo Filler.
• PC + lector + miniteclado.
• 4 gradillas llenado.
• Estanteria: banco de trabajo.
• 2 frascos dispensadores 1 L.
Estacion Lectura:
• Tempo Reader.
• PC + lector + teclado + ratOn.
• Impresora.
• Wifi inalambrico.
• 12 gradillas incubaciOn/lectura.

Agua
destilada
estéril

Diluciones
LAB
STA YM
Agua destilada 3 ml 3,9 ml
+ +
Muestra
(1/1 0) 1ml 1 0 0.1ml
Volumen total = =
en el vial 4 ml 4 ml
Dilución final 1/40 1/400
2
Rangos de detección / sensibilidad

Temperaturas y tiempos incubación
TEMPO
Temperatura Tiempo
Parámetro
incubación incubación
30°C 40 - 48 h
35°C 22 - 27 h
30°C 24 - 27 h
37°C 24 - 27 h
STA 37°C 24 - 27 h
LAB 30°C 40 - 48 h
YM 25°C 72 - 76 h
✓ • I % , • I , L - ! L I • , I , . / V • % / • • • I 6 I • V L % % V
Validaciones internacionales

Identificacion y genotipado de
microorganismos
Necesidades del
laboratorio
Rutina
Identificacion bacteriana Investigacion
Tipificacion bacteriana:
Fenotipica (bioquimica) cepa
VITEK 2 Compact DIVERSILAB

Caracteristicas:
• ID bioquimica (fenotipica) microbiana a nivel de genero /
especie.
• Tecnica colorimetrica.
• Lectura cinetica: identificaciones a partir de 2 horas.
• BD ampliada.
• Validation package.
Sistema automatico para la identificacion rapida de

rutina en el laboratorio .

Reactivos
• Vitek 2 GP: identificacion de cocos gram positivos (2 — 10 h.).

• Vi t e k 2 G N : i d e n t i f i c a c i o n d e b a c i l o s g r a m
negativos
fermentadores y no fermentadores (2 — 8 h.).
• Vitek 2 YST: identificacion de levaduras (18 h.).
• Vitek 2 BC L: identificacion de bacilos gram positivos (14 h.).
• Vi t e k 2 A N C : i d e n t i f i c a c i o n d e b a c t e r i a s a n a e r o b i a s
y microaerofilicas, corynebacterias y lactobacilos (6 h.). .

36
Protocolo
1 Preparacion de 2 Entrada automatica 3 Entrada al sistema.

muestras. de datos.

Caracteristicas:
• Tipificacion bacteriana.
• Tecnica: rep-PCR.
• BD: DVL, propias y compartidas.
• 13 muestras en 4 horas.
• Validation package.
Sistema automatico para el genotipado microbiano de
bacterias y hongos (incluido mohos) llegando a nivel de
subespecie y cepa.

38
Protocolo
1. EXTRACCION del ADN partiendo de cultivo puro con

el kit Mo Bio (silice magnetica).

Protocolo
2. AMPLIFICACION del ADN extraido mediante rep=PCR

en un termociclador.
1. rep=PCR primers bind to many 2. Multiple fragments of various lengths are amplified
specificrepetitive sequencese interspersed
throughout the genome
rep=PCR primers
4. A unique rep=PCR DNA fingerprint

profile is created with multiple bands of
3. Fragments can be separated by mass varying intensity
andcharge via electrophoresis
(+) (=)
Size of amplified fragments (time)

Protocolo
Protocolo
3. DETECCION automática del fragmento amplificado

por electroforesis en gel (LabChip) en el equipo
Agilent 21 00 mediante tecnologia de microfluidos en
chip: separación de fragmentos.

41
42 Barcelona, 2424
Barcelona, - 27
- 27noviembre
noviembre2009
2009
Protocolo
Software: análisis de datos.

Protocolo Reactivos
Fingerprinting kits especificos de Género
Acinetobacter Candida Lactobacillus Pseudomonas
Archaea Clostridium Legione lla Salmonella
Aspergillus C. perfringens Listeria Serratia
Bacillus Enterobacter Mycobacterium Shige lla
Bifidobacterium Enterococcus M. tuberculosis Staphylococcus
Bordete lla Escherichia Mycop lasma Stenotrophomonas
Burkho lderia Haemophilus Neisseria Streptococcus
Campylobacter Klebsie lla Propionibacterium Francise lla
Fingerprinting Generales:
Mold Kit Custom Kit TCQC KitGN Kit
Non-Fermenter Kit Developer Kit Yeast KitGP Kit

42
43 Barcelona,
Barcelona, 24 - 24
27-noviembre
27 noviembre2009
2009
De la tradicion...

...a la modernidad: soluciones automaticas
TEMPO, VIDAS, VITEK y DIVERSI LAB

44
45 Barcelona,
Barcelona, 2424 - 27noviembre
- 27 noviembre 2009
2009
AUTOMATIZACION INTEGRAL
DEL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA
MUCHAS
GRACIAS POR SU
ATENCION
U n iv e r s id a d N a c io n a l
Federico Villarreal

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bioMérieux es una empresa de biotecnologia que

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- CERTIFICACION ISO 9001: 2000

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• Preparacion de la muestra: •Completa gama de medios listos al

• Recuento de IC: TEMPO.

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Sistema automático de inmunodetección rapida

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Reactivos listos al empleo

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Captura Lavado Liberación

Las bacterias diana Las fases de lavado

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➢ Una plataforma para la INNOVACION.

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4 FAGOS + equipo miniVIDAS/VIDAS

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• Si anticuerpos especificos Inmunodeteccion automática de

Se utiliza el robot VIDAS para automatizar e

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• Multiparametrico: TVC, CT, EC, EB, LAB, STA y YM.

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Tarjeta de recuento patentada: PVC moldeado

• Cajas de 48 test (24 x 24).

Preparacion de la Llenado y sellado

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Agua destilada 3 ml 3,9 ml

Dilución final 1/40 1/400

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VITEK 2 Compact DIVERSILAB

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Sistema automatico para la identificacion rapida de

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• Vitek 2 GP: identificacion de cocos gram positivos (2 — 10 h.).

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1 Preparacion de 2 Entrada automatica 3 Entrada al sistema.

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2. AMPLIFICACION del ADN extraido mediante rep=PCR

4. A unique rep=PCR DNA fingerprint