Parra Talavera Kassandra y Rojas Espinoza Dana Yael

1 Precipitación, separación y punto isoeléctrico

de proteínas

Introducción: La solubilidad de una proteína Tabla 2. Precipitación por el efecto del PH y

está definida por algunas propiedades de la solventes
molécula en sí y por algunos factores externos,
entre los cuales destacan: grupos r de los
aminoácidos que la conforman, temperatura,
polaridad del disolvente, pH, constante
dieléctrica del medio y fuerza iónica. Al agregar
un agente precipitante, las proteínas con mayor
hidrofobicidad superficial precipitan en primero.

La adición de sales elimina el agua de la

proteína hidratada, dejando las regiones
hidrofóbicas en libertad de combinarse
intermolecularmente. La precipitación puede
producirse por desaparición total o parcial de
esta envoltura acuosa que facilita la agregación
intramolecular.

Las proteínas por su naturaleza anfotérica

presentan una carga neta negativa a pH alto y
una carga neta positiva a pH bajo. Existe un pH
llamado pH isoeléctrico al cual la carga neta de
la proteína es cero. A este pH la molécula es
incapaz de desplazarse en un campo eléctrico.

Objetivos: Conocer solubilidad y punto

isoeléctrico de algunas proteínas, incluida la
insulina, modificando algunos valores Tabla 3. Precipitación por metales pesados
extrínsecos.

Resultados:
Tabla 1. Salting-out

1

Tabla 4. Determinación del punto isoeléctrico de
la insulina
Cálculos del PH de la tabla 4: Tubo 1
Ac. Acético (0.2M/0.25M) (0.23ml) = 0.23
Acetato de sodio (0.2M/0.25M) (0.02ml) = 0.02
PH= 4.74+log [0.02]/ [0.23]= 3.67
Tubo 2
Ac. Acético (0.2M/0.25M) (0.15ml) = 0.15
Acetato de sodio (0.2M/0.25M) (0.10ml) = 0.1
PH= 4.74+log [0.1]/ [0.15]= 4.56
Tubo 3
Ac. Acético (0.2M/0.25M) (0.05ml) = 0.05
Acetato de sodio (0.2M/0.25M) (0.20ml) = 0.20
PH= 4.74+log [0.20]/ [0.05]= 5.34
Tubo 4
Ac. Acético (0.2M/0.25M) (0.01ml) = 0.01
Acetato de sodio (0.2M/0.25M) (0.24ml) = 0.24
PH= 4.74+log [0.24]/ [0.01]= 6.12
Tubo 5
Ac. Acético (0.2M/0.25M) (0.00ml) = 0
Acetato de sodio (0.2M/0.25M) (0.25ml) = 0.25
PH= 4.74+log [0.25]/ [0]= 9.04
Calculo de PI de la insulina:
PI= pka+pka/2
PI= 4.74+4.74/2= 4.74
Discusión:
En la separación de proteínas por precipitación
con sales (salting out) al aumentar la
concentración de sal, esta se desplaza al agua
de hidratación alrededor de los grupos
cargados de la proteína y la transforma en agua
de hidratación alrededor de los iones cargados
de la sal. Para lograr la separación de las
proteínas de la clara del huevo se agregó
(NH4)2SO4, debido a que es una solución
saturada y una sal muy soluble por lo que hace
2
que las proteínas precipiten. Al precipitado 1 se Pregunta extra
le realizo la prueba Biuret y dio positivo debido
a la presencia de proteínas y presento un color Rojas Espinoza D.Y; Parra Talavera K.
morado, el filtrado 1 (sobrenadante 1) de igual
forma dio positivo. Al filtrado 1 se le adiciono
NH4(SO4)2 para saturarlo y al filtrar y
posteriormente realizar la prueba Biuret el
precipitado 2 dio positivo presentando un color
morado indicando una separación de proteínas
y el filtrado 2 dio negativo, tomando un color
azul.

En la precipitación por efecto del pH y de

solventes en el tubo de HCl y Regulador de
acetatos se observó que las proteínas
precipitaron. En el tubo NaOH la clara de
huevo se solubilizo completamente debido
a que la proteína se encontraba muy lejos
de su punto isoeléctrico. En la presencia de
etanol, este provoca un cambio en la constante
dieléctrica y hubo menor solubilidad.

En la precipitación por metales pesados los

únicos que dieron positivos fueron el cloruro de
mercurio, el nitrato de plata y el acetato de
plomo, debido a que las proteínas precipitaron.
Y las proteínas en presencia de cloruro de sodio
se solubilizaron.

Por ultimo en la determinación del punto

isoeléctrico de la insulina, el tubo 3 fue el único
que dio positivo y presento turbidez, debido que
presento menor solubilidad y su mayor
viscosidad.

Conclusiones: Se concluyó que la solubilidad

de las proteínas es alterada cuando estos
factores físicos o químicos se alteran de manera
significante. Son sensibles a fuerzas iónicas,
presencia de solventes y sales disueltas.
Asimismo, se determinó punto isoeléctrico el
cual tiene una amplia relación con el pH de cada
proteína.

Bibliografía: Carey F, Giuliano R. “Química

orgánica”, Novena edición. Ed. Mc Grawhill
Education, México, pp 1050-1054