UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

LICENCIATURA EN OPTOMETRIA

CÁTEDRA:
Microbiología Ocular

COORDINADOR:
Dr. Antonio Vásquez Hidalgo, PhD,MD,Prof
Médico Microbiólogo Salubrista Programador Scientific Research

Técnicas de observación microbiana ocular más frecuentes

CICLO: I/2023
GRUPO TEÓRICO: GT01

ESTUDIANTE:
Rubén Alexander Sánchez Torres ST21012

San Salvador, marzo 28 de 2023

Contenido
Los tipos de microscopios..................................................................................................................3
Microscopio Óptico........................................................................................................................3
Microscopio Electrónico.................................................................................................................4
Partes del Microscopio.......................................................................................................................4
Diferentes técnicas de observación microscópica..............................................................................6
Los cultivos líquidos y sólidos y su forma de incubación....................................................................6
Cultivo en medio sólido..................................................................................................................7
Cultivo en medio líquido................................................................................................................7
El estudio de los microorganismos.....................................................................................................7
Citología de impresión.......................................................................................................................8
Áreas de la microbiología...................................................................................................................8
Aplicaciones de la microbiología........................................................................................................9
Conclusión........................................................................................................................................10
Bibliografía.......................................................................................................................................10
Los tipos de microscopios.
El microscopio es un instrumento óptico el cual amplifica la imagen de un objeto pequeño. Este
instrumento es el que más se usa en los laboratorios, ya que con este se estudian los
microorganismos; utiliza un sistema de lentes y fuentes de iluminación con el cual se hace visible
un objeto microscópico, ya que estos se pueden aumentar hasta 100 veces su tamaño original
para una mejor apreciación de su estructura.

Existen dos tipos de microscopios lo cuales son el óptico y el electrónico; en el óptico el aumento
de este se consigue mediante un sistema de lentes en el cual se manipula el paso de luz entre los
ojos y el objeto a observar, con el microscopio electrónico utiliza un rayo de electrones que es
controlado por un campo magnético.

Microscopio Óptico. Este tipo de microscopio genera un aumento de 1000 veces el tamaño
original del objeto a observar y su límite llega a ser 2000 veces su tamaño. Las lentes de este son el
condensador, el objetico y el ocular. La luz que entra se debe reflejar en la preparación y para ello
se utiliza el condensador, a medida que este se eleva o baja de posición altera su el plano del foco
de luz y por ende es necesario posicionarlo donde se logre una imagen precisa del objeto. El
objetivo es el lente que se encuentra colocada cerca del objeto a observar, el aumento primario
que se genera es por la lente objetico y la imagen se transmite al ocular, donde este realiza su
aumento final.

Los microscopios que se utilizan frecuentemente en los laboratorios están equipados con tres
objetivos de bajo poder, alto poder y objetivo de inmersión. Estos se montan en la pieza llamada
revolver el cual se puede rotar para alinear el objetico con el condensador. La imagen que se da en
el microscopio es finalmente aumentada por el ocular. La imagen demostrada es el producto del
aumento del objetivo y el ocular, ya que el m microscopio es capaz de conseguir aumentos
considerablemente mayores a uno que esté construido con una sola lente, a este último se le
llama microscopio simple y se usa más en lupas y cristales de aumento.

Una propiedad importante de este microscopio es su poder resolutivo, con ello es capaz de
mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea este poder, mayor será
la definición del objeto. Estos microscopios son especialmente buenos para ver pequeñas
estructuras y este poder resolutivo depende de la longitud de onda utilizada y de una propiedad
óptica conocida como apertura numérica. Estos microscopios utilizan luz visible, por el cual la
longitud de onda está fijada y la resolución de un objeto es función de la apertura numérica, entre
más alta sea la apertura, el objeto será más pequeño.

0.5 l

d = -----------

N sen a

d: poder resolutivo; l: longitud de onda; a: mitad del ángulo del lente objetivo; N: índice de
refracción del medio; N sen a: apertura numérica.

Un factor que afecta a la apertura numérica, además de la construcción de la lente, es el medio a

través del cual pasa la luz. Mientras que el objetivo esté separado del objeto por el aire, su
apertura numérica nunca será mayor de 1,0; para conseguir aperturas numéricas mayores que
ésta, el objetivo debe estar inmerso en un líquido de mayor índice de refracción que el aire. A
estos líquidos se les denomina aceites de inmersión que se utilizan con los objetivos de inmersión
obteniendo una apertura numérica entre 1,2 y 1,4. Aun así, al utilizarse la luz visible (longitud de
onda) estos microscopios llegan a tener un poder de resolución de aproximadamente 0,25 µm, lo
que significa que las partículas con un tamaño más pequeño de 0,25 µm no pueden distinguirse
unas de otras.

Microscopio Electrónico. Los microscopios electrónicos utilizan rayos de electrones en lugar

de la luz, lo que les permite tener un poder de resolución muy elevado. La longitud de onda de los
rayos de electrones es de 0,005 - 0,0003 nm, muy corta comparada con la de la luz visible (426 -
750 nm; violeta - rojo). Es posible con el microscopio electrónico resolver objetos separados por
una distancia de 0,003 µm, comparado con los 0,25 µm de uno óptico. Los aumentos pueden
llegar a ser de un millón de veces.

Por medio de la naturaleza este instrumento solo pueden examinarse objetos muy delgados, un
ejemplo de esto es que una sola bacteria es demasiado gruesa para ser directamente observada
por el microscopio. Por ello para generar muestras de este se necesitan técnicas especiales de
cortes ultrafinos. Para que las células se puedan seccionar, primero deben ser fijadas y
deshidratadas (etanol o acetona). Después de la deshidratación, la muestra se coloca en resina y
luego se realizan los cortes finos con un ultra microtomo, este se equipa con una cuchilla de
diamante; una sola célula bacteriana se puede cortar en cinco o seis secciones finas, solo si se
observara el contorno de un organismo no es necesario tener secciones finas por el cual se
montan las células enteras y estas se recubren por una capa fina de oro. El rayo de electrones es
dirigido sobre la preparación y los electrones dispersados por el oro o metal pesado activan una
pantalla de observación en el que se produce una imagen. A la primera técnica se le denomina
Microscopía Electrónica de Transmisión (MET) y a la segunda Microscopía Electrónica de Barrido
(MEB).

Partes del Microscopio.

Las partes de un microscopio se pueden clasificar entre las que pertenecen a su sistema mecánico
y las que pertenecen a su sistema óptico.

• Sistema mecánico. Dentro del sistema mecánico se incluyen todos los elementos estructurales
que dan estabilidad al microscopio y mantienen los elementos ópticos correctamente alineados.

• Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio y sobre la cual se
montan el resto de elementos. Acostumbra a ser la parte más pesante para proporcionar
suficiente equilibrio y estabilidad al microscopio. Es habitual que incluya algunos topes de goma
para evitar que el microscopio se deslice sobre la superficie donde se encuentra.

• Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza intermedia del microscopio
que conecta todas sus partes. Principalmente conecta la superficie donde se coloca la muestra con
el ocular por donde ésta se puede observar. Tanto las lentes del objetivo como del ocular se
encuentran también conectadas al brazo del microscopio.
• Platina: Esta es la superficie donde se coloca la muestra que se quiere observar. Su posición
vertical con respecto a las lentes del objetivo se puede regular mediante dos tornillos para generar
una imagen enfocada. La platina tiene un agujero en el centro a través del cual se ilumina la
muestra. Generalmente hay dos pinzas unidas a la platina que permiten mantener la muestra en
posición fija.

• Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta se ha colocado
sobre la platina. • Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la
muestra respecto el objetivo de forma rápida. Se utiliza para obtener un primer enfoque que es
ajustado posteriormente mediante el tornillo micrométrico

• Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un enfoque más preciso
de la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y con gran precisión el
desplazamiento vertical de la platina.

• Revólver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos. Cada objetivo tiene
proporciona un aumento distinto, el revólver permite seleccionar el más adecuado a cada
aplicación. Habitualmente el revólver permite escoger entre tres o cuatro objetivos distintos.

• Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el ocular con los
objetivos. Es un elemento esencial para mantener una correcta alineación entre los elementos
ópticos. Sistema óptico.

El sistema óptico incluye todos los elementos necesarios para generar y desviar la luz en las
direcciones necesarias y así acabar generando una imagen aumentada de la muestra.

• Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido hacia la
muestra. En algunos casos el haz de luz es primero dirigido hacia un espejo que a su vez lo desvía
hacia la muestra. La posición del foco en el microscopio depende de si se trata de un microscopio
de luz transmitida o de luz reflejada.

• Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar los rayos de luz

provenientes del foco a la muestra. En general, los rayos de luz provenientes del foco son
divergentes. El condensador consiste en un seguido de lentes que cambian la dirección de estos
rayos de modo que pasen a ser paralelos o incluso convergentes.

• Diafragma: El diafragma es una pieza que permite regular la cantidad de luz incidente a la
muestra. Normalmente se encuentra situado justo debajo la platina. Regulando la luz incidente es
posible variar el contraste con el que se observa la muestra. El punto óptimo del diafragma
depende del tipo de muestra observada y de su transparencia.

• Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la muestra y que
producen la primera etapa de aumento. El objetivo suele tener una distancia focal muy corta. En
los microscopios modernos distintos objetivos están montados en el revólver. Este permite
seleccionar el objetivo adecuado para el aumento deseado. El aumento del objetivo junto con su
apertura numérica suele estar escrito en su parte lateral.

• Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de ampliación de imagen.
El ocular amplio la imagen que ha sido previamente aumentada mediante el objetivo. En general,
el aumento aportado por el ocular es inferior al del objetivo. Es a través del ocular que el usuario
observa la muestra. En función del número de oculares se puede distinguir entre microscopios
monoculares, binoculares e incluso tri oculares. La combinación de objetivo y ocular determina el
aumento total del microscopio.

• Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior para corregir la
dirección de la luz. Por ejemplo, esto es imprescindible en el caso de los microscopios binoculares,
donde un prisma divide el haz de luz proveniente del objetivo para dirigirlo hacia dos oculares
distintos.

Diferentes técnicas de observación microscópica.

Debido a la gran diversidad de muestras a observar se han desarrollado diferentes técnicas de
microscopia y gran diversidad de microscopios para ello.

1. Microscopio de campo claro: Utiliza una fuente de luz directa como la de una bombilla o la luz
solar, los microorganismos son transparentes y es más difícil distinguirlos con este microscopio y
por ello se suelen teñir.

2. Microscopio de campo oscuro: Este se equipa con un condensador y un objetivo especial con el
que ilumina los microorganismos en la muestra frente a un fondo oscuro. Se utiliza este método
para visualizar microorganismos vivos sin teñir.

3. Microscopio de fluorescencia: se tiene la muestra con una sustancia fluorescente que absorbe
la energía de las ondas cortas de luz (azul) y emite la luz de longitudes de ondas más largas
(verde). Se utiliza inmunofluorescencia, con la cual la sustancia fluorescente se une a un
anticuerpo especifico de ciertos microorganismos. Si este anticuerpo se une al microorganismo,
este emitirá fluorescencia y se puede identificar; la técnica se utiliza más en clínicas.

4. Microscopio de contraste de fases: Es un microscopio óptico modificado que permite contrastar

sustancias de diferente grosor o densidad. Mediante un condensador y un objetivo especial se
controla la iluminación de tal manera que vaya en diferentes rutas a través de las distintas partes
de una célula. El resultado es una imagen con diferentes grados de brillo y oscuridad. Con este
método, el material denso aparece brillante, mientras que las partes de la célula que tienen una
densidad cercana al H2O (citoplasma) aparecen oscuras. Se utiliza para visualizar estructuras
celulares sin necesidad de usar colorantes o matar microorganismos.

Los cultivos líquidos y sólidos y su forma de incubación.

En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino integrados en
poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de sus propiedades,
es necesario separar unos de otros y trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o
puros. Un cultivo axénico o puro es aquel que contiene un sólo tipo de microorganismo y que
procede generalmente de una sola célula; el crecimiento de ésta origina, en medio sólido, una
masa de células fácilmente visible que recibe el nombre de colonia.

Para obtener cultivos puros a partir de una población microbiana mixta, se utilizan las
denominadas técnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas durante el siglo XIX. El aspecto de
las colonias sirve para diferenciar distintas especies microbianas.
Cultivo en medio sólido.
1. Tubos con agar inclinado: Previo a la siembra y con posterioridad a esta es importante pasar la
boca del tubo (sin la tapa) por la llama del mechero (flameado). Esta operación genera corrientes
de convección que previenen que los contaminantes del aire caigan dentro de los recipientes. El
calentamiento puede también matar los microorganismos que se encuentren en la boca de los
recipientes. Para realizar la siembra se puede utilizar el ansa, realizando un movimiento suave
sobre la superficie del agar en forma de zigzag, desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de
no dañar el agar. También se puede utilizar el hilo. En este caso, se realiza la punción y luego se
siembra en la superficie de manera similar a lo descripto, pero extremando los cuidados para no
romper la superficie. Luego de la incubación, se observará el aspecto general del medio y la
aparición de crecimiento sobre su superficie. Este tipo de siembra permite el cultivo de
microorganismos aerobios o anaerobios facultativos y además se utiliza para almacenar cultivos
durante cortos períodos de tiempo a temperaturas de 4ºC, o para la amplificación de un inóculo
pequeño.

2. Siembra en placas: Puede ser en superficie (utilizando espátula de Drigalski, ansa o hisopo) o
por mezcla (el inóculo con el medio de cultivo agar izado aún fundido, a temperatura de unos
45ºC, se mezclan y se vierte en la placa de Petri, como se explica en detalle más adelante). Las
placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar
condensación en la tapa de la misma durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se
extiende dando un crecimiento confluente. En medio sólido cada célula viable dará origen a una
colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar
microorganismos, sino además para contar y aislar. En general cuando se quieren tener colonias
aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la muestra en tubos con suero
fisiológico estéril.

Cultivo en medio líquido.

Habitualmente se realiza en tubos, frascos o Erlenmeyer. Antes y después de realizada la siembra,
se debe pasar la boca del recipiente (sin tapa) por la llama del mechero (flameado). En los cultivos
líquidos no tiene lugar la formación de colonias, por lo tanto, no sirven como técnica de
aislamiento. La utilización de medios de cultivo líquidos permite la obtención de una población
microbiana grande, con un elevado número de microorganismos, para ser utilizados
posteriormente. En estos cultivos se examinará la existencia de enturbiamiento más o menos
intenso, la formación de una película o velo sobre la superficie, la aparición de sedimento en el
fondo del tubo, entre otros.

El estudio de los microorganismos.

La microbiología es el estudio de los microorganismos y sus actividades. En este estudio se toma
en cuenta diferentes puntos como la estructura, fisiología, reproducción, metabolismo e
identificación de cada microrganismo. Su objetivo principal es comprender como las actividades
prejudiciales y beneficiosas de los microorganismos ayudan a diseñar una nueva manera de
aumentar los beneficios y reducir los daños.
Citología de impresión
La Citología de impresión es una técnica de diagnóstico médico, en donde se realiza la toma de
una biopsia corneo-conjuntival en los cuatro cuadrantes a saber conjuntiva superior, conjuntiva
nasal, conjuntiva inferior, conjuntiva temporal y cornea de ambos ojos, de las tres primeras capas
del tejido a evaluar.

Se clasifican los resultados de acuerdo a la presencia de las células, su forma, tamaño y numero,
después de la realización de la tinción de las muestras, su fijación y preservación de las placas para
posteriores análisis, basados en la clasificación de Nelson.

La Citología de impresión es indolora, y no presenta peligro alguno, incluso durante el embarazo y

la infancia.

La Cristalización de la lagrima, es otra prueba diagnóstica en la cual realizamos la toma de muestra

de la lagrima del fondo de saco inferior con una micropipeta, se deposita en un porta-objeto y se
evalúa a los 15 minutos de la toma en un microscopio de bacteriología normal. Se evalúa la
presencia de Mucina y sus resultados se clasifican de acuerdo al Test de Ferning.

Aplicaciones

Hoy en día la Citología de impresión tiene muchas aplicaciones debido al gran porcentaje que hoy
tenemos en la consulta externa compatibles con Sd. De Ojo Seco. También se indica en todas
aquellas patologías que comprometan el segmento anterior, entre las cuales podemos citar:
conjuntivitis alérgicas, virales, infecciosas, pterigión, pos quemaduras químicas (álcali, ácido,
térmicas, etc.), evaluación pre- operatoria a cirugías refractivas, de catarata, trasplante de córnea;
y aquellas patologías sistémicas (enfermedades del colágeno, autoinmunes, Sd. De Steven
Jhonson, etc.), que pueden desencadenar una insuficiencia limbal. Su aplicación es amplia debido
a que no requiere hospitalización y tiene una recuperación rápida de la zona.

Áreas de la microbiología.
• Bacteriología: Estudia las bacterias, microorganismos procariotas unicelulares de estructura
relativamente simple. Ejemplos: Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, etc.

• Micología: Estudia los hongos, microorganismos eucariotas quimio heterótrofos, pueden ser
unicelulares o multicelulares. Ejemplos: Aspergillus fumigatus, Histoplasma capsulatum, Candida
albicans, etc.

• Virología: Estudia los virus, agentes submicroscópicos filtrables, parásitos unicelulares obligados,
que poseen un sólo tipo de ácido nucleico rodeado de una cubierta proteica. Ejemplos: Virus de la
rabia, virus de la poliomielitis, virus del sarampión.

• Protozoología: Estudia los protozoarios, microorganismos unicelulares eucariotas. Ejemplos:

Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Trypanosoma cruzi, etc.

• Inmunología: Estudia los mecanismos de defensa del huésped contra las enfermedades. 12
Aplicaciones de la microbiología.
• Microbiología Médica: Estudia los microorganismos causantes de enfermedades (patógenos),
también se encarga de la prevención y control de las enfermedades infecciosas.

• Microbiología de Alimentos: Estudia tanto los efectos dañinos como los efectos beneficiosos de
los microorganismos sobre los alimentos. El papel beneficioso incluye el uso de microorganismos
en la preparación de alimentos tales como quesos, salchichas, yogur, encurtidos, entre otros. Por
otra parte, los microorganismos son responsables de algunas de las más serias intoxicaciones
alimentarias y causan también la descomposición de una gran variedad de alimentos.

• Microbiología del Agua: Se ocupa de obtener aguas de óptima calidad y utiliza microorganismos
con el fin de regenerar las aguas de desecho y hacerlas útiles.

• Microbiología Agrícola: Estudia ambos aspectos, entre otros: el papel de los microorganismos en
la formación y fertilización de los suelos, el control de los insectos dañinos para las plantas
mediante el uso de microorganismos, y los efectos dañinos de los microorganismos sobre las
plantas.

• Microbiología Veterinaria: Enfermedades infecciosas de varios tipos son responsables de la

muerte de muchas mascotas y de animales de granjas. La Microbiología Veterinaria se encarga de
la prevención y control de esas enfermedades.

• Microbiología Industrial: Productos de considerable valor económico se obtienen como

resultado del metabolismo microbiano, usando como sustrato desechos agrícolas, desechos
industriales y productos naturales de bajo costo. Entre los productos obtenidos de fuentes
microbianas tenemos: antibióticos, hormonas, enzimas, Entre otros.

Conclusión.
El microorganismo tiene beneficios y aplicaciones en todas las ramas en las que se desempeñan
por sus aportaciones al buen funcionamiento microbiológico, tiene sus aplicaciones en áreas como
la agricultura. Medicina. Entre otros. Cada microrganismo tiene su estructura y fisiología, por lo
tanto, a través del microscopio se pueden observar a mejor detalle cada uno de estas estructuras
de células, bacterias, entre muchos otros. Conocemos las partes que componen el microscopio y
cuál es la función de cada una de ellas para conseguir la mejor visualización del objeto a observar,
teniendo una buena resolución y como se prepara el objeto dependiendo de que se busca
visualizar.

Bibliografía.
Bernaro. (05 de Marzo de 2020). Siembra y Aislamiento de Microorganismos. Obtenido de Siembra
y Aislamiento de Microorganismos:
https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/202403/mod_resource/c
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Gutierrez. (18 de Septiembre de 2008). La Microbiologia y su objetivo . Obtenido de La

Microbiologia y su objetivo :
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08
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Mateos, D. P. (s.f.). TEMA 2. OBSERVACION DE LOS MICROORGANISMOS: EL MICROSCOPIO,

PREPARACION Y EXAMEN DE MUESTRAS. Obtenido de TEMA 2. OBSERVACION DE LOS
MICROORGANISMOS: EL MICROSCOPIO, PREPARACION Y EXAMEN DE MUESTRAS:
http://webcd.usal.es/Web/educativo/micro2/tema02.html

Microscopico, M. (2022). Mundo Microscopico. Obtenido de Mundo Microscopico:

https://www.mundomicroscopio.com/partes-del-microscopio

Citología de Impresíon – Clínica Oftalmológica de Cartagena

(clinicaoftalmologicadecartagena.com.co)