3) Separación y análisis de proteínas.

En las células existe un elevado número de proteínas, muchas de las cuales

son enzimas, por lo que para estudiar y caracterizar una proteína concreta
previamente hay que aislarla y purificarla.
El objetivo de un protocolo de purificación es, por lo tanto, aislar una
determinada proteína con el mejor rendimiento posible. Además, la preparación
tendría que tener la máxima pureza posible, esto es, no estar contaminada con otras
enzimas o macromoléculas.
Considerando un esquema general (figura 1), los pasos a seguir incluyen
varias elecciones:

Figura 1. Esquema general de purificación y análisis de una determinada proteína.

+ Elección de la fuente proteica: en cuanto a la fuente de la proteína, hay que
tener en cuenta la abundancia de la misma. Si es posible, lo más adecuado es
seleccionar un material en el que halla una gran cantidad de la proteína. En algunos
casos, la proteína se localiza sólo en ciertos organelos subcelulares, por lo que es
necesario un fraccionamiento subcelular antes de proceder a la purificación. Las
fracciones subcelulares se obtienen generalmente mediante varios pasos de
centrifugación y sedimentación.

+ Elección de los métodos de homogenización: en relación a los métodos de

homogenización, que permiten romper las células y extraer su contenido existen
varios y su elección depende del tipo de tejido y organismo que se emplee como
fuente de proteína. Entre los que podemos mencionar están la dialisis, y la
cromatografía de exclusión molecular.

+ Elección de los métodos de separación: por lo que respecta a los métodos de

separación, se basan en propiedades específicas de la proteína que se desea
purificar. Los métodos de separación aprovechan las propiedades tales como la
carga, el tamaño y la solubilidad. Que varían de una proteína a otra, así como que
posean sitios específicos de unión para algún compuesto. Entre ellos podemos
mencionar a la cromatografía de afinidad, de interacción hidrofóbica, intercambio
iónico y HPLC, electroforesis 1D y 2D,inmunobloting (western blot, southern blot y
northern blot).