AUTOMATIZADO

PGL

Laboratorio Clínico, EUTM, Universidad de la República,

Montevideo

Lic. Fabián Asconchilo

Tabla de contenido
Introducción ........................................................................................................................................ 2
Cobas c311 .......................................................................................................................................... 3
Reactivos ........................................................................................................................................... 10
Cobas Link.......................................................................................................................................... 13
PLANTA ELGA .................................................................................................................................... 13
INICIO DE LA JORNADA LABORAL E INICIO DIARIO ........................................................................... 16
ALARMAS........................................................................................................................................... 18
CONTROL DE CALIDAD ...................................................................................................................... 19
CALIBRACIÓN..................................................................................................................................... 28
Índices Séricos ................................................................................................................................... 32
EJERCICIOS......................................................................................................................................... 33
RESPUESTAS ...................................................................................................................................... 33
 Cronograma PGL automatizado

Semana 1 Presentación del equipo (ELGA, Cobas c311, Cobas Link)

Profundización en Planta ELGA (filtros y funciones)
Demostración de Inicio de Jornada Laboral (inicio diario)
Semana 2 Profundización del equipo Cobas c311 (Cubetas, pipetas, Reactivos, ISE
Alarmas y acciones correctivas, Soluciones de Lavado)
Profundización Cobas link (funciones, búsqueda de insertos)
Semana 3 Control de calidad Interpretación y reconstitución. N° Lotes, Fecha de
vencimiento, mala reconstitución.
Calibración, Curvas, Importancia del LOTE.
Semana 4 PARCIAL
Semana 5 Índices Séricos
Equipo ACCESS y TRIAGE
Dudas y consultas

1
 Introducción
El equipo con el
cual vamos a
trabajar en las
semanas de
práctico se llama
Cobas C311, es un
sistema automático
controlado por
software para el
análisis de química
clínica.

Las muestras que se pueden cargar en el equipo son suero/plasma, orina, LCR y sobrenadante
como “tipos de muestras”.

Posee componentes principales como:

Unidad analítica: es el equipo propiamente dicho, con sus reactivos, pipetas, cubetas, etc.
Unidad de control: controla y supervisa todo el proceso analítico, guarda y
comunica los resultados de las mediciones y ofrece funciones de mantenimiento. (marcada con
flecha azul)

Componentes anexos: Planta ELGA (flecha roja) y Cobas Link (flecha Amarilla)

A continuación, se detallarán características y funciones de los diferentes componentes: ELGA,

Cobas c311 y Cobas link.

2
 Cobas c311
El analizador cobas C311 está compuesto como se mencionó anteriormente por una UNIDAD
ANALITICA y una UNIDAD DE CONTROL.

La foto trata de mostrar los diferentes

componentes de la UNIDAD ANALÍTICA, entre
ellas se destacan:
2 pipetas, la flecha amarilla marca la pipeta de
muestra, detecta coágulos por
medio de mediciones de presión y
el círculo verde marca la pipeta de reactivos.
Rotor de muestra (flecha azul), que consta de
108 posiciones para muestras,

Un disco de reacción que transporta 66

cubetas de plástico semi desechables inmersas
en el baño de incubación (flecha roja).

Lámpara del fotómetro La lámpara del

fotómetro situada debajo del disco de
reacción está dentro de una “camisa” a
temperatura constante que le ayuda a
mantener una salida de
energía constante y aumenta su vida útil.

Se debe sustituir la lámpara del fotómetro si, al realizar un blanco de cubetas con agua destilada
a 340 nm, la absorbancia medida es superior a 12.000 (Ver más adelante)

Reactivos utilizados para la medición de los iones (flechas negras)

Posee además un rotor (no se ve en la imagen), donde se colocan los reactivos → 42 posiciones

3

Foto obtenida del manual de operador. Se observa con asterisco rojo el disco de reactivos (*) (42
posiciones)
PIPETA DE MUESTRA
DISCO DE REACCIÓN
DISCO DE MUESTRAS
DISCO DE REACTIVOS
LÁMPARA DEL FOTÓMETRO
En esta imagen se observa el baño de incubación.
Solamente se puede observar si se quita el disco de
reacción, el agua (marcada con un asterisco rojo) se
encuentra a 37° y se cambia cada vez que se le solicita el
INICIO DIARIO al equipo (se verá más adelante).
La luz del Fotómetro se dirige como indica la flecha
amarilla
A RECORDAR…
Detecta coágulos por diferencia de presión
66 cubetas inmersas en baño de incubación a 37 +/-0.1 °C
108 posiciones
42 posiciones
Cambiar cuando el valor de absorbancia llegue a 12.000 en
la longitud de onda de 340 nm
4
 LUZ DE ACCESO AL DISCO DE MUESTRAS

CARGUE LAS MUESTRAS EN EL

DISCO DE MUESTRAS SÓLO CUANDO
LA LÁMPARA
ESTÉ ENCENDIDA .
ESTO SIGNIFICARÁ QUE EL DISCO
DE MUESTRAS NO GIRARÁ HASTA
QUE EL OPERADOR INICIE
ACTIVAMENTE LA NUEVA
OPERACIÓN .

Lámpara de acceso Disco de muestras

Verde Es posible el acceso
Parpadeando El giro comenzará pronto
Apagada No se debe acceder al disco

Detectores de muestras y lectores de códigos de barras

Cuando las muestras se cargan en el “disco de muestras” pasan por un lector de códigos de barras.

En las partes interna y externa del área

del disco de muestras hay un lector de códigos de barras.
Estos dispositivos exploran el anillo interno y el externo del disco de muestras en busca de
muestras y códigos de barras.

5
La etiqueta de código de barras debe estar colocada de forma que se
pueda leer a
través de la abertura que hay en el disco de
muestras
Cuando hay un tubo enfrentado al detector, el
código de barras se lee
tres veces por motivos de seguridad

Estación de carga de reactivos

La estación de carga de reactivos está diseñada de forma tal que un
pack se pueda cargar en una única e indudable posición para el
operador.
Así, se descarta la posibilidad de colocar un casete en una ubicación y
de una forma incorrecta.

6
 Unidad de lavado de cubetas

La unidad de lavado de
cubetas está situada en el
lado izquierdo del disco de
reacción.
Se encarga de lavar,
enjuagar y secar las cubetas
de reacción una vez que se
ha medido
la reacción química de la mezcla. Para asegurar la integridad de las cubetas, durante el proceso de
lavado, se realiza una lectura fotométrica (se mide la absorbancia) de cada cubeta con agua
destilada y se compara con el valor almacenado de la medición del blanco de cubetas semanal.
El objetivo de esta maniobra es verificar el estado de las mismas. Si la absorbancia medida luego
del lavado es muy distante al valor almacenado, se da de baja esa cubeta puntual y por supuesto
el equipo la deja de utilizar.

Detrás de la puerta marcada con la flecha

verde se encuentran soluciones de
lavado (imagen a la derecha) para las
cubetas.

Estas soluciones son ácidas y básicas,

utilizadas en conjunto garantizan que las
cubetas alarguen su vida útil.

7
 Componentes del Área ISE

La unidad ISE ofrece un

método electrónico
para medir los iones
sodio, potasio y
cloruro de las muestras.
Está concebida para
procesar hasta 150
muestras por hora

La ubicación de los reactivos ISE contienen tres botellas de reactivos:

estándar interno (ISE IS), diluyente (ISE Dil.)
y solución de referencia (ISE Ref.).

La aguja del sipper aspira la solución ISE IS o la solución de muestra

diluida con diluyente desde una cubeta de reacción. La solución ISE IS
y la muestra con el diluyente se calientan hasta la temperatura de
medición (37°C) en el baño de reacción.
Para cada medición, el analizador mide tres valores de fuerza
electromotriz (FEM):
para cloruro, potasio y sodio, donde la FEM denota la diferencia de
potencial entre
los correspondientes electrodos ion selectivos y electrodos de
referencia.
Se hablará de este tema en clase.
Así que tranquilos si no entienden el párrafo anterior.

8
 UNIDAD DE CONTROL

El ordenador supervisa las funciones y los modos de operación del analizador.

Se utiliza una unidad de disco duro para almacenar resultados de muestras de pacientes,
controles y calibradores.
A través de esta pantalla vamos a acceder a diferentes “pestañas” como:

Pestaña Función
Trabajo Se puede ver en los corchetes rojos, las muestras de pacientes y controles y en
el corchete azul, el resultado de dicho paciente o control.

Reactivo Permite la observación de los reactivos que están abordo, cantidad de

determinaciones, fecha de vencimiento y su estabilidad abordo.
Calibración Permite ver los tests que requieren calibración, los test que están calibrados y
brinda la opción de calibrar aquellos que deseamos.
Nos brinda también información sobre el N° de lote
Control Permite observar el gráfico de Levey Jennings, solicitar controles de calidad e
información sobre el N° de lote
Utilidades Nos permite solicitar el mantenimiento DIARIO o SEMANAL. (mas adelante
profundizaremos en qué consisten cada uno de ellos)

9
 Reactivos
Los reactivos son provistos por el fabricante en los casetes que se observan en la imagen de abajo.

Dentro de ellos se encuentra la sustancia que va a provocar la reacción cuando interaccione con la
muestra.

La información de los componentes del reactivo la obtenemos del inserto, que lo vamos a
observar en el cobas Link.

En este caso se muestra una foto de una parte del inserto de UREA, donde se puede ver el
contenido del kit.

Analizando la reacción se puede comprender como el contenido del reactivo interacciona con los
diferentes componentes que aparecen en la reacción.

Donde la Urea se encuentran en la muestra

del paciente, la Ureasa, el 2-oxoglutarato y la
glutamato deshidrogenasa (GLDH) se
encuentran en el reactivo.

10
 Los reactivos vienen listos para usar y se guardan en
heladera o a temperatura ambiente, esto mismo se
especifica en la etiqueta.

Uno de los conceptos más importantes que debemos

tener es el N° de LOTE.

Si buscamos la definición de LOTE, encontramos la

siguiente “Conjunto de cosas que tienen características
comunes y que se agrupan con un fin determinado.”

Si extrapolamos esa definición a un reactivo se puede decir que: Ejemplo de Albúmina

LOTE DE REACTIVO: Casetes de reactivo que tiene características comunes y se agrupan con un fin
determinado (ej.: reaccionar con la ALBÚMINA para facilitar su medición)

Como característica común podemos decir que TODOS los casets de albumina (figura de abajo)
que son del mismo lote, tienen los mismos componentes, en la misma concentración y el
fabricante (que nos provee a nosotros) los adquiere a un mismo proveedor.

Cuando alguna de estas variables cambia decimos que el NÚMERO DE LOTE ES DIFERENTE.
Normalmente las concentraciones y los componentes no varían de un lote a otro.

Pero lo que sí varía es como se adquiere la materia prima. ES DECIR, VARÍA EL PROVEEDOR.

Aquí tenemos 2 reactivos para albúmina de

diferente lote.

Ambos tienen la misma composición que se

detalla en el cuadro rojo debajo.

Si bien ambos tienen la misma composición, la

diferencia radica en la obtención de dicho
material.

Quizás en un inicio el compuesto “Citrate Buffer

95 mmol” se adquirió por un proveedor A y luego
se cambió al proveedor B.

El compuesto, “Citrate Buffer 95 mmol” es el mismo, pero

la manera de fabricarlo u de obtenerlo por los
proveedores es distinto. La consecuencia de este cambio
puede ser que, por ejemplo el grado de pureza sea
diferente y acorte la fecha de vencimiento o estabilidad
abordo.

11
 Es por eso que cuando se cambia el N° de lote de reactivo debemos calibrar la técnica para evaluar
el desempeño del mismo.

A modo de esquema se trata de explicar lo dicho anteriormente.

Proveedor A Proveedor B

Fabricante
Si por alguna razón el
Proveedor A no puede
abastecer al fabricante por
Vende sus reactivos a los
algún motivo, el fabricante
Laboratorios Clínicos con N°
LOTE 1234
se abastecerá del
proveedor B, en este caso
Laboratorio
Clínico el material adquirido es de
otro origen, con diferentes
condiciones, el lote se debe
cambiar → Ej.: 2345

Proveedor A

Proveedor B

Fabricante

Vende sus reactivos a los

Laboratorios Clínicos con N°
LOTE 2345

Laboratorio
Clínico

12
 Cobas Link

Señalado aquí con la flecha amarilla, nos

permite la observación de:
instrucciones de uso del cobas,
hojas de valores,
notas importantes,
configuraciones del analizador específicas
para tests y lotes.

En el curso vamos a utilizarlo para buscar

los diferentes insertos y cartillas de
valores de controles y calibradores.

Es muy útil cuando una muestra en el equipo aparece con la

alarma < TEST (ver más adelante). En este caso observaremos
el inserto para informar el valor establecido por el fabricante,
que estará bajo el titulo límite de detección.

PLANTA ELGA
El equipo de tratamiento de agua MEDICA-D 7/15 se ha
diseñado específicamente para proporcionar un
suministro de agua altamente depurada
El equipo está diseñado para trabajar a partir de un agua
potable de buena calidad, y produce 7 o 15 litros por
hora de agua depurada por ósmosis inversa que
recircula a través de un depósito de
agua depurada.

13
A continuación, se muestra un mapa de los diferentes filtros que se encuentran en la planta y sus
funciones.

En el práctico tendremos que reconocerlos a cada uno de ellos y saber su función.

Se colocan en recuadros verdes aquellos importantes que tendremos que saber identificar.

Filtro Función
Protege a los cartuchos de ósmosis inversa
Pre tratamiento frente a partículas y al exceso de cloro libre
que puedan estar presentes en el agua de
alimentación.
Fuerza al agua a moverse en contra de su
gradiente. Normalmente el agua se mueve de
una zona de menor concentración de soluto a
una zona de mayor concentración de soluto. El
Ósmosis inversa filtro de osmosis inversa a través de la
aplicación de presión, genera un movimiento
tal que el agua se mueve desde donde hay
mayor concentración de soluto (agua de OSE)
a una zona donde hay menos concentración
de soluto (post membrana semipermeable)
Cartucho de intercambio iónico Elimina algunas impurezas que puedan haber
quedado del anterior permeado
Filtro UV Control bacteriológico por foto oxidación
Filtro de 0.2 micras Elimina cualquier impureza que pueda haber
quedado

14
La conductividad nos refleja la pureza del agua, se debe mantener menor a 1. Esa información nos
la brinda la siguiente pantalla.

15
 INICIO DE LA JORNADA LABORAL E INICIO DIARIO

La jornada laboral debe iniciar con el vaciamiento de los residuos

líquidos.

Seguidamente debemos chequear los reactivos, para garantizar que

durante la jornada laboral no sea una limitante.

Debemos prestar atención al reactivo que se llama ECO-D, ya que éste reactivo es el que se coloca
en el agua de incubación, y cuya función es evitar la espuma y crecimiento microbiológico.

Una vez que hemos realizado todo lo mencionado anteriormente, se procede a realizar el INICIO
DIARIO.

Llamamos INICIO DIARIO a la serie de acciones que realiza el EQUIPO para ponerse a punto.

La foto de la izquierda es una pestaña a que se llega a través

de otra que se denomina UTILIDADES

16
Al hacer Clic en INICIO DIARIO, el equipo lleva adelante 4 acciones importantes.

A saber y recordar:
Cambio de agua de incubación,
Purga de tubuladuras,
Limpieza de pipetas y
Chequeo de la lámpara del fotómetro

La lectura del fotómetro se debe chequear una vez finalizado el INICIO DIARIO

El fotómetro realiza un blanco de cubetas a diferentes longitudes de onda.

12000

Una vez el INICIO DIARIO ha finalizado (20 minutos aprox) se procederá a pasar los controles de
calidad

En la pestaña CC se visualizan todos los analitos que se encuentran abordo del analizador. Este
tema se verá más adelante.

17
 ALARMAS
A continuación, se enumerarán las alarmas mas frecuentes que observamos en la práctica diaria y
sus respectivas acciones correctivas.
Alarma Significado
Samp C. La pipeta de muestra detecta
un coágulo en la muestra
Valor obtenido supera la
> TEST Linealidad de la técnica
Se consumió el sustrato
antes del tiempo normal,
>REACT indica que la muestra
presenta una elevada
actividad enzimática
No puede calcular algún
CALC.? valor
Ej.: BILI= BILT – BILD
Resultado por debajo del
< TEST límite de detección
ClcT.e Calculo erróneo
> LIN Linealidad anómala
> I.H Alarma de Índice sérico, la
> I.I interferencia por hemólisis,
> I.L lípidos o bilirrubina es tal,
que no se puede informar
dicho valor
Acción correctiva
Se debe extraer el coágulo de
fibrina para luego poder
reprocesar la muestra
Diluir muestra
Diluir muestra
Ver el analito que no se pudo
calcular (BILI) y observar que
sucedió con las variables
(BILT-BILD)
Se informa menor a… (ver
inserto para cada técnica)
NO SE DEBE DILUIR
Ver el analito que no se pudo
calcular (BILI) y observar que
sucedió con las variables
(BILT-BILD)
Una de las causas es el
deterioro de la lámpara del
fotómetro, ver absorbancia a
340 nm
Solicitar nueva muestra
18
 CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad es una actividad diaria en el
laboratorio para garantizar la confiabilidad de los
resultados obtenidos.

El control, es una solución que tiene una matriz

semejante a las muestras que procesamos
diariamente y contiene todos los analitos en una
concentración conocida.

Existen controles que se encuentran de forma líquida, listos para usar (PUC controles de orina) y
otros en forma liofilizada, es decir que debemos reconstituirlos con el volumen que indica la
etiqueta.

Estos controles Multi 1 y Multi 2, también se conocen

como PCC1 y PCC2.

El control PCC1 contiene concentraciones normales de los

analitos y el control PCC2 contiene concentraciones
patológicas de los analitos.

Se utilizan para controlar los analitos que dosificamos en

sangre.

Hay que reconstituirlos, esperar 30 minutos, fraccionarlos y guardarlos en el freezer.

Éstos controles se utilizan para controlar analitos que

dosificamos en orina. Se denominan Precipath PUC
(control patológico) y Precinorm PUC (control normal)

Contienen concentraciones conocidas de: Proteínas y

Creatinina.

Además, es fabricado de manera tal que la matriz sea lo

mas parecida a la orina.

No hay que reconstituirlos, están prontos para usar.

Se deben guardar en heladera

19
Se muestran 2 capturas del analizador cobas c311 sección CONTROLES.

Con el recuadro azul, se muestran los analitos en los cuáles se les solicitó el control de calidad y en
el recuadro rojo se muestran los analitos sin solicitar.

Podemos observar como cada analito se controla con ambos niveles.

A continuación, se muestra una gráfica de control del analizador cobas c311

Hablaremos en clase de los términos precisión y exactitud.

PRECISIÓN EXACTITUD

20
Profundizaremos ahora en uno de los errores más frecuentes en el Laboratorio Clínico, para luego
realizar una tabla donde se resumen todos los motivos por los cuáles un control de calidad quede
por fuera de rango establecido.

Trataremos de explicar mediante fotos y gráficos las consecuencias de no descargar el lote de

control que se está utilizando.

Para poder entender

trabajaremos con un analito
(amilasa) y 2 lotes de controles
diferentes para que podamos
ver como el mismo analito,
tiene concentraciones muy
diferentes cuando se cambia de
lote.

En este caso vemos (recuadro rojo arriba) como el valor de la amilasa entre un lote y otro varia 24
U/L

Imaginemos que
estamos trabajando con
el lote 324209, donde el
valor de la media es de
103 U/L con desvíos
estándar que van hasta
los 91 U/L y 115 U/L.

Se procesa ese lote

hasta que se termina, y
se abre un nuevo
control.

El nuevo control es
procesado quedando
por fuera del límite
inferior, esto sucede 3
veces consecutivas.

Al verificar que el lote que se esta utilizando es el 250254 con una media de 79.9 U/L, se descarga
dicho lote para actualizarle la información al equipo, esta acción correctiva hace que la media pase
de 103 U/l a 79.9 U/L.

Este pequeño detalle es el que genera gastos de reactivos (porque seguimos pasando el control
con la esperanza que entre en rango) y genera también gasto de calibradores, ya que al detectar
ese control fuera de rango, tendemos a calibrar la técnica nuevamente de manera innecesaria.

21
Otro Error muy frecuente que se observa en los laboratorios es, colocar el control PCC1 (normal)
en la posición correspondiente al control PCC2 (patológico), Y viceversa.

El patrón característico en el gráfico de Levey-Jennings es el siguiente:

Aquí se puede observar una serie de triángulos verdes y amarillos. El recuadro azul engloba a los
controles que están fuera de rango por haber sido procesados en las posiciones incorrectas.

Ej.: para entender porque sucede esto utilizaremos un analito cualquiera, en este caso usaremos la
glucosa.

El PCC1 para la glucosa posee un valor de 0.90 g/l, al colocar este control en la posición del PCC2,
el equipo graficará el punto de la glucosa que se obtuvo dentro de los rangos para el PCC2, en este
caso la media para la glucosa del PCC2 es de 2.50 g/l.

El valor obtenido de 0.90 g/l, hace que el triangulo quede por debajo del rango estipulado.

Esto sucede con todos los analitos del PCC1.

Para el PCC2 sucede lo opuesto. Siguiendo con el ejemplo de la glucosa, el PCC2 posee un valor de
glucosa de 2.50 g/l, pero al estar colocado en la posición asignada para el PCC1, el equipo
extrapola el resultado obtenido en la gráfica de controles del PCC1, cuyo rango de normalidad está
por debajo de ese valor.

Este error de posición es frecuente y se manifiesta en los gráficos como triángulos amarillos todos
en fila en la zona de arriba y de abajo de la gráfica.

La acción correctiva aquí es volver a controlar el equipo, con los controles en sus posiciones
correspondientes.

22
 En este caso vemos la gráfica de control de
un analito “x”, donde se puede decir que
es una técnica precisa.

El punto señalado con la flecha azul,

corresponde a un Control que quedó por
debajo de los rangos establecidos por el
fabricante.

La flecha roja es el valor medido por el

equipo. Sabemos de ante mano que los
controles tienen valores de concentración
diferentes de 0. En este caso el resultado
fue justamente 0.00. Lo que pudo haber
sucedido aquí son 2 cosas, 1) el equipo
aspiro una burbuja cuando fue a pipetear
el control y 2) la muestra de control fue insuficiente. La acción correctiva aquí es volver a
procesarlo.

Interpretación de las curvas de control de calidad

Al interpretar un CC debemos tener en cuenta su comportamiento en el tiempo. Para poder
entender errores sistemáticos y aleatorios utilizaremos diferentes graficas obtenidas de la práctica
diaria.

El error se define como, la diferencia entre el valor verdadero y el obtenido experimentalmente.

Los errores no siguen una ley determinada y su origen está en múltiples causas

Error sistemático Error aleatorio

Se denomina error sistemático a aquel que es El error aleatorio se asocia a las variaciones
constante a lo largo de todo el proceso de explicadas por el azar que está
medida y, por tanto, afecta a todas las inherentemente involucrado en cada proceso
medidas de un modo definido y es el mismo de medición.
para todas ellas. El error aleatorio produce observaciones
Estos errores tienen siempre un signo desviadas del verdadero valor en cualquier
determinado y las causas probables pueden sentido
ser:
- Errores instrumentales (de aparatos); por
ejemplo, el error de calibrado de los
instrumentos, deterioro de los reactivos.
- Error personal: Este es, en general, difícil de
determinar y es debido a las limitaciones de
carácter personal. Como, por ejemplo, error
de paralaje al reconstituir un control.

23
 La gráfica de la izquierda corresponde a
los controles de Bilirrubina Total.

Se puede observar como los diferentes

puntos se distribuyen de un lado y del
otro de la media. Esto es lo que se espera
para cada analito.

En este otro ejemplo se observan todos los puntos por

debajo de la media, pero siempre dentro de los desvíos
estándar aceptados.

En este caso tenemos un error Sistemático.

En el cuál Sistemáticamente día a día tenemos esa

desviación con respecto al valor verdadero.

Este comportamiento se extrapola también a las muestras

de los pacientes. Es decir, vamos a obtener valores un poco
por debajo de su valor normal, que no va a diferir
significativamente de la realidad.

Si el control se desvía de manera significativa, el triangulo

quedara de color amarillo.

Las acciones a realizar en este caso las veremos en las clases prácticas.

Otro elemento que podemos observar en un gráfico de

control son las tendencias. En este caso se observa el
HCV 1 gráfico de control de la hepatitis C (HCV). Estos
controles se utilizan y se guardan en heladera para
volver a utilizarlos al día siguiente y así sucesivamente
hasta agotar el control. Se observa como los puntos
HCV 2 están distribuidos de un lado y del otro de la media para
luego uno de esos controles (HCV 1) comenzar a
adquirir valores cada vez mas elevados hasta que se
desvía lo suficiente como para invalidar esa corrida.

En este caso, como el otro nivel de control (HCV 2) siempre se mantuvo estable, podemos
presuponer que el reactivo no es el causante de esa tendencia, ya que, si fuera así, ambos
controles deberían verse afectados. El problema aquí está en el control HCV 1.

24
Cuando se realizó el seguimiento, se constata que el control HCV 1 día a día quedaba fuera de la
heladera mas tiempo de lo normal. Esta mala acción en el almacenamiento se ve reflejada en los
valores obtenidos. Este problema se soluciona utilizando un nuevo control, recién abierto, con un
almacenamiento acorde a lo que nos indica el fabricante.

Si al procesar un control nuevo de HCV 1, del mismo lote, con el almacenamiento correcto,
volvemos a obtener un punto por fuera siguiendo la tendencia, EN ESTE CASO SE ESTUDIARÁ LA
POSIBILIDAD DE CALIBRAR→ SE DISCUTIRÁ EN CLASE CUANDO DECIDIR CALIBAR O NO.

UN ELEMENTO PARA TOMAR ESA DECISIÓN SON LAS DETERMINACIONES QUE LE QUEDAN AL
REACTIVO.

No vale la pena calibrar un reactivo al que le quedan solamente 5 determinaciones. En estos casos
preferimos colocar un reactivo nuevo y controlarlo.

En esta situación estamos

frente a un error
ALEATORIO. Es un error
que puede aparecer en
cualquier momento, y se
caracteriza porque
“rompe” el patrón con el
cual se venía
comportando el control.

Se repite nuevamente el
control y se observa que corrige su valor.

Con la acción anterior de repetir el mismo control y obtener un resultado acorde, reafirmamos
aún más la existencia de que el punto anterior, que violó los desvíos estándares fue consecuencia
de un error aleatorio.

No es NECESARIO LA CALIBRACIÓN cuando estamos frente a un error aleatorio.

Esta grafica corresponde nuevamente al HCV, la cual se controla con HCV 1

(control positivo) y HCV 2 (Control negativo).

En esta situación se observa que AMBOS controles comienzan a “caer”.

Aquí es donde nos debemos hacer 2 preguntas 1) ¿ambos controles están

deteriorados? Y 2) ¿el reactivo está deteriorado? Para responder esta pregunta
debemos chequear la cantidad de determinaciones que tiene el reactivo y la
fecha de apertura de los controles.

Es así que podemos tener estas 3 situaciones→ a) reactivo con pocas determinaciones
(deteriorado por el tiempo que está abierto) y controles nuevos. En este caso se procederá a
cambiar el reactivo y controlarlo. Si el reactivo es de diferente lote, calibramos.

25
b) reactivo nuevo y controles abiertos ya hace un tiempo, en este caso abrimos nuevos controles.
Verificando que los controles sean del mismo LOTE, sino debemos descargarlos.

c) Reactivo y controles deteriorados, aquí se cambian ambas cosas. Teniendo en cuenta siempre si
se debe calibrar el reactivo o descargar el nuevo control.

¿Cómo puede ser que los reactivos se deterioren?

Se tomará el ejemplo de la PCR.

Como se puede observar en la imagen de la izquierda, la PCR

(en el equipo esta como CRPL3) tiene solamente 6
determinaciones. ¿Y eso cómo impacta en los controles?

Respuesta: De manera directa y para ambos.

Cada vez que nosotros abrimos un nuevo casete de reactivos,

éste contiene aproximadamente 200 determinaciones. Al abrirlo, lo colocamos en contacto con el
oxígeno del ambiente, el cual puede oxidar poco a poco los diferentes componentes del reactivo,
es por eso que, en la sección de reactivos, hay una columna donde nos dice los días de estabilidad
a bordo. Esto es básicamente para que tengamos en cuenta los días que tenemos para utilizar ese
reactivo una vez abierto.

Los días de estabilidad abordo se muestran entre paréntesis. Entonces tenemos que, por ejemplo,
para la CKMB los días que tenemos para usarla son 37, mientras que para la Gamma Glutamil
transferasa es de 0.

Lo que está marcado en el cuadro azul, son las determinaciones restantes de los diferentes
analitos. Viendo esto, podemos entender porque se siguen utilizando los reactivos, aunque ya no

tengan ninguna estabilidad a bordo.

Para su tranquilidad, los reactivos que ya no tienen estabilidad abordo, son controlados como los
demás, obteniéndose graficas sin desvíos significativos que invalidarían la corrida.

Este punto lo discutiremos en clase.

26
 Volviendo a la interpretación del gráfico de la HCV, se llega a la conclusión que
el reactivo está deteriorado, ya que la cantidad de determinaciones que le
quedaban eran 5 y la apertura de los controles había sido hace 3 días
(importante colocar la fecha de apertura)

Si hacemos un en suma de todo lo que tenemos que tener en cuenta para

interpretar un CC seria.

Calidad del Control (reconstitución, almacenamiento, etc.)

Calidad de Reactivo (días a bordo, fecha de vencimiento, cantidad de determinaciones)

Comprender si es aleatorio o sistemático.

Ya que, si es aleatorio, la acción es volver a procesarlo.

Todos estos temas serán abordados en la práctica para asi comprenderlos.

Les dejo un cuadro con las posibles causas por la cuál los controles quedan fuera de rango

Posibles causas de controles fuera de rango

Diferente N° Lote y no se actualizo
Posición incorrecta del control en el analizador
Aspiración anómala de la pipeta
Mala reconstitución
Mala refrigeración después de reconstituido
Mala conservación
Reactivos vencidos o con fecha de estabilidad abordo vencida

27
 CALIBRACIÓN
¿Qué es la calibración?

Acciones que se llevan a cabo para la creación de

una curva (recta), que relaciona la absorbancia y
la concentración de una solución de referencia.

La solución de referencia o calibrador en nuestro

caso se llama Cfas.

Este calibrador contiene concentraciones

conocidas de analitos que fueron medidas por un
método de referencia. Debe reconstituirse ya
que viene de forma liofilizada.

Mediante fotos se intentará describir como el equipo realiza la curva de calibración. Tomaremos el
ejemplo de la curva que se
realiza para la Glucosa

La curva de calibración se
realiza (en este caso) a 2
puntos.

El Punto con absorbancia 0

corresponde al agua destilada

y el punto rojo corresponde al

valor del Cfas

las líneas punteadas

representan los valores
máximos tolerables que el
fabricante acepta para dar
como valida la curva. Estas pequeñas desviaciones es consecuencia de que nuestro equipo
automatizado no es tan exacto como el utilizado por el fabricante.

Una vez realizada la calibración, el equipo automáticamente calcula el factor (K), en este caso el
valor es de 305 (en la gráfica mirar abajo a la izquierda)

28
 Abs ST = Pendiente
[ST]

Como ya sabemos, para calcular la concentración de la muestra el equipo utiliza la fórmula:

[MUESTRA] = [ST] x Abs Muestra

Abs ST

Como ustedes ven, la fórmula de la gráfica está “al revés” si la comparamos con la fórmula que
está en el recuadro verde (la parte de la división). Es por esta razón que, al valor obtenido de la
pendiente, le hacemos el inverso, es decir 1/PENDIENTE

El inverso de la pendiente (1/Pendiente) se le denomina Factor, que muchas veces se lo

representa con la letra K

Si colocamos la letra “K” en la fórmula de arriba nos queda:

[MUESTRA] = K x Abs Muestra

Esta fórmula es la base de todos los cálculos para poder obtener la concentración del analito en
cuestión.

29
 Existen curvas de calibración
multipunto, por ejemplo, las
proteínas en orina.

En este caso se utilizan más de 2

puntos para realizar la curva.

¿Qué pasa cuando cambia el lote de Calibrador?

En este ejemplo vemos como para el mismo analito ALBT2 (albumina) los lotes de Cfas tienen
concentraciones diferentes.

Esto tiene consecuencia directa en la curva de calibración, ya que si el equipo “espera” el valor de
albumina del lote 369113, y nosotros procesamos el lote 361200, (sin descargarle esta nueva
información) es muy probable que la curva quede con una pendiente diferente, superando los
máximos tolerables y no se acepte la calibración. En la siguiente imagen se trata de explicar lo
escrito en este párrafo.

30
 El lote que tiene instalado
en este momento es el
369113 cuyo valor es de
2.44, representado con el
cuadrado rojo, también se
muestran los máximos
tolerables para ese valor.

Al pasar el lote 391200

cuyo valor es de 2.54, la
curva (azul) se desplaza
hacia arriba, superando
los máximos tolerables y
emitiendo la alarma de
ERROR DE CALIBRACIÓN.

DATO: los calibradores son medidos 2 veces por el equipo. De esos 2 resultados se realiza una
media. Los datos obtenidos en esas 2 mediciones deben tener coherencia entre sí.

Ejemplo: Si en primera instancia se obtiene un valor de 0.70g/l, necesariamente en la segunda

medición se espera un valor que no se desvía más de un 10%--> (0.07g/l)

Si el valor obtenido supera este porcentaje, la curva será rechazada. Esto puede suceder cuando el
calibrador que se colocó es escaso, entonces en una primera instancia el volumen pipeteado es el
adecuado, pero en la segunda medición el volumen es insuficiente, obteniéndose así resultados
discordantes.

Posibles causas de ERROR DE CALIBRACIÓN

Diferente N° Lote de calibrador y no se actualizo
Posición incorrecta del calibrador en el analizador
Falta agua destilada en la posición que le corresponda para realizar el punto 0 abs
Aspiración anómala de la pipeta
Mala reconstitución
Mala refrigeración después de reconstituido el calibrador
Mala conservación
Reactivos vencidos o con fecha de estabilidad abordo vencida

31
 Índices Séricos
Las pruebas de laboratorio pueden ser afectados por componentes endógenos y exógenos en la
matriz de la muestra. Algunos de estos factores potencialmente interferentes pueden ser
detectados en la fase preanalítica por el color de la muestra.

Las interferencias debidas a la lipemia (turbidez), la hemólisis y la ictericia (bilirrubina) son difíciles
de predecir pues dependen mucho del método aplicado

Los resultados de los índices séricos son muy útiles para monitorizar el grado de posibles
interferencias por lipemia (turbidez), hemólisis e ictericia (bilirrubina).

Lipemia→ La lipemia se define como la turbidez evidente a simple vista en

muestras de suero y plasma. La causa más frecuente de lipemia es una elevada
concentración de triglicéridos en el plasma y el suero. Puede deberse a una
alimentación no balanceada, a trastornos del metabolismo de las lipoproteínas
o a la infusión de lípidos.

Hemólisis→ La hemólisis se define como la liberación de componentes

intracelulares de los eritrocitos y de otras células sanguíneas a la parte
extracelular de la sangre. Puede aparecer in vivo así como in vitro en todas las
etapas de la fase preanalítica (muestreo, transporte de las muestras y
almacenamiento). Tras separar los eritrocitos, la hemólisis se detecta en el
suero y el plasma por su color rojo causado por la hemoglobina.

32
Ictericia →La ictericia se define como una concentración elevada de diferentes tipos de
bilirrubina (conjugada y sin conjugar) en suero y plasma. Las concentraciones elevadas
de bilirrubina pueden deberse a enfermedades o afecciones en las que, a causa de
procesos hemolíticos, se produce más bilirrubina de la que el hígado es capaz de
metabolizar. La inmadurez hepática y otras enfermedades en las que el mecanismo de
conjugación de la bilirrubina está dañado pueden causar aumentos similares de la
bilirrubina circulante sin conjugar. La obstrucción del conducto biliar o el daño de la
estructura hepatocelular causan concentraciones elevadas de la bilirrubina conjugada
(directa) y de la bilirrubina sin conjugar (indirecta) en el torrente sanguíneo.

El principio de medición se basa en el cálculo de mediciones de absorbancia de

muestras diluidas a diversos pares de longitudes de onda bicromáticas a fin de obtener
una representación semicuantitativa de los niveles de lipemia, hemólisis e ictericia
presentes en las muestras de suero y plasma.

Los analizadores extraen

una alícuota de muestra de
paciente y la diluyen en
Bilirrubina
una solución fisiológica
(cloruro de sodio al 0.9 %)
a fin de medir la
absorbancia de la lipemia a
660 nm (longitud de onda
primaria) y 700 nm
(longitud de onda
secundaria), de la hemólisis
a 570 nm (longitud de onda
primaria) y 600 nm
(longitud de onda
secundaria), y de la ictericia
a 480 nm (longitud de onda primaria) y 505 nm (longitud de onda secundaria)

33
EJERCICIOS
PRÁCTICOS

34
 1) La imagen muestra la planta depuradora ELGA, con respecto a la misma marque la o las
respuestas correctas:

A) La flecha amarilla indica el filtro de 0.2 micras

B) La flecha azul indica el filtro UV
C) La flecha roja indica la cantidad de agua disponible en el equipo
D) Ésta planta posee además un filtro de osmosis inversa que no está indicado en la foto
E) La conductancia de la planta debe ser mayor a 1.

2) La imagen muestra una vista superior del analizador Cobas c311, con respecto a la
misma marque la o las respuestas correctas:

A) La flecha amarilla señala la pipeta de reactivos

B) La flecha roja indica el disco de muestra
C) La flecha azul indica el disco donde se pueden
colocar las muestras y los controles
D) Las flechas negras indican los reactivos de ISE
E) El círculo verde marca la pipeta de muestra

35
 3) La imagen muestra una luz ubicada en alguna parte de analizador, con respecto a la
misma marque la o las respuestas correctas:

A) Indica que los reactivos están disponibles

B) Indica que el mantenimiento diario se realizó
correctamente
C) Indica que se puede tener acceso al disco de
muestras
D) Indica que los desechos están vacíos
E) Indica que los controles están en rango

4) marque la o las respuestas correctas respecto a la imagen

A) El equipo encargado de
la depuración del agua se
encuentra detrás de las
puertas marcadas con la flecha
verde.
B) El equipo encargado de
suministrar información sobre
controles, calibradores,
insertos, etc., se marca con la
flecha azul.
C) La flecha amarilla marca
la computadora donde se
observan los controles de calidad
D) La flecha azul marca la unidad de control del cobas c 311

5) Con respecto al INICIO DE JORNADA LABORAL hablado en la clase práctica.

Marque lo correcto con respecto al orden de las actividades que se deben llevar a cabo.

A) Vaciar residuos, controlar, realizar mantenimiento diario, chequear el fotómetro, chequear

reactivos
B) Vaciar residuos, Chequear reactivos, controlar, realizar mantenimiento diario, chequear
fotómetro
C) Vaciar residuos, Chequear reactivos, realizar mantenimiento diario, chequear fotómetro,
controlar
D) Vaciar residuos, Chequear reactivos, chequear fotómetro, realizar mantenimiento diario.

36
 6) Con respecto al mantenimiento diario marque la o las respuestas correctas.

A) Se realiza de manera automática al menos 2 veces al día

B) Una de las actividades que lleva adelante el equipo es el cambio de la lámpara fotométrica
C) Una actividad importante que lleva adelante el equipo es el cambio de agua de incubación
D) El chequeo del fotómetro no entra en las actividades del mantenimiento diario, sino que
corresponde al mantenimiento semanal.

7) En el siguiente esquema se muestran 2 gráficas de calibración (A y B) de diferentes

analitos, con respecto a las mismas
marque la o las respuestas correctas:

A) La grafica A es multipunto
B) La grafica B es multipunto
C) Los calibradores se miden
mínimamente 2 veces
D) La flecha Roja en la gráfica A
indica el valor de absorbancia del
analito
E) La flecha verde en la gráfica B
corresponde a un valor del factor
F) La flecha azul en la gráfica B
indica que ese valor se fue de
linealidad
G) La flecha celeste en el gráfico A
indica el valor de absorbancia del
blanco
H) El objetivo de la calibración es
hallar un nuevo factor

37
 8) La imagen muestra una lista de los analitos del cobas c311, sus respectivos controles y
los números de lote correspondientes a éstos.
Marque la o las respuestas correctas

A) La flecha azul indica un control

patológico en sangre
B) La flecha roja indica un control normal
en sangre
C) Los controles marcados con el recuadro
verde se deben reconstituir para luego separa en
alícuotas.
D) El Litio se controla específicamente
cuando se solicita
E) Si el control cambia de lote, no es
necesario calibrar la técnica.
F) Si el control cambia de lote, el equipo lo
detecta automáticamente.

9) Usted se encuentra de guardia en el Laboratorio de emergencia y necesita calibrar una

técnica, dado que el reactivo cambia el número de lote.
Se muestra la caja que contiene el calibrador Cefas y una captura de pantalla del analizador.
Con respecto a las acciones a tomar marque la o las opciones correctas

A) El calibrador Cefas debe reconstituirse antes de utilizarlo

B) Es un calibrador para calibrar diferentes analitos como por ejemplo la Bilirrubina Total
C) En este caso no debe realizarse ninguna acción a la hora de procesar el calibrador
D) Cualquier información que deseemos conocer del calibrador podemos utilizar el cobas link
E) Los valores de concentración de los analitos no varía de un lote a otro.
F) Si se abre un lote de calibrador igual al que está en uso, no requiere ninguna acción por parte
del operador.

38
 10) Usted se encuentra de guardia en el Laboratorio de emergencia y necesita controlar los
analitos diarios.
Se muestra una captura de pantalla de los controles del analizador y la caja de control nuevo que
UD acaba de abrir.
Con respecto a las acciones a realizar marque la o las opciones correctas.

A) La caja de control corresponde al nivel normal de los analitos

B) Se debe instalar, ya que es de diferente lote
C) Sirve para controlar analitos en sangre y orina
D) Si no instalamos un control nuevo, corremos el riesgo de que los analitos queden fuera de
rango
E) El cobas se actualiza automáticamente, no es necesario llevar a cabo ninguna acción si el lote es
de diferente numeración

11) Usted llega a la guardia y le solicitan que coloque los reactivos en heladera o a
temperatura ambiente.
Con respecto a lo mencionado anteriormente marque la o las correctas

A) La bilirrubina total (BILT3) se debe colocar a temperatura ambiente al igual que las proteínas
totales (TP2)
B) El reactivo de creatinina y el de urea deben colocarse en heladera
C) Los reactivos de urea (UREAL) y bilirrubina total deben colocarse en heladera
D) Los reactivos de proteínas totales y creatinina deben quedar a temperatura ambiente.
E) Una mala conservación de los reactivos es una de las causantes de que los controles se vayan de
rango

39
12) Con respecto al siguiente gráfico, marque la o las opciones correctas:

A) Se deben calibrar las técnicas que se encuentran a la derecha de la flecha

B) Es un error muy común por no haber descargado el control adecuado.
C) Se debe a una mala reconstitución del calibrador
D) Es un error frecuente relacionado a la lampara fotométrica
E) Se debe verificar que los controles estén en la posición que tienen asignada.

13) Complete los siguientes enunciados con las alarmas que aparecen a continuación
A) Samp C.
B) Calc?
C) >React
D) >Test
E) <Test
F) > Lin

La alarma______________ indica que se consumió todo el sustrato, la acción a seguir es la

dilución de la muestra.
La alarma______________ indica que por algún motivo no se puede realizar el cálculo
correspondiente para obtener el valor del analito.
La alarma______________ indica que la muestra puede tener fibrina. La acción a seguir es
quitar el coágulo de fibrina y reprocesar la muestra
La alarma______________ indica que el analito se fue de linealidad. La acción a seguir es
diluir la muestra
La alarma______________ indica linealidad anómala, la acción a seguir es chequear el
valor de la lámpara del fotómetro
La alarma______________ indica que el valor del analito está por debajo del límite de
detección. No se realiza ninguna acción para con esa muestra.

40
14) Nombre 5 posibles razones por la cual una calibración pueda darnos error.
1)
2)
3)
4)
5)

15) En base a la siguiente grafica marque la o las respuestas correctas

1) La grafica A es la
interferencia por Hemólisis
2) La grafica C es la
interferencia por bilirrubina
3) La grafica B es la
interferencia por hemolisis
4) Una reacción medida a 700
nm, tendrá como principal
interferente a la lipemia
5) Las enzimas que se miden
a 340nm no son interferidas por
la hemolisis
6)

16) Con respecto al control de calidad y la siguiente gráfica.

Marque la o las opciones correctas:

A) En el recuadro azul podemos

ver 2 errores aleatorios

B) Lo que sucede en el recuadro

rojo es debido al deterioro del
reactivo

C) Se debe calibrar la técnica

D) Posiblemente lo que suceda en

el recuadro rojo se deba a un
deterioro del control de ese nivel

E) Como ambos controles no están afectados, nos permite pensar que el reactivo esta en optimas
condiciones.

41
RESPUESTAS

42
Pregunta Respuesta
1 D
2 C, D
3 C
4 D
5 C
6 C
7 B, C, E, G, H
8 C, D, E
9 A, B, D
10 A, D
11 C, D, E
12 E
13 >REACT
CALC
SAMPS C
> TEST
>LIN
< TEST
14 VER
CUADRO:
Posibles
causas de
ERROR DE
CALIBRACIÓN
15 4
16 D, E

43