Análisis de Pulso y caza

( Pulse and Chase)

Yezibel Ortiz Rivera
 Objetivos
conocer y explorar más a fondo
la técnica molecular de Análisis
pulso y caza

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 ¿Qué es Análisis de pulso
y caza?
◉ Método para examinar un proceso celular que ocurre a través de
tiempo , mediante la exposición sucesiva de células a un compuesto
radioactivo de uracilo que se utilizan para detectar ARN
◉ Los experimentos de persecución de pulso se utilizan a menudo para
estudiar la degradación de macromoléculas como proteínas o ARNm.
Las consideraciones para la elección de la duración del pulso incluyen
la toxicidad del pulso para la célula y la maximización del marcaje. En
el caso general de decaimiento no exponencial, variar la longitud del
pulso da como resultado patrones de decaimiento que se ven
diferentes. El análisis de estos patrones sin tener en cuenta la longitud
del pulso produciría parámetros de degradación incorrectos. (Celine
sin y colaboradores 2016)

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¿Como se utiliza esta técnica?
En un experimento de pulso y persecución, el
investigador rastrea la progresión de moléculas
radiomarcadas, como un aminoácido, a través de
una célula antes de que comience el experimento.
Las moléculas de proteína se sintetizan en un estado
estable a través de la traducción de ARNm por los
ribosomas. agregue una gran dosis de aminoácido
radiactivo a un medio de cultivo de células; luego,
los aminoácidos radiactivos se incorporan a las
proteínas fabricadas durante la síntesis de
proteínas; la fase de persecución comienza cuando
se agrega una gran cantidad de leucina no radiactiva
a la muestra después del comienzo de la
persecución. no se fabrican más proteínas
radiactivas

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Artículo Empírico
• Aquí proponemos un método
que incluye constructivamente
la longitud del pulso en el
análisis de patrones de
decaimiento y extrae los
parámetros del proceso de
degradación subyacente.
También mostramos cómo
extraer parámetros de
decaimiento de manera
confiable a partir de
mediciones tomadas durante
la fase de pulso.

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En la instantánea I, el pulso acaba de empezar. Los puntos
blancos representan la población de moléculas que ya existían
en la célula antes del pulso. Todas las moléculas recién
sintetizadas (puntos rojos) están marcadas por el pulso y son
medibles por el experimentador. A medida que el pulso continúa
en la instantánea II, vemos que aparecen más moléculas
marcadas. Mientras tanto, tanto las moléculas marcadas como
las no marcadas se degradan. En la instantánea III, el pulso ha
terminado desde hace algún tiempo. Las moléculas recién
sintetizadas a partir de este momento no están etiquetadas. De
nuevo, tanto las moléculas marcadas como las no marcadas se
degradan. En la instantánea IV, todas las moléculas marcadas se
han degradado. Las moléculas no marcadas continúan
sintetizándose y degradándose.

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Distribución de edad de las moléculas
marcadas, cada curva corresponde a una
fase en el panel

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Ajuste del modelo de estado
(línea negra) y ajuste
exponencial (línea roja) para
muestrear datos con un pulso
de 1 minuto (puntos azules).
Tenga en cuenta que en la
escala logarítmica
(abundancia)-lineal (tiempo),
los datos no se parecen a una
línea recta, por lo que se
necesita un modelo más
complicado que un solo
exponencial.

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 Referencias
o Aeon, B., Faber, A meta-analysis. PLOS
ONE. Retrieved November 10, 2022, from
https://journals.plos.org/plosone/article
?id=10.1371%2Fjournal.pone.0245066
o Scribd. (n.d.). Experimento Pulso y Caza.
Scribd. Retrieved November 11, 2022,
from
https://www.scribd.com/325310131/Exp
erimento-Pulso-y-Caza