3.

Procedimientos 
3.1 Verificación de la actividad enzimática 
Verificación de la actividad enzimática 
En tubos de ensayos marcados, limpios y secos, pipetee en orden las soluciones que se indican en el cuadro 1 

 
Mezcle bien y coloque los tubos en baño de maría a 37oC durante 25 minutos. Agite los tubos cada 5 minutos sin sacarlos
del baño. Observe el color inicial y el final en cada uno de los tres ensayos. 
Si los colores no son definidos se puede emplear el siguiente código 
No hay cambio de color _ 
Color claro + 
Color oscuro ++ 
Color muy oscuro +++ 
3.2 Efecto de la temperatura 
Efecto de la temperatura 
Tome 4 tubos de ensayo y mida en cada uno de ellos 1 mL del extracto enzimático. Coloque los tubos a
diferentes temperaturas durante 10 minutos, así: 
Tubo 1 a 0oC (en hielo) 
Tubo 2 a 37oC (en baño de agua) 
Tubo 3 a 60oC (en baño de agua) 
Tubo 4 a 92oC (en agua hirviendo) 
Al cabo de 10 minutos agregue a cada uno, 1 mL de catecol al 0,2%. Déjelos a la temperatura indicada por 5
minutos más. Observe los resultados y escriba en su informe los cambios de color presentados, según el código
indicado anteriormente. 
Por último, tome los tubos 1, 3 y 4 colóquelos en baño de agua a 37oC durante 10 minutos. Si observa algún
cambio regístrelo y analícelo en el informe. 
3.3 Naturaleza química de las enzimas 

 
3.4. Efecto del pH 
Efecto del pH sobre la actividad de la catecolasa 
Marque 4 tubos de ensayo, limpios y secos y mida los volúmenes solicitados en el cuadro 3 

 
Lleve los tubos a una temperatura de 37oC durante 10 minutos y agregue a cada uno 1 mL de catecol. Continúe
el calentamiento por 15 minutos. Observe, registre los resultados y plantee el pH óptimo para la enzima  
3.5 Efecto del ácido cítrico sobre la actividad de la catecolasa  
Efecto del ácido cítrico sobre la actividad de la catecolasa 
Esta enzima funciona removiendo iones hidrógeno (H+) de las moléculas del catecol para formar quinona.
Algunos ácidos como el cítrico son compuestos iónicos que liberan iones de H+ cuando se les adiciona agua.
Tan pronto como los iones de H+ se remueven por la catecolasa, se reemplazan por los iones de hidrógeno, pero
esta vez los del ácido cítrico. La reversibilidad en la reacción previene la formación de compuestos coloreados. 
1. Corte un trozo de cada muestra de aproximadamente 5 mm de espesor y divídalo en dos partes iguales. 
2. Raspe la superficie de ambos trozos, de cada muestra, con una cuchilla con el objetivo de liberar la enzima
catecolasa por rompimiento celular. 
3. Cubra completamente uno de los trozos con agua destilada y al otro con ácido cítrico. 
4. Después de 1 minuto cubra los trozos con catecol. 
5. Espere 5 minutos y observe lo que ocurre
Referencias bibliográficas (Norma APA) 

 Acetato de plomo. (2022). Ficha de datos de seguridad. Quimicompuestos. Recuperado el 22 de

marzo de 2023, de https://www.quimicompuestos.com/fichas-seguridad/acetato-de-plomo-99
 Adolph's. (2022). Adolph's Original Meat Tenderizer. Recuperado el 28 de marzo de 2022, de
https://www.mccormick.com/adolphs/products/seasoning-mixes/meat-tenderizer-original-unseasoned
 Bairoch, A. (2000). The ENZYME database in 2000. Nucleic Acids Research, 28(1), 304-305. doi:
10.1093/nar/28.1.304
 Berg, J. M., Tymoczko, J. L., & Stryer, L. (2002). Biochemistry. W. H. Freeman.
 Catechol. (2022). Safety data sheet. Fisher Scientific. Recuperado el 22 de marzo de 2023, de
https://www.fishersci.com/store/msds?partNumber=C110-500
 Feniltiourea. (2022). Ficha de datos de seguridad. Merck Millipore. Recuperado el 22 de marzo de
2023, de https://www.merckmillipore.com/ES/es/product/Feniltiourea,MDA_CHEM-805803
 Food Network. (s.f.). Meat Tenderizer. Recuperado el 22 de marzo de 2023, de
https://www.foodnetwork.com/how-to/packages/help-around-the-kitchen/meat-tenderizer
 Kaur, C., & Kapoor, H. C. (2002). Antioxidants in fruits and vegetables-the millennium's health.
International Journal of Food Science and Technology, 36(7), 703-725.
 Kholodenko, R. V., & Tikhonova, T. V. (2017). Structure and function of catechol oxidase. Biochemistry
(Moscow), 82(4), 333-349. doi: 10.1134/S0006297917040015
 Kosman, D. J. (2010). Copper uptake and allocation in fungi. Fungal genetics and biology, 47(11), 757-
765. doi: 10.1016/j.fgb.2010.04.004
 McCormick. (2022). McCormick® Meat Tenderizer. Recuperado el 28 de marzo de 2022, de
https://www.mccormick.com/spices-and-flavors/herbs-and-spices/meat-tenderizer
 (Puig, 2019) Puig, R. P. (2019, 4 julio). Catalasa: características, estructura, funciones, patologías.
Lifeder. https://www.lifeder.com/catalasa/
 Wang, Y., Li, L., Chen, G., & Zhang, Y. (2015). Purification and characterization of catechol oxidase
from lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.) plumule. International Journal of Biological Macromolecules, 80,
237-245. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2015.05.039
 Wei, Z., Li, Y., Liu, Y., & Shi, S. (2013). Characterization of catechol oxidase from Morus alba L. and its
response