Tema 8.

Cinética enzimática

 Velocidad y orden de reacción

 Cinética enzimática: ecuación de Michaelis-Menten

 Determinación y significado de los parámetros Vmax y Km

 Cinética de las reacciones con más de un sustrato

 Cinética

Estudia las velocidades de las reacciones y la forma en que

éstas cambian en respuesta a modificaciones
experimentales

Enzimas aumentan la velocidad sin modificar la constante

de equilibrio de la reacción

K1
E+S E+P
K-1
 Cinética de las reacciones enzimáticas

Las reacciones enzimáticas siguen los principios generales de la cinética de las

reacciones químicas, pero además muestran un rasgo característico: la
SATURACIÓN POR SUSTRATO

Vo = Velocidad inicial ( nº moles P formados/s )

Variación de la velocidad (V) en función

de la [S], para una [E] determinada
 Teoría de la acción enzimática

L. Michaelis M. Menten

 En 1913 propusieron una ecuación de velocidad que explica el

comportamiento cinético de las enzimas

K1 K2
E+S ES E + P
K-1
 Teoría de la acción enzimática
K1 K2
E+S ES E + P
K-1

 El complejo ES se encuentra en
estado estacionario
Concentración

 Bajo condiciones de saturación,

toda la enzima interviene en la
formación del complejo ES

 Cuando toda la enzima se

encuentra en forma de complejo ES,
la velocidad de la reacción es la
Tiempo máxima posible (Vmáx)
 Ecuación de Michaelis-Menten
K1 K2
E+S ES E + P
K-1

K2 + K-1
Km =
K1

[S]
Vo = Vmáx
Km + [ S ]
Ecuación de Michaelis-Menten

[S]
Vo = Vmáx
Km + [ S ]

[ S ] << Km
Vmáx
Vo = [S]
Km

[ S ] >> Km
Vo = Vmáx

[ S ] = Km
Vo = ½ Vmáx
 Km: constante de Michaelis

Km: concentración de sustrato a la cual la velocidad de la reacción es ½ Vmax

K1 K2
E+S ES E + P
K-1

K2 + K-1 K-1
Km = Si K2 <<< K-1 Km =
K1 K1

 Km índice de afinidad

Km alta poca afinidad K-1 > K1

Km baja alta afinidad K-1 < K1

 Valores de Km próximos a las [S] fisiológicas

 Cálculo de Km y Vmax por ecuación de Lineweaver-Burk

Dobles recíprocos de ecuación de Michaelis-Menten

[S]
Km Vo = Vmáx
Vmáx Km + [ S ]

1 Km + [ S ]
=
V0 Vmáx [ S ]

1
V0
= ( )
Km
Vmáx
1
[S]
+
1
Vmáx

y = a x + b
 Parámetros enzimáticos

 Km: concentración de sustrato a la cual la velocidad de la reacción es ½ Vmax

 Vmáx: velocidad cuando todos los centros activos están ocupados con S,
velocidad máxima teórica.

 Kcat: número de recambio, número de moléculas de sustrato convertidas en

producto por molécula de enzima y unidad de tiempo, en condiciones de
saturación de sustrato. Equivalente a la constante de velocidad del paso de
la reacción limitante.

 Unidad de enzima (UI): Cantidad de enzima necesaria para transformar 1

µmol sustrato por min.

 Katal (Kat): cantidad de enzima para transformar un mol sustrato por seg.
1 Kat = 6 x 107 UI
Parámetros enzimáticos
 Reacciones enzimáticas con dos sustratos

 Con formación de un complejo ternario

• Al azar

• Ordenado

 Sin formación de un complejo ternario: mecanismo ping-pong