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INVESTIGACIÓN  |  INFORMES

BIODEGRADACIÓN fibras  de  los  hongos  filamentosos  Fusarium  oxy  
sporum  y  F.  solani,  que  han  demostrado  crecer  en  un  
medio  mineral  que  contiene  hilos  de  PET  [aunque  no  

Una  bacteria  que  degrada  y   se  especificaron  los  niveles  de  crecimiento  (5,  6)].  Una  
vez  identificados,  los  microorganismos  con  la  maquinaria  

asimila  poli(tereftalato  de  etileno) enzimática  necesaria  para  degradar  el  PET  podrían  
servir  como  remediación  ambiental
así  como  una  plataforma  de  degradación  y/o  
Shosuke  Yoshida,1,2*  Kazumi  Hiraga,1  Toshihiko  Takehana,3  Ikuo  Taniguchi,4 fermentación  para  el  reciclaje  biológico  de  productos  
Hironao  Yamaji,  1  Yasuhito  Maeda,  5  Kiyotsuna  Toyohara,  5  Kenji  Miyamoto,  2  † de  desecho  de  PET.
Yoshiharu  Kimura4,  Kohei  Oda1  † Recolectamos  250  muestras  ambientales  
contaminadas  con  desechos  de  PET,  incluidos  
El  poli(tereftalato  de  etileno)  (PET)  se  usa  ampliamente  en  todo  el  mundo  en  productos  plásticos  y  su  acumulación   sedimentos,  suelo,  aguas  residuales  y  lodos  activados  
en  el  medio  ambiente  se  ha  convertido  en  una  preocupación  mundial.  Debido  a  que  se  ha  pensado  que  la  capacidad   de  un  sitio  de  reciclaje  de  botellas  de  PET  (7).  Usando  
de  degradar  enzimáticamente  el  PET  está  limitada  a  unas  pocas  especies  de  hongos,  la  biodegradación  aún  no  es   estas  muestras,  buscamos  microorganismos  que  
una  estrategia  viable  de  remediación  o  reciclaje.  Mediante  el  cribado  de  comunidades  microbianas  naturales   pudieran  usar  películas  de  PET  de  baja  cristalinidad  
expuestas  al  PET  en  el  medio  ambiente,  aislamos  una  nueva  bacteria,  Ideonella  sakaiensis  201­F6,  que  puede   (1,9  %)  como  la  principal  fuente  de  carbono  para  el  
utilizar  el  PET  como  su  principal  fuente  de  energía  y  carbono. crecimiento.  Una  muestra  de  sedimento  contenía  un  
Cuando  se  cultiva  en  PET,  esta  cepa  produce  dos  enzimas  capaces  de  hidrolizar  PET  y  el  intermedio  de  reacción,   consorcio  microbiano  distinto  que  se  formó  en  la  
ácido  mono(2­hidroxietil)  tereftálico.  Se  requieren  ambas  enzimas  para  convertir  enzimáticamente  el  PET  de  manera   película  de  PET  durante  el  cultivo  (Fig.  1A)  e  indujo  un  
eficiente  en  sus  dos  monómeros  ambientalmente  benignos,  ácido  tereftálico  y  etilenglicol. cambio  morfológico  en  la  película  de  PET  (Fig.  1B).  La  
microscopía  reveló  que  el  consortium  de  la  película,  denominado  “no

1
Los  plásticos  con  propiedades  deseables  como   degradación  (2,  3).  Solo  en  2013  se  produjeron   Departamento  de  Biología  Aplicada,  Facultad  de  Ciencias  Textiles,  
Instituto  de  Tecnología  de  Kioto,  Matsugasaki,  Sakyo­ku,  Kioto  606­8585,  
durabilidad,  plasticidad  y/o  transparencia  se  han   alrededor  de  56  millones  de  toneladas  de  PET  en  todo   2
Japón. Departamento  de  Biociencias  e  
PAG producido  industrialmente  durante  el  último  siglo   el  mundo,  lo  que  provocó  una  mayor  producción   Informática,  Universidad  de  Keio,  3­14­1  Hiyoshi,  Kohoku­ku,  3  
Yokohama,  
y  se  han  incorporado  ampliamente  a  los   industrial  de  sus  monómeros,  ácido  tereftálico  (TPA)  y   Kanagawa  223­8522,  Japón. Laboratorio   marzo  
2016
de  
de  
26  
el  

productos  de  consumo  (1).  Muchos  de  estos   etilenglicol  (EG),  ambos  derivados  del  petróleo  crudo.   de  materiales  de  ciencias  de  la  vida,  ADEKA,  7­2­34  Higashiogu,  

4
Arakawa­ku,  Tokio  116­8553,  Departamento  
Japón. de  Ciencias  de  
productos  son  notablemente  persistentes  en  el  medio   Se  han  introducido  grandes  cantidades  de  PET  en  el  
Polímeros,  Facultad  de  Ciencias  Textiles,  Instituto  de  Tecnología  
ambiente  debido  a  la  ausencia  o  baja  actividad  de  las   medio  ambiente  a  través  de  su  producción  y  eliminación,   5
de  Kioto,  Matsugasaki,  Sakyo­ku,  Kioto  606­8585,  Japón. Ecología
enzimas  catabólicas  que  pueden  descomponer  sus   lo  que  ha  dado  lugar  a  la  acumulación  de  PET  en  los   Material  relacionado  Instituto  de  Investigación  de  Innovación  del  

constituyentes  plásticos.  En  particular,  los  poliésteres   ecosistemas  de  todo  el  mundo  (4). Grupo,  Teijin,  Hinode­cho  2­1,  Iwakuni,  Yamaguchi  740­8511,  Japón.

*Dirección  actual:  Departamento  de  Química  de  Polímeros,  Escuela  
que  contienen  una  alta  proporción  de  componentes   Hay  muy  pocos  informes  sobre  la  degradación  
de  Graduados  de  Ingeniería,  Universidad  de  Kyoto,  Nishikyo­ku,  Kyoto  
aromáticos,  como  el  poli(tereftalato  de  etileno)  (PET),   biológica  del  PET  o  su  utilización  para  apoyar  el   615­  8530,  Japón.  †Autor  correspondiente.  Correo  electrónico:  
crecimiento  
son  químicamente  inertes,  lo  que  resulta  en  resistencia  a  los  microbios. microbiano.  Ejemplos  raros  incluyen  mem kmiyamoto@bio.  keio.ac.jp  (KM);  bika@kit.ac.jp  (KO) Descargado  
de

10

Pérdida  
peso  
(mg)
de  
20

30

40

50

MASCOTA
60  
película 0 20 40 60 80

Tiempo  de  cultivo  (días)

1 1 2 3
2 0

6 10
3
4 20
4 6 Pérdida  
peso  
(mg)
de  

30
5
5 40
50
8 60
7 7 8
0 20 40 60
910 9  10
Tiempo  de  cultivo  (días)

Figura  1.  Crecimiento  microbiano  en  PET.  La  degradación  de  la  película  de  PET  (60  mg,  20  ×  15  ×  0,2  mm)  por   vitaminas)  el  medio  se  cambió  semanalmente.  (D  a  F)  Imágenes  SEM  de  células  de  I.  sakaiensis  cultivadas  en  
el  consorcio  microbiano  no.  46  a  30°C  se  muestra  en  (A)  a  (C). película  PET  durante  60  horas.  Barras  de  escala,  1  mm.  Las  puntas  de  flecha  en  el  panel  izquierdo  de  (D)  indican  
El  medio  MLE  (lechuga  y  huevo  modificado)  (10  ml)  se  cambió  cada  dos  semanas. los  puntos  de  contacto  de  los  apéndices  celulares  y  la  superficie  de  la  película  de  PET.
(A)  Crecimiento  de  no.  46  en  película  PET  después  de  20  días.  (B)  Imagen  SEM  de  una  película  de  PET   Las  ampliaciones  se  muestran  en  el  panel  derecho.  Las  flechas  en  (F)  indican  apéndices  entre  la  celda  y  la  
degradada  después  de  70  días.  El  recuadro  muestra  una  película  de  PET  intacta.  Barra  de  escala,  0,5  mm.  (C)   superficie  de  la  película  de  PET.  (G)  Imagen  SEM  de  una  superficie  de  película  de  PET  degradada  después  de  
Curso  temporal  de  la  degradación  de  la  película  de  PET  por  no.  46.  La  degradación  de  la  película  de  PET  por  I.   lavar  las  células  adherentes.  El  recuadro  muestra  una  película  de  PET  intacta.
sakaiensis  201­F6  a  30  °C  se  muestra  en  (D)  a  (H).  El  YSV  (extracto  de  levadura–carbonato  de  sodio– Barra  de  escala,  1  mm.  (H)  Evolución  temporal  de  la  degradación  de  la  película  de  PET  por  I.  sakaiensis.

1196  11  DE  MARZO  DE  2016  •  VOL  351  NÚMERO  6278 cienciamag.org  CIENCIA
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una  mezcla  de  bacterias,  células  similares  a  levaduras  y   Base  de  datos  de  taxonomía  de  información  biotecnológica   Actualmente  hay  pocos  ejemplos  conocidos  de  

protozoos,  mientras  que  el  líquido  de  cultivo  era  casi   con  el  identificador  1547922).  Además  de  encontrarse  en   esterasas,  lipasas  o  cutinasas  que  sean  capaces  de  
transparente  (Fig.  1A).  Este  consorcio  degradó  la   el  fluido  de  cultivo,  se  observaron  células  en  la  película   hidrolizar  PET  (8,  9).  Para  explorar  los  genes  involucrados  
superficie  de  la  película  de  PET  (fig.  S1)  a  una  tasa  de   (Fig.  1D)  y  parecían  estar  conectadas  entre  sí  por   en  la  hidrólisis  de  PET  en  I.  sakaiensis  201­F6,  
0,13  mg  cm–2  día–1  a  30  °C  (Fig.  1C),  y  el  75  %  del   apéndices  (Fig.  1E).  Se  observaron  apéndices  más  cortos   ensamblamos  un  borrador  de  secuencia  de  su  genoma  
carbono  de  la  película  de  PET  degradado  se  catabolizó   entre  las  células  y  la  película;  estos  podrían  ayudar  en  la   (tabla  S1).  Un  marco  de  lectura  abierto  (ORF)  identificado,  
en  CO2  a  28  °C.  C  (figura  S2). entrega  de  enzimas  secretadas  en  la  película  (Fig.  1,  D  y   ISF6_4831,  codifica  una  lipasa  putativa  que  comparte  un  
Usando  diluciones  limitantes  del  consorcio  no.  46  que   F). 51  %  de  identidad  de  secuencia  de  aminoácidos  y  residuos  
fueron  cultivadas  con  película  PET  para  enriquecer  por La  película  de  PET  se  dañó  extensamente  (Fig.  1G)  y  se   catalíticos  con  una  hidrolasa  de  Ther  mobifida  fusca  (TfH)  
microorganismos  nutricionalmente  dependientes  del  PET,   degradó  casi  por  completo  después  de  6  semanas  a  30°C   (fig.  S4  y  tabla  S2)  que  muestra  actividad  hidrolítica  de  
logramos  aislar  con  éxito  una  bacteria  capaz  de  degradar   (Fig.  1H).  En  el  curso  de  la  subcultura  no.  46,  encontramos   PET  (10).  Purificamos  las  correspondientes  proteínas  
y  asimilar  el  PET.  La  cepa  representa  una  nueva  especie   un  subconsorcio  que  perdió  su  capacidad  de  degradación   recombinantes  de  I.  sakaiensis  (fig.  S5)  y  las  incubamos  
del  género  Ideonella,  para  la  cual  proponemos  el  nombre   de  PET.  Este  subconsorcio  carecía  de  I.  sakaiensis  (fig.   con  película  PET  a  30°C  durante  18  horas.  Se  desarrollaron  
Ideonella  sakaiensis  201­F6  (depositado  en  el  Centro   S3),  lo  que  indica  que  I.  sakaiensis  está  funcionalmente   picaduras  prominentes  en  la  superficie  de  la  película  (Fig.  
Nacional  de involucrada  en  la  degradación  de  PET. 2A).  Mono(2­hidroxietilo)

grupo  termobifida
4OYY ADV92528  
(humicola  inusual)
TfH
(T.  fusca)
ADV92526
ADV92527
(T.  cellulosilytica)
(T.  cellulosilytica)
AFA45122.1   ADV92525  
991  982  997
(T.  halotolerans) (T.  alba)

1000 BAO42836.1  
668 (Saccharomonospora  viridis)
1000 1000
FSC 986
1000

REUNIÓ O O
A CH2  CH2 O C C OH
LCC
10mV
O O
A C COH

TPA se  convierte O O
A CH2  CH2 O C C O  CH2  CH2  OH PETasa
18:00

0h
0.1
18  19  20  21  22  23  24 ADH43200.1  
Tiempo  de  retención  (min) (Bacillus  subtilis)

ésteres  pNP­alifáticos  (a) Película  de  PET  (b) licenciado  en  Letras se  convierte

hcPET 10
pNP­acetato  (C2)  pNP­
PETasa butirato  (C4)  pNP­
LCC
caproato  (C6)  pNP­ 100
PETasa
caprilato  (C8)
PETasa
TfH 10­1
TfH
TfH
10­2
LCC
TPA b/a(C2)  
LCC Compuestos  
liberados  
totales  
(mM)

REUNIÓ b/a(C4)  
TPA 10­3
b/a(C6)   FSC
FSC se  convierte
b/a(C8) FSC REUNIÓ

10­4
0  40  80  120  0  ­1) 0.1 0.2 0.3 ­5  ­4  ­3  ­2 ­1  0 0 0.4 0.8 0 0,010  0,005   0.015 20  30  40  50  60  70  80
Kcat  aparente  (seg. Compuestos  liberados  (mM) relación  log10 Kcat  aparente  (seg­1) Compuestos  liberados  (mM) Temperatura  (°C)

Fig.  2.  La  proteína  ISF6_4831  es  una  PETasa.  Los  efectos  de  la  PETasa  en  la  película  de   panel  a  los  del  panel  más  a  la  izquierda).  Todas  las  reacciones  se  realizaron  en  tampón  
PET  se  muestran  en  (A)  y  (B).  La  película  de  PET  (diámetro,  6  mm)  se  incubó  con  PETasa   de  pH  7,0  a  30°C.  La  película  de  PET  se  incubó  con  enzima  50  nM  durante  18  horas.
50  nM  en  tampón  de  pH  7,0  durante  18  horas  a  30°C.  (A)  Imagen  SEM  de  la  superficie  de   (E)  Actividad  de  las  enzimas  hidrolíticas  de  PET  para  PET  altamente  cristalizado  (hcPET).  
la  película  de  PET  tratada.  El  recuadro  muestra  una  película  de  PET  intacta.  Barra  de   El  hcPET  (diámetro,  6  mm)  se  incubó  con  PETasa  50  nM  o  TfH,  LCC  o  FsC  200  nM  en  
escala,  5  mm.  (B)  Espectro  de  cromatografía  líquida  de  alta  resolución  de  los  productos   tampón  bicina­NaOH  de  pH  9,0  durante  18  horas  a  30  °C.  (F)  Efecto  de  la  temperatura  
liberados  de  la  película  de  PET.  (C)  Árbol  filogenético  sin  raíces  de  enzimas  hidrolíticas   sobre  la  hidrólisis  enzimática  de  la  película  de  PET.  La  película  de  PET  (diámetro,  6  mm)  
de  PET  conocidas.  Los  números  de  acceso  de  GenBank  o  Protein  Data  Bank  (con  la   se  incubó  con  PETasa  50  nM  o  TfH,  LCC  o  FsC  200  nM  en  tampón  bicina­NaOH  de  pH  
fuente  de  proteína  del  organismo  entre  paréntesis)  se  muestran  en  las  hojas.  Los  valores   9,0  durante  1  hora.  Para  una  mejor  detección  de  los  productos  liberados  en  (E)  y  (F),  se  
de  Bootstrap  se  muestran  en  los  puntos  de  bifurcación.  Barra  de  escala,  0,1  sustituciones   determinaron  el  pH  y  las  concentraciones  de  enzima  en  base  a  los  resultados  que  se  
de  aminoácidos  por  sitio  único.  (D)  Especificidad  de  sustrato  de  cuatro  enzimas  hidrolíticas   muestran  en  las  figs.  S6  y  S7,  respectivamente.
de  PET  filogenéticamente  distintas  (b/a  indica  la  proporción  de  los  valores  en  el  centro  izquierdoLas  barras  de  error  en  (D)  a  (F)  indican  SE  (n  ≥  3).

CIENCIA  cienciamag.org 11  DE  MARZO  DE  2016  •  VOL  351  NÚMERO  6278  1197
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Fig.  3.  Metabolismo  de  PET  por  I.  sakaiensis.  (A) Cambio  de  
Niveles  de  transcripción  de  genes  seleccionados  
O O
pliegue  (en  relación  
cuando  se  cultivan  en  TPA­Na,  película  PET  o  BHET,   con  la  maltosa)  10­1  100  101  102  103
*** ( CH2  CH2 O C C O )norte

en  relación  con  los  que  se  cultivan  en  maltosa  (PCA,   **
ácido  protocatequiico;  ORF#,  últimos  cuatro  dígitos  del   4831 PETasa  
número  ORF).  Los  valores  de  P  bilaterales  se  derivaron   ** **** (4831)
de  la  prueba  de  Baggerly  de  las  diferencias  entre  las   O O
0224
medias  de  dos  experimentos  independientes  de   *
**** A CH2  CH2 O C C OH
secuenciación  de  ARN  (*P  <  0,05;  **P  <  0,01).  Los   0076
colores  corresponden  a  los  pasos  en  (B).  (B)  Vía   *
****
Degradac
TPA
de  prevista  de  degradación  de  PET  de  I.  sakaiensis.  
Primero  se  predijo  la  localización  celular  de  PETase  y  
MHETase  (texto  complementario,  sección  S1).  La  
0077 ****
** A
O
C
O
COH
MHETasa  
(0224)

0227
PETasa  extracelular  hidroliza  PET  para  producir  MHET  (el  producto  principal)  y  TPA.
MHETase,  una  lipoproteína  predicha,  hidroliza  MHET  
****
** O2
TPATP  (0076/0077)
0228
a  TPA  y  EG.  El  TPA  se  incorpora  a  través  del   ****** NADPH  +  H+
transportador  TPA  (TPATP)  (17)  y  es  catabolizado  por  
0230 TPADO  (0227/0228/0230)  
la  TPA  1,2­dioxigenasa  (TPADO),  seguida  de  la  1,2­ ****** NADP+
dihidroxi­3,5­ciclohexadieno­1,4­dicarboxilato  de  
Degradaci
PCA
de  hidrogenasa  (DCDDH) .  El  PCA  resultante  se  escinde  
en  el  anillo  mediante  la  PCA  3,4­dioxigenasa  (Pca34).
0229
**  
**
**
COOH

DCDDH  
(0229)
COOH

Pca34  
(0626/0627)
COOH

La  ruta  de  degradación  de  TPA  predicha  se  describe   0626 H
TPA­Na HOOC
con  más  detalle  en  el  texto  complementario  (sección  S2). ****  
**
OH
Película  de  PET OH HOOC
CO2 O2
0627
se  convierte HOOC  OH NADP+  NADPH+  H+ OH

ORF#
(ISF6_XXXX)

El  ácido  tereftálico  (MHET)  fue  el  principal  producto  liberado  por  
la  proteína  recombinante,  junto  con  cantidades  menores  de  TPA   Tabla  1.  Parámetros  cinéticos  de  MHETase.  Los  parámetros  cinéticos  se  determinaron  en  tampón  de  pH  7,0  a  30°C.  Debido  a  que  la  hidrólisis  
y  bis(2­hidroxietilo)
enzimática  de  PET  implica  una  reacción  heterogénea,  la  cinética  de  Michaelis­Menten  no  se  aplicó  a  PETasa.  ND,  no  detectado  (la  actividad  
TPA  (BHET)  (Fig.  2B).  Estos  resultados  sugieren  que  la  proteína  
estuvo  por  debajo  del  límite  de  detección  del  ensayo).
ISF6_4831  hidroliza  PET.  Esta  proteína  también  hidrolizó  BHET  
para  producir  MHET  sin  descomposición  adicional.
Sustrato kcat  (s−1 ) km  (mM)
Comparamos  la  actividad  de  la  proteína  ISF6_4831  con  la  
REUNIÓ 31  ±  0,8* 7,3  ±  0,6*
.................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .............
de  tres  enzimas  hidrolíticas  PET  evolutivamente  divergentes  
Película  de  PET
.................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .............
DAKOTA  DEL  NORTE

identificadas  a  partir  de  un  árbol  filogenético  que  construimos  
se  convierte 0,10  ±  0,004†
.................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .............
utilizando  enzimas  publicadas  (Fig.  2C  y  tabla  S2).  Purificamos  
ésteres   alifáticos  de  pNP  (pNP­acetato,  pNP­butirato)
.................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .............
DAKOTA  DEL  NORTE

TfH  de  un  actinomiceto  termófilo  (10),  homólogo  de  cutinasa  del  
Ésteres   aromáticos  (galato  de  etilo,  ferulato  de  etilo,  hidrato  de  ácido  clorogénico)
.................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .............
metagenoma  de  compost  de  rama  de  hoja  (LC  cutinasa  o  LCC)  
DAKOTA  DEL  NORTE

(11),  y  cutinasa  de  F.  solani  (FsC)  de  un  hongo  (fig.  S5)  (12),  y  
*Los  datos  se  muestran  como  medias  ±  SE  basados  en  un  modelo  de  regresión  no  lineal.  †La  kcat  notificada  es  la  
medimos  sus  actividades  frente  a  ésteres  alifáticos  ligados  a  p  
kcat  aparente  determinada  con  BHET  0,9  mM.  Se  muestra  la  media  ±  SE  de  tres  experimentos  independientes.
nitrofenol  (ésteres  alifáticos  pNP),  películas  de  PET  y  BHET  a  
30  °C  y  pH  7,0.
El  PET  reduce  en  gran  medida  la  hidrólisis  enzimática  de  sus   (figura  S7).  Las  proporciones  de  actividad  de  la  PETasa  en  
enlaces  éster  (9,  13).  La  PETasa  era  algo  lábil  al  calor,  pero  era   relación  con  las  otras  enzimas  disminuyeron  a  medida  que  
Para  los  ésteres  alifáticos  de  pNP,  que  son  los  preferidos  por   considerablemente  más  activa  contra  la  película  de  PET  a  bajas   aumentaban  las  concentraciones  de  la  enzima,  lo  que  indica  
las  lipasas  y  las  cutinasas,  la  actividad  de  la  proteína  ISF6_4831   temperaturas  que  TfH,  LCC  y  FsC  (Fig.  2F).  La  degradación   que  la  PETasa  hidrolizó  eficientemente  el  PET  con  una  menor  
fue  menor  que  la  de  TfH,  LCC  y  FsC  (Fig.  2D).  Sin  embargo,  la   enzimática  de  los  poliésteres  está  controlada  principalmente  por   difusión  de  la  enzima  en  la  fase  acuosa  y/o  en  los  recipientes  
actividad  de  la  proteína  ISF6_4831  contra  la  película  de  PET   la  movilidad  de  su  cadena  (14).  La  flexibilidad  de  la  cadena  de   de  plástico  utilizados  para  la  reacción.  La  PETasa  carece  de  
fue  120,  5,5  y  88  veces  mayor  que  la  de  TfH,  LCC  y  FsC,   poliéster  disminuye  a  medida  que  aumenta  la  temperatura  de   motivos  aparentes  de  unión  al  sustrato,  como  los  módulos  de  
respectivamente.  Se  observó  una  tendencia  similar  para  BHET   transición  vítrea  (9).  La  temperatura  de  transición  vítrea  del  PET   unión  a  carbohidratos  que  se  observan  generalmente  en  las  glucósidos  hidrola
(Fig.  2D).  La  preferencia  catalítica  de  la  proteína  ISF6_4831  por   es  de  alrededor  de  75  °C,  lo  que  significa  que  la  cadena  de   Por  lo  tanto,  sin  una  estructura  tridimensional  determinada  para  
la  película  de  PET  sobre  los  ésteres  alifáticos  de  pNP  también   poliéster  del  PET  se  encuentra  en  un  estado  vítreo  a  las   la  PETasa,  se  desconoce  el  mecanismo  de  unión  exacto.
fue  sustancialmente  mayor  que  la  de  TfH,  LCC  y  FsC  (380,  48   temperaturas  moderadas  apropiadas  para  las  reacciones  
y  400  veces  mayor  en  promedio,  respectivamente)  (Fig.  2D).   enzimáticas  mesofílicas.  La  especificidad  de  sustrato  de  la   MHET,  el  producto  de  la  hidrólisis  de  BHET  y  PET  mediada  
Por  lo  tanto,  la  proteína  ISF6_4831  prefiere  PET  a  los  ésteres   PETasa  y  su  destacada  actividad  hidrolítica  para  PET  en  estado   por  PETasa,  era  un  componente  muy  pequeño  en  el  
alifáticos,  en  comparación  con  las  otras  enzimas,  lo  que  lleva  a   vítreo  serían  fundamentales  para  mantener  el  crecimiento  de  I.   sobrenadante  de  I.  sakaiensis  cultivada  en  película  de  PET  (fig.  
su  designación  como  PET  hidrolasa  (denominada  PETasa). sakaiensis  en  PET  en  la  mayoría  de  los  entornos. S8),  lo  que  indica  un  rápido  metabolismo  de  MHET.  Se  ha  
confirmado  que  varias  enzimas  hidrolíticas  de  PET  hidrolizan  
MHET  (tabla  S2).  Para  identificar  las  enzimas  responsables  de  
PETase  también  fue  más  activo  que  TfH,  LCC  y  FsC  contra   I.  sakaiensis  se  adhiere  a  PET  (Fig.  1,  D  a  F)  y  secreta   la  degradación  de  PET  en  cultivos  de  I.  sakaiensis,  secuenciamos  
el  PET  comercial  derivado  de  botellas,  que  está  altamente   PETase  para  apuntar  a  este  material.  Comparamos  la  actividad   transcriptomas  de  ARN  de  células  de  I.  sakaiensis  que  crecen  
cristalizado  (Fig.  2E),  a  pesar  de  que  la  estructura  densamente   hidrolítica  de  PET  de  PETase  con  la  de  las  otras  tres  enzimas   en  maltosa,  tereftalato  disódico  (TPA­Na),  BHET,
empaquetada  de  PET  altamente  cristalizado hidrolíticas  de  PET.

1198  11  DE  MARZO  DE  2016  •  VOL  351  NÚMERO  6278 cienciamag.org  CIENCIA
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INVESTIGACIÓN  |  INFORMES

o  película  PET  (fig.  S9  y  tabla  S3).  Los  genes   REFERENCIAS  Y  NOTAS 16.  P.  Kersey  y  col.,  Nucleic  Acids  Res.  33,  D297–D302

catabólicos  para  TPA  y  el  metabolito  ácido   1.  V.  Sinha,  MR  Patel,  JV  Patel,  J.  Polym.  Reinar.  18,  8–25 (2005).

protocatequiico  (PCA)  aumentaron  drásticamente   (2010). 17.  M.  Hosaka  et  al.,  Appl.  Environ.  Microbiol.  79,  6148–6155  

(2013).
cuando  las  células  se  cultivaron  en  película  TPA­Na,  BHET  
2.  RJ  Moüller,  
  PET. I.  Kleeberg,  WD  Deckwer,  J.  Biotechnol.  86,  87–95  (2001).

Esto  contrasta  con  los  genes  para  el  catabolismo  de   EXPRESIONES  DE  GRATITUD
3.  D.  Kint,  S.  Munoz­Guerra,  Polym.  Int.  48,  346­352
la  maltosa  (Fig.  3A),  que  involucra  una  vía  distinta   (1999). Agradecemos  a  Y.  Horiuchi,  M.  Uemura,  T.  Kawai,  K.  Sasage  y  S.  Hase  por  su  
de  la  degradación  de  TPA  y  EG,  lo  que  indica  un   4.  L.  Neufeld,  F.  Stassen,  R.  Sheppard,  T.  Gilman,  Eds.,  The  New  Plastics   asistencia  en  la  investigación.  Damos  las  gracias  a  D.  Dodd,  H.  Atomi,  T.  

metabolismo  eficiente  de  TPA  por  parte  de  I.   Economy:  Rethinking  the  Future  of  Plastics  (Foro  Económico  Mundial,   Nakayama  y  A.  Wlodawer  por  sus  comentarios  sobre  este  manuscrito.

2016);  www3.weforum.org/docs/WEF_The_  New_Plastics_Economy.pdf. Este  estudio  fue  apoyado  por  subvenciones  para  la  investigación  científica  
sakaiensis.  El  nivel  de  transcripción  del  gen  que  
(24780078  y  26850053  a  SY)  y  el  Instituto  Noda  para  la  Investigación  Científica  
codifica  PETasa  durante  el  crecimiento  en  película   5.  T.  Nimchua,  H.  Punnapayak,  W.  Zimmermann,  Biotechnol.  J.  2,  361–364   (SY).  Los  datos  de  la  secuencia  de  nucleótidos  notificados,  incluido  el  
de  PET  fue  el  más  alto  entre  todas  las  secuencias   (2007). ensamblaje  y  la  anotación,  se  han  depositado  en  el  Banco  de  datos  de  ADN  de  

de  codificación  analizadas  (tabla  S4),  y  fue  15,  31  y   6.  T.  Nimchua,  DE  Eveleigh,  U.  Sangwatanaroj,  H.  Punnapayak,  J.  Ind.  Microbiol.   Japón,  el  Laboratorio  europeo  de  biología  molecular  y  las  bases  de  datos  

Biotecnología.  35,  843–850  (2008). GenBank  con  los  números  de  acceso  BBYR01000001  a  BBYR01000227.  Todos  
41  veces  mayor  que  cuando  las  bacterias  se  
7.  Los  materiales  y  métodos  están  disponibles  como  complemento los  demás  datos  se  informan  en  los  materiales  complementarios.  La  cepa  
cultivaron  en  maltosa,  TPA­Na. ,  y  BHET,   materiales  en  Science  Online. Ideonella  sakaiensis  201­F6T  notificada  se  depositó  en  el  Instituto  Nacional  de  
respectivamente.  Esto  sugiere  que  la  expresión  de   8.  D.  Ribitsch  et  al.,  Biocatalysis  Biotransform.  30,  2­9 Tecnología  y  Evaluación  del  Centro  de  Recursos  Biológicos  como  cepa  NBRC  

PETase  es  inducida  por  la  propia  película  de  PET  y/ (2012). 110686T  y  en  el  Instituto  de  Investigación  Científica  y  Tecnológica  de  Tailandia  

9.  W.  Zimmermann,  S.  Billig,  Adv.  Bioquímica  Ing.  Biotecnología.  125,  97–120   como  cepa  TISTR  2288T .
o  algunos  productos  de  degradación  distintos  de  TPA,  EG,  MHET  y  BHET.
(2010).
Los  niveles  de  expresión  del  gen  PETase  en  los   10.  RJ  Müller,  H.  Schrader,  J.  Profe,  K.  Dresler,  WD  Deckwer,  Macromol.  
cuatro  medios  diferentes  fueron  similares  a  los  de  otro   Comun  rápido.  26,  1400–1405  (2005).

ORF,  ISF6_0224  (fig.  S10),  lo  que  indica  una  regulación   11.  S.  Sulaiman  y  col.,  Appl.  Reinar.  Microbiol.  78,  1556­1562 MATERIALES  COMPLEMENTARIOS

(2012).
similar.  ISF6_0224  está  ubicado  junto  al  grupo  de   www.sciencemag.org/content/351/6278/1196/suppl/DC1  Materiales  
12.  CM  Silva  et  al.,  J.  Polym.  ciencia  Un  polim.  química  43,  2448–2450
y  métodos  Texto  complementario  Figs.  S1  a  S14  Tablas  S1  a  S5  
genes  de  degradación  de  TPA  (fig.  S11).  La  secuencia   (2005).
Referencias  (18–39)
de  la  proteína  ISF6_0224  coincide  con  la  de  la  familia   13.  MAME  Vertommen,  VA  Nierstrasz,  M.  Veer,
MMCG  Warmoeskerken,  J.  Biotechnol.  120,  376–386  (2005).
de  las  tanasas,  que  se  sabe  que  hidroliza  el  enlace  
éster  de  compuestos  aromáticos  como  los  ésteres  de  
14.  E.  Marten,  RJ  Müller,  WD  Deckwer,  Polym.  degradación  Estable.
ácido  gálico,  los  sacáridos  ferúlicos  y  los  ácidos   88,  371–381  (2005). 15  de  octubre  de  2015;  aceptado  el  29  de  enero  de  
clorogénicos.  Los  residuos  de  la  tríada  catalítica  y  dos   15.  K.  Suzuki  et  al.,  Proteins  82,  2857–2867  (2014).   2016  10.1126/science.aad6359

residuos  de  cisteína  que  se  encuentran  solo  en  esta  
familia  (15)  están  completamente  conservados  en  la  
proteína  ISF6_0224  (fig.  S12).  La  proteína  ISF6_0224  
recombinante  purificada  (fig.  S5)  hidrolizó  eficientemente  
NEURODESARROLLO
MHET  con  una  tasa  de  rotación  (kcat)  de  31  ±  0,8  s−1  
y  una  constante  de  Michaelis  (Km)  de  7,3  ±  0,6  mM  
(Tabla  1),  pero  no  mostró  cualquier  actividad  contra   La  inhibición  de  CLK2  mejora  las  
PET,  BHET,  ésteres  alifáticos  de  pNP  o  compuestos  
de  éster  aromático  típicos  catalizada  por  las  enzimas  
de  la  familia  de  las  tanasas  (Tabla  1).  ISF6_0224  no  
características  autistas  asociadas  
es  homólogo  de  seis  enzimas  hidrolíticas  MHET  
con  la  deficiencia  de  SHANK3
conocidas  que  también  hidrolizan  ésteres  alifáticos  de  PET  y  pNP  (tabla  S2).
Estos  resultados  sugieren  fuertemente  que  la  
proteína  ISF6_0224  es  responsable  de  la  conversión  
de  MHET  a  TPA  y  EG  en  I.  sakaiensis.  Por  lo  tanto,   Michael  Bidinosti,1  *  Paolo  Botta,3  *  Sebastian  Krüttner,3  Catia  C.  Proenca,1  Natacha  
la  enzima  se  denominó  hidrolasa  MHET   Stoehr,1  Mario  Bernhard,1  Isabelle  Fruh,1  Matthias  Mueller,1  Debora  Bonenfant,2  Hans  
(denominada  MHETasa). Voshol,2  Walter  Carbone,1  Sarah  J .Neal,4  Stephanie  M  McTighe,4  Guglielmo  Roma,1  
Para  determinar  cómo  evolucionó  el  metabolismo   Ricardo  E  Dolmetsch,4  Jeffrey  A  Porter,1  Pico  Caroni,3  Tewis  Bouwmeester,1  Andreas  
del  PET  (Fig.  3B),  utilizamos  la  base  de  datos  del   Lüthi,3  Ivan  Galimberti1  †
genoma  totalmente  secuenciado  Integr8  (16)  para  
buscar  otros  organismos  capaces  de  metabolizar  
este  compuesto.  Sin  embargo,  no  pudimos  encontrar   SH3  y  la  haploinsuficiencia  de  múltiples  dominios  repetidos  de  anquirina  3  (SHANK3)  es  la  causa  de  
otros  organismos  con  un  conjunto  de  genes   las  características  neurológicas  del  síndrome  de  Phelan­McDermid  (PMDS),  incluido  un  alto  riesgo  de  
homólogos  de  enzimas  de  naturaleza  signataria  para   trastorno  del  espectro  autista  (TEA).  Utilizamos  proteómica  cuantitativa  e  imparcial  para  identificar  
el  metabolismo  de  PET  (PETasa,  MHETasa,  TPA   cambios  en  el  fosfoproteoma  de  las  neuronas  deficientes  en  Shank3.  La  regulación  a  la  baja  de  la  
dioxigenasa  y  PCA  dioxigenasa)  (fig.  S13).  Sin   proteína  quinasa  B  (PKB/Akt)­objetivo  de  mamíferos  de  la  señalización  del  complejo  1  de  rapamicina  
embargo,  entre  los  92  microorganismos  con   (mTORC1)  resultó  de  una  fosforilación  mejorada  y  activación  de  la  subunidad  reguladora  de  la  serina/
treonina  proteína  
homólogo(s)  de  MHETasa,  33  tenían  homólogos  de  las  dioxigenasas   TPA  y  fPosfatasa  
CA. 2A  (PP2A),  B56b,  debido  a  un  aumento  en  el  estado  estacionario  niveles  de  
Esto  sugiere  que  una  base  genómica  para  respaldar  el   su  cinasa,  la  cinasa  2  similar  a  Cdc2  (CLK2).  La  activación  farmacológica  y  genética  de  Akt  o  la  inhibición  
metabolismo  de  los  análogos  de  MHET  se  estableció   de  CLK2  alivió  los  déficits  sinápticos  en  neuronas  deficientes  en  Shank3  y  derivadas  de  pacientes  con  
mucho  antes  que  cuando  las  proteínas  PETasa   PMDS.  La  inhibición  de  CLK2  también  restauró  la  sociabilidad  normal  en  un  modelo  de  ratón  deficiente  
ancestrales  se  incorporaron  a  la  vía.  El  enriquecimiento   en  Shank3.  Por  lo  tanto,  nuestro  estudio  proporciona  una  nueva  comprensión  mecánica  y  potencialmente  
de  PET  en  el  sitio  de  muestreo  y  el  cultivo  de   terapéutica  de  la  señalización  desregulada  aguas  abajo  de  la  deficiencia  de  Shank3.
enriquecimiento  promovieron  potencialmente  la  
selección  de  una  bacteria  que  podría  haber  obtenido  
el  conjunto  necesario  de  genes  a  través  de  la  transferencia  lateral  de  genes. SHANK3  también  se  asocia  con  el  trastorno  del  
Un  número  limitado  de  mutaciones  en  una  hidrolasa,   eliminar  o  inactivar  un  alelo  SH3  y  múltiples   espectro  autista  (TEA)  no  sindrómico  y  la  discapacidad  
como  la  cutinasa  hidrolítica  de  PET,  que  se  dirige   dominios  repetidos  de  anquirina  3  (SHANK3) intelectual  (1–4).  La  ablación  genética  de  Shank3  en  
inherentemente  a  la  cutina  del  polímero  alifático  natural,   son  características  genéticas  del  síndrome  de   ratones  produce  fenotipos  de  comportamiento  similares  
puede  haber  resultado  en  una  mayor  selectividad  para  PET. Aberraciones   cromosómicas  
Phelan­McDermid   en  2M2q13  
(PMDS).   que  ddee  novo  en a  ASD  y  disfunción  sináptica  (5­10),  el  último  de  los  cuales
utaciones  

CIENCIA  cienciamag.org 11  DE  MARZO  DE  2016  •  VOL  351  NÚMERO  6278  1199
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Una  bacteria  que  degrada  y  asimila  poli(tereftalato  de  etileno)
Shosuke  Yoshida  et  al.
Ciencia  351,  1196  (2016);  
DOI:  10.1126/ciencia.aad6359

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