Práctica No.5.

Aislamiento y Recuento de microorganismos Grupo: 2BM2 SEM 22-2 Nombre: Lima Ordaz Braulio
Objetivos:
1.2.1 El alumno practicará las diferentes técnicas de aislamiento y recuento de microorganismos.
1.2.2 Aplicará la técnica de las diluciones para disminuir la carga microbiana de las muestras con base en las normas oficiales.

Integrantes del equipo de la carne molida:

Introducción Resultados • Lima Ordaz Braulio

Conceptos: Preguntas Centrales
• Paniaguas Barajas Jorge Adrián
Cultivo puro: Población de células que proceden de una única célula • Miranda Luna Clio Abigail
*Organismos Mesofílicos aerobios: 25-250 colonias
¿Qué se logra con el *Mohos y Levaduras: 10-150 colonias
Colonia microbiana: Masa visible de células de la misma especie que proviene de una célula. *Organismos Coliformes: 15-150 colonias
aislamiento de
Aislamiento: Nos permite separar uno o más microorganismos presentes en una muestra, microorganismos?
forzándolos a crecer en medios de cultivo y obtener colonias aisladas. Carne Molida
10-4 10-5 UFC/g Imagen 1: Medio EMB, y crecimiento de colonias con

Técnicas de aislamiento ¿Por qué es importante aislar OMA’s

(ACS)
341 31 3,300,000 brillo verde metálico a luz reflejada

Estría simple: Se utiliza cuando se sospecha que la muestra tiene poca cantidad de
microorganismos de acuerdo con la naturaleza de la muestra, o bien cuando el medio es diferencial.
microorganismos? Mohos
(PDA)
0 0 >10000

Estría cruzada: Consiste en establecer un gradiente de diluciones por medio de las estrías cruzadas Levaduras 0 0 >10000
(PDA)
sobre la superficie de un medio sólido, para separar a los microorganismos. ¿Cómo se cuantifican los Mohos 0 0 >10000
(Biggy)
Método de las diluciones
resultados en las placas Levaduras 2 0 20*104 (valor Imagen 1: Vista al microscopio de una tinción de
(Biggy) estimado) gram, con muestra de una colonia del medio EMB.
Con este método se diluye varias veces para reducir suficientemente la población microbiana. después del aislamiento? Tabla 1: Resultados de UFC/ g
*Extensión con varilla: Consiste en mezclar una serie de volúmenes definidos, de los cuales se
*Se tomó en cuenta el valor de 341, del conteo de una sola placa correspondiente a la dilución de 10-4,
toman alícuotas que se siembran en medios de cultivo sólido, ya sea depositando la alícuota en
Unidades formadoras de colonias la superficie y dispersándola con una varilla de metal o de vidrio
¿Para qué sirven las Unidades a pesar de que el límite son 250 colonias, debido a que era la única que coincidía con el valor obtenido
en la dilución de 10-5.
acodada. Formadoras de Colonias? Imagen 3: Vista al
Imagen 4:
Colonias
Imagen 5:
Colonias de la
*Vaciado en placa: la alícuota se deposita en la base de una caja Petri estéril y se le adiciona el agar microscopio de la muestra de la placa
placa con ACS,
de una colonia en placa de ACS,
previamente enfriado a 45°C, procediendo a mezclar suavemente. dilución 10-5

Unidades Formadoras de Colonias: Las UFC son el número mínimo de células separables sobre ¿Cuál es el propósito de la biggy, con tinción de cristal
violeta
dilución
10-4

la superficie o dentro de un medio de agar semisólido, que da lugar al desarrollo de una colonia técnica de estría cruzada?
visible Memoria de cálculo: UFC/g de OMA’s (ACS)
Procedimiento 1 1
𝑈𝐹𝐶/𝑔 = 𝑛𝑜. 𝐶𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 ∙ ∙
¿Qué se espera encontrar en alicuota dilucion

los medios EMB, PDA Y ACS? 𝑈𝐹𝐶/𝑔 = 341 ∙

1
∙
1
= 3,410,000 = 𝟑, 𝟒𝟎𝟎, 𝟎𝟎𝟎
1 mL 10-4
10-4 10-5
1 1 1 341 37
𝑈𝐹𝐶/𝑔 = 31 ∙ ∙ = 3,100,000 = 𝟑, 1𝟎𝟎, 𝟎𝟎𝟎
1 mL 10-5 2 142 24
3,100,000 + 3,400,000 Promedio 341 31
𝑈𝐹𝐶/𝑔 (promedio = = 3,250,000 = 𝟑, 𝟑𝟎𝟎, 𝟎𝟎𝟎
2
Análisis de resultados: Se pudo observar que la cantidad de colonias observadas en las placas con medio ACS son consistentes a excepción de una
de ellas en la dilución 10-4, que resultó de 142. Esto se dio probablemente a que en esta placa se formó una película de crecimiento en el agar. El
Pesar 10 g crecimiento fue abundante en este medio, pues la carne molida es portadora de muchos OMA’S como Salmonella y Staphylococcus aureus.}
de la
muestra de En cuanto a mohos y levaduras el crecimiento fue casi nulo, sólo por 2 colonias que se obtuvieron en el agar Biggy. Probablemente la cantidad de
estos microrganismos no era lo suficientemente alta para que hubiera crecimiento en las diluciones de 10-4 y 10-5, o el periodo de incubación no fue
carne
el idóneo. Se esperaba que el microorganismo que había originado las 2 colonias fuera una levadura, debido a que este medio es idóneo para su
molida crecimiento, sin embargo, después de enfocar al microscopio, lo observado fueron bacterias con forma de bacilo.
Estría
cruzada en En la placa de EMB, se pudo observar un característico brillo metálico, presumiblemente causado por la producción de ácidos, debido a la rápida
medio EMB fermentación de la lactosa por Escherichia coli. Esto se pudo confirmar con la observación al microscopio: bacilos Gramnegativos.

Conclusiones
Verter de 12-15 mL de Agar Cuenta Depositar Periodo de
• Las distintas técnicas de aislamiento nos permitieron saber la viabilidad de los distintos tipos de microorganismos para los
Estándar en cuatro placas 1 mL en incubación: 48
cuales se pretendía obtener colonias en los distintos medios, PDA, ACS, Biggy, EMB.
Vaciado en placa cada hrs • El crecimiento de Mohos y levaduras fue prácticamente escaso, en los medios PDA y Biggy, el número de UFC/g que
Verter de 12-15 mL de PDA acidificado placa predominó fue < 10-4, pues no podemos saber cuál sería el crecimiento con diluciones menores.
con ácido tartárico (1.12 mL en el frasco Temperatura • Los mohos y levaduras no tuvieron el suficiente tiempo de crecer en sus respectivos medios, o nos son microorganismos
de 80 mL) ACS: 35° abundantes en la carne molida.
• Los OMA’S son microorganismos abundantes en la carne, y de rápido crecimiento, pues se observaron muchas colonias en las
respectivas placas de ACS. Los UFC/g calculados fueron de 3.3 * 106.
Extender la alícuota con PDA, Biggy:
• El brillo verde metálico observado en el medio EMB después de realizar estría cruzada y la posterior tinción de Gram, nos
la varilla estéril en 28° permitieron confirmar la presencia de Escherichia coli en la muestra.
placas de agar Biggy Depositar
Referencias:
Extensión con varilla 0.1 mL en ALONSO-CORTÉS, A. L., & DE LOS ALIMENTOS, T. E. C. N. O. L. O. G. Í. A. MÉTODOS CLÁSICOS DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS.
cada placa GUIÓN DE PRÁCTICAS.
Anderson, M. D. R. P., & Calderón, V. (1999). Microbiología alimentaria: metodología analítica para alimentos y bebidas.
Ediciones Diaz de Santos.
Anderson, M. D. R. P., & Calderón, V. (1999). Microbiología alimentaria: metodología analítica para alimentos y bebidas.
Ediciones Diaz de Santos.