BIOLOGIA DE

ANISAKIS SIMPLEX
Y ESTUDIOS
EXPERIMENTALES
Temas relaccionados

Dra. C. Cuéllar
 La a n i s a k i d o s i s es la enfermedad
producida por las larvas de nematodos
pertenecientes a la familia Anisakidae,
cuyos géneros más importantes, Ani -
sakis, Pseudoterranova y Contracae -
cum, se diferencian en su estadio lar-
vario por la presencia o ausencia de
ciegos intestinales y apéndices esofá-
gicos, así como la forma del ventrícu-
lo. Dentro del género anisakis se dis-
tinguen distintas especies cuya
taxonomía es controvertida; mediante
la técnica de RAPD hemos encontrado
diferencias genéticas dentro de la es-
pecie Anisakis simplex estudiando ais-
lados procedentes de pescadilla, bró-
tola de fango, congrio y gallo.
Los adultos del género anisakis vi-
ven en el estómago de mamíferos ma-
rinos, los huevos eclosionan en el
agua y las larvas infestantes de tercer
estdio (L3) se desarrollan en pequeños
crustáceos. Peces y cefalópodos ac-
túan como hospedadores paraténicos
facilitando la llegada de las larvas a
sus hospedadores definitivos, así co-
mo al hombre, hospedador accidental.
En los peces las L3 se encuentran en
la cavidad abdominal, libres o enrolla-
das en espiral y rodeadas de una cáp-
sula, tras la muerte del hospedador
realizan una migración abdomino-
muscular acumulándose en la muscu-
latura del pescado. Los porcentajes de
parasitación de pescado destinado al
consumo humano en España alcanzan
tasas de un 88% en bacaladillas.
Dependiendo de la localización lar-
varia, la anisakidosis humana se pue-
de dividir en gástrica, intestinal o ec-
tópica. Basándonos en nuestras
propias observaciones realizadas en
animales de experimentación y tenien-
do en cuenta que las manifestaciones
hemorrágicas forman parte de la clíni-
ca humana, nos planteamos el estudio
de la posible actividad anticoagulante
de estas larvas, observando que sus
productos de excreción-secreción (ES)
producían una prolongación del tiem-
po de protrombina, así como del tiem-
po parcial de tromboplastina.
Hasta el momento sólo se han citado
en España 7 casos de anisakidosis hu-
mana. La elevada parasitación del
pescado destinado al consumo huma-
no, así como la importancia del mis-
mo en la alimentación española pare-
cen sugerir que la presencia de esta
parasitosis en España pudera ser más
elevada de lo que se supone. Para ello
pusimos a punto una técnica de ELI-
SA con extractos larvarios y antíenos
ES utilizando sueros de ratones y co-
nejos inmunizados experimentalmente
con el fin de poder estudiar la preva-
lencia real de esta parasitosis en Espa-
ña, así como la posible relación exis-
tente entre presencia de anticuerpos
específicos y sintomatología aparente
de distintas afecciones del tubo diges-
tivo. Hemos estudiado la dinámica de
la respuesta humoral a lo largo del
tiempo en ratones de las cepas
BALB/c y C57CL/10 inoculados con
una larva de A. simplex vía oral. La
producción de anticuerpos específicos
mostró patrones similares frente al an-
tígeno ES y los estractos larvarios con
niveles más altos en este último caso,
siendo detectables un año post-inocu-
lación. La dinámica de su producción
mostró un perfil opuesto, dependiendo
de la cepa murina, con respuestas más
tempranas en la BALB/c, donde los
anticuerpos fueron principalmente
IgM. La subclase IgG1 fue mayorita-
riamente producida en la cepa
C57BL/10. Los niveles de IgG2a fue-
ron prácticamente indetectables. Con
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 suero de ratones C57BL/10 se detecta-
rón elevados niveles de IgG2b. Las
respuestas de IgG3 e IgA fueron muy
bajas. Así mismo se estudiaron los pa-
trones de inmunorreactividad de di-
chos sueros frente al antígeno total
larvario con respuestas detectables
hasta el final de la experiencia.
Cuando estudiamos la dinámica de
la respuesta en ratones inmunizados
con extractos larvarios, observamos
elevada producción de anticuerpos
que fueron mayoritariamente IgG1.
Para la selección de controles huma-
nos negativos hemos determinado la
presencia de anticuerpos en sueros de
niños con edades comprendidas entre
uno y dos años frente a extractos lar-
varios de A. simplex utilizando como
control positivo el suero de referencia
de anisakidosis humana E17 (Dr. Pe-
tithory, Centre Hospitalier, Gonesse,
Francia), siendo las DOX obtenidas
0,235 y 0,658 respectivamente para
los sueros negativos y el E17. Poste-
riormente se seleccionaron 1.008 sueros
pertenecientes a individuos adultos sin
sospecha clínica de anisakidosis y se
realizó un Indice Diagnóstico (ID)
consistente en dividir la DOX de cada
usero problema entre la DOX de los
correspondientes testigos negativos.
El IDX del suero control E17 fue de
1,7. De los 1.008 sueros estudiados el
13,4% dio IDs superiores a 1,3. Tras
comprobar sus patrones de inmunorre-
actividad mediante inmunoblot obser-
vamos que sólo el 1,9% de los sueros
mostró un patrón concordante en el
E17 mientras el 3,1% reaccionó úni-
camente con proteínas de alto peso
molecular. Finalmente, se determinó
la IgE específica (CAP Pharmacia;
Dras. Esteban y González, Hospital de
Segovia), no observándose correla-
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ción con niveles de anticuerpos tota-
les.
Paralelamente, en el Hospital del
Aire, el equipo del Dr. Laguna está
llevando a cabo un estudio sobre la re-
lación entre urticaria aguda recidivan-
te a A. simplex, habiéndonos enviado
los 25 primeros sueros de su estudio,
perteneciendo 16 de los mismos a pa-
cientes con prueba cutánea positiva
(IPI, ASAC). En 19 de los sueros se
detectó IgE específica (CAP Pharma-
cia), siendo 4 de los mismos proce-
dentes de pacientes con prueba cutá-
nea negativa. Se determinó el perfil de
los sueros mediante immunoblot, ob-
servándose correlación con los ID ob-
tenidos en ELISA frente a extractos
larvarios y antígeno ES. No se obser-
vó correlación entre presencia de IgM,
IgG, IgG1 e IgG4. Se determinó la
presencia de anticuerpos frente a antí-
geno ES de Toxocara canis, observán-
dose valores positivos en ELISA con
14 de los sueros, siendo todos ellos
positivos a IgE específica de A. sim -
plex (CAP Pharmacia) y sólo 7 prerte-
necían a pacientes con prueba cutánea
positiva (IPI, ASAC). En vista de la
posibilidad de falsos positivos debido
a una reacción cruzada con T. canis
decidimos su comprobación en mode-
lo murino. Para ello enfrentamos sue-
ros de ratones inoculados con larvas
de A. simplex y con huevos embriona-
dos de T. canis con antígenos ES de
T. canis, ES de A. simplex y total de
A. simplex, observándose una discreta
reacción cruzada. Finalmente, selec-
cionamos 28 sueros pertenecientes a
pacientes con sospecha clínica de lar-
va migratoria visceral peviamente
diagnosticados como positivos frente
al antígeno ES de T. canis (Dr. Gui-
llén, Dpto. Parasitol. UCM). Seis de
los sueros fueron positivos para IgE
específica de A. simplex (CAP, Phar-
macia) y sólo 4 de los sueros fueron
positivos para IgE específica de T. ca -
nis, siéndolo 2 de los mismos también
a A. simplex. Comprobamos mediante
Elisa que la reacción cruzada era debi-
da fundamentalmente a la IgM. Final-
mente, enfrentamos 9 sueros de cada
uno de los grupos (urticaria aguda re-
cidivante y larva migratoria visceral)
con antígeno total de A. simplex me-
diante immunoblot, observando patro-
nes diferentes que requieren su confir-
mación en modelo experimental
murino.
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