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PRUEBAS INMUNOLOGÍA

INMUNOCROMATOGRAFÍA

1) FUNDAMENTO
Las reacciones antígeno – anticuerpo son visualizadas por la acumulación de oro coloidal del
conjugado en zonas específicas del papel de nitrocelulosa, donde se fijan previamente
anticuerpos de captura.
2) TIPOS
 Prueba de Captura: o de tipo directa, poseen una almohadilla con un anticuerpo
monoclonal dirigido a un antígeno que se ha conjugado con oro coloidal.
 Prueba de Bloqueo: es de gran utilidad en la diferenciación de drogas de abuso, cuya
almohadilla está marcada con oro coloidal y contiene anticuerpos monoclonales contra la
droga.
 Prueba Indirecta: adaptada para la investigación de anticuerpos específicos contra
antígenos microbianos, con el fin de establecer un diagnóstico indirecto.
3) PROTOCOLO
 Reactivos físicos
 Backing, o base rígida
 Pad conjugado
 Pad de muestra
 Casete
 Reactivos químicos
 Preparación del oro coloidal
 Evaluación de lote anti-IgG
 Preparación del Antígeno
 Conjugación del oro coloidal con IgG
 Reactivos de Prueba Aplicada
4) RESULTADOS
Las líneas de test y control se presentan en caso de que la reacción sea positiva, es decir cuando
existe flujo del conjugado unido al analito.
En el caso de que esta sea negativa se activaran la o las líneas de control, que indicarán si la
reacción ha sido exitosa.

5) ENFERMEDADES DE EMPLEO

Test Detecta Especie Muestra Sen Esp


FASTest Título de Canino Sangre, 99,9 % 99,8%
CDV Ab anticuerpos del suero y
virus del plasma
moquillo
Rainbow Clostridium, Porcino y bovino Heces
Piglet Rotavirus,
Scours Cryptosporidiu
m y E. coli

Rainbow Clostridium, Ovino


Lamb & Rotavirus,
Kid Cryptosporidiu
Scours m y E. coli
DipFit Virus Bovino Tejido
BRSV y respiratorio pulmonar
SmarTri sincitial del
ps bovino
BRSV
Ag
DipFit Rotavirus Porcino Heces
Rotaviru
s
porcino
SmarTri Cryptosporidiu Bovino, porcino,
ps m spp. aviar, equino y
Cryptos conejo
poridium
Sp y
DipFit
Cryptos
poridium
Sp
FASTest Ehrlichia canis Canino Sangre,
EHRLIC y Leishmania suero y
HIA - infantum plasma
LEISH
FASTest Chlamydophila Canino, felino, Secrecion 93% 99,5%
CHLAM spp. equino, bovino, es,
Ag caprino, porcino, órganos o
aviar y ciervo heces
FASSISI Parvovirus y Canino y felino Heces CCV: CCV:
ParCo Coronavirus 96% 96%
CPV: CPV:
93% 96%
FASTest Cryptosporidiu Canino, felino,
CRYPT m parvum y equino, bovino,
O- Giardia caprino, porcino,
GIARDI duodenalis aviar, cobaya,
A Strip erizo y reptiles
FASTest Cryptosporidiu
Crypto - m parvus y
Rota Rotavirus
D2T
FASTest Gestación por Canino y felino Suero 97,8% 99,9%
Relaxin hormona
relaxina
FASTest Coronavirus Bovino Heces 96,7% 99,9%
BCV bovino
Strip
Rainbow Coronavirus,
Calf Cryptosporidiu
Scours m, Rotavirus y
E. coli
ScheBo Elastasa 1 Canino Heces
Pancrea pancreática
s
Elastase
1
Canine
Quick
FASTest Anaplasma Canino y equino Sangre, 99% 94,6%
ANAPLA phagocytophilu suero y
SMA m y Anaplasma plasma
platys

Tabla 2. Pruebas inmunocromatográficass en humanos

Tipo Test Detecta Muestra Sensibilidad


Embarazo y Sperm Ok Concentració Semen 25 mIU/ml - 3
fertilidad n de mm
espermatozoi
des
Qupid Plus Detecta hCG Orina y suero 20 mIU/ml
Enfermedade Hepatitis A Anticuerpos Suero y 99,7%
s crónicas e contra el plasma
infecciosas virus de la
hepatitis A
Dengue Antígeno Plasma, 99,7%
combo Ab NS1 y suero y
(IgG+IgM) y anticuerpos sangre
Ag (NS1) IgG e IgM
RapiTest VIH Anticuerpos 98%
contra el VIH

FIJACIÓN DEL COMPLEMENTO


1. FUNDAMENTO

La activación de la vía clásica del complemento por la unión antígeno-anticuerpo genera complejos
de ataque a membrana que son capaces de lisar las membranas celulares y ocurre una hemólisis.
Este fenómeno sirve para medir los niveles de anticuerpos séricos de un individuo.

El fundamento de esta prueba se basa en la utilización de una cantidad precisa de complemento


sérico.

2. PROTOCOLO
 FASES
 Primera: se mezclan los antígenos y los anticuerpos y se incuban en presencia
de suero normal de cobaya como fuente de complemento.
 Segunda: después de que la mezcla de antígeno-anticuerpo-complemento
reacciona, se determina la cantidad de complemento libre en la mezcla luego de
añadir un sistema indicador, el cual consta de eritrocitos de oveja recubiertos de
anticuerpos.
 MATERIALES

 Micropuntas adaptables

 Recipientes de dispensar reactivos


 Frascos tapa rosca

 Balones volumétricos aforados

 Tubos de serología

 Microplacas

 Tubos cónicos con graduación

 Pipetas de vidrio

 Tubos al vacío

 Agujas

 Micropipetas unicanal y multicanal de volumen variable


 EQUIPOS

 Centrífuga para tubos y placas

 Incubadora

 Agitador de tubos

 Agitador magnético

 Baño serológico

 Balanza analítica

 Ultracongelador

 Refrigerador

 Cronómetro

3. REACTIVOS
 Antígeno
 Tampón
 Eritrocitos de oveja
 Hemolisina
 Sistema hemolítico (HS)
 Complemento (C)
4. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
La lisis de estos eritrocitos es un resultado negativo, porque indica que el complemento no se
activó y que, por tanto, no había anticuerpos.
La ausencia de lisis es un resultado positivo que indica que el complemento se consumió en la
primera fase.
5. ENFERMEDADES

 Brucelosis bovina

 Perineumonía contagiosa bovina por Micoplasma

 Coccidioidomicosis

 Histoplasmosis

 Peste equina africana

 Peste bovina y de los pequeños rumiantes causada por Morbillivirus

 Encefalomielitis equina causada por Alfavirus

 Neumonía progresiva ovina causada por Retrovirus o Lentivirus

 Fiebre del valle de Rift en bovinos y ovinos causada por Flebovirus

 Fiebre aftosa causada por Aftovirus

 Estomatitis vesicular causada por Vesiculovirus

 Exantema vesicular del cerdo causado por Calicivirus

 Lengua azul y enfermedad hemorrágica epizoótica causadas por Orbivirus

 Arteritis vírica equina causada por Pestivirus

 Anemia infecciosa equina causada por Retrovirus o Pentivirus

 Peste porcina africana causada por Iridovirus

6. SENSIBILIDAD
Sin embargo, la prueba de Fijación de Complemento es una herramienta útil en áreas endémicas
para la demostración y titulación de anticuerpos IgM específicos de grupo contra el virus de la
pesque equina africana, especialmente después de una infección o vacunación reciente.
Tipo de prueba Concentración de proteínas que puede
detectar (ug/ml)
Fijación del complemento 0.1 a 0.05

INMUNOELECTROTRANSFERENCIA
1. FUNDAMENTO
Western blot es una técnica molecular semicuantitativa e incluso analítica de alta
sensibilidad en la cual se realiza la inmunodetección específica de una proteína o de cierto
perfil de proteínas en una muestra determinada. Se basa en la separación de proteínas de
acuerdo a la carga y peso molecular. Terminado el tiempo de incubación, se detecta la
presencia de la unión antígeno-anticuerpo.

¿Cómo realizar la técnica de Inmunoelectrotransferencia o Western Blot?


Requiere de al menos dos días para realizarse
2. REACTIVOS
 Componentes de disoluciones
 Componentes del gel poliacrilamida
 Colorantes
 Reactivos para detección
3. PROTOCOLO
 Preparación de la muestra
 Electroforesis en gel de Acrilamida
 Transferencia de proteínas
 Hibridación del anticuerpo
 Revelado por quimioluminiscencia
4. INTERPRETACION DE RESULTADOS
 Infección por VIH, que da un resultado positivo si en la prueba aparece la
proteína p24+ o la p41+ [ CITATION Álv17 \l 3082 ].
 Diagnóstico de Encefalopatía Espongiforme Bovina, se detecta un resultado
positivo al encontrar una isoforma de una proteína de membrana que es
específica de esta enfermedad que es el PrPSc[ CITATION Man18 \l 3082 ].
 WB positivo: Cuando presenta por lo menos dos de las siguientes bandas
p24, gp41, gp120/gp160.
 WB negativo: Ausencia total de bandas.
 WB indeterminado: Presencia de cualquier banda sin que se cumpla el
criterio de positividad[ CITATION Far20 \l 3082 ].

5. TÉCNICA DE INMUNOELECTROTRANSFERENCIA
 Preparación de muestras
 Electroforesis de Acrilamida
 Transferencia a una membrana
 Hibridación del anticuerpo
 Detección:

 Quimioluminiscencia

Utilizan comúnmente anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa (HRP). La


reacción entre la enzima y el sustrato produce luz, que puede ser detectada mediante
la exposición de la membrana a una película de rayos X o captada de forma digital
utilizando una cámara CCD.

 Ventajas: muy sensible, la membrana puede tratarse para reutilizarse, se pueden


hacer múltiples exposiciones en películas de rayos X, fácil de documentar.
 Inconvenientes: requiere una habitación oscura (película rayos X) o sistemas de
imagen caros, semicuantitativa - porque se basa en una reacción enzimática, la
película tiene un rango dinámico limitado, la intensidad de la señal puede variar con
la incubación o el tiempo de exposición, no son posibles detecciones multiplex
(detección de más de una proteína, sólo un color de reacción).

 Fluorescencia

El anticuerpo secundario se une a un fluoróforo, que cuando al excitarse emite luz.


La luz emitida, se detecta mediante un dispositivo capaz de medir la fluorescencia o
mediante una cámara CCD provista con los filtros de longitud de onda apropiada. La
imagen se digitaliza para su análisis.

 Ventajas: sensibilidad (la sensibilidad puede incrementarse utilizando el sistema


streptavidina/ biotina), apto para ensayos multiplex con múltiples colorantes, amplio
rango dinámico, no se requiere el uso de una cámara oscura, aporta datas
cuantificables, fácil documentación de resultados, pueden usarse Ac primarios
marcados (para proteínas abundantes) y eliminar pasos.
 Inconvenientes: los reactivos y el equipamiento pueden ser costosos, no es tan
sensible como la quimioluminiscencia (puede no ser apropiado para proteínas poco
abundantes).

 Colorimetría.

Utilizan un Ac secundario que ha sido conjugado previamente a una enzima


(peroxidasa o fosfatasa alcalina). Esta convierte el colorante en un producto insoluble
que es visible en la membrana. La cantidad de colorante convertido es proporcional a
la cantidad en la muestra. La intensidad de la tinción puede ser medida por
espectrofotometría o por un densitómetro.

 Ventajas: sencilla de realizar, no requiere cámara oscura, las membranas se pueden


documentar fácilmente mediante fotografía.
 Inconvenientes: no es tan sensible como los otros dos métodos, el color se
desvanece con el tiempo.

6. APLICACIONES EN EL CAMPO BIOMÉDICO


Sensibilidad del 96% y especificidad del 100%
7. ENFERMEDADES
 M. Tuberculosis
 Alta sensibilidad para detectar sífilis congénita en niños
 100% confiable para diagnóstico de infección por el virus herpes
 Diagnóstico no invasivo y altamente sensible que detecta en 47.8% de los
pacientes con úlcera duodenal causada por H. Pylori
 Epidermólisis ampollosa adquirida
 Dermatitis atópica

RADIOINMUNOANÁLISIS

1. RADIACTIVIDAD
Es un fenómeno físico que se caracteriza por la desintegración, es decir, la reorganización
de los núcleos atómicosinestables. Entre los tipos de radiaciones se encuentran:
 Radiación alfa
 Radiación beta
 Radiación gamma
2. MEDIDAS DE SEGURIDAD
 Limitación del tiempo de exposición
 Apantallamiento o utilización de blindajes
 Distancia a la fuente radiactiva
 Protección de las estructuras
 Instalaciones y zonas de trabajo
 Protección del personal y procedimientos de trabajo
 Gestión de residuos y plan de emergencia
3. RADIOINMUNOANÁLISIS PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS
La prueba Radio AllergoSorbent Test (RAST) mide la inmunoglobulina E (Ig E) específica
en el suero de los animales alérgicos. Para esta técnica se utiliza: discos de celulosa,
solución de antiglobulina.

4. RADIOINMUNOANÁLISIS PARA LA DETECCIÓN DE ANTÍGENO


El inmunoanálisis se basa en que el antígeno no marcado desplaza al antígeno marcado, por
lo que estas pruebas son extremadamente sensibles utilizadas para determinar cantidades
traza de fármacos.
5. TIPOS DE RIA
 RIA directo
 RIA de sándwich – RIA indirecto
6. FUNDAMENTO
El radioinmunoanálisis (RIA) es una prueba que permite analizar moléculas que se
encuentran en el suero,en baja concentraciónademás de ser unmétodo específico y sensible.
7. REACTIVOS
 125
I
 Tritio 3H
8. APLICACIÓN DEL RADIOINMUNOANÁLISIS
Su aplicación para diagnóstico de enfermedades infecciosas fue pobre por lo que se limitó a
la investigación de anticuerpos contra el virus de la hepatitis y VIH, etc.
Algunas aplicaciones en medicina veterinaria son:
 En reproducción:
 Determinación de hormonas hipotalámicas, gonadotrópicas, uterinas y
gonadales.
 Estudio de las interrelaciones del eje hipotálamo-hipófisis-gónadas
 Estudio del ciclo estral, de los niveles hormonales durante la preñez,
período periparturiento y las alteraciones durante estas etapas.
 Comportamiento ovárico del postparto y pubertad, y los factores que los
afectan.
 Alteraciones ováricas y luteales.
 Seguimiento del control reproductivo de rebaños y resultado de
tratamientos hormonales.
 Eficiencia de la inseminación artificial.
 Estudio de alteraciones del aparato reproductivo (Ramírez, 2001).
 Otros:
 Determinación de leptina(Campuzano-Granados et al., 2015).
 Determinación de ácidos biliares (Ernst, Saelzer&Wittwer, 1990).

9. RADIOINMUNOANÁLISIS VS ELISA
ELISA

1. PRUEBA ELISA
Este método permite visualizar objetivamente la formación de los complejos antígeno—
anticuerpo, mediante la conjugación de uno de los componentes con un enzima y la
inmovilización del otro en un soporte. Los enzimas más utilizados son la peroxidasa de
rábano, glucosa oxidasa, β—galactosidasa y fosfatasa alcalina. En la Inmovilización del
antígeno o anticuerpo se utilizan placas de nylon, poliestireno, polivinilo o polipropileno.
2. FUNDAMENTO
La técnica ELISA se basa en dos premisas: la primera que, al acoplar antígenos solubles
(Ag) o anticuerpos (Ac) a una matriz sólida insoluble, retienen la actividad inmunológica, y
segunda en que estas biomoléculas también pueden unirse a una enzima; siendo el
conjugado resultante, capaz de retener tanto la actividad enzimática como inmunológica.
Su principal ventaja está en su alto grado de sensibilidad, detectabilidad, precisión y
exactitud, lo que hace que los inmunoensayos enzimáticos según el principio ELISA,
puedan equipararse a los radioinmunoensayos, sin sus desventajas.
3. CLASIFICACIÓN
 ELISA competitivo
 ELISA no competitivo:
 Indirecta: los antígenos capturan y detectan a los anticuerpos.
 Directa: detección de antígenos.
 ELISA tipo sándwich doble antígeno: sirve para evaluar la respuesta
inmune inducida por vacunas al igual que en las indirectas, los antígenos
capturan a los anticuerpos pero usan un conjugado antígeno-enzima.
 ELISA tipo sándwich doble anticuerpo: detecta u cuantifica un antígeno
en específico.
4. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
En esta prueba, un cambio de color en la reacción de las microfosetas se categoriza como
positivo, y una ausencia de color o una permanencia del color inicial se categoriza como
negativo.
5. APLICACIONES DE LA TÉCNICA

ENFERMEDADES VIRALES

FAMILIA DE VIRUS ESPECIE ENFERMEDAD PRUEBAS

Porcinos Enfermedad de Aujeszky Método inmunoenzimático


Rumiantes Rinotraqueitis infecciosa Método inmunoenzimático
bovina
Equinos Rinomeumonía y aborto (EHV Método inmunoenzimático
Herpesvirus
3 y 4) indirecto
Pequeñas especies Método inmunoenzimático
Aves Laringotraqueitis infecciosa Método inmunoenzimático
Enfermedad de Marek
Porcinos Viruela porcina Método inmunoenzimático
Poxvirus
Rumiantes Viruela ovina y caprina Método inmunoenzimático
Asfarvirus Porcinos Peste porcina Método inmunoenzimático
Pequeñas especies Panleucopenia felina Método inmunoenzimático
Parvoovirus
Parvovirus canino
Rumiantes Leucosisenzoótica bovina Método inmunoenzimático
Pequeñas especies Leucemia felina Método inmunoenzimático
Retrovirus
SIDA-felino
Aves Leucosis aviar Método inmunoenzimático
Reovirus Rumiantes Lengua azul Método inmunoenzimático
Birnavirus Aves Bursitis infecciosa aviar Método inmunoenzimático
Porcinos Influenza porcina Método inmunoenzimático
Orthomyxovirus Aves Influenza aviar Método inmunoenzimático
competitivo
Rumiantes Peste bovina Método inmunoenzimático
Peste de los pequeños competitivo
Paramyxovirus rumiantes
Pequeñas especies Moquillo canino Método inmunoenzimático
Aves New castle Método inmunoenzimático
Rhabdovirus Mamíferos Rabia Método inmunoenzimático+
Bovinos, equinos, Estomatitis vesicular Método inmunoenzimático
porcinos
Porcinos Enfermedad vesicular porcina Método inmunoenzimático
Picornavirus
Biungulados Fiebre aftosa Método inmunoenzimático
Porcinos Peste porcina clásica Método inmunoenzimático
Flavivirus Rumiantes Diarrea viral bovina Método inmunoenzimático
Togavirus Equinos Encefalitis equina Método inmunoenzimático
ENFERMEDADES BACTERIANAS Y PARASITARIAS
MICROORGNISMO ESPECIE ENFERMEDADES PRUEBAS
Porcinos Brucella suis Método inmunoenzimático
indirecto o competitivo
Bovinos Brucella abortus Método inmunoenzimático
indirecto o competitivo
Brucella
Equinos Cruz fistulosa Método inmunoenzimático
indirecto o competitivo
Ovinos y caprinos Brucella melitensis Método inmunoenzimático
indirecto o competitivo
Mamíferos Leptospirosis Método inmunoenzimático
Leptospira domésticos
Cerdos Triquinelosis Método inmunoenzimático
Tichinella

6. SENSIBILIDAD Y ESPECIFIDAD
 Una de las ventajas de esta prueba es que tiene una alta sensibilidad, ya que permite
la detección de concentraciones bajas de antígenos o anticuerpos.
 Su especificidad en la detección permite la diferenciación y el estudio de diferentes
serotipos y relaciones antigénicas.

AGLUTINACIÓN

1. AGLUTINACIÓN
Las técnicas de aglutinación son muy utilizadas debido a que son versátiles, tienen gran
sensibilidad en comparación con la de precipitación. Su principio se basa en la
aglutinación, es decir una agrupación visible en donde se da la reacción Ag-Ac, las
pruebas se basan también en la acción del sistema inmunitario adaptativo.
2. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
 Ventajas:
 Son muy sencillas de realizar.
 Pueden evaluarse a simple vista con o sin ayuda del microscopio o
equipamiento para su lectura.
 Son rápidas y fáciles de implementar.
 Cuentan con mayor grado de sensibilidad que las pruebas de
precipitación.
 Desventaja:
 Son menos específicas.
3. PRINCIPALES REQUERIMIENTOS

 Los sueros que vayan a ser sometidos a estudios serológicos deben ser obtenidos
de una muestra de sangre tomando en cuenta las normas de asepsia y antisepsia en
pacientes en ayunas. 
 El suero debe estar trasparente y no hemolizado.
 El suero debe ser conservado en alicuotas de 0,25 ml, correctamente identificado
congelar a 20º centígrados dejando una alicuota a 4º centígrados para realizar las
pruebas. 
 No se debe congelar descongelar y volver a congelar debido que se altera la
reactividad de los sueros. 
4. CLASIFICACIÓN

 Aglutinación directa: se da cuando los antígenos o anticuerpos intervienen


de manera natural en una partícula de mayor tamaño, si esto se da en un
eritrocito la prueba se denomina hemaglutinación.

 Hemoglutinación: es una técnica utilizada para la tipificación sanguínea de


glóbulos rojos. En la tipificación para ABO se mezclan glóbulos rojos en un
portaobjetos con antisuero a los antígenos del grupo sanguíneo A o B.
 Aglutinación indirecta:
 Aglutinación de látex: se basa en los anticuerpos están adheridos
a partículas de látex, con el objetivo de facilitar la visualización de la
prueba. al enfrentarse el antígeno específico al látex sensibilizado se
produce la agregación entre estas esferas y los antígenos. Es utilizada en
bacteriología y en virología, para la identificación de Salmonella spp,
Vibrio cholerae, E. Coli. entre otro.
 Aglutinación microscópica: se lo conoce como el estándar de oro para el
diagnóstico serológico de la leptospirosis en animales y humanos. La
MAT es actualmente la prueba más eficaz para determinar el serotipo y
serogrupo de las leptospiras. El método utilizado es relativamente simple
en donde se mezcla el suero que se desea estudiar con el cultivo de
leptospiras para luego observarlas el grado de aglutinación en un
microscopio de campo oscuro. Su lectura requiere de personal con
experiencia en la lectura de la misma porque con frecuencia se pueden dar
falsos positivos por la falta de experiencia en la misma.
5. PROTOCOLO
 Aglutinación directa:
 Reactivos:
 Suero anti-Ade color azul que contiene aglutininas alfa 
 Suero anti-B de color amarillo contiene aglutinina beta 
 Suero anti A-B 
 Factor Rh o anti-D transparente (Rodríguez, 2012). 
 Materiales y equipos:
 Placa de vidrio  
 Palillos  
 Lanceta estéril 
 Torundas con alcohol 
 Muestra biológica 
 Interpretación de resultados:
Si la prueba es positiva se evidenciará el agrupamiento de loshematíes, si
el resultado es negativo los glóbulos rojos se distribuirán uniformemente
por el líquido. 
 Aglutinación indirecta:
 Materiales y equipos:
 2,5 ml test látex 
 0,5 ml control positivo 
 5 ml de solución isotónica salina 
 Cartilla de reacción desechable 
 Agitadores (Microbiology International, 2020)
 Interpretación de resultados:
La presencia de grumos en 2 minutos es un indicativo de la presencia de
un microorganismo en la muestra.

6. ENFERMEDADES
 Streptococcuspneumoniae: En la prueba de identificación serológica de
Streptococcuspneumoniae, se hace una detección serológica de polisacáridos
capsulares neumococóciso usando antisueros específicos.
 Brucelosis: Es una enfermedad zoonótica, causada por una bacteria del género
Brucella, muy conocida por ocasionar la brucelosis humana y bovina.

 Rosa de Bengala

 Seroaglutinación en tubo o placa con pocillos

 Prueba de Coombs

INMUNOPRECIPITACIONES
1. FUNDAMENTO
Es una reacción inmunológica en donde se forma un
precipitado visible como resultado de la unión entre
el antígeno y el anticuerpo. El compuesto resultante
en la reacción, también denominado "Precipitina", se
forma de la reacción del anticuerpo con el antígeno.

2. TÉCNICAS
 Floculación de portaobjetos: si se produce una aglomeración entre el
antígeno y el anticuerpo, la prueba de portaobjetos dará un resultado positivo y
viceversa.
 Floculación de tubo: el procedimiento es el mismo que la prueba de
floculación de portaobjetos, pero la única diferencia es que se realiza en un
tubo de ensayo en lugar de un portaobjetos.
El ejemplo de las pruebas de floculación de tubos es la prueba RPR (Rapid
Plasma Reagin) y VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) para
diagnóstico de sífilis.
 Precipitaciones en agar: Se basa en la existencia de una relación
cuantitativa entre la concentración de Ag colocado en un pocillo excavado
en una placa de agar, que contiene el anticuerpo correspondiente, y el halo
de precipitación resultante.

3. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Una vez que el tiempo ha transcurrido, se toma la caja Petri y observa si hubo o no
precipitado (formación de halo) y en caso de haberlo se realiza lo siguiente:

 Con una regla, medir el diámetro (a partir de los centros de los pocillos) del
anillo de precipitación en milímetros.
 A partir de la curva estándar, se puede determinar la concentración
desconocida, por lo tanto, para trazar la misma, se debe elevar al cuadrado
el valor del diámetro, para realizar la gráfica hay que tener en cuenta que la
concentración del antígeno en el eje X y el diámetro al cuadrado en el eje
Y.
 Dibujar la línea que mejor se ajuste entre estos puntos.
 Calcular el valor de la concentración de antígeno desconocido de esta
gráfica.
Nota: El área del anillo de la precipitación, medida por el cuadrado del diámetro del
anillo, es proporcional a la concentración del Ag.
4. TÉCNICAS DE DIFUSIÓN RADIAL DE OUCHTERLONY
Sirve para la detección de antígenos o anticuerpos en una muestra biológica.
5. RESULTDOS
La técnica de Ouchterlony permite identificar sustancias según la forma de unirse

las líneas de precipitación de dos o varios sistemas.

 Reacción de identidad: si se coloca una solución de antígeno en dos pocillos


adyacentes y el anticuerpo homólogo se coloca bien en el centro, las dos
bandas de precipitación que se forman se unirán en sus extremos más
cercanos y se fusionarán, es decir los dos Ag tienen los mismos epítopos
reconocidos por el suero y se forma una banda de precipitación con forma de
arco continuo.
 Reacción de no identidad: cuando se colocan antígenos no relacionados en pocillos
adyacentes y el pocillo central se llena con anticuerpos para cada antígeno, las
bandas de precipitación se formarán independientemente entre sí y se cruzarán, es
decir los Ag son distintos y se forman bandas de precipitación independientes y no
dan un arco continuo.
Reacción de identidad parcial: los dos Ag comparten un epítopo, pero uno de ellos
tiene un epítopo extra que es reconocido por el suero y se forma un arco de
precipitación al que le sale un espolón.
6. TÉCNICA DE INMUNOELECTROFORESIS
La inmunoelectroforesis es una técnica cualitativa que permite la identificación de
diferentes componentes proteicos a través de arcos de precipitación, que tienen
movilidad electroforética semejante, pero poseen diferente peso molecular y/o
diferentes determinantes antigénicos.
7. RESULTADOS
Por cada proteína presente en el suero se producirá un arco de precipitación
muy definido, permitiendo un análisis de la mezcla antigénica; la aplicación al
diagnóstico clínico de esta técnica es muy limitada reduciéndose al estudio del
mieloma múltiple.
8. PRUEBAS QUE UTILIZAN MAGNETISMO
 Inmunoprecipitación: la inmunoprecipitación (IP) es uno de los
métodos más utilizados para la detección y purificación de antígenos.
Hay que mencionar que no es una prueba diagnóstica, sino
únicamente de carácter investigativo.
 Co-inmunoprecipitación: la coinmunoprecipitación (co-IP) es una
técnica popular para identificar interacciones proteína-proteína
fisiológicamente relevantes mediante el uso de anticuerpos
específicos de proteína objetivo para capturar indirectamente
proteínas que están unidas a una proteína objetivo específica.
9. ESPECIFIDAD Y SENSIBILIDAD
 Carbunco bacteridiano (Bacillus anthracis):
La prueba de Ascoli Valente carece de mucha especificidad porque los
antígenos termoestables de B. anthracis los comparten otras especies de
Bacillus, y depende de la probabilidad de que solamente prolifere B. anthracis
en el animal y deposite el antígeno suficiente para dar una reacción positiva.
Parece que solamente se emplea en Europa del Este (OIE, 2018).
 Brucelosis (Brucella abortus)

La prueba de inmunodifusión radial (IDR) usando como antígeno el hapteno


nativo, presenta 96 % de sensibilidad y entre 80 a 100 % de especificidad,
para el diagnóstico diferencial de vacas infectadas con B. abortus o
vacunadas. El hapteno nativo es un antígeno de tipo intracelular, por lo que
solamente una exposición prolongada de la Brucella al sistema inmune,
como es el caso de una infección de campo, produce anticuerpos contra este
antígeno, y no cuando se trate de una exposición temporal al
microorganismo, como es el caso de la vacunación (González, Hernández,
Díaz., 2006).

 Aspergiloma pulmonar

La prueba de inmunodifusión se indica una sensibilidad entre el 80% a 100%


y con una excelente especificidad (100%). Lo que significa que es
improbable que una persona sana tenga ID positiva o que una persona con ID
positiva este realmente sana (Arce, 2003).

 Leucosis enzoótica bovina

La sensibilidad relativa de la IDGA resultó en 77,6%, es decir, por debajo de


lo deseado para una prueba eficaz. En este caso, IDGA deja de detectar
49/219 (13,41%) sueros positivos, desempeño que podría influir
negativamente si la emplea en un programa de erradicación. En relación al
porcentaje de especificidad de la IDGA (100%), la cual detectó un mayor
número de animales negativos lo que sugiere que la utilización de la IDGA
tiene menor riesgo en la identificación de falsos positivos (Nava, 2012).

 Anemia Infecciosa Equina

Según la OIE, el test de Coggins es el test oficial de referencia para el


diagnóstico de la AIE. Es capaz de detectar anticuerpos a partir de las 2-3
semanas postinfección, aunque se Los resultados son obtenidos a las 48
horas. Esta prueba se considera de alta especificidad, con valores
determinados de 99% y una sensibilidad del 95%, según los valores de
referencia de la DILACOT de SENASA
INMUNOFLUORESCENCIA
1. GENERALIDADES
 Inmunofluorescencia directa: Son utilizados para identificar
microorganismos en una muestra clínica.
 Inmunofluorescencia indirecta: Se utiliza para identificar la presencia de
un anticuerpo específico en el suero luego de la exposición de un
macroorganismo.
2. FUNDAMENTO
El fundamento de las técnicas de inmunofluorescencia se basa en que
ciertas sustancias fluorescen, es decir, tienen la capacidad de irradiar luz de
otra longitud de onda al ser iluminadas.
3. REACTIVOS Y MATERIALES
 Conjugado
 Antígeno
 Liquido de montaje
 Solución salina buffer
 Portaobjetos
 Microscopio de inmunofluorescencia
4. TÉCNICA
 Fijación
 Permeabilización
 Bloqueo
 Inmunodetección
5. TIPOS DE PRUEBAS
 Inmunofluorescencia directa (IFD)
 Inmunofluorescencia en fase sólida (FIAS)
 Prueba de anticuerpos fluorescentes contra antígenos de membrana
(FAMA):
 Inmunofluorescencia indirecta (IFI)
6. TÉCNICA APLICADA PARA EL DIAGNÓSTICO
 Inmunofluorescencia indirecta para la detección de anticuerpos IgM
contra Rickettsiosis
 La inmunofluorescencia directa
 Inmunofluorescencia en la detecció n de bacterias
 Inmunofluorescencia en la detección de protozoarios.
7. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
 Desventajas:
 Resultados no son 100% específicos
 Necesidad de contar con material fresco o congelado.
 Presencia de una fluorescencia de fondo, dificultando la
interpretación de resultados
 Necesidad de contar con un microscopio especial
 Documentar los resultados, ya que la fluorescencia
desaparece conforme avanza el tiempo desde que fue
realizada la técnica en la placa.
 Dificultad en la interpretación correcta de la morfología
tisular (Tortora, Funke, & Case, 2007)
 Ventajas
 Se pueden obtener resultados rápidos
 No es necesario realizar cultivos
 Se puede identificar microorganismos específicos en un
grupo mixto
 Determina la identidad de un organismo muerto.
 Es sensible(Tortora, Funke, & Case, 2007)

TE AMO