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TRANSFERENCIA DE
EMBRIONES
EN ANIMALES DOMESTICOS
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ÍNDICE
INTRODUCCIÓN 06
CAPÍTULO I
BREVE HISTORIA DE LA INSEMINACION ARTIFICIAL 08
GENERALIDADES DE LA INSEMINACIÓN 08
IMPORTANCIA 08
CONCEPTO 09
ALGUNAS VENTAJAS 09
ALGUNAS EXIGENCIAS 10
COMPORTAMIENTO SEXUAL DEL MACHO 11
ASPECTOS RELACIONADOS CON EL COMPORTAMIENTO SEXUAL 15
LA REFRACTARIEDAD 15
EL VIGOR SESUAL 15
LA SACIEDA SEXUAL 15
EL AGOTAMIENTO SEXUAL 15
REGULACION HORMONAL DEL COMPORTAMIENTO
SEXUAL DEL MACHO 17
CAPITULO II
APARATO REPRODUCTOR DEL MACHO 19
TESTÍCULOS 19
Estructura 20
Funciones 24
ESCROTO 25
Estructura 25
Funciones 26
TUBOS DE CONDUCCIÓN 26
Epidídimo 26
Vasos Deferentes 27
Uretra 27
GLÁNDULAS ACCESORIAS 28
Glándulas Vesiculares 28
Próstata 28
Glándulas de Cowper 28
PENE 29
Tipos de tejidos 30
Función 34
PREPUCIO 34
CAPÍTULO III
FISIOLOGÍA DE LA REPRODUCCION DEL MACHO 36
FASES DE LA ACTIVIDAD SEXUAL EN LA VIDA DE UN MACHO 38
ESPERMATOGÉNESIS 39
ESPERMATOCITOGÉNESIS 41
ESPERMIOGÉNESIS 41
MITOSIS 42
MEIOSIS 43
CARACTERIZACION DE MADURACION DE ESPERMATOZOIDES 45
DEFINICION Y ESTRUCTURA DEL ESPERMATOZOIDE 46
2
Cabeza, Cuello, Cola 46
Superficie de la Membrana Celular 47
EL SEMEN 48
El Plasma Seminal 48
Dudas sobre el semen 52
Funciones del Plasma Seminal 52
Dudas sobre el semen 52
CAPITULO IV
LA ANDROLOGIA 53
CONTRASTACION DE LA FUNCION GENESICA 54
EVALUACION REPRODUCTIVA DEL MACHO 56
CAPÍTULO V
COLECCIÓN DEL SEMEN 57
MÉTODO DE LA VAGINA ARTIFICIAL 57
Tipos de vagina artificial 57
Preparación de la vagina artificial 58
Breves recomendaciones 59
Técnicas de extracción 59
ELECTROEYACULACIÓN 61
MÉTODO DEL CONDÓN O PRESERVATIVO 61
MÉTODO DEL RECOJO VAGINAL 62
MÉTODO DEL MASAJE DE LAS AMPOLLAS SEMINALES 62
MÉTODO DE LA MANO ENGUANTADA 62
MÉTODO DE LA MASTURBACIÓN 63
CAPÍTULO VI
VALORACIÓN Y PROCESAMIENTO DEL SEMEN 64
EVALUACIÓN MACROSCÓPICA 64
Volumen 64
Color 64
Aspecto y Densidad 65
Motilidad en Masa Macroscópica 65
pH 65
Material extraño 65
Schalm Test 65
EVALUACIÓN MICROSCÓPICA 65
Motilidad en masa microscópica 65
Motilidad Individual 66
EL vigor 67
Concentración espermática 68
El Frotis 70
Morfología y acrosomía 70
Coloración vital 72
Método de Blom 72
Clasificación de Anormalidades 74
3
CAPÍTULO VII
DILUCIÓN DEL SEMEN 78
Características que debe reunir un Dilutor 79
Recomendaciones para efectos de la dilución 79
Funciones que cumple la yema de huevo 79
TIPOS DE DILUTORES 80
FORMULAS PARA LA REPARACIÓN DE DILUYENTES 81
ADICION DE ANTIBIOTICOS 85
CAPÍTULO VIII
CONSERVACIÓN DEL SEMEN Y TIPOS DE ENVASES 88
CONSERVACIÓN DE SEMEN A TEMPERATURA AMBIENTE 88
CONSERVACIÓN DE SEMEN EN REFRIGERACIÓN (5ºC) 88
CONSERVACIÓN DE SEMEN MEDIANTE CONGELACIÓN (N2L) 88
TIPOS DE ENVASES 91
CONDICIONES QUE DEBE REUNIR UN TIPO DE ENVASE 91
TIPOS DE PAJILLA FRANCESA 91
CAPÍTULO IX
INSEMINACIÓN ARTIFICIAL 93
INSEMINACIÓN ARTIFICIAL DE LA VACA 93
CAPÍTULO X
FECUNDACIÓN 114
Ovocito 114
Espermatozoide 114
Fertilización 115
Polispermia 116
CAPÍTULO XI
GESTACIÓN 118
PERIODOS DURANTE LA CONCEPCIÓN 118
Huevo o Cigoto 118
Embrión 118
Formación de órganos 121
Feto 122
Hormonas importantes en la gestación 122
CAPÍTULO XII
DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ 125
Importancia 125
Métodos Clínicos 125
Pruebas Inmunológicas 127
4
CAPÍTULO XIII
EL PARTO 128
Los Signos de Aproximación al Parto 128
Desencadenamiento del parto 129
Regulación de los acontecimientos fisiológicos del parto en la vaca 130
Dilatación 130
Expulsión del Feto 131
Limpieza o expulsión de la placenta 132
CAPÍTULO XIV
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES 136
Introducción 136
ORGANIZACIÓN Y DESARROLLO DE LA TE 136
MEDIDAS DE HIGIENE DURANTE LA REALIZACION DE LA 137
SELECCIÓN DE VACAS DONANTES 138
SELECCIÓN DE VACAS RECEPTORAS 138
SUPEROVULACIÓN 139
INSEMINACION ARTIFICIAL DE LAS HEMBRAS DONANTES 141
LAVADO Y COLECCIÓN DE EMBRIONES 141
Método Quirúrgico 141
Métodos No Quirúrgicos 142
DONANTES DESPUÉS DE LA COLECCIÓN 143
VALORACION Y CLASIFICACION DE LOS EMBRIONES 143
ENVASADO DEL EMBRIÓN EN LA PAJILLA 145
CONSERVACIÓN: REFRIGERACIÓN, CONGELACIÓN 145
SINCRONIZACIÓN ESTRAL ENTRE DONANTE Y RECEPTORAS 146
TÉCNICAS DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES 147
NECESIDADES PARA UN PROGRAMA DE TE 148
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INTRODUCCIÓN
Vacas de baja productividad y un lento avance genético, son los resultados de la falta de
planeación reproductiva y administración. Los hatos lecheros del valle de Cajamarca
experimentan la falta de ganado vacuno de alta calidad genética, disponible y accesible
para productores de todos los niveles. Son pocos los hatos lecheros que tienen vacas que
destacan por su Eficiencia Productiva probada, superiores consideradas “buenas” o de
“élite”. Estas vacas en condiciones óptimas sólo podrían parir de 4 a 7 crías en toda su
vida productiva lo cual refleja el desaprovechamiento de la biotecnología reproductiva
de avanzada T.E. que lograría obtener de 12 a 15 terneros de alto valor genético por
cada vaca anualmente.
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En muchos otros países como Estados Unidos, Francia y Canadá, las técnicas de
transferencia y micro manipulación de embriones son de uso cotidiano y así las mejoras
genéticas para aumento de la productividad en especies de interés económico como son
los bovinos de leche, están dando importantes resultados e incremento de los ingresos.
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CAPÍTULO I
IMPORTANCIA
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la productividad animal mejorando el aspecto esencial como es la rentabilidad de las
crianzas pecuarias de interés humano.
CONCEPTO
La inseminación artificial, es una Biotecnología de la reproducción animal, mediante la
cual el hombre extrae el semen del macho elegido por su superioridad genética, luego se
valora macro y microscópicamente, puede ser diluido y usado como semen fresco o
congelado y conservado para ser utilizado mediante una técnica basada principalmente
en depositar el semen con un equipo e instrumental adecuado en el tracto reproductor de
la hembra, en el momento preciso; con la finalidad de que ésta quede preñada, teniendo
en cuenta siempre el mejoramiento genético de la descendencia. Reemplaza a la monta
natural.
Para adquirir una buena técnica de inseminación artificial, se debe conseguir una
excelente práctica o adiestramiento en todos los pasos del proceso, conocimiento pleno
de las funciones de la reproducción en el ganado y nunca ser precipitado ni rutinario. A
los técnicos de campo se les debe brindar constantemente asesoramiento, adiestramiento
además inculcarles el deseo de estudio y superación.
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COMPORTAMIENTO SEXUAL DEL MACHO
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Fig.1. Excitación sexual del macho por presencia de la hembra en estro.
Fig. 2. Toro Holstein en ritual de Flehmen. Fig. 3. Toro Brown Swiss ritual de Flehmen.
El garañón en cambio utiliza la orina para marcar el lugar donde una hembra en estro ha
orinado, el verraco orina siguiendo un modelo rítmico durante la actividad sexual, pues
este evento, está dado por la exhibición con alarde de masculinidad frente a la hembra o
macho competidor.
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cerdas tienden a montar y ser montadas por otras hembras lo cual no sucede con la
borrega y la yegua.
2. El tipo fibroso: El pene de algunas especies presenta una túnica fibrosa densa y
espesa, que resulta casi inextensible, por lo que impide el incremento de tamaño durante
la erección. La extrusión de este tipo de pene se debe principalmente al enderezamiento
de la flexura sigmoidea, provocado por el incremento de la presión interna del angosto
cuerpo cavernoso, y facilitado por la relajación del músculo retractor del pene. Estos
penes presentan un glande muy pequeño: Rumiantes y cerdo.
3. El tercer tipo: Corresponde a especies de animales en los que aparece una mayor
evolución de las entidades anatómicas que garantizan la rigidez del pene durante la
cópula, la porción del cuerpo cavernoso que se encuentra recubierto por un gran glande,
que se transforma, corresponde al Perro, gato y muchas especies salvajes.
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La Monta: En este patrón copulatorio en el macho, especialmente en el toro se produce
escurrimiento de líquido proveniente de las glándulas de Cowper que es diferente del
plasma seminal que emiten las glándulas vesiculares durante la eyaculación. Si la
hembra en estro se muestra receptiva, la copulación ocurre con facilidad y rapidez. El
macho descansa su mentón en el tren posterior de la hembra y ésta responde quedándose
“inmóvil” entonces el macho la monta, fija sus miembros anteriores alrededor de la
hembra, tomándola firmemente y realiza empujes pélvicos rítmicos.
Algunos verracos y toros sementales montan y desmontan a la hembra repetidamente
antes de la cópula incrementando su erección, mientras que otros montan una sola vez y
copulan. El toro da un solo salto, hace contacto, introduce y eyacula.
El verraco -por ejemplo- con el pene parcialmente fuera del prepucio, empuja su pelvis
y hace el contracto hasta que la punta del pene penetre a la vulva, sólo entonces el pene
se desenvaina por completo y se efectúa la introducción.
El garañón oscila la pelvis varias veces durante el tiempo en que su pene se llena de
sangre y alcanza la rigidez para la introducción máxima.
La duración de la penetración varía de una especie a otra, los toros y carneros presentan
un extremo, típicamente eyaculan en forma instantánea a la primera introducción, los
verracos sin embargo, pueden mantener la introducción hasta por 20 minutos en una
sola eyaculación, también la alpaca macho y el perro, se ubican en el otro extremo.
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En el carnero, el macho cabrío y el toro, hay una contracción muscular generalizada en
el momento del orgasmo, frecuentemente es tan fuerte que el toro separa sus miembros
posteriores del suelo dando la apariencia de un salto activo. El carnero y el cabrón
mueven de pronto la cabeza hacia atrás, mientras que el toro la presiona hacia abajo
sobre el cuerpo de la hembra. En este momento se produce también la eyaculación.
El Desmonte: El macho baja y/o se retira de la hembra una vez terminado el coito, en el
caso del toro el pene se retrae, vuelve a formarse la flexura sigmoidea, se reubica en la
cavidad prepucial y la extremidad libre del pene se aloja en el fondo de la misma.
El macho cabrío y el pero por lo general se lamen el pene después de la eyaculación.
Las demostraciones post-coitales de los machos domésticos son raras.
Las hembras después de la cópula, -la vaca por ejemplo- arquea la espalda, eleva la cola
y mantiene esta postura por varios minutos.
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Es importante considerar la edad de los machos que serán utilizados como futuros
Reproductores en los establecimientos pecuarios o empresas dedicadas a la producción
de semen para iniciarlos en su actividad sexual -por ejemplo- la Pubertad que es la edad
en la que el animal ya puede tener cópulas fecundantes, pero los genitales aún están en
desarrollo y maduración lo que puede ir en desmedro de la constitución corpórea del
macho. Existen muchos factores que determinan la edad en que se presenta la pubertad,
así como también, la madurez sexual, estos son: Factores genéticos, nutricionales, la
estación del año, temperatura, raza, entre otros. La edad a la que se presenta la pubertad
se muestra en la tabla 1.
Además es importante considerar la Madurez Sexual de los machos que serán futuros
Reproductores o Sementales, se refiere a la edad en la que el animal está preparado
anatómica, fisiológica y psicológicamente para iniciar su actividad sexual y su rol
reproductivo.
En Vacunos:
01 Toro para 25-30 vacas. Un toro debe permanecer vigoroso e inspirar confianza como
reproductor hasta los más o menos 10 años de edad.
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En Ovinos:
01 carnero Joven para 25-30 ovejas, un carnero maduro para 50-60 ovejas. Un carnero
se mantendrá como reproductor vigoroso y efectivo, hasta los 6-8 años de edad
aproximadamente.
En Porcinos:
01 verraco para 15 marranas. Los machos jóvenes deben limitarse a un servicio/día; los
más maduros a dos servicios/día. Un verraco se mantendrá como reproductor vigoroso y
efectivo, hasta los 6-8 años de edad aproximadamente.
En Equinos:
01 garañón “semental” para 10-15 yeguas. Limitar el de 2 años a 23 servicios por
semana, el de tres años a 1 servicio por día, y el de 4 años o más, a 2 servicios por día.
Un padrillo se mantendrá como reproductor vigoroso y efectivo, hasta los 20-25 años de
edad aproximadamente.
La testosterona: por ser la principal hormona secretada por el testículo adulto, ha sido
utilizada para restituir la conducta sexual en animales castrados. Sin embargo la
testosterona en los tejidos efectores puede ser metabolizada. La testosterona puede ser
también metabolizada a estradiol por el proceso de aromatización. También se ha
observado la actividad de las aromatasas en varios tejidos, incluyendo las áreas
cerebrales involucradas en las funciones neuroendocrinas.
Se han estudiado los efectos de diez andrógenos naturales sobre la conducta sexual del
macho, muestra que solamente la testosterona, el androstenediol y la androstenediona
(andrógenos aromatizables) inducen la conducta de eyaculación, en tanto que los
andrógenos 5 α reducidos, muy potentes en sus acciones androgénicas, no estimulan la
conducta sexual del macho.
Los estrógenos: también estimulan la expresión de la conducta sexual del macho aunque
parezca contradictorio. En el potro, conejo y cerdo, los estrógenos y los andrógenos
también presentan sinergismo en su capacidad de estimular la conducta sexual del
macho, aunque todavía no se ha definido el mecanismo por el cual éste se produce.
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BIBLIOGRAFIA
Beach, F.A. (1987). Cerebral and hormonal control of reflexive mechanisms involved in
copulatory behavior. Physiol. Rev. 47; 289-316.
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CAPITULO II
PARATO REPRODUCTOR DEL MACHO
Está compuesto por órganos internos (en la cavidad abdominal, debajo del recto) y
externos (testículos y pene). Los órganos reproductivos del macho de los animales
domésticos comprenden: 1. Un par de testículos con sus escrotos, 2. Los tubos de
conducción que son los epidídimos, vasos deferentes y uretra, 3. Las glándulas
accesorias que agrupan a las glándulas vesiculares, próstata y glándulas de
bulbouretrales o de cowper, y 4. El pene con su prepucio.
Es un sistema que tiene la función de producir, almacenar, nutrir y liberar las células
reproductoras masculinas denominadas espermatozoides y la elaboración de andrógenos
(testosterona) que regulan los caracteres sexuales del macho y la propia producción de
espermatozoides.
Fig. 6. Aparato reproductor de toro, carnero, verraco y garañón.
1. TESTÍCULOS
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Fig.7. Ubicación de los testículos en vacuno, equino, ovino y porcino.
Estructura:
Túnica Vaginal Propia.- Es una fina lámina que recubre la superficie testicular. Ésta se
extiende por encima de una capa fibrosa llamada túnica albugínea.
Túnica Albugínea.- Es una cápsula blanca gruesa de tejido conectivo que envuelve
todo el parénquima testicular y rodea al testículo, es la responsable de su forma ovoidea
que lo caracteriza.
Fig. 8. Corte histológico del parénquima del testículo: túnica albugínea exterior y los tubos seminíferos.
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especies animales son muy desarrollados. El parénquima testicular está formado
principalmente por los túbulos seminíferos (90% del órgano).
Lóbulos Piramidales.- Son las divisiones internas del testículo, delimitadas por haces
que tienen su origen en la túnica albugínea.
Túbulos Seminíferos.- Formados por varias capas de células epiteliales que por
multiplicación y maduración producen los espermatozoides. Luego se convierten en
tubos rectos y penetran en la red testicular, de allí emergen sobre la superficie del
testículo, se reúnen en un número de 10 a 15 y dan lugar de esta manera al epidídimo.
En un corte transversal del túbulo seminífero se observa, desde la pared hacia la luz del
mismo, una membrana basal, rodeada de células mioides; las células de sostén o Células
de Sertoli y las células germinales en sus distintos estadios. Las espermátides y los
espermatozoides se ubican con sus colas hacia la luz de los túbulos.
Células de Sertoli.- Poseen el citoplasma extendido, de forma piramidal, y sostienen el
epitelio germinativo constituyendo el armazón del túbulo seminífero. Descansan sobre
la membrana basal y evitan que los diferentes estratos celulares penetren en la luz del
túbulo, a menos que lo hagan a través del citoplasma de las células. Las células de
Sertoli, además, son necesarias para la nutrición de las células germinales a medida que
se desplazan desde la membrana basal hacia la luz del túbulo.
Fig.9. Detalle histológico de las células de Sertoli, que demuestra su interrelación con la pared del tubo
seminífero y las células de la serie espermática.
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(porque es inadecuado), no hay efecto de la hormona; del mismo modo, si el receptor es
el adecuado pero el complejo HR no es reconocido, tampoco hay efecto.
Red Testicular o Rete Testis.- Encargada de llevar los espermatozoides desde los
túbulos seminíferos hasta la cabeza del epidídimo. Los túbulos seminíferos son
convolutados, cilíndricos, y están estrechamente unidos de manera tal que dejan entre sí
sólo pequeños espacios de tejido intersticial, se anastomosan hacia el centro del
testículo y se tornan rectos formando una red (rete testis) a partir de la cual emergen los
conductos eferentes atravesando la túnica albugínea para llegar al epidídimo.
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Fig. 10. Esquema del sistema tubular del testículo y epidídimo del toro.
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Fig. 11. Corte transversal del testículo.
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Los túbulos seminíferos se hallan en constante producción y eliminación de
espermatozoides y el número o concentración espermática disminuye después de varias
eyaculaciones sucesivas, pero vuelven a la normalidad después de un período de reposo.
Especie/macho Localización
Toro y Carnero Región inguinal anterior.
Potro Región inguinal.
Perro Entre región inguinal y el ano
Verraco y gato Región perineal (sub anal)
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Funciones de los testículos:
La LH que es una glucoproteína va a la sangre para alcanzar las células de Leydig. Allí
se estimula la producción de cAMP y de PKa (proteína kinasa A), que fosforila y
produce testosterona. Esta testosterona producida puede inhibir a las GnRH y a LH,
como mecanismo de retroalimentación.
ESCROTO
Estructura:
• La piel
• Túnica Dartos, compuesto de fibras musculares lisas mezcladas con fibras de
tejido conectivo elástico y colágeno.
• Túnica vaginal, compuesta por fascia escrotal superficial y fascia escrotal
profunda.
• Músculo cremaster externo
• Proceso vaginal – parietal, se continúa con el peritoneo.
Funciones:
• Sostén de los testículos.
• Protección de los testículos.
• Termorregulación, ya que los testículos para su proceso espermatogénico,
necesitan una temperatura de 4 – 7º C, más baja que la corporal. Para este
proceso las capas más importantes son la Túnica Dartos y el Músculo Cremaster
Externo y de estas 2 la más importante aún es la Túnica Dartos ya que reacciona
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rápidamente a cualquier cambio de temperatura. En carnero adulto comienza a
contraerse a 35 – 37º C y alcanza su contracción máxima a los 20º C.
2. TUBOS DE CONDUCCIÓN:
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Funciones:
Su función principal es la de contribuir en la emisión de semen durante la eyaculación,
transportando espermatozoides mediante ondas peristálticas desde la cola del epidídimo
hasta su desembocadura.
Almacenamiento de espermatozoides en las ampollas, especialmente en los momentos
que preceden al coito.
Las glándulas de la ampolla aportan fructosa y ácido cítrico al semen.
2.3. Uretra:
Constituye el pasaje común para los productos de los testículos, glándulas accesorias, y
para la excreción de la orina. Se pueden distinguir 3 partes:
La uretra pelviana prostática, que recibe todas las secreciones de las glándulas anexas y
a los espermatozoides desde el conducto deferente (aquí se mezcla el semen).
La uretra membranosa o bulbo, encorvado arco isquiático.
La uretra peniana, que recorre toda la longitud del pene.
3. GLÁNDULAS ACCESORIAS:
Función: Aportan gran cantidad de fluido al semen con un alto contenido de fructosa y
ácido cítrico, así como de potasio, sorbitol y enzimas.
3.2. Próstata:
Glándula impar de forma variable según la especie, que consta de una parte situada
detrás de la entrada del conducto deferente a la uretra y una parte diseminada o críptica,
extendida a lo largo de esta, sus secreciones se vierten junto al semen en el momento de
la eyaculación por medio de numerosos conductos que llegan hacia la uretra pelviana,
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en lateral del colículo seminal. Es la única glándula accesoria del macho constante en
todas las especies de animales domésticos, y su cuerpo mide 2,5 cm de ancho por 1 a
1,5 cm de grosor.
Función:
Secreta un líquido opaco, que tiene una reacción neutra, un olor característico, rico en
proteínas y minerales.
Evita la aglutinación de los espermatozoides.
Al momento de la eyaculación la secreción prostática absorbe anhídrido carbónico,
sustancia tóxica para los espermatozoides.
Función:
Producen un lubricante viscoso como mucus, que se considera interviene el la limpieza
de la uretra como preparación para el pasaje de espermatozoides, pH 7.5 a 8.2. Es la
secreción que se observa en el estado de excitación.
4. PENE:
El pene es el órgano copulador del macho que interviene, además, en la excreción
urinaria; destinado a depositar el semen en el interior del aparato reproductor de la
hembra, muchas veces solo en la vagina. Está formado por un tejido capaz de acumular
bruscamente - 5 a 10 segundos- gran cantidad de sangre y aumentando de tamaño y
rigidez (erección); esto ocurre durante la excitación sexual y permite su entrada en el
aparato reproductor de la hembra ayudado por la lubricación que le aportan las
secreciones de las glándulas de la hembra. El tamaño de este órgano varía con a especie
y no tiene nada que ver con la potencia sexual del macho. En el toro –por ejemplo- tiene
forma de cilindro, de 90 cm de largo aprox. y 3-4 cm de diámetro.
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Fig. 13. Genitales del toro.
• Tejido Fibroso
El corion sub mucoso, constituido de tejido conectivo sumamente denso y espeso que
rodea al pene, formando una cubierta fibrosa concéntrica, inmediatamente por dentro de
la mucosa.
La túnica albugínea, formada por fibras colágenas, que envuelven al cuerpo cavernoso
y a la porción esponjosa de la uretra.
El ligamento apical dorsal, que viene a ser un espesamiento de la túnica albugínea.
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• Tejido Eréctil
Tejido areolar compuesto por lagunas sanguíneas (aréolas o senos) separadas entre sí
por láminas de tejido conjuntivo denominadas septas que proceden de la túnica
albugínea.
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Fig.17. Pene del Verraco.
32
Fig.19. Parte craneal del pene del carnero.
Fig. 20. Formas del extremo libre del pene (glande) de los machos de diferentes especies.
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Entre las aves, sólo las pertenecientes al superorden palaeognathae (tinamúes,
avestruces, casuarios, etc.) y a la familia anátidos (patos, gansos, cisnes, etc.) poseen
pene, y la estructura del mismo es diferente a la del pene de los mamíferos. El pato de
laguna argentino (Oxyura vittata) - por ejemplo- tiene el pene más largo entre los
vertebrados proporcionalmente a la masa corporal. Su miembro viril está enrollado en
estado flácido, en estado erecto, es común que su pene mida la mitad de la longitud del
cuerpo, es decir, unos 20 cm (7.9 pulgadas), aproximadamente; no obstante, se
documentó el caso de un espécimen con un pene de 42.5 cm (16.75 pulgadas). Se cree
que estos tamaños tan importantes pueden tener relación con la competencia existente
entre estas aves promiscuas.
PREPUCIO
Es un pliegue invaginado de la piel que rodea la extremidad libre del pene cuando no
está en erección, recorre sagitalmente, la mitad caudal de la pared abdominal.
La superficie externa corresponde a la clásica arquitectura histológica característica de
la piel, a nivel del orificio prepucial la piel está formando un mechón de pelos largos,
mientras que internamente se encuentra recubierta por una membrana mucosa tapizada
por un epitelio estratificado escamoso de tipo húmedo no queratinizado, que presenta
glándulas tubulares.
Esta mucosa prepucial, se continúa hacia caudal, donde se refleja sobre la extremidad
libre del pene, para recubrirlo. El fondo del saco balano prepucial, que corresponde a la
reflexión de la mucosa prepucial para continuarse con la del pene, ha recibido la
denominación de fornix; a este nivel la submucosa presenta nódulos linfáticos.
El aparato reproductor del macho en las aves, difiere con el de los mamíferos, así,
presenta dos testículos ovalados y sin prepucio, su tamaño está en función de la
actividad sexual, de 1 a 4 cm de longitud, están situados en la cavidad abdominal
(endorquidea fisiológica), en posición cefálica respecto a los riñones y por debajo de
ellos. Su temperatura es la misma que la temperatura corporal (41-43°C). Tienen
túbulos seminíferos pero no presentan septas de separación ni lobulillos, están
suspendidos en la pared dorsal de la cavidad abdominal, mediante un ligamento llamado
mesorquio. Los epidídimos están poco desarrollados por lo que su papel fisiológico es
escaso, se prolongan hacia los conductos deferentes que están bien desarrollados y se
extienden a lo largo de 12 a 15 cm hasta desembocar en la cavidad común al aparato
digestivo y al genito-urinario, la Cloaca.
El falo o pene que es el órgano copulador está situado en la línea media y ventral de la
cloaca formando dos pliegues cloacales. Es muy rudimentario en el gallo y el pavo por
lo que en el momento de la copula solo existe un contacto de cloacas del macho y la
hembra. Pero está muy desarrollado en el pato y ganso (palmípedos), de 6 a 8 cm en
erección, deduciéndose una verdadera penetración en el momento de la cópula. Las
aves a diferencia de los mamíferos carecen de glándulas accesorias como las vesículas
seminales y glándulas de cowper o bulbouretrales.
34
BIBLIOGRAFIA
Dukes. (1981). Anatomía y fisiología de los animales domésticos”. 4ª Edición.
http://www.uclm.es/profesorado/produccionanimal/AparatoRepr.
http://www.um.es/anatvet/Documentos/Programa-asignatura-2009-10.
35
CAPITULO III
FISIOLOGÍA DE LA REPRODUCCION DEL MACHO
Sus acciones pueden dividirse en 2 grandes grupos, aquellas que tienen como órgano
blanco el propio aparato genital del macho y un segundo grupo de acciones que tienen
que ver con el metabolismo en virtud de sus efectos anabólicos. Los andrógenos
estimulan el crecimiento, desarrollo y mantenimiento de la actividad funcional de los
órganos sexuales primario, secundario y accesorios incluyendo el pene. Estimulan la
libido y potencia sexual del macho. Así mismo son responsables del desarrollo de los
caracteres sexuales secundarios, lo que se traduce en el mayor desarrollo corporal que se
observa sin excepción en el macho donde la cintura escapular es más ancha que la
pelviana y una distribución diferente a la hembra de los depósitos de grasa corporal. Un
ejemplo es el toro donde el peso corporal del animal maduro con frecuencia duplica al
de la hembra de igual raza. Por otra parte, influyen en la pigmentación (dicromismo del
pelaje) y crecimiento del pelo en los mamíferos y de las plumas en las aves donde son
más oscuros en ciertas regiones del cuerpo, el desarrollo de los cuernos en los
ungulados, la vocalización grave por hipertrofia laríngea y engrosamiento de las cuerdas
vocales y la conducta excretora de micción. Incluso se considera también la producción
de feromonas ya que algunas son específicas del sexo y dependen de los esteroides
gonadales.
36
conserve la dotación normal cromosómica de la especie al unirse con el óvulo también
haploide, Este proceso en el macho comienza con la madurez sexual y termina,
prácticamente, con la muerte del animal, lo que constituye una importante diferencia
con la fisiología reproductiva de la hembra que nace con un número finito de folículos
primarios (con el oocito tipo I correspondiente) y llega un momento de la vida a partir
del cual no se desarrollan mas óvulos.
Las espermatogonias tienen la vida normal de todos los tejidos, cada cierto tiempo se
renuevan. El ciclo espermatogénico o tiempo necesario para la evolución completa de
una espermatogonia hasta la formación de espermatozoides liberados es de una duración
constante para cada especie animal: 49 días para el morueco, 38 días para el verraco, 52
días en el conejo y 74 días en el hombre.
Fig. 21. Corte transversal del túbulo seminífero, Fig. 22. Epitelio seminífero mostrando
Ubicación de células de Sertoli y germinales. células de Sertoli y germinales.
37
25-30 °C y la fertilidad del semental disminuye cuando la temperatura alcanza los 30-
45°C por falta de espermatozoides.
La capacidad para producir espermatozoides, está, hasta cierto punto, determinada por
la herencia y es regulada durante la vida por la Hipófisis Anterior o Adenohipófisis y
otros factores que actúan indirectamente vía hipófisis o directamente sobre los mismos
testículos.
38
Las hormonas contribuyen también en la formación de los espermatozoides, la FSH y la
LTH, hacen que las células de Leydig tengan mejor respuesta a la LH en los machos
jóvenes, al incrementar y mantener sitios receptores para la LH, además la FSH
estimula el desarrollo del tejido germinal del testículo e interviene en las fases iniciales
de la espermatogénesis, hasta espermatocito secundario, luego la testosterona continúa
el proceso.
39
FASES DE LA ACTIVIDAD SEXUAL EN LA VIDA DE UN MACHO
1.- Desarrollo fetal.- En la vida embrionaria y fetal tienen lugar el desarrollo de los
caracteres sexuales por acción de las hormonas, permitiendo el desarrollo de los
testículos a partir de gónadas indiferenciadas. La presencia de hormonas esteroides
sexuales (testosterona) durante la diferenciación sexual, llevan a una orientación
definitiva hacia macho.
40
ESPERMATOGÉNESIS
El tejido testicular tiene una actividad muy prolífica, en el caso del toro, 1 gramo de
tejido testicular produce alrededor de 9 millones de espermatozoides por día. En
términos generales se dice que el toro produce 290 millones de espermatozoides por
hora y 80,000 por minuto, de los cuales el 80% se reabsorben.
41
La espermatogénesis comprende a su vez la espermatocitogenisis y la espermiogenesis:
ESPERMATOCITOGÉNESIS
Durante este proceso se dan: Primera Fase, que tiene una duración aproximada de 15 a
17 días, en la que los espermatogonios se dividen en uno latente y uno activo, que se
sigue dividiendo hasta dar 16 espermatocitos primarios, la Segunda Fase, comprende
unos 15 días, en la que cada espermatocito primario dar lugar a dos espermatocitos
secundarios y en la Tercera Fase, se da la división y maduración de los espermatocitos
secundarios, y la formación de las espermatidas sólo dura unas cuantas horas.
ESPERMIOGÉNESIS
Por este proceso las espermátides, redondas se transforman en espermatozoides por una
serie de cambios morfológicos progresivos, y ocurre la condensación de la cromatina
nuclear, formación de la cabeza del espermatozoide, formación del aparato flagelar, y
desarrollo del capuchón Acrosomal. La espermátide sufre una metamorfosis, hasta
convertirse en espermatozoide maduro, este proceso comienza en los túbulos
seminíferos y termina en los epidídimos; comprende la Fase de Golgi, Fase de
Capuchón o encasquetamiento, Fase Acrosomal y Fase de Maduración.
42
Fase de Capuchón o Encasquetamiento: El gránulo acrosomal cubre un polo del
núcleo, formándose el casquete cefálico.
Hay migración de los centriolos al polo del núcleo opuesto a aquel en el que se forma el
gránulo acrosomal. El centriolo proximal forma la parte de adhesión de la cola con la
cabeza del espermatozoide, la cola se forma de elementos del centríolo distal.
MITOSIS
La célula madre se divide en dos células hijas, cada una tiene el mismo número de
cromosomas que su progenitora. Es el mecanismo de división que presentan todas las
células de un organismo, excepto las implicadas en la reproducción sexual. Se desarrolla
en varias fases:
Profase: Empiezan a hacerse visibles los dos filamentos o cromátidas que forman cada
cromosoma, los cuales se van acortando al sufrir un proceso de espiralización. Van
desapareciendo progresivamente el nucleolo y la membrana nuclear y comienza a
formarse el huso acromático, en el que se insertan los cromosomas por el centrómero.
Al final de la profase todos se encuentran en la placa ecuatorial.
Anafase: Se separan las cromátidas de cada cromosoma, emigrando cada una de ellas a
un polo de la célula. Si ésta al principio tenía 2n cromosomas, ahora tiene 2n cromáticas
en cada polo.
Interfase: Cada cromátida de las células hijas reproduce la cromátida que le falta para
tener los cromosomas completos.
43
MEIOSIS
División de una célula progenitora en cuatro células hijas, de forma que cada una posee
la mitad del número de cromosomas de la madre. Este tipo de división se da en las
células implicadas en la reproducción sexual y se desarrolla en las siguientes fases:
Telofase II: Cada célula hija ha dado lugar a dos nuevas células con n cromátidas, que
sintetizarán la que les falta para tener el cromosoma completo.
44
Fig. 26. Mitosis y Meiosis en la Espermatogénesis y Ovogénesis.
45
Fig. 27. Parangón entre la espermatogénesis y los estudios universitarios
46
DEFINICION Y ESTRUCTURA DEL ESPERMATOZOIDE
La Cabeza
Es de forma ovoide aplanada, como raqueta de tenis, mide aproximadamente 8 x 4 x 1µ,
compuesta principalmente de un núcleo ubicado en la zona ecuatorial de la cabeza, que
se adelgaza hacia la parte anterior de la cabeza, está compuesto por ADN, conjugado y
estabilizado por proteínas básicas llamadas protaminas y en algunas especies contiene
cantidades variables de histonas más grandes, ricas en arginina, portador de la
información genética y ocupa la mayor parte de la cabeza, que a su vez contiene, en la
parte anterior al Acrosoma que significa un revestimiento interno, integrado por
sulfoproteinas de cierta resistencia física, por encima del acrosoma y cubriendo la mitad
de la cabeza está el capuchón cefálico unido a la membrana protoplasmática. Se
interpreta como una zona de protección, no precisamente de la cabeza sino de la
hialuronidasa y acrosina que se alojan entre el capuchón cefálico y el acrosoma. La
testosterona aumenta la concentración de hialuronidasa.
El Cuello
Es corto, mide alrededor de 1 u, poco perceptible, localizado entre la cabeza y la pieza
media, contiene una placa basal que lo separa de la cabeza y los centriolos modificados,
de uno de ellos -el distal- se origina el flagelo. Presenta una estructura de tipo articular
llamada Capítulum.
La Cola
Mide 40-50µ de longitud, es larga y delgada, proviniendo del centríolo de la
espermátida. Impulsa el espermatozoide mediante dos ondas dimensionales, las que
siguen una dirección distal con movimientos de látigo. Comprende:
47
Superficie de la Membrana Celular
Está cubierta por una membrana de fosfolípido prácticamente impermeable a ciertos
colorantes cuando se halla viva, cuando la célula muere aumenta la permeabilidad de la
membrana, especialmente en la región de la capa o de la cubierta post-nuclear, este
hecho proporciona la base para las técnicas rigurosas de coloración que diferencian a los
espermatozoides vivos y muertos.
48
EL SEMEN
El semen llamado también esperma, proviene del griego sperma que significa semilla,
es depositado a través del pene en el aparato reproductor de la hembra durante la
eyaculación con la finalidad de alcanzar y fecundar el óvulo. Está compuesto por
espermatozoides (de los testículos) y plasma seminal que se forma por el aporte de los
testículos, el epidídimo, las vesículas seminales, la próstata, las glándulas de Cowper,
los vasos deferentes.
La actividad cinética está regulada por los electrolitos procedentes del contenido
prostático, aunque en detrimento del tiempo de conservación in vitro; así mismo,
49
el pH también es un activador cinético: pH ácido disminuye la actividad
cinética, en cambio pH alcalino, la mantiene.
Vitaminas: Las más importantes son el Ácido ascórbico cuyos niveles promedio son:
para el toro 15-18 mg, verraco 43, potro 46, perro 45, y conejo 14, y las vitaminas
hidrosolubles del complejo B. La motilidad de los espermatozoides está correlacionada
positivamente con el contenido de tiamina, riboflavina, niacina, glicerilfosforilcolina
(GPC) y ergotionina. La glicerilfosforilcolina se secreta en el epidídimo, los
espermatozoides son incapaces de digerirla como tal, pero una enzima (disterasa) de las
secreciones del aparato genital femenino pueden desdoblarla en unidades simples para
que puedan utilizar los espermatozoides. Por consiguiente el GPC es una fuente de
energía en el aparato reproductor femenino para que el espermatozoide cumpla su
objetivo de fecundar.
La composición química del plasma seminal, hay que centrarla en contenido de fosfatos
y otras sales minerales, hidratos de carbono y lípidos.
En el toro y carnero está en 9.530 y 14.828 mg/100, en el verraco y potro 4.600 y 2.450
mg/100 respectivamente. En el hombre 8.200 mg/100. De esto se deduce que es de más
alta concentración en los animales de alta concentración zoospérmica.
50
carnero, 264 en el potro, entre 620 y 657 en el perro y 155 en el hombre; máxima
concentración en animales de eyaculación uterina.
Sodio y Potasio: Diferencias a favor del K, significa alta permeabilidad celular, un
equilibrio de Na:K significa óptimas condiciones de supervivencia post eyaculatoria en
los medios de dilución. Se han determinado concentraciones para el Na de 371 en toro,
103 en carnero, 646 en verraco, 264 en potro, y 155 en el hombre; mientras que para el
K: 325 en toro, 71 en carnero, 243 en verraco, y 62 mg en el potro.
Relación Ca: Mg.: Los niveles de Ca determinados son: toro 34 mg, carnero 9, verraco
5, potro 20, perro 16-17 y en el hombre de 25 mg. El mayor nivel corresponde a
animales de eyaculación uterina. Se cree que la mayor concentración del Ca en el
plasma seminal está relacionada con la actividad tampón. Los valores del Mg son: en el
toro 12, carnero y potro 3, verraco 11, perro 4 y en el hombre 14 mg por 100. En la aves
el Ca es poco abundante, habiéndose encontrado cantidades inferiores a 5, mientras que
el Mg esta en 11-12 mg; como consecuencia se observa una hipercinesis en el
eyaculado, y por lo tanto escasa supervivencia in vitro. El Mg actúa por un lado como
catalizador del metabolismo de los Hidratos de Carbono (fase de fosforilación) y por
otro, en el lado de cinesis zoospérmica; además actúa como estimulante de la glucolisis.
Del equilibrio Ca / Mg depende la posibilidad motora de los espermatozoides.
En lo que respecta a fósforo acido soluble y lipoideo, se señala para el toro 33, carnero
171, verraco 24, potro 26, gallo 27, perro 80 y para el hombre 57 mg; estas
concentraciones señalan utilización fosfórica por la célula zoospérmica.
El fósforo lipoideo, constituye la cubierta del espermatozoide, cuyas bases son las
cefalinas, lecitinas, que en algún caso se añaden a los dilutores para reforzar la
resistencia de los espermatozoides, frente a condiciones ambientales y a cambios de
temperatura o de presión osmótica.
51
Funciones del Plasma Seminal
BIBLIOGRAFIA
Caravaca, F.P., Castel, J.M., Guzmán, J.L., Delgado, M., Mena, Y., Alcalde, M.J. y
Gonzales, P. (2003). Bases de la producción animal, Ed. Servicio de publicaciones
de la universidad de córdoba.
52
Frandson, R. D. (1995). Anatomía y fisiología de los animales domésticos. Ed.
Inter-Americana. Méjico.
53
CAPÍTULO IV
LA ANDROLOGÍA
Los principales problemas de los que se encarga la andrología desde el punto de vista
de las disfunciones sexuales del macho son dos: la disfunción eréctil o impotencia, la
eyaculación precoz.
El tratamiento actual de este nuevo concepto médico, que agrupa una serie de
alteraciones que sufre el macho no solamente con la edad y que anteriormente no se
conocía o no se trataba, se realiza con terapia hormonal de suplencia con
undecanoato de testosterona.
Las enfermedades de los órganos urogenitales masculinos en los toros, cerdos y caballos
reproductores, disminuyen o excluyen por completo la función de la reproducción. La
esterilidad en los animales domésticos grandes son más frecuentes que en los pequeños
-por ejemplo- en toros aprox. el 1% por lo menos presenta alteración o imposibilidad de
la función copulatoria (impotencia) o de la fecundante (impotencia generandi) que
puede tener origen congénito o adquirido.
54
condromas) más común en perros y potros, menor presentación en cerdos y corderos,
Hiperplasia testicular e Histerocele.
55
En los bovinos la capacidad sexual se valora teniendo en cuenta la reacción de los
mismos ante los estímulos normales de la copula, para Gotze, deben transcurrir como
máximo entre 20 y 30 minutos, aunque en animales vigorosos la respuesta es muy
rápida.
56
Freud: Líbido es una expresión tomada de la teoría de la afectividad. Llamamos así la
energía, considerada como una magnitud cuantitativa (aunque actualmente no pueda
medirse), de las pulsiones que tienen relación con todo aquello que puede designarse
con la palabra amor. Así como la pulsión sexual se sitúa en el límite somato-psíquico, la
libido designa su aspecto psíquico; es la manifestación dinámica, en la vida psíquica, de
la pulsión sexual.
57
TARJETA DE EVALUACION REPRODUCTIVA DEL MACHO
Fecha de Evaluación:………………………………………………………………….
Propietario:…………………………………………………………………………….
Establo………………………………………………………………………………....
Dirección:…………………………… Teléfono: …………………………………….
Nombre y registro del semental:……………………………………………………….
Nro. Identificación: ……………Tatuaje:………….. Marca……………………........
Raza:…………………………………………………………………………………...
Fecha de Nacimiento:…………………….. Edad:……………………………………
Padre:…………………………………….. Madre:……………………………………
ANAMNESIS
Individual: Revisación Previa Fecha: _ _ / _ _ / _ _ Clasificación: _________
Examen Físico
Condición Corporal (1-5):…………………………………………………………
Aparato locomotor:………………………………………………………………..
Ojos:……………………………………………………………………………….
Escroto:……………………………………………………………………………
Testículos-Tono:…………………………………………………………………..
Epidídimo/Cordón espermático:………………………………………………….
Pene/ Prepucio:……………………………………………………………………
Glándulas Vesiculares:……………………………………………………………
Ampolla/Próstata:…………………………………………………………………
Anillo Inguinal:……………………………………………………………………
Circunferencia Escrotal: cm……………………………………………………….
Examen Sanitario:
Brucelosis, TBC, IBR, DVBC……………………..………………………
Campylobacter, Tricomoniasis, Leptospirosis…………….………………
Observaciones:…………………………………………………………………….
Método de Colección
VA EE Masaje
Respuesta: Protrusión Erección Eyaculación
Examen del Eyaculado (E 1) y (E 2)
Volumen………………………………… Color………………………………….
Densidad …………………………………pH…………………………………….
M.M.Mi. (1-5) …………………… Mot.Individual (MI) ……………………
Mot.Individual (MI) …………………………………………………………….
Vigor (0-4) ………………………………………………………………………
Concentración ……………………………………………………………………..
% vivos ……………………………% Anormalidades Primarias………………...
%Anormalidades. Secundarias……………………….……………………………
Observaciones……………………………………………………………………...
Clasificación:
Los datos resultantes del examen indicarían en la fecha, que el toro es: Apto,…
No Apto, Clasificación diferida.
Fecha de reexaminación recomendada:……………………Firma...………………
58
Análisis andrológico del toro
1. Examen general:
2. Examen interno
59
CAPÍTULO V
COLECCIÓN DE SEMEN
Varios métodos han sido ideados para la recolección de semen en los animales
domésticos, pero la mayoría de ellos han sido rechazados a favor del uso de la vagina
artificial. Todos los centros de inseminación artificial coinciden en afirmar que esta es la
metodología más sencilla, sobre todo en animales de gran alzada. Sin embargo, existen
otras alternativas que también se mencionarán a continuación. Para seleccionar alguno
de ellos, debe cumplir las siguientes condiciones:
• Obtención total del eyaculado.
• Obtener el material seminal en un estado de absoluta pureza.
• No constituir peligro para el macho.
• No significar riesgo en su ejecución para el operador.
• No debe desencadenar en los animales, reflejos inhibitorios.
60
2. Modelo danés: este tipo de vagina artificial es más ampliamente utilizado. Tiene
diferentes partes, como:
• Cilindro rígido de goma con agujero y tapón para el llenado con agua caliente.
• Camisa interior de látex.
• Cono recolector de látex.
• Ligaduras para atar.
• Tubo colector de vidrio.
El tubo colector está expuesto a temperatura ambiente y a la incidencia de los rayos
solares, por lo que debe cubrirse con alguna protección térmica. Mide aproximadamente
40 cm de largo y 5,7 cm de diámetro. Al cono colector de látex se le puede hacer un
pequeño orificio por donde se pueda expulsar el aire en el momento de la introducción
del pene a la vagina artificial, teniendo la precaución de colocar el cono con el orificio
hacia arriba.
3. Modelo de Cornell: para no exponer el tubo colector a la luz y a la temperatura
ambiental, Cornell ideó una vagina en la que el colector corre por dentro del
revestimiento interno y de esta manera queda protegido. Contiene una vaina de goma en
forma de embudo que corre a lo largo de la mayor parte de la vagina por dentro de la
cubierta interna y que se conecta con el tubo recolector. Puede llegar a medir 70 cm de
largo y 6,3 cm de diámetro.
4. Modelo Italiano (Bonadonna): este tipo es muy semejante al modelo danés; presenta
una longitud de 60 cm y 6 cm de diámetro. Como particularidad, contiene un disco de
goma espuma de 1,5 cm de grosor con una fisura en el medio que se fija en la
extremidad peneana del tubo rígido. Este diafragma cumple la función de aumentar la
fricción en el pene, el cual deberá entrar a la vagina con cierto esfuerzo y así
desencadenar el proceso final de la eyaculación de una manera más cercana a la natural.
Estos agregados evitan que el agua del interior de la vagina artificial salga fuera de los
márgenes terminales del cilindro hueco.
Preparación de la vagina (Modelo Danés)
El lavado de las camisas y conos de látex debe hacerse con agua caliente y detergente
neutro, enjuagadas luego también con agua caliente, posteriormente con alcohol etílico
70º y finalmente con agua destilada. Se dejan secar al aire y se guardan en lugares
cerrados a los que no pueda ingresar polvo ni suciedad. El cilindro o funda es lavado de
la misma manera y esterilizado con autoclave o en su defecto por ebullición.
Para armar esta vagina artificial, se coloca la camisa de látex dentro del cilindro, como
es más larga que el tubo rígido, se revierten los extremos de la camisa sobre los
extremos del cilindro. Ambos extremos son fijados con ligaduras, sin olvidar contar
siempre el número de ligaduras que se emplean, para evitar pérdidas. Luego se coloca el
cono o tubo colector fijándose con nuevas ataduras.
Una vez armada la vagina, se debe llenar el espacio vaginal con agua caliente a ±55 –
60 grados centígrados, para lograr una temperatura interna que oscile entre 40 y 42
grados centígrados para animales jóvenes que recién comienzan su período de
extracción, y entre 42 y 45 grados para los adultos ya entrenados según sea el caso. El
61
agua se ha de colocar primero con la vagina en posición horizontal hasta que rebalse, y
luego en forma vertical desalojando el excedente; de esta manera, la presión
intravaginal será la correcta en el momento de la introducción del pene en la vagina,
aunque debe recordarse que esta presión depende mucho del tamaño del órgano. Se
debe confirmar la temperatura del agua colocando un termómetro en el interior de la
vagina artificial.
Una vez llena de agua, se coloca el tubo colector de vidrio protegido y de esta manera
ya se encuentra preparada para ser utilizada. Antes de comenzar la extracción puede
lubricarse la entrada con vaselina sólida esterilizada, o bien con un gel especial; se
puede preparar de la siguiente manera: diluir goma tragacanto (3 gramos), en 5
centímetros cúbicos de glicerina, y colocar todo en 50 centímetros cúbicos de agua
destilada.
Fig.30. Partes de la vagina artificial (izquierda), Armado de la vagina (derecha).
Breves Recomendaciones
Antes de la colección, se debe limpiar bien al macho para evitar la contaminación de la
muestra de semen. Se deben cortar los pelos del orificio prepucial y de la periferia del
mismo. Es conveniente el completo lavado de la zona aproximadamente una hora antes
de la extracción, como así también la irrigación del saco prepucial con solución
fisiológica tibia una vez por semana, pero nunca el mismo día, ya que podría ocurrir una
mezcla entre el semen y los líquidos prepuciales.
Algunos Centros de Inseminación Artificial de bovinos, el día anterior a la extracción de
semen realizan una ducha completa del reproductor; esta práctica persigue dos objetivos
distintos, por un lado la higiene, y por el otro crear en el macho un reflejo condicionado.
Para cada macho, debe emplearse una vagina artificial, respetando normas sanitarias
básicas para evitar la diseminación de enfermedades infecciosas, principalmente las de
tipo venéreas o de transmisión sexual.
Técnicas de extracción
El método de la vagina artificial requiere de animales dóciles y entrenados, junto con
instalaciones y montajes adecuados. La universalidad del uso de esta técnica responde al
hecho de que se obtienen eyaculados muy limpios, con una baja contaminación cuando
se procede correctamente y con un equipamiento base de muy bajo costo, amén de
observar toda la cadena de reflejos de excitación y líbido sexual.
62
Existen diferentes técnicas de extracción:
1. Según lo utilizado
1.1. Con maniquí fijo: existen diferentes modelos de éstos. En general, consisten en una
estructura de acero muy fuerte o de madera con un acolchado para amortiguar golpes
que podría recibir el animal. Se encuentran cubiertos de cuero bovino o una tela
especial. El interior está vacío, y en la parte posterior se coloca la vagina.
1.2. Con maniquí móvil: posee la ventaja de facilitar el desplazamiento del reproductor
e ir cambiando el método de colección (muy útil para animales de baja líbido). Existen
modelos que se desplazan empujando y otros que poseen un motor eléctrico colocado en
el interior del maniquí y que es accionado por el operador.
1.3. Con animal vivo: se puede utilizar un brete para la sujeción del animal que sirve de
maniquí. No se debe emplear piso duro, ya que es muy traumático para las
articulaciones del reproductor. En algunos casos se coloca arena para amortiguar el
salto, pero de cualquier manera el piso más apropiado es el de tierra.
Los animales que suelen emplearse son hembras (vacas o yeguas, según el caso), es
conveniente que no estén en celo, y que estén perfectamente sanas y sean de
temperamento tranquilo. El uso de vacas lecheras del establecimiento es una gran
ventaja ya que están acostumbradas a estar atadas. La cola debe atarse a uno de los
miembros posteriores, o bien entre los mismos dirigidos hacia delante y atada en el
cuello con una soga fina. En Centros de Inseminación Artificial de bovinos es común el
uso de novillos o toros viejos.
2. Según la forma de presentar la vagina artificial.
2.1. Fija: esta técnica se emplea cuando se utiliza un maniquí que permite colocar la
vagina artificial dentro del mismo.
2.2. Manual: es el método más preferido universalmente. El operador se sitúa del lado
derecho del macho o maniquí. Con la mano derecha sostiene la vagina artificial, cuando
el macho inicia el salto, con la mano izquierda enguantada se desvía la dirección del
pene (tocando solamente el prepucio) y se lo dirige hacia la vagina, la cual debe
presentar una dirección de arriba-abajo en un ángulo aproximado de 45º. Se puede
apoyar el hombro izquierdo sobre el reproductor, para ser desplazado junto con él en
caso de que éste corrija su posición. De esta manera, la colección se consigue en forma
rápida y precisa.
Fig. 31. Colección de semen con vagina artificial
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El empuje -en el caso del toro- es extremadamente vigoroso y un operador desprevenido
puede perder el equilibrio, caérsele la vagina de sus manos o provocar lesiones sobre el
pene del animal por eso, el operador debe estar atento en todo momento durante el
desarrollo de la técnica.
Vale la pena tener presente que cada macho presenta características individuales que
es conveniente conocer a fin de lograr la máxima eficiencia en las colecciones. Si el
operador no conoce o no acepta esos “caprichos” particulares del macho, muchas
veces se llega al fracaso en la obtención de resultados.
La colección del semen debe hacerse de preferencia por las mañanas o después de 2
horas que el macho (toro) haya comido o bebido, de preferencia, con un ejercicio de 15
a 30 minutos. Conviene restringir a los toros durante 3-5 minutos previos a la monta y
evitar que ésta se produzca en el primer salto; de obtener un segundo eyaculado, debe
esperarse aprox.10 minutos, de esta manera se mejora la calidad del semen, por el
aumento del vigor del macho, producido por la monta previa. Se puede lubricar la
entrada de la vagina artificial (vaselina o con el dilutor) para facilitar la penetración.
La vagina artificial para el potro, se debe llenar con 2-3 litros de agua caliente para
alcanzar la temperatura final de 40-42ºC en el interior de la misma. Se debe lubricar la
funda con vaselina estéril.
ELECTROEYACULACIÓN
64
Fig. 32. Equipos de electroeyaculación para vacunos.
Este método fue utilizado sobre todo en equinos, se procede a cubrir el pene en erección
con una funda de goma, de longitud apropiada y que permita la expansión del glande.
La parte interna se lubrica con diluyentes y en la externa se puede colocar vaselina en el
momento de entrada a la vagina de la hembra; después de la eyaculación el esperma está
contenido por completo en el condón, si el procedimiento se ha realizado de buena
manera, se obtienen eyaculados muy aceptables.
Este es un método que al inicio del desarrollo de esta biotecnología se aplicó casi en
todas las especies de animales domésticos, ahora es anticuado, y solamente en casos
aislados podría servir para estudiar algunas características del semen de un reproductor
utilizado en monta natural. Tiene muchos inconvenientes, entre ellos, que el semen se
mezcla con los fluidos de la vagina y además se contamina (no se recomienda).
Este método requiere la introducción de la mano enguantada por el recto del macho para
masajear las ampollas seminales, se necesita la destreza del operador. El semen se
coloca en un frasco estéril. Puede emplearse en vacunos que presentan algún defecto
que impida la monta. Tiene el inconveniente de que el semen no sale completamente
puro, ya que se mezcla con otras secreciones y aún con orina, el contenido bacteriano es
alto, es decir, el semen colectado es de baja calidad.
65
MÉTODO DE LA MASTURBACIÓN
66
CAPÍTULO VI
VALORACIÓN Y PROCESAMIENTO DEL SEMEN
La fertilidad potencial de una colección de semen de cualquier macho reproductor,
tomada con cualquier método de colección depende de que contenga un número ideal de
espermatozoides viables, morfológicamente normales y funcionalmente competentes,
capaces de alcanzar el oviducto y de llevar a cabo la fecundación del ovocito. La
evaluación del semen mediante métodos y técnicas in vitro, para ver si ha de tener algún
valor predictivo de su capacidad fecundante in vivo, incluye el estudio de tantas
características espermáticas macro y microscópicas como sea posible. El principal
factor que persigue la valoración del semen es precisamente determinar la calidad
seminal que es un punto importante para la certificación de la aptitud reproductiva en
un macho dador de semen. Si bien no existe ningún examen in vitro altamente
correlacionado con la fertilidad, existen diversas pruebas de laboratorio que permiten
estimar la calidad seminal, muy útiles cuando son realizadas correctamente e
interpretadas con criterio.
EVALUACIÓN MACROSCÓPICA:
Fig. 34. Eyaculado de semen de toro.
La primera evaluación a realizar luego de
la colección de semen, es la evaluación
macroscópica, que consta de los siguientes
pasos:
67
Color: se consideran normales los colores que van desde el blanco al amarillento,
siendo patológicos, los eyaculados de color rosado, amarronado y verdoso. Son muchos
los factores que pueden hacer variar el color; alimentación, edad, época del año,
administración de fármacos, entre otros. Hay que tener en cuenta que las tonalidades
fuertemente parduscas, así como el semen amarillento cremoso (presencia de pus),
indican infecciones del tracto genital. Eventualmente el semen puede tener presencia de
sangre, lo cual causa alteraciones en los espermatozoides.
Aspecto y Densidad: la densidad del semen del eyaculado varía desde un semen
acuoso, lechoso, lechoso-cremoso, hasta un aspecto cremoso, estando directamente
relacionada con la concentración espermática.
La Densidad, depende de la concentración espermática.
pH: se evalúa tomando una gota de semen del tubo de colección y colocándola sobre
una tira indicadora de pH. Se usa también potenciómetros. Se considera un pH normal,
entre 6.2 y 6.8 no introducir la tira dentro del tubo para no alterar el semen con el
reactivo de la misma.
Material Extraño: se evalúa observando el fondo del tubo de colección para detectar la
presencia o no, de algún cuerpo extraño, se considera como positivo o negativo.
Schalm Test: se realiza para detectar la presencia de leucocitos, pero sólo en casos
sospechosos, no es una práctica de rutina en cada evaluación.
EVALUACIÓN MICROSCÓPICA:
Fig.36. Evaluando motilidad.
Motilidad en Masa Microscópica (M.M.Mi): se coloca una gota del semen puro sobre
un portaobjetos previamente temperado a 36-37ºC sobre una platina térmica de
68
microscopio, y se observa a 100 aumentos, Se observará en el campo microscópico,
ondas microscópicas o movimientos de remolino. Esto refleja el efecto combinado de
la concentración de células espermáticas y la viabilidad de las mismas. Se puede evaluar
cerca del borde de la gota, donde la profundidad de la misma es menor y es más fácil de
observar. La escala que se toma es de 0 a 4, evaluando como 0 al semen que no presenta
ondas y 4 cuando las ondas se mueven rápidamente formado remolinos. Dentro de esos
parámetros se consideran los puntos intermedios. Se puede considerar como valor
mínimo de aceptación 3 de MMMi.
Los errores más comunes que se podrían cometer y que se deben evitar, son:
Daño mecánico a las células, generalmente durante el frotis, el mismo que debe hacerse
con manipulaciones suaves.
También es posible utilizar como dilutor, suero salino tibio (cloruro de Sodio al 0.9%)
la dilución utilizada es de 1:20, se introduce una varilla aplicadora dentro de la muestra
de semen diluido, se extrae una gota y se coloca sobre un portaobjetos, luego una
laminilla para extender la muestra y la observación se hace al microscopio con platina
térmica 100x; se examina toda la lámina y el recuento se hará sobre el lugar (campo)
donde existe una mayor concentración de espermatozoides móviles.
El Vigor: se evalúa al mismo tiempo que la MI, teniendo en cuenta la velocidad con la
que estos espermatozoides atraviesan el campo. La escala que se utiliza es de 0 a 4,
evaluando como 0 los espermatozoides inmóviles y como 4 los que avanzan con rapidez
por el campo y son difíciles de seguir visualmente. Dentro de estos parámetros se
consideran los puntos intermedios. Se considera como valor mínimo aceptable un vigor
de 3.
70
Concentración espermática: para evaluarla, se emplean varios métodos:
Método de la Cámara Neubauer, es conocido también como: Método del conteo directo
de células o Método del hemocitómetro de Spencer o Método hemocitométrico:
Se debe preparar previamente una solución salina formolada al 2-3% Se colocan ±10
microlitros de semen puro en 2ml. de solución salina formolada (1/200) y se
homogeniza invirtiendo el tubo varias veces. Una vez homogeneizado, se toma
aproximadamente 10-14 microlitros (una gota) y se carga la Cámara de Neubauer por
capilaridad, en ambos retículos, teniendo en cuenta de cargar otros 10-14 microlitros
(una gota) para el segundo retículo volviendo a homogeneizar entre una carga y otra.
Nota I: para preparar la Cámara Neubauer, se deben humedecer los bordes de ésta antes
de colocar el cubre cámara y luego se debe presionar ejerciendo una leve fricción para
que el cubre cámara quede fijo y al invertir la Cámara no se caiga. Una vez cargada, se
debe dejar reposar unos minutos para permitir que todos los espermatozoides decanten y
se ubiquen en un mismo plano para poder contarlos. Luego se procede a ubicar el
retículo de glóbulos rojos a 100 aumentos, y una vez localizado, se pasa a 400 aumentos
para realizar el conteo. Se cuentan todos los espermatozoides que se encuentren en las 4
cuadrículas de las puntas y la central (5 en total) teniendo en cuenta de incluir también
los espermatozoides que se encuentren sobre 2 de las triples líneas de cada cuadrícula,
ya sean la superior y derecha ó la izquierda e inferior. Se cuentan los retículos de ambos
lados de la cámara y se saca el promedio. El número de espermatozoides que se cuenta,
se multiplica por 10,000(*) y así se obtiene la cantidad de espermatozoides por
milímetro cúbico de semen. Se puede considerar como valor aceptable, una
concentración de no menos de 750,000 espermatozoides por milímetro cúbico para
aceptar el eyaculado para congelación. La concentración mínima aceptable para toro de
500,000 espermatozoides por milímetro cúbico. Nota II: la medición de la
concentración se puede realizar al final de toda la evaluación, ya que el semen se puede
conservar hasta el otro día en la solución formolada.
71
Fig.37. La Cámara de Neubauer para el conteo directo de células.
La cámara de Neubauer.- Es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de
fases. Se trata de un portaobjetos de mayor espesor con una depresión en el centro, en cuyo fondo se ha marcado con
la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen de la fig.34. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con
una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área más pequeña de la cámara corresponde a 1
milímetro cuadrado. La depresión central está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre
con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie y
el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.
Existen numerosos modelos de cámaras de contaje celular adaptadas a su uso en microscopía. En la imagen anterior
se puede observar una cámara de Neubauer doble, como las que usas en el laboratorio de prácticas.
72
Tabla 9. Concentración espermática de algunas especies.
Método Fotocolorimétrico:
El procedimiento se basa en la utilización de un equipo que absorbe la luz que pasa a
través de una serie de lentes y filtros y después a través de una muestra diluida de
semen. La luz que pasa a través del semen se mide con un galvanómetro, pero este se
debe calibrar con muestras de semen de concentración conocida, determinadas por el
método del hemocitómetro, de manera que las lecturas se puedan convertir a
concentraciones.
73
Las coloraciones más prácticas y usuales que se pueden recomendar son:
Fig.38. Materiales para realizar las tinciones y tinción con tinta china.
74
Los métodos más usados son: Blom, Schaffer y Alquimist (eosina azul de anilina),
Mayer y Squiers y Bogart (fast green - eosina), Bodanona (Azul de Bromofenol -
nigrosina).
El método que utiliza la eosina, se realiza tomando una gota de semen puro y
colocándola sobre el extremo de un portaobjetos limpio y desengrasado, temperado a
36-37ºC sobre la platina térmica. Sobre esta gota se añade 1-2 gotas de eosina, que debe
75
estar a la misma temperatura del semen, en un tubo dentro del Baño María. Se mezcla
suavemente con la punta de la pipeta por aproximadamente 20 segundos. Se utiliza otro
portaobjetos, también temperado, y se apoya sobre el borde de la gota para que por
capilaridad se distribuya sobre el portaobjetos, se levanta y se realiza el extendido en
forma firme.
Nota II: la lectura del frotis de coloración vital se debe realizar el mismo día de la
evaluación, ya que pasado el tiempo todos los espermatozoides pueden llegar a teñirse.
• Los frotis no deben teñirse hasta algunas horas después de que son hechos.
• Se recomienda agregar una solución de Cloramina o clorazene al 0.5% durante
½ a 1minuto, con la finalidad de remover el mucus y enjuagar con agua
destilada.
• Realizar la desecación al aire, puede ser una ayuda los ventiladores de aire frío o
caliente.
• La fijación tiene el doble fin de estabilizar y conservar, en cuanto sea posible, la
forma de las células existentes. El método más sencillo y común es la “llama”,
también existen líquidos fijadores como el alcohol metílico, líquido de Carnoy,
solución ósmica, el sublimado, etc.
76
Clasificación de Anormalidades o Malformaciones Espermáticas
Las influencias adversas sobre el semen colectado, como contaminación con orina o
agua, exposición a cambios de temperatura y sustancias químicas, así como
manipulaciones mecánicas toscas, pueden producir algunas de las formas anormales.
Anormalidades primarias:
Del Cuello: Unión del cuello fuera del eje, en espiral, deshilachado, granular, hinchado.
77
Fig.41. Principales anormalidades morfológicas.
Anormalidades secundarias:
Son aquellas que se originan dentro del epidídimo; cabe destacar que por definición se
denota el origen y no la severidad del defecto.
78
Frecuencia en la presentación de anormalidades:
Colas enroscadas.
Cabezas o colas sueltas.
Colas partidas.
Cabezas piriformes.
Segmento intermedio alargado.
79
capaz de superar el proceso de congelación-descongelación. Los factores que pueden
afectar los valores de evaluación corresponden a factores intrínsecos del semen, o
factores de manejo del mismo (falta de N2 líquido en el termo de almacenamiento, etc.).
La descongelación de la pajuela se realiza generalmente en agua a 37ºC durante 1
minuto.
La evaluación consta de los siguientes pasos:
Motilidad Individual: 0 horas y 2 horas incubado a 37ºC. A las 0 horas valor mínimo
40% y a las 2 horas 30% de espermatozoides mótiles. Según el Departamento de
Medicina del Rodeo y Teriogenología de la Universidad de Saskatchewan, Canadá y
que se corresponden con las normas ISO 9002, los valores son: 0 hs de 25% y a las 2 hs
de 15%.
Vigor: 0 horas y 2 horas incubado a 37ºC. A las 0 horas valor mínimo 3 a las 2 horas 2.
Acrosomía: se realiza con tinción de Giemsa o por contraste de fase con glutaraldehído
al 0,2%. 0 horas y 2 horas incubado a 37ºC. A las 0 horas valor mínimo 60% de
acrosomas intactos y a las 2 horas 40%.
BIBLIOGRAFIA
Gómez, M., Verano, M., A. Lorena. (2005). Cátedra Reproducción Animal. Facultad de
Cs. Veterinarias y Zootecnia – UNLP.
80
CAPÍTULO VII
DILUCIÓN DEL SEMEN
81
Características que debe reunir un dilutor
• La tensión osmótica del dilutor debe ser isotónica, ósea, igual a la del semen.
• Evitar la intoxicación del espermatozoide asociada a la acumulación de desechos
metabólicos, gracias a las sustancias conservantes y quelantes incluidas en sus
fórmulas.
• Aumentar la propiedad tampón (pH tendiente a la neutralidad).
• Suministrar un balance apropiado de minerales esenciales para la vida de los
espermatozoides.
• Proporcionar nutrientes para los procesos metabólicos de la célula.
• Contener lipoproteínas y/o lecitinas para proteger a las células espermáticas
contra el shock frío.
• Crear espacio entre los espermatozoides disminuyendo la aglutinación.
• Encontrarse libre de sustancias, productos bacteriales y organismos infecciosos
perjudiciales a los espermatozoides, al aparato reproductor femenino, al proceso
de fertilización y a la implantación y desarrollo del óvulo fecundado.
• Inhibir el desarrollo microbiano gracias a los antibióticos que contienen
• Debe ser económico y de fácil preparación.
82
TIPOS DE DILUTORES
Para fines de congelamiento de semen, hoy en día el diluyente más usado es el “TRIS”.
Recomendaciones:
Para obtener la yema de huevo, se limpia el huevo con algodón y alcohol, se parte la
cáscara y se separa la yema de la clara, la yema se coloca en sobre un papel esterilizado
para que los últimos residuos de clara se queden en el papel, tratando de que no se
rompa la membrana de la yema durante este proceso. Una vez mezclada la yema de
huevo y el dilutor, debe batirse el dilutor durante 3 a 4 minutos, para lograr una
emulsión, de lo contrario habrá aglutinación de espermatozoides.
Usar huevos de gallina de corral, alimentadas preferentemente con maíz.
83
El pH del dilutor obtenido debe ser de 6.6 a 6.8.
Filtrar el dilutor preparado para separar las partículas grandes.
Es un medio simple de preparar, práctico y económico.
Ventajas:
Facilita el examen microscópico del semen, ya que el citrato es un agente quelador que
une al calcio y otros metales pesados ejerciendo una acción dispersante sobre los
glóbulos grasos de la yema de huevo.
Y solamente debe usarse semen con motilidad 5 y 4, el resto debe ser descartado.
El semen puede ser diluido hasta 50 a 60 veces, sin embargo, las diluciones de 5 - 25,
son las que se utilizan con más frecuencia.
La dosis mínima a utilizarse en la inseminación artificial va de 20 a 30 millones de
espermatozoides. Para determinar la concentración de espermatozoides por cc de semen
puro, se emplea la siguiente fórmula:
84
Ejemplo:
Aplicando la fórmula:
Son usados por su contenido de fosfatos, citratos y azúcares. Este tipo de dilutor puede
ser empleado en casi todas las especies de animales domésticos; y es recomendable
utilizar la leche de la hembra de la misma especie que ha dado el semen y que se desea
diluir. Los dilutores comerciales a base de leche contienen proteínas similares a la
especie en que se utiliza, esto hace posible que no existan reacciones contra proteínas
extrañas al momento de la inseminación, en cambio, pueden existir reacciones adversas
cuando se utiliza la yema de huevo en el dilutor.
La técnica de preparación:
La leche se coloca en baño maría entre 92 y 95 ºC, durante 10 minutos, se deja enfriar a
la temperatura ambiente, enseguida se filtra para eliminar la espuma y la nata, en esta
forma queda lista para ser utilizada como dilutor. La leche de vaca descremada y
esterilizada puede, sin embargo presentar ciertas variaciones en su composición.
85
dilutores comerciales se utilizan tanto en inseminación con semen fresco como para
semen congelado; con resultados similares e incluso superiores al diluyente clásico de
citrato de sodio. El producto se diluye en agua bidestilada esteril, al momento de su
empleo y se le adiciona 10% de su volumen de yema de huevo.
• Ausencia de aglutinación.
• Grado de dilución más elevado.
• Conservación de más larga duración.
• Algunos espermas se conservan mal en medio ordinario de yema de huevo, y sin
embargo, se conservan muy bien en un medio de leche sintética.
• Preparación fácil y precio cada vez menor.
• Los medios de leche se prestan muy bien para la congelación.
Medio Berliner
Glucosa 5.70 gr
Tartrato sódico potásico 0.67 gr
Yema 30.00 cc
Gelatina 1.80 gr
Agua bidestilada 100.00 cc
Medio Citrato-yema-glucosa
Citrato de Sodio 2.90 gr
Glucosa (Fructosa) 7.44 gr
Agua bidestilada 100.00 cc
Penicilina 500 000 U.I.
Estreptomicina 2.00 gr
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De esta solución se toma el 80% y se adiciona 20% de yema de huevo. Dentro de los
medios a base de leche el mejor es el Laiciphos 123. La dilución deberá ser entre 1:4 a
1:8 como máximo y las dosis deberán poseer como máximo 30 000 000 de
espermatozoides. El semen diluido puede conservarse, hasta 48 horas, a una Tº de 5ºC.
Medio Polge
Glucosa o glicocola 7.44 gr
Yema de huevo 30.00 cc
Agua bidestilada 100 cc
Medio Pardue
Glucosa 13.00 gr
Citrato de sodio 14.00 gr
Cloruro de potasio 0.29 gr
Bicarbonato de sodio 1.50 gr
Penicilina 100 000 U.I.
Estreptomicina 3.00 gr
Agua bidestilada 1.00 cc
Otros medios:
Yema de huevo 30.00 cc
Glicerina 2.00 cc
Agua bidestilada 68.00 cc
Medio Illinois:
Glucosa 3.00 gr
Citrato de Sodio 1.50 gr
Penicilina potásica 1 000 000 U.I.
Dihidroestreptomicina 1.00 gr
Como dilutores podemos usar la leche pasteurizada, la yema citrato o la fructosa 40%
con yema de huevo. La dilución será de 1/8, mantenida a 5ºC y durante 48 horas.
87
DILUTORES PARA SEMEN AVES:
En esta especie, con el eyaculado normal se pueden servir a 50 hembras, de allí la poca
práctica con diluyentes en la industria avícola.
Las soluciones Ringer y la de Tyrode, son medios satisfactorios; la dilución será de 1/3
a 1/5. Cada dosis debe tener 100 millones de espermatozoides y podrá mantenerse a 5
ºC, durante un máximo de 24 horas. Se recomienda añadir un poco de fructosa justo
antes de inseminar.
88
bacteriana en el semen de distintas especies. Aunque la acción de los antibióticos sobre
la flora bacteriana es beneficiosa para el semen, estas sustancias ejercen un cierto efecto
espermicida (Ahmad, 1987) o afectan a algunas características propias de los
espermatozoides como la motilidad (Jasko et al. 1993).
Se han reportado casos de infertilidad y hasta esterilidad en los que el semen ha sido
contaminado con: Brucela abortus, Vibrio foetus, Trichomonas foetus, Leptospira,
Pseudomonas aureaginosa, etc.
Fig. 45. Dilutor two-step para semen vacuno-ovino, Bioxcell para vacuno y MR-A para porcinos
BIBLIOGRAFIA
Boretto JM, Gibbons AE, Bunge MM, Cueto MI, Bidinodt F. 2002. Calidad seminal
post descongelamiento en relación con la eficiencia reproductiva de la inseminación
artificial laparoscópica en ovinos. Rev Med Vet, Argentina 83(4): 185-188.
Evans G. 1990. Inseminación artificial de ovejas y cabras. la. ed. p. 25-177. Ed.
ACRIBIA. S. A. España.Gibbons A, Cueto M, Wolf M, Arrigo J, Garcia J. 2004.
89
Evans G, Maxwell WMC. 1990. Salamon´s artificial insemination of sheep and goats».
London: Butterworth. 192 p.
Nunes. J. F 1993. El agua de coco como dilutor del semen caprino. Brasil. Rev. Cient.,
l(3):269-271.
Thomas CA, Garner DL, Dejarnette JM, Marshall CE. 1998. Effect of cryopreservation
on bovine sperm organelle function and viability as determined by flow cytometry. Biol
Reprod 58: 786-793.
90
CAPÍTULO VIII
CONSERVACIÓN DEL SEMEN Y TIPOS DE ENVASES
Una vez que el semen ha sido colectado por cualquier método antes descrito, debe ser
manipulado con mucho cuidado para evitar el deterioro o la muerte de los
espermatozoides. Es muy importante que todas las superficies que entren en contacto
con el semen se encuentren a una temperatura adecuada, es decir, entre 35 y 38ºC. Se
debe así mismo evitar la exposición del semen a los rayos directos del sol y la
contaminación de los implementos utilizados. El semen después de diluido y valorado,
puede ser utilizado en fresco o conservarse mediante refrigeración o congelación.
Los métodos más comunes usados en la actualidad para conservar el semen son:
Este método requiere del uso de Nitrógeno Líquido cuya temperatura es de -196ºC, este
descenso de temperatura constituye un “stress”, para los espermatozoides, por lo que la
mortalidad de los mismos oscila entre el 20% al 40%. Por tanto se recomienda como
91
base fundamental de la congelación de semen, trabajar con un eyaculado en óptimas
condiciones, para llegar a la congelación, con el máximo posible de espermatozoides
vivos.
Parece que congelar el semen relativamente despacio entre 2 a 4 minutos por la fase de
cristalización, es menos dañina que durante la fase de descongelación, por eso se
recomienda la descongelación rápida en agua a 37-40 ºC.
92
Fig. 46. Tanques criogénicos y temperaturas a nivel del cuello.
93
TIPOS DE ENVASES
Los envases para conservar el semen de los animales domésticos son de tipos diferentes
para caca especie, inclusive varían para una misma especie, existen envases desde
frascos de vidrio neutro, de plástico, sachets, pellets, pajillas, etc. Se pueden citar para
semen de vacunos -por ejemplo- los siguientes tipos de envases:
La ampolleta de vidrio de 1 cc de capacidad: casi en desuso.
El pellet o píldora: actualmente ya casi en desuso.
El minitueb o pajuela alemana.
La pajuela Francesa (French strow), hoy, la más usada universalmente.
94
Fig.47. Pajilla Francesa médium Strow modificada por Cassou
95
CAPÍTULO IX
INSEMINACIÓN ARTIFICIAL
96
Fig. 48. Lubricación con agua el guante de exploración.
A continuación, abrir ligeramente los labios de la vulva aplicando una ligera presión
hacia abajo y hacia atrás con el puño de la mano y la muñeca dentro del recto lo más
cerca posible del ano, para luego introducir el extremo de la pistola en la vulva.
con la punta dirigida hacia arriba formando un ángulo de 20 ó 30 hasta 45 grados para
evitar que la extremidad de la pistola coincida con del divertículo sub uretral o meato
urinario y entre en uretra hasta la vejiga, salvada esta posibilidad, se nivela
97
horizontalmente la pistola y se guía hasta que penetre en el conducto cervical con la
mano situada en el recto, el avance de la pistola a través de la vagina puede ser detenido
por la presencia de algunos pliegues de la pared vaginal, empujando el tracto hacia
delante suelen eliminarse estos pliegues, la localización del cérvix y de la abertura
cervical en ocasiones es difícil para los principiantes, pero ayuda mucho la contextura
compacta, dura de los anillos cervicales cartilaginosos, el paso por estos anillos
cervicales, puede ser difícil, y en ocasiones, éstos están cerrados de forma tan hermética
que es imposible la penetración.
Una vez depositado el semen en el cuerpo uterino, se retira suavemente la pistola del
tracto reproductivo. Luego se puede presionar suavemente varias veces y por 10
segundos aproximadamente la vulva a nivel del clítoris con la finalidad de estimular o
provocar contracciones y facilitar el transporte de los espermatozoides, se elimina el
guante obstétrico usado, así mismo la funda que utilizó. Lávese correctamente las
manos con una solución desinfectante, y con un cepillo y agua limpie sus botas.
98
Para desarrollar un programa de inseminación artificial, deben establecerse adecuados
registros y controles. Existen diferentes tipos de registro, fundamentalmente deben contener
los siguientes aspectos: control de celos y servicios, control de preñez, control de gestación y
parto, y el control de alteraciones ginecológicas y tratamientos.
EQUIPOS.
Tanque criogénico.
Termo descongelador.
Termómetro.
Disparador o Pistola de inseminar.
Pinza para pajilla.
Corta palillas.
Tijeras.
MATERIALES. Fig.52.Materiales de IA
Fundas descartables.
Doble funda.
Guantes descartables.
Papel absorbente.
Lubricante estéril.
Registro – lápiz
INDUMENTARIA.
Mameluco o delantal.
Gorra y botas de goma.
99
El tanque criogénico, también llamado tanque isotérmico, tanque de inseminación,
tanque de nitrógeno líquido, tanque de Criopreservación, etc. Este equipo juega un
papel muy importante en la conservación del semen congelado, se le debe prestar
cuidados especiales, este tanque contiene nitrógeno líquido a una temperatura constante
de -196ºC que sirve para mantener el semen en condiciones adecuadas, está construido
de manera similar a un termo común, de tal manera que contiene un recipiente dentro de
otro formando un espacio al vació y una presión constante que guarda una temperatura
constante; generalmente están construidos de aluminio y aleaciones específicas.
Tapa de tanque
Tapa del cuello
Asa
Cubierta externa
Base
100
La “Pistola de inseminar” o “Disparador de semen” es un tubo de acero inoxidable
con un delgado émbolo de acero. La luz del tubo es del mismo diámetro de la pajilla,
excepto por una cámara en el extremo anterior, que es lo suficientemente larga como
para acomodar el diámetro exterior de la pajuela. Esta cámara es 1 cm más corta que la
pajilla de manera que ésta sobresale del extremo de la pistola. La pajilla se inserta con
el extremo cerrado primero, luego se corta en forma perpendicular a nivel del extremo
sellado. Se cubren la pistola y el extremo de la pajuela con una funda descartable. El
extremo posterior de la pistola es más ancho con el fin de que pueda asegurarse el anillo
de plástico en forma de “O” llamado rondana para sostener en su lugar a la funda de
plástico descartable. El semen se expulsa al empujar el émbolo de acero inoxidable
contra el sello de la pajilla, la leve fuerza positiva asegura una expulsión máxima de
semen.
Fund
a
Embolo
Cuerpo
Extracción de la Pajilla
Se levanta -del asa- la canastilla sólo hasta la mitad del cuello del tanque criogénico,
esto aproximadamente unos 10cm. debajo de la boca del tanque. Se retira del gobelete,
la pajilla con una pinza; es necesario recordar que el semen dentro del tanque se
encuentra en estado sólido por lo tanto se debe evitar doblar las pajillas por el riesgo de
romperlas. Regresar rápidamente el bastón dentro de la canastilla; bajarla y colocarla en
la posición adecuada en el tanque. Si se demora más de 10seg con la canastilla a la
altura del cuello del tanque y no se ha conseguido retirar la pajilla, introduzca otra vez
la canastilla dentro del tanque para mantener la temperatura adecuada y repita la
operación.
101
Descongelación de la pajilla
Al momento de retirar la pajilla del tanque criogénico, agítela rápidamente una o dos
veces en el aire antes de introducirla en el agua temperada, esto se realiza con la
finalidad de evitar que el tapón de la pajilla explote. Seque de inmediato la pajilla
externamente evitando la formación de escarcha.
El agua para descongelar las pajillas debe estar a 37ºC en el termo descongelador, la
pajilla de 0.5 cm debe ser descongelada en un tiempo de 45 seg, mientras que la de 0.25
cm se descongela en 20-30 segundos.
102
Inseminación vaginal: llamada el tiro en la oscuridad. Consiste en depositar el semen
en el interior de la vagina sin tocar el cérvix, es simple y rápido, pero requiere de una
dosis de mayor volumen de semen, con resultados muy variables. Puede ser usada
donde el tiempo y recursos son limitados o para primerizas ya que en éstas la parte
vestibular es estrecha y no permite la introducción del espéculo o vaginoscopio.
Se limpia la vulva con papel toalla, cuando se utiliza pipetas y jeringas, primero se
carga ésta con aire hasta la marca de 0,2ml y luego se toma la dosis requerida de semen
del tubo que está a 30ºC (el aire sirve para expulsar todo el semen contenido en la
jeringa), abriendo la vulva se introduce cuidadosamente la pipeta, hasta el fondo como
sea posible dentro de la vagina, allí es vaciado el semen y luego se retira la pipeta. En el
proceso debe haber un asistente que limpie y recargue las pipetas. No son
recomendables las pipetas de vidrio, se pueden romper en la inseminación por un
movimiento brusco de la oveja, etc.
Para la IA, vía vaginal y cervical, es necesario simplemente una pipeta de plástico recta
conectada a una jeringa de 1ml, es similar en todos los aspectos a aquella usada en la
inseminación cervical, excepto que la punta es un poco torcida, la pistola usada en vacas
puede servir para depositar el semen a nivel de vagina o inicio de cérvix.
Este método requiere de un diseño especial que consiste en carriles para inmovilizar a
las ovejas dentro de la sala de IA, la altura general del riel es de 85-90cm y 60cm de
ancho, el inseminador se ubica en una silla dentro de una fosa.
103
Inseminación intrauterina:
104
Para la IA, vía intrauterina o laparoscópica, es necesario un telescopio o endoscopio de
7mm de preferencia con bisel de 30º, además, dos cánulas trocar montadas, una para el
telescopio con línea de gas y fuente de luz enchufada vía cable de fibra óptica, y la otra
para introducir las pipetas de IA. La pipeta de inseminación puede ser de vidrio o de
plástico con diámetro de 1.5mm y de 2mm de diámetro externo y de 30 cm de longitud.
La pipeta de inseminación puede ser acondicionada insertando una Scalp Vein Needle
(aguja para el cuero cabelludo o alitas) 23G x ¾ pulgadas de longitud dentro de una
funda de inseminación de vaca. Se requiere que la oveja esté inmóvil y en una posición
que facilite la IA, en una camilla con inclinación.
Este método permite varias personas que pueden ayudar en el trabajo de movimiento de
camillas, la limpieza de los locales es inevitable, donde se instalen los equipos,
microscopios, baño maría que facilite el manipuleo del semen (descongelación y
cargado de las pipetas de IA).
105
dentro de la cérvix de la oveja y a poca profundidad no es tan conveniente, gran parte
del semen retornará a la vagina.
• Para inseminación vaginal 0,3-0,5ml
• Para inseminación cervical 0,1-0,2ml
• Para inseminación intrauterina 0,1-0,5ml
COLECCIÓN DE SEMEN
El ambiente de colección debe ser lo suficientemente grande como para permitir la
seguridad de la persona encargada de realizarla, se puede acondicionar un antiguo
alojamiento de verracos para tal fin pero cerca del pequeño laboratorio. Debe ofrecer
seguridad y mayor confort del trabajador al trabajar de pie o en cuclillas, una ventaja de
este método es el ahorro de tiempo ya que el verraco "se dirige" directamente al potro,
el mismo que debe ser sólido y estar fijado al suelo para poder resistir el peso del
verraco y los golpes que éste da durante la fase de excitación, demás, debe brindar la
posibilidad de ajustar tanto la altura como la inclinación , de acceso fácil para coger el
prepucio sin tener contacto con una parte del potro; el recubrimiento se puede limpiar
pero que a la vez debe permitir conservar el olor del verraco para la estimulación. La
utilización de una alfombra en la parte trasera del potro puede evitar posibles
resbalones.
Material para la recogida.
• Termo: evita el choque térmico del semen. Debe estar temperado, en un armario o,
mejor, en una cámara caliente situada entre el local de recogida y el laboratorio. Debe
estar limpio y debe limpiarse tras cada recogida.
Fig. 61. Termo y cámara caliente
106
Fig. 62. Vaso de cartón y bolsita de plástico en vaso de precipitación.
• Gasa o filtro de papel: para evitar el contacto entre la tapioca y el semen que causaría
la aglutinación de los espermatozoides tradicionalmente se utiliza gasa médica doblada
dando lugar a varios grosores. Cada vez más esta gasa se ha ido sustituyendo por filtros
de papel o de tejido que dan el mismo resultado.
Fig. 63. Gasa doblada en cuatro, en la boca del termo: libre y fijada con una liga.
107
Técnica de la colección manual
La recogida tiene una duración variable según el verraco, pero normalmente oscila
entre los 5 a 15 minutos. Es muy importante observar bien el semen para poder definir
de forma óptima las diferentes fases: Los primeros chorros (10 a 15 ml) corresponden a
un líquido procedente de las glándulas accesorias, a menudo contaminado ya que
enjuaga las vías genitales en particular en su parte terminal (pene). Continúa la fracción
rica cuyo volumen varía entre los 50 a 150ml con un color blanco lechoso y que
generalmente inicia la eyaculación. Finalmente la fracción pobre con un volumen que
puede alcanzar los 200-300 ml y que procede esencialmente de la secreción de las
glándulas accesorias (próstata, vesículas seminales)
1. Mantener el pene horizontalmente para evitar que los derrames que pasan entre las
manos contaminen el semen.
2. Excitar la extremidad del pene con los dedos pulgar o meñique retirando la tapioca
adherida.
3. Una vez la cantidad de semen recogido parece suficiente, volver a poner la tapa del
termo y dejar caer el resto del eyaculado sobre el suelo o en un depósito.
5. Pulverizar el pene y el prepucio con una solución pudiendo ser por ejemplo
clorhexidina para desinfectarlos.
108
EL APRENDIZAJE DE LOS VERRACOS JÓVENES
Es un aspecto esencial que si se realiza de forma correcta permitirá más tarde ganar
mucho tiempo: El aprendizaje debe iniciarse desde la entrada de los animales en
cuarentena (1ª semana) ya que una vez aprendido el comportamiento, este queda
memorizado. El contacto con el potro deberá ser realizado por la persona encargada
habitualmente y en el mismo corral donde se aloja el verraco para no distraer su
atención con un nuevo local. Utilizar un potro simple sobre 4 patas, muy bajo y cubierto
de una tela o de un tejido con fuerte olor de esperma de verraco u orina de marranas en
celo. Dejar al verraco "jugar" pero siempre bajo estricta vigilancia para colocar
regularmente el potro en el eje del verraco y facilitar así la monta, realizar la operación
varias veces si esta no funciona a la primera vez (15 a 30 min). Una vez el verraco se ha
montado sobre el potro debemos acostumbrarle al contacto con la mano para conseguir
la primera colección, con calma y tranquilidad. Para conservar el aprendizaje, realizar
una colección cada semana o cada 15 días hasta el primer control microscópico o primer
espermiograma.
La técnica de la inseminación
Existen varias maneras de inseminar a una marrana que incluyen en sus procesos
muchos pasos comunes. Es buena práctica -por ejemplo- evaluar la calidad del semen
con un microscopio al colectarlo y antes de inseminar, ya que el transporte, dilución,
temperatura de almacenamiento, las fluctuaciones de temperatura y el tiempo
transcurrido desde la colección, pueden afectar la vida útil de los espermatozoides,
motilidad y viabilidad, etc.
• Se puede lavar y luego usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de proceder
a la inseminación.
109
•Hay que lubricar el extremo de la pipeta o del catéter con un poco de semen diluido o
con algún lubricante estéril que no sea espermicida, teniendo cuidado de no obstruir el
orificio del instrumento.
•Con los dedos de una mano se separan los labios vulvares y con la otra mano se
introduce cuidadosamente el catéter con la punta hacia arriba para salvar el meato
urinario o divertículo uretral, manteniendo la punta del catéter hacia arriba minimiza el
riesgo de entrar en contacto con la vejiga, y se empuja suave y lentamente por la vagina
hasta el cérvix. La botella o frasco de plástico con el semen diluido no se ha conectado
todavía con el catéter por la sencilla razón de no exponer la botella innecesariamente a
excesos de luz o temperatura y no contaminarla.
•Haciendo una rotación en el sentido contrario a las agujas del reloj se hace penetrar el
catéter en el cérvix. En ese momento se puede comprobar su ubicación y sentir cierta
resistencia al halar el catéter hacia atrás. Cuando se usa un catéter con punta de esponja,
no siempre está dentro del cérvix. En lugar de ello, puede estar contra el mismo cérvix.
Sin embargo, hay inseminadores que empujan suavemente para tratar de insertar la
punta de esponja dentro del primer anillo del cérvix. Si la punta está sujeta al cérvix, se
sentirá resistencia cuando se rota el catéter.
Debido a la variación de la intensidad de las contracciones del útero, suele llevar más
tiempo inseminar a las primerizas que a las marranas adultas. Si se deposita muy rápido
el semen puede causar reflujo por la vulva. Evidentemente ese semen que sale se
desperdicia. Recuerde que se está tratando de reemplazar al verraco, que se pasa de
cinco a diez minutos en cada monta.
• Es de esperar que algo de semen salga por la vagina hacia la vulva. Si la cantidad que
sale es excesiva, se debe detener la operación. O el semen está siendo depositado muy
rápido (habrá que depositarlo más lentamente) o el catéter no está dentro del cérvix. Si
el flujo se detiene, coloque mejor el catéter girándolo un cuarto de vuelta para reiniciar
el flujo de semen o muévalo lentamente adelante y atrás. Adicionalmente, puede ayudar
si se abre un agujero en la botella con un punzón o navaja si es que el flujo se detiene
por haberse formado un vacío.
• El transporte del semen, y por lo tanto, la fertilización, puede ser ineficiente cuando la
marrana está asustada o molesta; siempre hay que manejar a las hembras con calma y
suavidad. El inseminador está tratando de imitar al verraco, y la mayor fertilidad ocurre
cuando se hace bien. Teniendo presente un verraco, aplicando presión sobre el lomo de
la cerda y masajeándola en los flancos durante la inseminación, pueden aumentarse la
cantidad e intensidad de las contracciones del útero que extraen el semen de la botella y
110
lo transportan al interior del útero. Esto es especialmente cierto cuando se insemina a las
primerizas.
Si la marrana ha estado demasiado tiempo "cerrada" y esperando mucho tiempo para ser
montada, puede rechazar la inseminación. Si esto ocurre, hay que sacarla de la presencia
del macho por lo menos una hora y probar de nuevo. Es importante que la hembra inicie
su reflejo de inmovilidad mientras está siendo inseminada; así se estimulan las
contracciones uterinas, vitales para el transporte del semen.
El semen fresco o el semen frio transportado o congelado son los métodos alternativos
para la IA equina. El semen fresco o frio debe ser utilizado dentro de las 72 hs después
de la colección, mientras que el semen es congelado en vapor de nitrógeno líquido a una
temperatura de -196ºC puede ser utilizado cuando sea necesario.
111
de 4 a 6 dosis de semen congelado es lo que se necesita para preñar una yegua en estro
y de 1 a 2 dosis durante el estro con semen frio transportado.
No todos los sementales producen semen que pueda ser enfriado, transportado o
congelado con éxito. Aproximadamente el 70% de los sementales producen esperma
que puede ser enfriado, transportado o congelado, resultando en algún resultado de
fertilidad. Las yeguas deben de ser inseminadas cerca de la ovulación - dentro de las 0 y
las 24 h- antes de ovulación o -dentro de las 6 h- después de la ovulación.
Los servicios y nacimientos mediante inseminación artificial deben ser registrados ante
la asociación correspondiente, en EEUU -por ejemplo- luego de la IA, un Certificado de
Colección /Inseminación debe de ser llenado por el propietario del semental y de la
yegua, el formato deberá ser enviado a AQHA (American Quarter Horse Association)
dentro de los 15 días después de la inseminación. Estos formatos están disponibles
gratuitamente cuando son solicitadas. Para registrar una cría resultante de la IA, es
necesario usar el apropiado Certificado del Criador. Este documento es diferente al que
está en la Solicitud de Registro y es gratis cuando es solicitado o puede ser impreso
desde el internet. Este certificado del criador debe ser firmado por el propietario del
semental en el momento de la inseminación. Las crías son verificadas de parentesco por
la prueba de ADN, antes de ser registradas, para esto, se necesita el tipo genético de la
cría, del semental y de la yegua.
112
Fig. 67. Localización del catéter e inseminación artificial.
113
INSEMINACION ARTIFICIAL EN LA PERRA
La IA se realiza cuando los animales no pueden cruzarse en forma normal ya sea por
problemas de comportamiento o anatómicos, estos últimos pueden ser propios de la raza
o adquiridos.
En cruzas difíciles, ya sea por la anatomía de las razas o por el peso de los sementales
sobre las hembras al momento de la cópula. Cuando se requiere el uso de un semental
que habite lejos de donde está la perra, el uso de semen importado o cuando es difícil la
presencia de alguno de los progenitores. Para evitar enfermedades de transmisión
sexual. En perros agresivos, para mantener la integridad del otro reproductor. En perros
de buena calidad genética que sean incapaces de montar por edad, eyaculación precoz o
por problemas musculares o locomotores tanto del semental como de la perra. Para
preservar semen congelado de algún semental importante, que por edad o muerte ya no
pueda realizar cruzas.
Previo a la IA, es de utilidad observar rápidamente al microscopio óptico una gota del
semen. Este procedimiento asegura que el semen a utilizar contiene la fracción
114
espermática, y orienta sobre su calidad en cuanto a la motilidad y vitalidad de los
espermatozoides.
Momento de inseminación
En las perras la duración del proestro es variable, pudiendo oscilar entre 2 y 25 días. La
ovulación ocurre aproximadamente 48 h luego de ocurrido el pico preovulatorio de
hormona luteinizante (LH), al inicio del estro. La posterior maduración del ovocito
requiere aproximadamente 2 días. Si bien la perra suele aceptar al macho sólo durante
su periodo fértil, a veces lo acepta durante periodos no fértiles. Por ello es que por sí
sóla la observación de la conducta no es un buen indicador. Debido a la elevación de la
estrogenemia en el proestro, el número de capas celulares del epitelio vaginal aumenta,
este hecho hace que las células luminales se alejen de la irrigación sanguínea
evolucionando hacia la muerte. Este fenómeno puede visualizarse claramente en
extendidos vaginales seriados los cuales, junto con la imagen de vaginoscopía, pueden
orientar al comienzo del estro. Sin embargo no se puede identificar exactamente el
momento de mayor fertilidad de la perra. El dosaje de progesterona sérica hace posible
determinar el momento de la ovulación a través de la estimación indirecta del pico de
LH. Los óvulos son capaces de ser fecundados durante 4 ó 5 días, periodo en el cual se
realiza la IA.
La inseminación intra vaginal, con semen fresco es una maniobra fácil y rápida que
no lleva más de 15 minutos, se realiza con un catéter plástico, que existen de distintas
medidas según el tamaño de la perra, al que se adosa en su extremo una jeringa
conteniendo el semen a inseminar, pero también es posible utilizar una sonda rígida
urinaria. En algunos casos, el dedo índice, enguantado, ayuda a evitar la fosa del clítoris
y la uretra. El catéter o la sonda se introducen dorso-cranealmente, con la perra parada.
Una vez ubicado el catéter lo más craneal posible en la vagina, se descarga el semen
completamente. Por último, se llena la jeringa con aire y se descarga, a fin de evitar que
quede semen retenido en el espacio muerto del catéter.
115
Fig.68. Inseminación artificial y Post Inseminación en perras.
Son tres las principales fallas que se advierten en la inseminación artificial de la perra:
Segundo, el manejo incorrecto del semen. Hay que evitar cambios de temperatura y
exceso de luz. Además, cuando la muestra es fresca no deben pasar más 15 a 30 minutos
entre su obtención y la inseminación.
En este punto también influye la técnica aplicada (el semen se ubica en distintas zonas
dependiendo de si es fresco o congelado) y la inapropiada elección de materiales (ojo
con las pipetas inapropiadas, adaptadas, por ejemplo, de sondas que se usan para otros
fines).
116
BIBLIOGRAFIA
Cambell, W. J., Havey, G.T., Mc Donald, F.M. y Sparkman, I.R. 1996. Transcervical
insemination in sheep: an anatomical evaluation. Theriogenology 45: 1535-1544
Hafez, E.S.E. y Hafez B., 2000. Reproducción e inseminación artificial en animales. Ed.
McGraw-Hill Interamericana, 7ª ed. México, D.F.
CAPITULO X
FECUNDACIÓN
117
Fig. 69. El Ovocito y sus células que la rodean
Las Contracciones Uterinas y del Oviducto: Estas contracciones pueden iniciarse por la
cópula mediante transmisores nerviosos (Noradrenalina) o agentes hormonales
(oxitocina, PGF2α), o ambas en interacción con los estrógenos para ocasionar las
contracciones. Hacia la parte terminal uterina del oviducto el líquido fluye en dirección
de los ovarios, esto probablemente ayudado por el movimiento de los cilios a nivel del
istmo y de las contracciones de las paredes del istmo que son estimuladas también por
agentes nerviosos y hormonales.
Las capas que el espermatozoide tiene que atravesar son: las células del cúmulo y de la
corona radiada, la zona pelúcida, la membrana externa, la membrana vitelina, que es la
verdadera membrana plasmática del ovocito, los gránulos corticales, pequeños cuerpos
118
redondeados que permanecen exactamente debajo de la membrana vitelina; hasta llegar
al núcleo aploide del ovocito.
119
Polispermia:
BIBLIOGRAFIA
Patten, B.M. (1948).Embryology of the pig. 3rd edn. McGraw-Hill book Co.
120
CAPÍTULO XI
GESTACIÓN
Huevo o Cigoto (Segmentación): División del cigoto sin aumento del citoplasma,
tampoco de tamaño. La primera segmentación ocasiona la formación de un embrión de
2 células, estas dan lugar a 4, luego a 8, 16 y 32 células. Cuando el embrión pasa del
oviducto hacia el útero se encontrará una masa de 16 a 32 células dentro de la zona
pelúcida. A esta estructura se la denomina mórula. Durante los siguientes días el
líquido colectado en los espacios intercelulares se acumulará en el centro formando el
blastocisto, estructura con una cavidad llena de líquido (el blastocele) rodeado por una
capa de células. Se puede identificar la masa celular interna, montículo de células a un
lado del blastocisto, estas células aún no están diferenciadas. Cerca del término del
período de segmentación la zona pelúcida del embrión se desintegra permitiendo que el
blastocisto se alargue. Este período se prolonga desde la fertilización hasta los 12 días
en la vaca, 10 en la borrega y 6 en la cerda.
121
Fig. 71. Evolución del cigoto
122
Tabla 13. Capas germinales y formación de órganos.
Capa
Órganos
Germinal
Sistema nervioso central.
Órganos sensoriales.
Glándulas sudoríparas.
Ectodermo Glándulas mamarias.
Piel.
Pelo.
Uñas
Sistema circulatorio.
Sistema esquelético.
Músculo.
Mesodermo
Sistema reproductor (masculino y femenino)
Riñones.
Conductos urinarios.
Sistema digestivo.
Hígado.
Pulmones.
Endodermo
Páncreas.
Glándula tiroides.
La mayor parte de otras glándulas.
Membranas Extraembrionarias:
Alantocorion: La capa extraembrionaria más externa, formada por la fusión del corion y
el alantoides. Esta membrana se une al endometrio durante la placentación y forma la
placenta. A través de las uniones placentarias pasan los nutrientes y oxígeno de la
sangre materna al embrión en desarrollo y el CO2 y el metano, del embrión a la sangre
materna, si la membrana corioalantoidea no se desarrollara apropiadamente, el embrión
moriría pronto.
123
Fig. 73. Membranas extraembrionarias
124
Fig. 74. Formación de órganos (arriba), feto vacuno de 2.5 meses (abajo).
125
Fig.75. Feto de vacuno de 5 meses: líquidos fetales y membranas extraembrionarias.
Progesterona:
La progesterona es producida por el cuerpo lúteo y por la placenta en determinados
momentos de la gestación: Altos niveles de esta hormona disminuyen el tono del
miometrio e inhiben las contracciones uterinas por bloqueo de la acción de otras
hormonas o drogas sobre el miometrio. Además, altas concentraciones de progesterona
detienen el ciclo estral, evitando la secreción de gonadotropinas.
Tabla 14. Producción de progesterona por el cuerpo lúteo y la placenta en hembras en gestación.
Especie.
Progesterona de cuerpo lúteo Progesterona de placenta
Hembra
126
Relaxina:
Polipéptido producido por el cuerpo lúteo y la placenta, netamente femenina.
Los niveles son mucho más altos durante la última parte de la gestación que al inicio de
la misma. Suaviza el tejido conjuntivo lo cual permite a los músculos uterinos estirarse
para acomodar al feto en crecimiento. Interviene en la separación de la sínfisis púbica
en momentos del parto. En sinergismo con la progesterona y estrógenos produce
aumento de la glándula mamaria.
Estrógenos:
Los niveles de estrógenos son bajos durante la primera parte de la gestación pero
aumentan a la mitad y última parte de la misma. La fuente primaria de los estrógenos,
en la gestación, es la placenta. Su función es actuar en sinergismo con la progesterona y
la relaxina para desarrollar y preparar la glándula mamaria, para la síntesis de leche
después del parto.
Otras:
Las hormonas que secretan las glándulas, tiroides, paratiroides, corteza suprarrenal,
entre otras que producen hormonas secundarias de la reproducción, son importantes en
el mantenimiento de un estado metabólico de la madre que permite un desarrollo
embrionario y luego fetal, apropiados.
BIBLIOGRAFIA
Arthur, G.H., Noakes D.E.; Pearson, H.; Parkinson, T.J. 1996. Veterinary Reproduction
and Obstetrics. Seventh Edition Saunders.
Adams, G.P.; R.L. Matteri; J.P. Kastelic; J.ch. Ko; O Ginther. 1992. Association
between surges of follicle stimulating hormone and the emergence of follicular waves in
heifers. J. Reprod. Fert. 94: 177
127
CAPÍTULO XII
DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ
Importancia:
El diagnóstico de la preñez, sirve para identificar hembras no preñadas, al poco tiempo
del apareamiento o la inseminación artificial y así reducir la pérdida de tiempo en la
producción debido a infertilidad; en algunos casos, una situación negativa se puede
corregir mediante el tratamiento apropiado, en otros solo queda la posibilidad de
desechar a la hembra, permite también certificar hembras con fines de venta o
aseguramiento para manejo, además, para reducir el desperdicio en programas de
reproducción con técnicas hormonales costosas y para asistir en el manejo económico
de la producción animal, entre otros.
Métodos Clínicos
La exploración Rectal:
Llamada palpación rectal, en hatos donde se utiliza la inseminación artificial, la primera
palpación se puede hacer entre 35 y 45 días después de la inseminación. Se deben llevar
registros específicos de cada palpación para cada vaca.
128
Palpación a los 45 y 50 días: El útero aún se encuentra en el piso de la cavidad pélvica,
el cuerno grávido ha alcanzado un diámetro de 6.5cm, con el abultamiento de este
cuerno más pronunciado, el amnios, por su tamaño, es semejante al de un pequeño
huevo de gallina, la membrana se puede deslizar en cualquier cuerno. Presencia definida
de cuerpo lúteo en el ovario adyacente al cuerno grávido.
Palpación a los 90 días: El útero se colgará más allá del borde pélvico y tendrá un
diámetro de 8-10 cm, el feto tendrá 10-15 cm de largo y se podrá palpar con facilidad.
Presencia de cuerpo lúteo en el ovario adyacente al cuerno grávido.
Palpación a los 120 días: El útero estará más colgado hacia el borde anterior de la
pelvis al igual que el cérvix casi colgado sobre el borde de la pelvis, el feto se podrá
palpar con facilidad y tendrá de 25 a 30cm de largo. Se puede identificar las partes
anatómicas del mismo, se pueden identificar pequeños placentomas, se puede detectar el
pulso de la preñez, pero es difícil alcanzar ovarios.
Palpación a los 150 días: El útero se encuentra bastante colgado ya sobre la cavidad
abdominal y el cérvix se localiza sobre el borde anterior de la pelvis, se pueden
identificar placentomas sobresalientes aprox. del tamaño de los ovarios, el feto tiene una
longitud de 35 a 40cm, aunque puede ser difícil tocarlo en vacas grandes.
Arteria de 6 mm a 1.24 cm de diámetro, y pulso de preñez sobresaliente.
Palpación a los 170 a 230 días: EL cérvix se encontrará sobre el borde anterior de la
pelvis, pudiéndose doblar sobre el borde de la misma, la pared dorsal del útero estará
dura y difícil de palpar, los placentomas varían de tamaño y puede ser difícil palparlos,
debido a la dureza de la pared uterina, también el feto será difícil de palpar debido a que
se encuentra en la cavidad abdominal.
Arteria uterina de 1.25 a 1.4cm; pulso fuerte de preñez.
Palpación a los 230 a 280 días: El feto estará lo suficientemente grande como para que
se pueda palpar con la mano, por lo general las estructuras que se pueden palpar son la
cabeza y miembros anteriores. Con frecuencia se pueden detectar los movimientos del
feto.
129
Fig. 77. Diagnóstico de preñez mediante palpación rectal (izquierda) y mediante ecosonografía (derecha)
Pruebas Inmunológicas
BIBLIOGRABIA
Arthur, G.H., Noakes D.E.; Pearson, H.; Parkinson, T.J. 1996. Veterinary Reproduction
and Obstetrics. Seventh Edition Saunders.
Brown, R.T., Brogliatt,i G.M., Adams, G.P. 1996. Postpubertal fertility subsequent to
repeated transvaginal oocyte collection in caíves. Theriogenology 45:358 abstr.
Brogliatti, G.M., Adams, G.R 1996. Transvaginal ultrasound guided oocvte collection
in prepubertal calves, Theriogenology 45:1163-1176.
Brogliatti, G.M., Furnus, C., De Mates, D., Martínez, G. 1999. Programa de
fertilización in vitro, superovulación y transferencia de embriones en terneras Brangus
prepúberes.
Bó, G.A., Caccia, M. 1997/1998. Examinación ultrasonográfica del tracto reproductivo
bovino. En: Modulo 111, Anexo 1, Ultrasonografía.
Curso de Post-Grado en Reproducción Bovina, Instituto de Reproducción Animal de
Córdoba (IRAC), 3:19-37.
Resúmens III Simposio Internacional de Reproducción Animal, Carlos Paz, Córdoba;
Argentina, Junio 19-21; 209 abstr.
130
CAPÍTULO XIII
EL PARTO
El parto natural de una hembra de animal doméstico, no es simplemente un parto
“sin”, sino aquel que se produce gracias a la maravilla de la fisiología reproductiva, y
en el que los procedimientos obstétricos se aplican únicamente en caso de necesidad. Es
lo opuesto al parto inducido, atendido por un profesional y asistido por personal con
alguna experiencia, en el cual la tecnología sustituye la fisiología de la hembra,
pudiendo generar riesgos para la madre y la cría. No será posible asistir a una hembra
parturienta sin comprender la verdadera naturaleza o fisiología del parto el cual es un
acontecimiento involuntario. Siendo la fisiología del parto tan sensible al entorno, el
papel del zootecnista asistente de un parto es estar disponible pero en un discreto
segundo plano, sin interferir, confiando en los recursos de la hembra para parir, y
aplicar los procedimientos obstétricos únicamente si hacen falta. El protagonismo del
parto corresponde a la hembra parturienta.
Fig.78. Parto en las diferentes especies de animales domésticos.
131
Fig.80. Algunas posiciones anormales fetales en vacunos
132
Desencadenamiento del parto
Dilatación, el cérvix se dilata permitiendo el paso del feto, la dilatación es causada por
acción de la relaxina en sinergismo con los estrógenos. La fase de dilatación comienza
cuando se inicia la apertura del cuello uterino por la presión de los líquidos placentarios
al regularizarse las contracciones uterinas.
El ternero tiene una posición fisiológica dentro del útero como se ve en la Fig.76. Esta
posición se denomina presentación anterior.
133
Una característica que define esta fase es la regularización de las contracciones uterinas,
una cada 15-20 minutos, con una duración de 15-20 seg. El cuello uterino se dilata
lentamente, en 6 h alcanza un diámetro de 5-10 cm.
Expulsión del Feto, contracciones uterinas, que inicialmente son débiles e irregulares y
se vuelven progresivamente más fuertes y frecuentes (cada 2 minutos con 1 minuto de
duración). Estas contracciones subsisten después del parto.
Fig.82. Vaca en trabajo de parto, salida del amnios y alantoides- Fase de expulsión.
Gracias al movimiento del esternón que se desplaza hacia atrás se logra la salida
completa del ternero.
134
Limpieza o Expulsión de la Placenta, llamado también periodo de secundinas, es
posible gracias a las contracciones que se producen aún después del parto,
fisiológicamente debe expulsarse entre las 2 y 8 horas después del parto.
Retención Placentaria
Si la placenta de la vaca no es expulsada 24 horas después de la expulsión del feto, esta
se retendrá por 5 ó 6 días. Los tejidos placentarios son un excelente medio de cultivo
para el crecimiento bacteriano, por lo tanto debe extraerse esa placenta ya se por método
mecánico o utilizando hormonas que puedan producir contracciones uterinas que la
expulsen (dietilestilbestrol, PGF2α).
Es una regla que siempre se debe tener en cuenta cuando se ayuda a una vaca a parir.
Cuando se asiste a la vaca muy temprano, se corre el riesgo de hacerle daño a la vaca y
al ternero, si se asiste muy tarde, puede perder el ternero. Anteriormente, la
recomendación de cuando asistir se basaba solamente en el tiempo, nuevas
135
investigaciones demuestran que si se sigue solamente las reglas del tiempo, se puede
hacer más daño que beneficio según dice Howard Tyler, científico en lechería de la
Universidad Estatal de Iowa. Frank Garry, del Hospital de la Universidad Estatal de
Colorado, dice que no solamente los terneros muy duros de halar son los que producen
problemas para las vacas y para los mismos terneros. Toda vez que se asiste a una vaca
en el parto, se incrementa el riesgo y los efectos negativos en las vacas y los becerros.
Se puede recomendar 4 pasos para asistir con éxito un parto distócico “Primero. No
haga daño”
Entonces ¿qué se debe hacer para no hacer daño? se debe desarrollar un protocolo que
use el tiempo y que también se base en saber si la vaca o el ternero están en estrés. Se
puede utilizar estos pasos para saber cuándo asistir a una vaca con problemas.
Paso 1. A los primeros signos de la fase 1 del parto (la vaca está inquieta, se para y se
echa, no come, se empieza a tomar el tiempo, este es el momento de pasar la vaca a un
sitio individual bien limpio y con muy buena cama.
Se evalúa la vaca cada hora y se mire si está progresando. Si no se nota ningún progreso
a las cuatro horas, entonces se necesita examinar la vaca, según nos dice Garry, limpie
la vulva y su brazo, aplique un lubricante y con gentileza evalúe lo que está pasando. Si
por ejemplo, la vaca tiene una torsión uterina o el ternero está en una posición
incorrecta, el proceso no va a progresar. También revise si hay signos de fiebre de leche.
Si todo parece normal, déjela que trabaje sola.
La fase 1 del parto, por lo general dura 2 a 6 horas. Durante esta fase, el becerro no está
en el canal del parto y por lo tanto no tiene riesgo de que le falte oxigeno. Esto significa
que usted puede esperar.
136
Paso 3. Se evalúa el progreso por lo menos cada 30 minutos, se monitorea la vaca y el
ternero para ver si están estresados. Se busca cualquier signo que indique que haya
sangre en las membranas fetales o el líquido amniótico. Se busca la presencia de los
cotiledones. Se revisa para ver si hay sangre alrededor del recto. Cualquiera de estos
signos indica que puede haber un problema serio, como ruptura de la placenta y el parto
se debe asistir inmediatamente.
Una vez que se presentan las pezuñas, se deberá revisar la lengua para ver si el ternero
tiene reflejos y un color normal. Use los dedos para pellizcar la lengua. Si la lengua se
retrae, el ternero está bien, si no se retrae significa que no tiene reflejos y se debe sacar
ese ternero inmediatamente.
También se evalúa el color de la lengua. Durante esta fase del parto, cuando la vaca está
pujando activamente, la mayoría del oxígeno que va al ternero se restringe
temporalmente y la lengua se obscurece y se vuelve morada. Esta debe volver a su
color rosa una vez pasada la contracción. Si no vuelve a su color rosa después de la
contracción, esto indica que el ternero está en peligro y se debe de halar inmediatamente
(en menos de 10 minutos).
Paso 4. Si no hay síntomas que el ternero esté bajo estrés, se deja que la vaca haga su
trabajo. Tayler dice “yo he visto una novilla de primer parto, parir un becerro de 130
libras sin ninguna ayuda”. La habilidad de dilatación del cérvix casi no tiene límite, solo
requiere de tiempo.
La fase dos del parto puede durar una a dos horas en las vacas y dos a cuatro horas en
vaquillonas de primer parto.
Sin embargo no se deja que la vaca trabaje por siempre. Es posible que se necesite
actuar.
Si la vaca no progresa, es posible que necesite ayuda para que dilate el cérvix y parir el
ternero. Si es necesario darle asistencia a una vaca, no se pone los fórceps y
simplemente se hala. Hay que tomarse el tiempo de ayudarla a dilatar. Esto hace que la
137
halada sea mucho más tolerable para la vaca y el ternero y también va a significar
menos trabajo para el que hala.
Si la cabeza o las patas están presentes, se coloca una mano en cada lado de la cabeza y
se trabaja hacia adentro y afuera durante 5 minutos. (Siempre se limpia bien y se
desinfectan los brazos del asistente y la vulva de la vaca antes de entrar.) Esto ayudará a
que la vulva se extienda. Si las patas y la cabeza no están afuera, simplemente se cruza
las manos y se trabaja con manos y brazos de adentro hacia fuera durante 5 minutos.
BIBLIOGRAFIA
Allen, W. E. (1994) Fertilidad y obstetricia equina. 1ª Edición P. 248
Eales, F. A. Bsc, BVSc, Msc, Ph.D., Mrcvs. Small, J. Hnc. (1986). Parto en oveja.
Consejos e instrucciones prácticas: 1а.Edición. P.160
138
CAPÍTULO XIV
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
Introducción:
En la actualidad y tras 36 años de aplicación práctica, la transferencia de embriones
(TE) es una biotecnología fiable en la crianza de los animales de interés económico del
hombre, un planeamiento reproductivo moderno debe incluir necesariamente programas
de transferencia embrionaria, para ver el mejoramiento genético más temprano que
tarde. La TE se introdujo en Alemania en 1974 de manera experimental, de allí hasta
ahora ha sufrido críticas muy variadas y seguro también en el futuro. La TE entraña una
carga emocional tan grande por la esperanza de éxito en muchos pasos desde la
sincronización previa, pasando por la superovulación, inseminación hasta la recogida de
los embriones y su transferencia, esperanzas de éxito que en algunos casos superan en
mucho todas las previsiones. El creciente campo de la TE puede considerarse como la
contraparte femenina de la Inseminación Artificial, ya que las hembras de mérito
genético superior son superovuladas con hormonas gonadotrópicas y sus ovocitos se
fecundan in vivo pero también in vitro; a continuación los embriones resultantes se
transfieren a las receptoras que son madres sustitutas de menor valor genético.
El avance en técnicas de Sincronización del ciclo estrual, técnicas de recolección de
ovocitos y embriones, la tecnología de criopreservación, han aportado a la utilización
creciente de la transferencia de embriones (TE). Por término medio se puede considerar
normal la obtención de alrededor de 10 embriones de diferente calidad, con una media
de 6 embriones transferibles por lavado
Así se difunde cada vez con mayor amplitud la TE desapareciendo el requisito de que su
realización sea monopolizada exclusivamente por instituciones de TE, esta
biotecnología trae ingresos extras al ingeniero zootecnista y a los técnicos
inseminadores que trabajen en un centro de TE, origina competencia y con ello una
evolución de los precios según las premisas de de una economía libre de mercado.
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MEDIDAS DE HIGIENE A CONSIDERAR
Se han concretado algunas exigencias mínimas referente a las instalaciones,
laboratorios, instrumentos y equipos, personal calificado y la higiene referida a la
limpieza y desinfección de los aparatos y ropas adecuadas. Está claro que se deben
evitar especialmente la propagación de enfermedades infectocontagiosas, sin embargo
en la puesta en práctica de los programas de TE ocurre frecuentemente que, por un lado,
una higiene excesiva minimiza la eficiencia del programa y, por otro, que en situaciones
problemáticas se llega a descuidar la higiene considerablemente. Suficiente
instrumental, convenientemente higienizado, organizado, y empaquetado por bloques
evitará sorpresas desagradables y fracasos innecesarios.
Se puede dividir el proceso en un área limpia y otra sucia, o en sector blanco y sector
negro; la parte sucia engloba todo el manejo de animales, la colección de embriones y
su transferencia, mientras que todas las operaciones que con los embriones en el
laboratorio se realizan en la parte limpia; por lo tanto todo el material del sector sucio se
debe limpiar someramente tras su uso y mantener siempre separado del sector limpio
hasta la finalización del proceso.
Después lo más sencillo es que las sondas de lavado y artículos de plástico se esterilicen
con gases (óxido de etileno) tras su lavado y luego pasan a una secadora con corriente
de aire a 50-60ºC, o bien, simplemente dejarlos a temperatura ambiente. Los artículos
de metal y de vidrio tras su lavado se pasan al esterilizador por 1 h a 150-200ºC.
Todo este proceso de higiene, se puede mejorar con la administración de silicona en las
superficies de lavado, la silicona hace un efecto hidrófobo y evita la fijación de
partículas a la superficie del material, el material de vidrio se rocía con una emulsión de
silicona al 0,5-1% y luego se calienta, para lo cual se limpian los instrumentos de
140
cristal, se aclaran con agua destilada, se sumergen en la emulsión de silicona, y tras
escurrirlas se calientan durante dos horas en el esterilizador a 206ºC, también son
suficientes tratamientos de 15 a 20 minutos a 300ºC ó 10 minutos a 330ºC.
Animales cuyo estado general se encuentran afectados de alguna manera por ejemplo:
caquexia, diarrea, cojeras y aquellos que tras de un puerperio problemático, presentan
un estado ginecológico anormal: retraso de la involución uterina, endometritis, vaginitis,
ninfomanía, distrofia ovárica, urovagina, prolapso uterino y/0 vaginal, mastitis; no
sirven como donantes y se deben rechazar.
Calificando como muy buenas receptoras a aquéllas que presentan estro patente y más o
menos simultáneo al de la donadora, sin anormalidades ni patologías ginecológicas y
con un buen cuerpo lúteo el día de la transferencia y una consistencia uterina
correspondiente al día del diestro en que se encuentra.
141
Las receptoras calificadas como buenas, presentan las características antes citadas pero
en un intervalo menor de valores y que se apartan algo del óptimo.
Para seleccionar las vacas receptoras, se utilizan sus registros, así como; la inspección
visual y el examen ginecológico, que ayudan en la selección.
Las vacas post parto son incorporadas a programas de superovulación después de haber
finalizado su puerperio y reiniciado la actividad ovárica.
SUPEROVULACIÓN
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Dos días después de la aplicación de PMSG, se administra el doble de la dosis normal
de PGF2 alfa para contrarrestar la propiedad luteotrópica de la PMSG y producir
luteólisis completa.
Dos días después del tratamiento con PGF2α, la donadora muestra signos de celo y se le
deberá administrar una dosis dividida de Gn-RH, en un intervalo de 1 y ½ h, entre cada
aplicación. Esto producirá un pico mayor de LH que una dosis simple y asegurará una
superovulación completa. En vaca el número de ovocitos que se logra es 9 – 11.
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INSEMINACION ARTIFICIAL DE LAS HEMBRAS DONANTES
Método Quirúrgico:
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Métodos No Quirúrgicos:
Estos métodos son más deseables, debido a que conllevan menos riesgo para la vida y la
salud de la donadora. Todos los procedimientos quirúrgicos, invariablemente, causan la
formación de adherencias.
Para el lavado se utiliza una solución salina PBS (phosphate buffered saline) y BSA
fr.V (powdered) w/ Antibiotic/Antimicotic, se deposita por gravedad unos 100 a 150 ml
de esta solución salina en el cuerno uterino utilizando una sonda extra que consta de un
adaptador para el catéter de lavado y una bifurcación en dos circuitos, de entrada y
salida que desembocan en un dispositivo en “Y”.
Es poco probable que quede algún embrión en el útero pero para mayor seguridad se
aplica algún análogo sintético de la PGF2α, pudiendo ser el Cloprostenol (Estrumate®,
3 ml IM) a cada vaca donadora para provocar lisis de los cuerpos lúteos que se formaron
como resultado de la superovulación, y disminuir los altos niveles de progesterona,
luego se muestran en estro y de esta manera se evitará que queden preñadas.
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Fig.86. Colección de embriones con sonda Foley, método transcervical.
Mientras que para la colección de los embriones en ovejas, cabras y cerdas se recurre al
método de Laparoscopia. El laparoscopio se introduce a través de una herida en la piel,
al observarse el útero se introduce un Catéter de Foley de dos vías a través de otra
herida y se guía hacia uno de los cuernos uterinos antes de inflar el globo; a
continuación se introduce un catéter intravenoso en la luz uterina, cerca de la unión
uterotubárica. Se inyectan aproximadamente 40 a 50 ml de medio de lavado por el
catéter intravenoso y el lavado se realiza mediante el Catéter del Foley.
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Además, en el ganado bovino, sólo los embriones excelentes y buenos se consideran
“transferibles”, no se utilizan los embriones con anormalidades morfológicas como:
blastómeros de tamaño no uniforme, detritos celulares en la mórula, colapso del
blastocisto degenerado dentro de una zona pelúcida alargada, desintegración de la figura
mitótica, blastómeros espumosos mal diferenciados, fragmentación del material
citoplásmico y nuclear, forma anormal de la mórula o blastocisto.
Fig.87. Embriones de bovinos en diferentes etapas (izquierda), Embriones colectados de 7 días de edad
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Fig.88. Embriones de bovino transferibles (izquierda) y degenerados, no trasferibles (derecha).
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congelaran los embriones de “Clase1” y “clase 2” siguiendo rigurosamente los pasos
que el manual de la congeladora utilizada recomienda, por ejemplo la “Freeze -
control” , se empieza a enfriar esta congeladora con nitrógeno líquido, llenándola hasta
en nivel indicado y lentamente empieza a descender la temperatura del dispositivo
interno hasta -6ºC en 15 minutos, temperatura a la que son sometidas las pajuelas con el
embrión en un medio de congelación por un espacio de 5 minutos, luego manualmente
se realiza la siembra del hielo o cristalización (seeding) con una pinza enfriada
directamente en el nitrógeno líquido y presionando muy suavemente con esta pinza en
el centro de la pajuela se homogeniza la distribución del hielo dentro de la misma, a esta
temperatura la pajuela permanece por 10 minutos, continua el descenso de temperatura
más lentamente a razón de 0.5ºC por minuto hasta alcanzar -32ºC, momento en el que se
introducen las pajuelas directamente en el nitrógeno líquido a -196ºC por un tiempo de
2 horas, finalmente se pasan con rapidez las pajuelas congeladas a un tanque criogénico
para ser almacenadas y conservadas hasta su utilización.
Desde la colección de los embriones hasta su congelación nunca debe prolongarse mas
allá de las cuatro horas para evitar perjudicar la vida de los embriones y disminuir el
éxito en la transferencia.
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Tabla17. Protocolo de sincronización de la vaca donante y sus receptoras
DONADORA RECEPTORAS
NOTA: La aplicación de FSH se puede realizar a las 6:00am y 6:00pm y la PF2alfa a las 12:00 del día
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procedimiento. La dosis del anestésico local se ajusta para garantizar que el animal
permanezca de pie durante la transferencia.
Material Biológico:
Constituido por las vacas donadoras y receptoras seleccionadas en los establos, así
como por el semen congelado de toros de buena calidad genética y por los embriones
colectados in situ.
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Hormonas Sintéticas: Se pueden utilizar las siguientes:
a.- Suspensiones intrauterinas de amplio espectro por ejemplo Metricure®, contiene 500
mg de Cefapirina, Pencivet® LPU, contiene bencilpenicilina procaínica,
bencilpenicilina benzatínica, sulfato de dihidroestreptomicina piroxican.
b.- Para uso de anestesia local se puede utilizar Lidocaina® al 2%.
Medios:
Existen en el mercado numerosos medios utilizados en esta biotecnología reproductiva,
la utilización de ellos dependerá de su calidad, disponibilidad, así como, del precio en el
mercado, así se tienen: Medio de conservación, medio de congelación, medio de
descongelación, medio de mantenimiento y de transferencia.
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Fig.90. Medio PBS, de mantenimiento y congelación.
BIBLIOGRAFIA
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Nacional de Tecnología Agropecuaria, EEA Balcarce, Argentina. Vol. 06,
Nº 07, p. 08 14.
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Bovinos de raza Holstein. Rev. Mundial de Zootecnia. P 13 18.
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