Influencia de parámetros microbiológicos

causada por un canal de vertimiento de aguas

residuales domiciliarias en el río shullcas distrito

Huancayo

INTEGRANTES:
Integrantes ESPINOZACENTENO,Juanaluz
ROSALESVASQUEZ,Ellison

Aldair
TORRESCORILLOCLLA,Jean

Pierre
QUISPELUJÁN,JoséLuis
INTRODUCCION
Actualmente hay un gran interés por la comprensión de la ecología microbiana, principalmente en los ríos
donde la actividad microbiana es muy activa, aun más cuando existen distintas fuentes de vertimiento de
aguas residuales, pues estos son los que aumenta mayormente las colonias, por esta razón nos ha llamado la
atención mucho el estudio de la población microbiana en el río Shullcas, ver que tipo de colonias se forman y
qué características presentan. Con el fin de ver qué impacto genera la presencia de estos seres en el río.
Por ello, en la presente investigación nos hemos planteado determinar qué tipos de colonias microbiológicas
están presentes en el río Shullcas y en cuál de los puntos elegidos están más presentes, mediante la
obtención de muestras del río y aplicando el método de cultivo en el laboratorio, también observando si los
medios de cultivo cultivados en el laboratorio germinan, esto con la evaluación después de 24 horas de
haberlos cultivado, por otro lado, también fue necesario observar la características morfológicas que se
formaron en los cultivos de laboratorio y utilizar el método de las tinciones de microorganismos obtenidas
de la muestra del laboratorio y luego observarlos en el microscopio, para así identificar las características
microbiológicas de cada colonia, teniendo así un mejor resultado del estudio y lograr el objetivo principal
que nos hemos planteado. Asimismo, a través de ello se nos hizo factible poder determinar, si son cocos,
bacilos, estreptococos, entre otros, como así también si son gram negativas o gram positivas. A
continuación se detallaran todos los aspectos que se tomó en cuenta para la presente investigación.[1]
" PLANTEAMIENTO
DEL
"
ESTUDIO

 Planteamiento del

problema
PROBLEMA GENERAL

¿ Que tipo de colonias microbiológicas están

presentes en el rio shullcas y en cuál de los puntos
elegidos están más presentes?

PROBLEMAS ESPECIFICOS

¿Cómo aplicamos el método de cultivo de las

muestras del rio shullcas en el laboratorio?

¿Cómo determinar si los medios de cultivo cultivados

en el laboratorio germinaron ?
¿Qué características morfológicas se formaron en los

cultivos del laboratorio?

¿Cómo aplicamos el método de tinciones de los

microorganismos en las muestras de laboratorio y con

qué herramienta las observamos detalladamente?

objetivos

OBJETIVO GENERAL OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Determinar que tipos de colonias

Obtener las muestras del río shullcas y aplicar el método de

microbiológicas están presentes en el

cultivo en el laboratorio
Observar si los medios de cultivo cultivados en el

rio shullcas y en cual de los puntos

laboratorio germinaron.
elegidos están presentes en mayor

Observar la características morfológicas que se formaron

cantidad
en los cultivos de laboratorio
Utilizar el método de las tinciones de microorganismos

obtenidas de la muestra del laboratorio y luego observar

en el microscopio [2]
 JUSTIFICACIÓN

SOCIAL AMBIENTAL
Esta investigación servirá como un antecedente del
La presente investigación ayudará a obtener datos a
desarrollo microbiano que presenta el río Shullcas en los
escala laboratorio con respecto al desarrollo microbiano
puntos elegidos para otras futuras investigaciones,
en los cultivos con agar EMB Levine y MacConkey
asimismo también representa una investigación para
mediante el estriado simple y de diseminación, para así
la evaluación de qué tan influyente es el desarrollo
ver que tipos de colonias se forman en cada cultivo, y que
microbiano en el río mencionado, viendo si las colonias
punto de muestreo muestra mayor desarrollo de colonias
presentes representan un riesgo o no en la fuente
bacterianas, para luego analizar la influencia que tienen
hídrica. [3] el desarrollo microbiano en el río Shullcas. [3]

METODOLÓGIA TEÓRICA
Se utilizó las técnicas aprendidas en la toma de
Se podrá evidenciar los conocimientos

muestras según los monitoreos de aguas superficiales y

estudiados en microbiología ambiental

también las técnicas en el laboratorio de microbiología

ambiental [3]
 IMPORTANCIA
La importancia de la investigación recae en obtener datos del
desarrollo microbiano en los cultivos con las muestras tomadas de
los 4 puntos en el río Shullcas,ya que actualmente presenta olores
fuertes, principalmente en el punto 2 donde se encuentra el
desfogue de un desagüe ,por lo cual con la evaluación del desarrollo
de colonias podremos ver porque se producen estos olores según la
cantidad de colonias bacterianas que se desarrollan en los cultivo y
las características que muestran.[4]
 Limitaciones de la

investigación

Fue el escaso tiempo

El uso de los

Diseño dentro de los

Creación microscopios también

fue de manera muy

laboratorios.
rápida con pocos

minutos.
LIMITACIÓN
LIMITACIÓN

GEOGRÁFICA DE ESTUDIO
Para la toma de muestras, se determinó
La presente investigación se realizará a

tomar solo 4 puntos principales que nos

escala laboratorio en la Universidad

permitan ver y comparar el desarrollo

Continental, en cultivos elaborados en

microbiano que presenta cada una de

placas Petri usando para ello el agar EMB

ellas, ya que el recorrido del río es muy

Levine y MacConkey,y los materiales

amplio y para desarrollar un análisis

brindados por los encargados de laboratorio,

más centrado y específico se tomó como

ya que al ser un estudio académico, el apoyo

referencia los puntos que son aguas

para el estudio y análisis del desarrollo

arriba, otra aguas abajo del efluente, en el

desemboque del efluente(desagüe) y en la

microbiano será brindado por la

interseccion del río y el efluente , con el fin

universidad. [5]
de realizar un estudio detallado.[5]
HIPÓTESIS
HIPÓTESIS GENERAL HIPÓTESIS ESPECÍFICAS

Se obtendrán satisfactoriamente las

A. Hipótesis alterna: Se determinará muestras del río Shullcas y se aplicará

de manera efectiva los tipos de adecuadamente el método de cultivo en el

colonias microbiológicas que están laboratorio.

presentes en el río Shullcas y en cuál
Se logrará observar detenidamente si los

de los puntos elegidos están más

presentes. medios de cultivo cultivados en el laboratorio

llegaron a germinar.
B. Hipótesis nula: No se determinará Se obtendrán las características morfológicas

de manera efectiva los tipos de que se formaron en los cultivos de laboratorio.

colonias microbiológicas que están Se llegará a utilizar el método de las tinciones

presentes en el río Shullcas y en cuál

de microorganismos que serán obtenidas de la

de los puntos elegidos están más

muestra del laboratorio y luego se podrá

presentes.[6]
observar a más detalle en el microscopio.[6]
" Marco Teórico

"
Bases teoricas

Microorganismos Gram positivos Gram negativos

Los microorganismos se clasifican en

Los cocos son microorganismos
Las bacterias Gram negativas tienen

unicelulares, caracterizados por presentar

forma esférica, también de

hongos, bacterias, algas y protozoos, se

una forma esférica, en la que algunas de sus

espiral(espiroquetas).
caracterizan por su pequeño tamaño.
especies se agrupan en diferentes patrones
Aguas residuales
Son aguas con impurezas procedentes de diversos vertidos, principalmente domésticos e industriales. Estas aguas pueden

contener elementos contaminantes provenientes de los desechos urbanos e industriales. Este resulta un potencial

contaminante ambiental, si no se efectúa el tratamiento respectivo.

Fuente : Propia Muestra de

Fuente : Fuente :
agua. Rio Shullcas(Luz

Adaptado de E.2022) 1:07 pm Adaptado de

iStock. 2019. iStock. 2020.
 Antecedentes de la

investigación

Medios de cultivo Los microorganismos que se investigan necesitan sustancias

nutritivas sólidas o líquidas, para que estas bacterias crezcan se

requiere un ambiente con condiciones

Para la morfología de bacterias su análisis es por cada

Morfología colonia que se reconoce por sus aspectos físicos y se

clasifican en un cuadro teniendo en cuenta forma, borde,

elevación, textura, color y medición.

Todas las bacterias vivas son incoloras así que no ayudan

Tinciones en su observación microscópica

5
 MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se multiplican los microorganismos en el

laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas, con el fin de identificarlas y realizar estudios

complementarios

ORIGEN Consistencia

Medios sintéticos: Estos medios están compuestos

por químicos conocidos, además se utilizan para Líquidos:

realizar estudios metabólicos como el agar blando,

caldo nutritivo, etc. Sólidos: Semisólidos:
Medios naturales: Estos son preparados con
sustancias naturales animales o vegetales, como el
suero, leche, papa, etc.
Composición y utilización

Medios simples: Medios enriquecidos: Medios selectivos:

Son medios simples a los que se añadieron
Se obtienen añadiendo al agar nutritivo,

Cuentan con los requisitos nutricionales,

sustancias como sangre, suero, entre otros,

compuestos químicos nocivos para algunas

en efecto, permiten el desarrollo

para permitir factores de crecimiento o

bacterias cuyo crecimiento no es de interés y

bacteriano.
sustancias que neutralizan agentes
también mediante alteraciones de condiciones

inhibidores del crecimiento en bacterias físicas.

Medios diferenciales:
En este caso se le adicionan sustancias, para que sólo
Medios de enriquecimiento:
crezcan ciertas bacterias y al actuar sobre alguna de las

Son medios líquidos que favorecen o

sustancias adicionadas, permiten observar

permiten la multiplicación de las bacterias

macroscópicamente ciertas propiedades de crecimiento

cuando la muestra obtenida es muy pobre.

que ayudan a diferenciar sus colonias de otras especies

diferentes
ESTRIADOS

Estriado básico o
Estriado para aislar: Estriado por
simple: agotamiento:
Para realizar este estriado Para aplicar este estriado

solo se inocula una vez en

Para esto se divide la parte
se levanta la tapa de la inferior de la caja Petri en
placa Petri que se va a una sección de la placa

Petri y a continuación se cuatro partes iguales con

sembrar en un ángulo de un marcador. Se estría el
45°, luego se procede a disminuye la colonia

arrastrando
primer cuadrante con el
colocar el asa en la parte procedimiento básico de S.
de atrás de la caja, hasta microorganismos de la

sección inicial de dos a tres

Se trabaja en el sentido de
tocar con el asa el medio y las agujas del reloj,
pasarlo a través de la secciones adicionales,

reduciendo eficientemente
estriando por agotamito,
superficie de la placa con esterilizando el asa antes
un movimiento en forma de la población de

microorganismos. de seguir a otro.

S desde atrás hacia
adelante.
" METODOLOGIA "
Puntos de monitoreo

Imagen: Puntos de monitoreo según el protocolo de aguas residuales domiciliarias. Elaboración propia.
 Materiales Equipos
Laminas porta objetos Microscopio
Laminas cubre objetos Estufa electrica
Papel lente Balanza
Pinzas
Lupa
Asas Digralsky
Asas bacteriologicas
Probeta
Vaso de precipitados
Matraz erlenmeyer
Varilla de vidrio Imagen : Microscopio. Extraido de: IntekGroup
por Agudelo Gabriela, 2021.
Mechero de bunsen
 Reactivos Implementos

Cristal violeta
mascarilla
Lugol guantes
Safranina
Alcohol acetona
Solución salina Botas Guardapolvo
Aceite de inmersión
Agua destilada
Agar Mcconkey (11.31g) lentes de seguridad cooler
Agar EMB Levine (7.5g)

cofia
 Métodos
En base a la normativa del ANA y el Ministerio de Vivienda Construcción y Saneamiento

1. Tener los equipos y materiales para llevarlos al punto de monitoreo.

2. Contar con los EPPS al momento de la toma de muestra.
3. Rotular los frascos.

Imagen : Rotulo para las muestras. Adaptado de:

Parámetros del agua por Corlap
Imagen : Rotulado de las muestras. Elaboración propia.
 Métodos
4. Considerar que los frascos deben ser estériles.
5. Acercarse al punto de muestreo y realizar la toma de la muestra según el
protocolo de monitoreo de aguas residuales domiciliarias.

Imagen: Toma de muestra 1. Elaboración propia.

6. Finalmente, se almacena las muestras en un cooler y son trasladas al laboratorio para

el proceso de cultivo.
Preparación de los medios de cultivo
Preparación de los medios de cultivo y esterilización de materiales:

Imagen: Esterilización de materiales. Elaboración propia.

Preparación de los medios de cultivo
Preparación de los medios de cultivo y esterilización de materiales:

Imágenes : Pesaje del agar MacConkey y EMB

Imagen: Vaso de precipitado hirviendo. Levine. Elaboración propia.- Imágen : Agar MacConckey y EMB Levine
Elaboración propia. preparados. Elaboración propia.-
 Cultivo de Microorganismos

Se usó las técnicas de estriado simple, por agotamiento y por

extensión obteniendo dos cultivos (Uno de agar MacConkey y otro de
Agar EMB Levine) para cada PM.

A TENER EN CUENTA:
1. Las muestras deben ser conservadas de manera adecuada y con limpieza.
2. Se debe esterilizar la asa bacteriologica al rojo vivo antes de sumergir en
la muestra, la asa debe enfriarse antes de introducir de lo contrario se
eliminara a los microorganismos de la muestra.
Imagen : Proceso de cultivo de
microorganismos. Elaboración Propia
Cultivo de Microorganismos

MUESTRA 1: Estriado Simple

Imagen: M1- Cultivo de microorganismos - 24h.

Elaboración Propia
Cultivo de Microorganismos

MUESTRA 2: Estriado por extensión

Imagen: M2- Cultivo de microorganismos - 24h.

Elaboración Propia
 Cultivo de Microorganismos

MUESTRA 3: Estriado simple

Imagen: M3- Cultivo de microorganismos - 24h.

Elaboración Propia
Cultivo de Microorganismos

MUESTRA 4: Estriado por agotamiento

Imagen: M4- Cultivo de microorganismos - 24h.

Elaboración Propia
MORFOLOGIA

Para el estudio morfológico tenemos que determinar los siguientes aspectos :

Forma Elevación
MORFOLOGIA

Margen Superficie

Lisa
Brillante
Rugosa
Seca

Tinción de microorganismos

La técnica de la tinción de Gram nos

permite distinguir los
microorganismos en Gram(+) y
Gram (-) la cual es de gran
importancia taxonómica. La
diferencia en su comportamiento
cuando se les realiza las
tinturaciones se debe a su
estructura de la pared celular
bacteriana.
Tinciones de microorganismos
Paso 01: Se calienta el asa bacteriológica
hasta el rojo vivo.

Paso 02: Colocar una gota de solución salina

en el portaobjetos y con la mano izquierda tomar la
placa petri, retirar la tapa con el dedo meñique.

Paso 03: Flamee la placa petri y

retire una cantidad mínima del cultivo.

Paso 04: Seque por calentamiento suave ,

sosteniendo la lámina portaobjetos a unos
10-15 cm del mechero.

Paso 05: Cubrir con Cristal violeta

durante 60 segundos.

Paso 06: Lavar suavemente con

agua destilada para eliminar el exceso.
Tinciones de microorganismos

Paso 07: Agregar Lugol por 60

segundos

Paso 8: Lavar con agua destilada el

exceso de lugol.

Paso 9: Añadir unas gotas de

alcohol-acetona por 30 segundos.

Paso 10: Lavar enseguida con agua

destilada

Paso 11: Cubrir la preparación con

safranina durante 60 segundos

Paso 12: finalmente lavar y secar con

ayuda del papel toalla.

Paso 13: Observamos en el microscopio inicialmente con el

objetivo 4x y seguidamente con cada uno de los lentes
hasta llegar al 100x en el que se usara el aceite de
inmersión.
" RESULTADOS "
Morfología de los microorganismos

Muestra 1: Levine
Muestra 1 : Agar Mac Conkey
Muestra 2 : Levine
Muestra 2: Agar Mac Conkey
Muestra 3 : Levine
Muestra 3: Agar Mac Conkey
Muestra 4 : LEVINE
Muestra 4: Agar Mac Conkey
 RESULTADOS OBTENIDOS POR CADA PUNTO
PUNTO 1 : Podemos apreciar los bacilos gram + y algunos cocos gran
positivos

FUENTE: PROPIA Mac Conkey. Muestra de agua. Rio Shullcas(Luz E.2022) 4:34 pm
 PUNTO 2 : En la primera imagen se ve claramente bacilos Gram positivos

y en la última cocos Gram (+)

Levine. Muestra de agua. Rio Shullcas(Luz E.2022) 4:48 pm

 PUNTO 3 : En esta imagen se observa coco gram (+)

Mac Conkey. Muestra de agua. Rio Shullcas(Luz E.2022) 5:02 pm

PUNTO 4 : En la imagen observamos cocos gram (+)

Levine. Muestra de agua. Rio Shullcas(Luz E.2022) 5:10 pm

" DISCUSIONES "
 Discusiones de resultados

La morfología es el estudio según algún rasgo parecido entre algunos seres

vivos como es forma, estructura y son clasificados. Las bacterias son
microorganismo que se observan con el microscopio que se reproducen por
medio de fisión binaria, tienen en particular tres formas: esféricas o cocos, las
alargadas o bacilos y las bacterias curvadas o espirilos, también presentan
variaciones morfológicas como por ejemplo tienen forma de estrella, las
planas y rectangulares, las alargadas en forma de pera y por último aquellas
que forman pedúnculos no celulares

Según Vargas las bacterias que son procariotas que se encuentran en los
dominios Bacteria y Archaea duplican el ADN en un mismo tiempo. Presentan
estructuras como las eucariotas por ejemplo la membrana celular que
envuelve la célula y separa contenido, también los ribosomas que contiene
síntesis de proteínas.
" CONCLUSIONES "
 Conclusiones

La siembra del medio de cultivo se realizó con el procedimiento adecuado además aprendimos que, si
das los cálculos exactos de los componentes para los medios de cultivos, estos serán exitosos para
su supervivencia utilizando diversas técnicas nos ayudarán a identificar todas sus
características morfológicas.
Para la identificación de la morfología microbiana se estudió tipos de formas, elevación, orilla,
superficie, textura y color. Primero ubicamos las colonias que había en cada placa Petri para
seguidamente rellenar en un cuadrito y nos resultó de mucha ayuda para el aprendizaje.
La observación de las bacterias en el microscopio es importante ya que después de realizar la
tinción de Gram con el procedimiento adecuado se observó increíbles bacterias, también reconocimos
correctamente si es Gram positiva o Gram negativa.
El grupo en general aprendió a utilizar la información brindada por la Ingeniera para luego dar
una explicación corta en clase y nosotros seguir con nuestra siembra que resultó buena porque
utilizamos todos los materiales y cantidades correctas.
Para la morfología de un género bacteriano aprendimos que puede incluir varias especies. Si la
especie no se identifica se escribe el género seguido de sp.
En la observación de microscopio se aprendió a identificar que Gram positivo es de color violeta
casi acercándose a azulino y en Gram negativo tiene un tono rosa o roja. También que presentan
tres formas: esféricas o cocos, las alargadas o bacilos y las bacterias curvadas o espirilos
" "
RECOMENDACIONES
Se determinó qué tipos de colonias microbiológicas que
están presentes en el río Shullcas y en cuál de los puntos
elegidos el punto 03 es en el que se evidenció mayor
microorganismos.
Se obtuvieron las muestras del río Shullcas y se aplicó el
método de cultivo en el laboratorio.

Se observó los medios de cultivo cultivados en el

laboratorio que germinaron en mayor cantidad los bacilos
gram positivos.

Se observó las características morfológicas que se

formaron en los cultivos de laboratorio.

Se utilizó el método de las tinciones de microorganismos

obtenido de la muestra del laboratorio y se observó en el
microscopio bacilos Gram positivos, cocos Gram positivos
y estreptococos Gram negativos.
REFERENCIAS
1. COBO, Carlos. 2017. Evaluación de medios de cultivo líquidos para la multiplicación de la bacteria
Bacillus subtilis. Quito : USFQ, 2017. 9781236753303.
2.Cocos Gram Positivos. QUISPE, Grabiela y HILARI, Limberd. 2014. La paz : Revista de Actualización Clínica
Investiga, 2014, Vol. 49. 2304-3768.
3. Evolución de la resistencia antimicrobiana de bacilos Gram negativos en unidades de cuidados intensivos
en Colombia. GÓMEZ, Cristhian. 2014. Bogotá : Biomédica, 2014,Vol. 34. 0120-4157.
4. Vargas-Flores, T. Vargas, A. (2014). Morfología bacteriana. Revista de Actualización Clínica, 49(2),
2594-2598.
5. Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. LÓPEZ, Luis, y otros.2014. 1, Ciudad de México:
Investigación en Discapacidad, 2014, Vol. 3.
6. Morfología bacteriana. VARGAS, Tatiana y VARGAS, Alvin. 2014. 49, La Paz: Revista de Actualización
Clínica, 2014, Vol. II. 2594-2598.
7. OPTIMIZACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS PARA MICROORGANISMOUNA VALIOSA ESTRATEGIA PARA LA PRODUCCIÓN DE
BIOPREPARADOS DE INTERÉS AGRÍCOLA. GÓMEZ, Gretel y BATISTA, C. 2006. 3, La Habana: Instituto Nacional de
Ciencias Agrícolas, 2006, Vol. 27. 0258-5936.
8. SILVIA, Díaz Sandoval. 2006.AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LABORATORIO DE TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. [En
línea] 2006. [Citado el: 10 de mayo de 2022.]
https://d1wqtxts1xzle7.cloudfront.net/39703215/Aislamiento_de_Microorganismos