LABORATORIO DE QUÍMICA BIOLÓGICA

UNIDAD 3. Operaciones Básicas en el Laboratorio de

Química Biológica
•3. Selección y preparación de muestras
•3.1 Muestreo
•3.2 Pesado de la muestra
•3.3 Disolución de la muestra
•3.4 Precipitación
•3.5 Métodos de separación

•
 Muestreo

El muestreo es el proceso mediante el que se reduce el tamaño

de una población muestral a una cantidad de material
homogéneo que se pueda manipular de forma adecuada en el
laboratorio y cuya composición es representativa de la
población
• El muestreo es por lo tanto una herramienta de la investigación
científica, cuya función básica es determinar que parte de una
población debe examinarse, con la finalidad de hacer
inferencias sobre dicha población

Una muestra es el material del que se toman porciones para la

preparación de un sistema. Es la cantidad de sustancia
sometida a diversos análisis, con el propósito de encontrar su
identidad, su pureza, por métodos cualitativosy/ocuantitativo
 Los errores más comunes que se pueden
cometer son
• 1.- Hacer conclusiones muy generales a partir de la observación
de sólo una parte de la Población, se denomina error de
muestreo.
• 2.- Hacer conclusiones hacia una Población mucho más
grandes de la que originalmente se tomo la muestra. Error de
Inferencia.
• En la estadística se usa la palabra población para referirse no
sólo a personas si no a todos los elementos que han sido
escogidos para su estudio y el término muestra se usa para
describir una porción escogida de la población.
Diseño del plan de muestreo

Identifique la población

Tome la muestra bruta

Reduzca la muestra bruta a

una muestra de laboratorio
 Plan de muestreo
DONDE HACER EL
MUESTREO?
QUE TIPO DE MUESTRA
DEBEMOS TOMAR?
CUANTAS MUESTRAS HAY
QUE OBTENER?
CUANTAS MUESTRAS
ANALIZAR?
Modificar el protocolo de
muestreo conlleva a cometer
errores graves
 Muestreo preliminar
Esta condicionado por los conocimientos teóricos o
empíricos precedentes
Submuestra para:
Transporte y conservación
Pretratamiento a la muestra
Preparación y análisis
 Pasos para realizar un muestreo
1. Objetivo general de estudio
2. Definir la población objetivo
3. Seleccionar un procedimiento
4. Definir el tamaño de la muestra
5. Seleccionar las unidades muestrales
Obtención de resultados
Características de la Muestra

Una muestra adecuada debe ser representativa del material a

analizar.
Además la muestra a analizar debe ser homogénea, lo que
significa que debe ser igual en todas sus partes.

En la medida que esto se logra el error de muestreo se reduce.

Muchas veces el muestreo es el factor limitante en la precisión y

en la exactitud de los resultados obtenidos.
TIPOS DE MUESTREO
• En general pueden dividirse en dos grandes grupos: métodos
de muestreo probabilísticos y métodos de muestreo no
probabilísticos
PROBABILISTICO
• Los métodos de muestreo probabilísticos son aquellos que se basan
en el principio de equiprobabilidad. Es decir, aquellos en los que
todos los individuos tienen la misma probabilidad de ser elegidos
para formar parte de una muestra y, consiguientemente, todas las
posibles muestras de tamaño n tienen la misma probabilidad de ser
seleccionadas.
• Sólo estos métodos de muestreo probabilísticos nos aseguran la
representatividad de la muestra extraída y son, por tanto, los más
recomendables. Dentro de los métodos de muestreo probabilísticos
encontramos los siguientes tipos:
Muestreo aleatorio simple:
• El procedimiento empleado es el siguiente: 1) se asigna un número a
cada individuo de la población y 2) a través de algún medio mecánico
(bolas dentro de una bolsa, tablas de números aleatorios, números
aleatorios generados con una calculadora u ordenador, etc.) se
eligen tantos sujetos como sea necesario para completar el tamaño
de muestra requerido.
• Este procedimiento, atractivo por su simpleza, tiene poca o nula
utilidad práctica cuando la población que estamos manejando es muy
grande
Muestreo aleatorio estratificado
• Consiste en considerar categorías típicas diferentes entre sí
(estratos) que poseen gran homogeneidad respecto a alguna
característica (se puede estratificar, por ejemplo, según la profesión,
el municipio de residencia, el sexo, el estado civil, etc.). Así se
asegura que todos los estratos de interés estarán representados
adecuadamente en la muestra. Cada estrato funciona
independientemente, pudiendo aplicarse dentro de ellos el muestreo
aleatorio simple o el estratificado para elegir los elementos concretos
que formarán parte de la muestra.
Muestreo aleatorio por conglomerados
• En el muestreo por conglomerados la unidad muestral es un
grupo de elementos de la población que forman una unidad, a la
que llamamos conglomerado. Las unidades hospitalarias,
• los departamentos universitarios, una caja de determinado
producto, etc.
No probabilísticos , por
conveniencia
No probabilísticos , por conveniencia
• En ocasiones, el muestreo probabilístico resulta costoso y se
acude a métodos no probabilísticos, aunque no sirven para
realizar generalizaciones (estimaciones inferenciales sobre la
población), pues no se tiene certeza de que la muestra sea
representativa, ya que no todos los sujetos de la población
tienen la misma probabilidad de se elegidos. En general se
seleccionan a los sujetos siguiendo determinados criterios
procurando, que la muestra sea representativa.
• En algunas circunstancias los métodos estadísticos y
epidemiológicos permiten resolver los problemas de
representatividad aun en situaciones de muestreo no
probabilístico, por ejemplo los estudios de caso-control, donde
los casos no son seleccionados aleatoriamente de la población.
• No debemos ver el muestreo por conveniencia como un método
inútil. De hecho, es habitual su uso exitoso en muchos ámbitos.
Por ejemplo, los estudios clínicos con voluntarios. En dichos
estudios, se solicita a personas con ciertas características
físicas que acudan voluntariamente para formar parte de algún
tipo de investigación o incluso algún tratamiento. El
investigador clínico que usa esta técnica está considerando que
cualquier individuo que cumpla con una cierta características
(por ejemplo, ser diabético) va a ser representativo del universo.
O dicho de otra manera, el hecho de que un individuo vea o no
vea la solicitud de voluntarios, acceda o no a participar, sea de
una región o de otra, etc. no va a afectar a sus resultados en el
estudio.
• Intuitivo: Se selecciona por decisión personal la porción del material a
analizar, por ejemplo debido a un cambio textural o cromático de la
sustancia a analizar, o cuando se observa alguna alteración puntual en
un proceso productivo, etc.

• Dirigido: el problema analítico exige un tipo específico de

información, por ejemplo el análisis de trazas de metales en las
partículas en suspensión en agua natural.

• De protocolo: Cuando se debe seguir un procedimiento de muestreo

detallado en una norma, método estándar, publicación oficial, etc.
MUESTREO SEGÚN EL ESTADO FISICO
DE LA MUESTRA

Algunos ejemplos de toma de

muestra para análisis
medioambientales:
•A. Muestras Gaseosas:
Un muestreador de partículas en suspensión y gases inorgánicos en aire,
consta de un tubo que se conecta a una bomba de succión, por él pasa
un determinado volúmen de aire. Las partículas quedan retenidas en el
filtro de teflón. Los gases como el SO2 son retenidos por el lecho de
carbón impregnado de un reactivo que lo transforma y queda absorbido
en el soporte activo.
• Gases licuados en movimiento
• Gases procedentes de procesos Industriales
• Gases almacenados en tanques
• Gases en sistemas abiertos (atmosfericos)
•B.Muestras Líquidas:
Se utilizan módulos automáticos para tomar muestras de agua de lagos,
ríos o mares a diferentes profundidades y tiempos según el plan de
muestreo. Consta de una sonda de longitud variable por donde se aspira
la muestra, una bomba de succión, un distribuidor automático de las
muestras, un automuestreador de 20 a 100 contenedores y un
microprocesador de control del proceso.
 EVITAR
MUESTRAS
SUPERFICIALES O
MUY CERCANAS AL
FONDO ASI COMO
ESTANCAMIENTOS
•C. Muestras sólidas:
Por ejemplo en el estudio de la contaminación del suelo suele
utilizarse un muestreo superficial y a distintas profundidades, o
bien buscando una composición media de una zona entre la
superficie y una profundidad dada. Se utilizan generalmente
taladros de tornillos que se introducen verticalmente en el suelo
manual o mecánicamente. Después se retiran verticalmente y en
sus intersticios se encuentran las diferentes muestras del suelo
para analizar.
 BOLSAS DE RECOLECCION O
CONSERVACION DE LA MUESTRA
Pesado de la Muestra
En Química Analítica, medir la masa de una sustancia
representa un proceso muy importante y determinante para la
exactitud en los procesos analíticos o preparación y
normalización de soluciones. Según la precisión deseada y la
naturaleza química de las sustancias, elegimos el método y tipo
de balanza a utilizar.
Tarar
Es el peso del recipiente donde se pesa, ó el peso de la misma
muestra, que posteriormente se lleva a cero en una balanza.
¿Qué es lo que pesamos?
Masa: propiedad física intrínseca de
un cuerpo, que mide su inercia, es
decir, la resistencia del cuerpo a
cambiar su movimiento. La masa no
es lo mismo que el peso, que mide
la atracción que ejerce la Tierra
sobre una masa determinada. La
masa inercial y la masa
gravitacional son idénticas. El peso
varía según la posición de la masa
en relación con la Tierra, pero es
proporcional a la masa; dos masas
iguales situadas en el mismo punto
de un campo gravitatorio tienen el
mismo peso.
 Requisitos que debe cumplir una balanza:
• Debe ser exacta: En equilibrio (fiel en el centro de la escala),
el peso de un cuerpo colocado en un platillo debe ser igual al
del cuerpo colocado en el otro.
• Debe ser fiel: Colocando la misma cantidad varias veces
indica siempre el mismo resultado.
• Debe ser sensible: Es tanto mas sensible, cuanto menor es la
diferencia mínima de peso que puede apreciar. Se fabrican
con la mínima fricción de las partes móviles.
• Debe tener un periodo de oscilación corto, por lo que se
fabrican con brazos cortos y materiales ligeros. Las
automáticas y electrónicas suelen tener un sistema de
amortiguación para disminuir los tiempos de espera.
Además las balanzas deben cumplir también:

• La balanza debe estar bien nivelada, por lo que la burbuja de nivel se

vigilará para que esté ajustada.
• Deben estar en un lugar sólido, sin vibraciones (mesa de balanzas).
• Deben estar en un lugar apartado, protegidas de gases corrosivos,
humedad, etc. (en sala de balanzas con puerta cerrada).
• Deben protegerse de las altas temperaturas, sol y de la electrostática.
• Se deben mantener limpias
• No pesar objetos calientes (y a ser posible tampoco húmedos).
• Si poseen vitrina con puerta, esta debe estar cerrada (al efectuar la
medición final y cuando no se utilice).
• En las balanzas de dos platos que requieren utilizar caja de pesas,
estas deben cogerse con pinzas y nunca con los dedos.
 Métodos de Pesada

❖Directo: En este método se pesa el recipiente que se

utilizará para la muestra, se registra su peso,
posteriormente se pesa la muestra y se registra el peso
del recipiente con muestra.
❖Indirecto: En este método se pesa el recipiente con la
muestra, se saca esta y se vuelve a pesar el recipiente
con lo que pudiera quedar de la muestra, la diferencia
es el peso de la muestra sacada.
 Muestreo (almacenamiento de muestras)
REQUISITOS PARA UN CORRECTO ALMACENAMIENTO

❖ENVASE ADECUADO
❖ETIQUETADO CORRECTO
❖CONDICIONES ADECUADAS DE ALMACENAMIENTO
(TEMPERATURA, HUMEDAD, LUZ, )

La muestra puede estar sometida a los siguientes riesgos:

✔ DESHIDRATACION
✔ HIDRATACION
✔ OXIDACION
✔ EVAPORACION
✔ CONTAMINACION
Preparación de la muestra para la determinación
de analitos
Muestras sólidas (transformación en fase líquida)

Disolución por vía húmeda (disolución total)

Transformación de la muestra sólida en fase líquida
-Sin reacción química: disolución de numerosas sales y
compuestos inorgánicos en agua o disoluciones reguladoras.
-Con reacción química: la mayor parte de las sustancias necesitan
de una reacción química para su disolución.
Muestras líquidas (Eliminación de partículas en suspensión y
materia orgánica)
Centrifugación
La centrifugación es una técnica de separación de sólidos y líquidos y de
líquidos inmiscibles. Se consigue mediante el movimiento rotatorio de
las partículas impulsadas por una fuerza centrífuga.
Centrifugas