INFORME DE LABORATORIO

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS
II SEMESTRE
ASIMILACIÓN Y TRASFORMACIÓN DE NUTRIENTES

Autores:
Algarín Varela Yina Paola, Caballero Lopez Olga Sofia,
Llinas Marchena Mayerlis, Ruiz Alvear Yurainis Paola.

Docente:
Manuel Benjamín Angarita Vega

Facultad de Nutrición y Dietética

27/10/22
Tabla de contenido
1. Introducción
2. Objetivos
3. Marco teórico
4. Materiales y reactivos
5. Procedimiento
6. Resultados y Discusión
7. Conclusión
8. Preguntas del informe
9. Bibliografía
Determinacion de Proteinas Totales por Espectrofotometria
Determinacion de Albuminas y Globulinas
 INTRODUCCIÓN

Las proteínas son una clase importante de moléculas que se encuentran en todas
las células vivas. Una proteína se compone de una o más cadenas largas de
aminoácidos, cuya secuencia corresponde a la secuencia de ADN del gen que la
codifica.
De entre todas las biomoléculas, las proteínas desempeñan un papel fundamental
en el organismo. Son esenciales para el crecimiento, gracias a su contenido de
nitrógeno, que no está presente en otras moléculas como grasas o hidratos de
carbono. También lo son para las síntesis y mantenimiento de diversos tejidos o
componentes del cuerpo, como los jugos gástricos, la hemoglobina, las vitaminas,
las hormonas y las enzimas (estas últimas actúan como catalizadores biológicos
haciendo que aumente la velocidad a la que se producen las reacciones químicas
del metabolismo). Asimismo, ayudan a transportar determinados gases a través de
la sangre, como el oxígeno y el dióxido de carbono, y funcionan a modo de
amortiguadores para mantener el equilibrio ácido-base y la presión oncótica del
plasma.
Otras funciones más específicas son, por ejemplo, las de los anticuerpos, un tipo
de proteínas que actúan como defensa natural frente a posibles infecciones o
agentes externos; el colágeno, cuya función de resistencia lo hace imprescindible
en los tejidos de sostén o la miosina y la actina, dos proteínas musculares que
hacen posible el movimiento, entre muchas otras.
Las proteínas desde el punto de vista químico son ácidos orgánicos (RCOOH),
portadores de un grupo amino (-NH2) y una radical variable R. Según la
naturaleza del grupo R , los aminoácidos pueden ser clasificados en cuatro
grandes grupos: apolares, polares sin carga, aniónicos y catiónicos. En el presente
informe se abarcarán diferentes métodos para determinar la presencia de
proteínas en distintas soluciones.
Objetivos
 Identificar proteínas por medio de reactivos especifico, por coloración o por
desnaturalización.
 Describir las generalidades de las pruebas de identificación de aminoácidos
y proteínas.

Marco Teórico
Las proteínas son biopolímeros, están formadas por gran número de unidades
estructurales simples repetitivas (monómeros). Debido a su gran tamaño, cuando
estas moléculas se dispersan en un disolvente adecuado, forman siempre
dispersiones coloidales, con características que las diferencian de las disoluciones
de moléculas más pequeñas.
Por hidrólisis, las moléculas de proteína se dividen en numerosos compuestos
relativamente simples, de masa molecular pequeña, que son las unidades
fundamentales constituyentes de la macromolécula. Estas unidades son los
aminoácidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen entre
sí mediante enlaces peptídicos. Cientos y miles de estos aminoácidos pueden
participar en la formación de la gran molécula polimérica de una proteína. Todas
las proteínas tienen carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno, y casi todas poseen
también azufre.
Las proteínas son las macromoléculas más abundantes presentes en las células
vivas. Poseen una gran variedad y diversidad en cuanto a su función biológica.
Son los instrumentos moleculares mediante los que se expresa la información
génica.
Las proteínas están constituidas por aminoácidos (existen 20 de ellos) unidos en
forma covalente a través de enlaces peptídicos. A partir de estos 20 aminoácidos,
los diferentes organismos pueden fabricar productos tan diversos como enzimas,
hormonas, anticuerpos, etc.
Funciones
Las proteínas ocupan un lugar de máxima importancia entre las moléculas
constituyentes de los seres vivos (biomoléculas). Prácticamente todos los
procesos biológicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de
moléculas. Bastan algunos ejemplos para dar idea de la variedad y trascendencia
de las funciones que desempeñan. Son proteínas:
 • Casi todas las enzimas, catalizadores de reacciones químicas en organismos
vivientes.
• Muchas hormonas, reguladores de actividades celulares.
• La hemoglobina y otras moléculas con funciones de transporte en la sangre.
• Los anticuerpos, encargados de acciones de defensa natural contra infecciones
o agentes patógenos.
• Los receptores de las células, a los cuales se fijan moléculas capaces de
desencadenar una respuesta determinada.
• La actina y la miosina, responsables finales del acortamiento del músculo
durante la contracción
• El colágeno, integrante de fibras altamente resistentes en tejidos de sostén.
Funciones de reserva: Como la ovoalbúmina en el huevo, o la caseína de la
leche. Todas las proteínas realizan elementales funciones para la vida celular,
pero además cada una de éstas cuenta con una función más específica de cara a
nuestro organismo.
Debido a sus funciones, se pueden clasificar en:
 Catálisis: Está formado por enzimas proteicas que se encargan de realizar
reacciones químicas de una manera más rápida y eficiente. Procesos que
resultan de suma importancia para el organismo. Por ejemplo, la pepsina,
esta enzima se encuentra en el sistema digestivo y se encargan de
degradar los alimentos.
 Reguladoras: Las hormonas son un tipo de proteínas las cuales ayudan a
que exista un equilibrio entre las funciones que realiza el cuerpo. Tal es el
caso de la insulina que se encarga de regular la glucosa que se encuentra
en la sangre.
 Estructural: Este tipo de proteínas tienen la función de dar resistencia y
elasticidad que permite formar tejidos, así como la de dar soporte a otras
estructuras. Este es el caso de la tubulina que se encuentra en el
citoesqueleto.
 Defensiva: Son las encargadas de defender al organismo. Glicoproteínas
que se encargan de producir inmunoglobulinas que defienden al organismo
contra cuerpos extraños, o la queratina que protege la piel, así como el
fibrinógeno y protrombina que forman coágulos.
 Transporte: La función de estas proteínas es llevar sustancias a través de
todo el organismo donde son requeridas. Proteínas como la hemoglobina
que lleva el oxígeno por medio de la sangre.
  Receptoras: Este tipo de proteínas se encuentran en la membrana celular
y llevan a cabo la función de recibir señales y para que la célula así pueda
realizar su función. La acetilcolina que recibe señales para producir la
contracción muscular.

Desnaturalización de proteínas
Es la ruptura de los enlaces que mantenían sus estructuras cuaternaria, terciaria y
secundaria, conservándose solamente la primaria. En estos casos las proteínas se
transforman en filamentos lineales y delgados que se entrelazan hasta formar
compuestos fibrosos e insolubles en agua. Los agentes que pueden desnaturalizar
a una proteína pueden ser: calor excesivo; sustancias que modifican el pH;
alteraciones en la concentración; alta salinidad; agitación molecular; etc... El efecto
más visible de éste fenómeno es que las proteínas se hacen menos solubles o
insolubles y que pierden su actividad biológica.
La mayor parte de las proteínas experimentan desnaturalizaciones cuando se
calientan entre 50 y 60 ºC; otras se desnaturalizan también cuando se enfrían por
debajo de los 10 a 15 ºC.
La desnaturalización puede ser reversible (renaturalización) pero en muchos
casos es irreversible.

Pruebas para identificar aminoácidos y proteínas

1 PRUEBA DE BIURET
La prueba de Biuret es una prueba química utilizada para determinar la presencia
de un enlace peptídico en una sustancia. Está basada en la reacción de Biuret, en
la cual, una estructura peptídica que contiene al menos dos enlaces peptídicos
produce un color violeta al reaccionar con sulfato de cobre alcalino. En presencia
de una solución alcalina, el ion de cobre II de color azul puede formar un complejo
con los enlaces peptídicos, ya que el péptido tiene pares de electrones no
compartidos en el nitrógeno y el oxígeno del agua. La compleja coordinación de
colores se forma entre iones Cu+2 ,oxigeno carbonilo(>C=O) y nitrógeno amida
(=NH) del enlace peptídico. Una vez se ha formado este complejo, la solución se
torna de azul a violeta. Entre mas profundo sea el color violeta, más alto es el
número de complejos de péptido-cobre.
La intensidad del color es directamente proporcional al número de enlaces
peptídicos presentes en la molécula de proteína que está reaccionando y también
al número de moléculas de proteína presentes en el sistema de reacción.

PRUEBA DE NINHIDRINA
La prueba de ninhidrina es una prueba química utilizada para detectar la
presencia de amoníaco, aminas primarias/secundarias o aminoácidos. Esta
prueba envuelve la adición de reactivo de ninhidrina a la muestra, que resulta en la
formación de un color azul oscuro, frecuentemente denominado Púrpura de
Ruhemann, en la presencia de un grupo amino.
La ninhidrina es un agente reactivo utilizado en pruebas cuantitativas para la
determinación de aminoácidos. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno)
reacciona con aminoácidos que tengan el grupo amino libre, dando lugar a la
formación de amoniaco y anhídrido carbónico, con reducción del reactivo
(ninhidrina) a hidrindantina. La hidrindantina reacciona a su vez con el amoniaco y
otra molécula de ninhidrina para dar un compuesto de adición doble que presenta
una coloración azul-púrpura.
PRUEBA XANTOPROTEICA
La prueba xantoproteica es una prueba bioquímica para la detección de
aminoácidos que contienen grupos fenólicos como fenilalanina, tirosina y triptófano
(aminoácidos aromáticos). La prueba se denomina prueba xantoproteica debido a
la formación de un precipitado amarillo de ácido xantoproteico. El término 'Xantho'
se refiere a 'amarillo', por lo que la prueba a menudo se denomina Prueba de
proteína amarilla. La prueba da un resultado positivo para los aminoácidos que
contienen anillos de benceno u otros grupos aromáticos. La prueba es una prueba
cualitativa que proporciona información solo sobre la presencia o ausencia de los
aminoácidos.

PRUEBA DE GRUPOS AZUFRADOS

La prueba de grupos azufrados más conocida como a prueba de sulfuro de plomo
(o prueba de acetato de plomo) es una prueba bioquímica para la detección de
aminoácidos como cisteína y cistina. Esta es de carácter específica para la
detección de aminoácidos que contienen azufre, grupo SS en cisteína y grupo SH
en cistina. La prueba también se llama prueba de acetato de plomo ya que el
reactivo para la prueba es acetato de plomo. Aunque la prueba es específica para
la detección de aminoácidos que contienen azufre, la metionina no da un resultado
positivo en esta prueba puesto que presenta su grupo tiol bloqueado por la
presencia de un grupo metilo.
Reacción
Cisteína + 2NaOH → Serina + Na 2 S + H 2 O
Pb (CH 3 COO) 2 + NaOH → Pb (OH) 2 + 2CH 3 COONa
Pb (OH) 2 + 2NaOH → Pb (ONa) 2 + 2H 2 O
Na 2 S + Pb (ONa) 2 + H2O → PbS (precipitado negro) + 4NaOH
PRUEBA DE SAKAGUCHI
La prueba de Sakaguchi es una prueba bioquímica que consiste en una reacción
colorimétrica para la detección y cuantificación de grupos de guanidina, utilizada
como prueba cualitativa para la arginina libre o en proteína. La prueba fue
descubierta por el científico de alimentos japonés Shoyo Sakaguchi y recibió su
nombre en 1925. La prueba de Sakaguchi es un ejemplo de reacciones de color o
prueba que se realiza para la detección de aminoácidos o proteínas. La prueba es
una prueba específica para la arginina en la que el grupo guanidina de la arginina
reacciona con 1-naftol o α-naftol para producir un producto coloreado. El
desarrollo de un color rojo marca la reacción positiva y se debe a la presencia del
grupo guanidina, que caracteriza la arginina. Esta es una reacción de indicación
de la presencia de arginina libre de proteínas que contengan arginina. La prueba
consiste en tratar la muestra con alfa-naftol e hipoclorito de sodio o hipobromito de
sodio, con lo cual se desarrollará un color rojo intenso. El desarrollo del color se
altera o se previene por completo por la presencia de amino, histidina o triptófano.
La arginina es un aminoácido condicionalmente esencial, necesario en la dieta
solo bajo ciertas condiciones. Este puede estimular la función inmunológica al
aumentar el número de leucocitos. La arginina está involucrada en la síntesis de
creatinina, poliaminas y en el ADN. Puede disminuir el colesterol para mejorar la
capacidad del aparato circulatorio, así como estimular la liberación de hormona de
crecimiento (somatotropina), reducir los niveles de grasa corporal.
Prueba de millon
La prueba de Millon es una prueba analítica utilizada para la detección del
aminoácido tirosina, que es el único aminoácido que contiene el grupo fenol. La
prueba de Millon es una prueba específica para tirosina, pero no es una prueba
específica para proteínas, ya que también detecta el grupo fenólico presente en
otros compuestos. Por lo tanto, mientras se realiza la prueba de Millon, es esencial
que también se realicen otras pruebas como la prueba de Biuret y la prueba de
ninhidrina. Como muchas proteínas se componen de tirosina, la prueba es útil
para la detección de dichas proteínas. La prueba fue descubierta y nombrada en
honor al químico francés Auguste Nicolas Eugene Millon. El ensayo de Millon
detecta la presencia del grupo hidroxifenil en las proteínas, aunque es sensible a
cualquier compuesto fenólico sin sustituir en las posiciones 3,5. Se considera
ensayo positivo para la presencia de tirosina en las proteínas.

Materiales y Reactivos
Materiales Reactivos
Tubos de ensayo NaOH al 36°- 0,9
Gradilla Solución de nitrato de plomo al 10%
Pipetas Solución de sulfato de cobre
Pipeteador Reactivo de Molish
Mechero Acido nítrico 1. Determinació
Baño de maria Hipoclorito de sodio n de
Solución de albumina proteínas
totales por
espectrofotometría

Este método que usa la luz ultravioleta y la espectroscopia visible para

determinar de manera rápida la concentración de proteínas.
Utilizando un espectrofotómetro UV-VIS, se puede obtener cuantificación
precisa del ADN, ARN y proteínas utilizando 1 a 2 ml de muestra.
 Absorbancia UV: la utilización de la absorbancia ultravioleta para medir la
concentración de proteínas es un análisis de cuantificación de proteínas.
Los aminoácidos con cadenas laterales aromáticas, proporciona su
absorbancia UV. Dado que los aminoácidos absorben la luz UV, puede
obtener la absorbancia a una longitud de onda a través de un
espectrómetro y utilizarse para estimarse la concentración de proteínas de
la muestra.

Método Wartburg Christian: es un método de ensayo espectroscópico

ultravioleta de proteínas y ácidos nucleicos basado en la absorbancia de la
luz ultravioleta a longitud de onda de 260 nm y 280 nm. Las proteínas
generalmente absorben la luz a 280 nanómetros debido a la presencia de
triptófano y tirosina. Los ácidos nucleicos absorben mas a 260 nm, por su
base de purina y pirimidina. Este método se utiliza para sacar las
cantidades de proteínas presentes.

2. Determinación de albuminas y globulinas

El verde de bromocresol posee especificidad para la albumina y no sufre

interferencias por valores elevados de bilirrubina y hemoglobina,
permitiendo que las interferencias de valores elevados de triglicéridos
puedan ser corregidos utilizando el blanco de muestra.
El método tiene excelente correlación con la separación electroforética en
acetato de celulosa y es fácilmente aplicable a la mayor parte de los
analizadores semi automáticos y automáticos capaces de medir una
reacción de punto final 600 y 640 nm.
Se necesita fotómetro, pipetas para dispensar muestras y reactivos,
cronometro.
Este sistema se basa en la desviación del pico de absortividad máxima de
un colorante completo, el verde de bromocresol cuando se liga a la
albumina, el color formado es medido colorimétricamente entre 600 y 640
nm.

Método de biuret: en solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace

peptídico de las proteínas dando color purpura que se cuantifica
espectrofometricamente 540nm, como estándar se utiliza una solución de
albumina, suero o plasma.

Electroforesis de globulinas en suero es el examen que mide este tipo de

proteínas en la parte liquida de la sangre.
Este examen se realiza colocando en un papel especial la muestra de
sangre y se le aplica una corriente eléctrica. Las proteínas se mueven en el
papel y forman bandas que muestran las cantidades de cada proteína.