BIOTECNOLOGÍA

VEGETAL
SISTEMAS DE CULTIVO CON
ALTERACIÓN DEL ESTADO DE
DIFERENCIACIÓN CELULAR
SISTEMAS DE CULTIVO CON ALTERACIÓN DEL
ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
TOTIPOTENCIA Y PLURIPOTENCIA
Totipotencia
- Es la capacidad de la célula de desarrollar todas las células de la planta madura. La
capacidad de la distribución auxínica debido a la polarización es importante.
Ejemplo
- El cigoto.
- Células del suspensor (embriogénicas hasta el estado globular)
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
TOTIPOTENCIA Y PLURIPOTENCIA
Pluripotencia
Capacidad de grupos de células para regenerar plantas en dos etapas (brotes, luego
raíces)
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
Las células vegetales pueden no ser totipotentes per se, pero pueden recuperar la
totipotencia.

- Por inducción - Por reversión

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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
EMBRIOGÉNESIS…
EMBRIOGÉNESIS SEXUAL. Suprimida hasta la fertilización
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
EMBRIOGÉNESIS
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.
Formación de embrioides a
partir de células somáticas
diploides:
- Cuerpo vegetativo
- Tejidos reproductivos
diferentes al zigoto (a) Embriones somáticos en diversas etapas de desarrollo
(anteras, megasporas, en un medio de agar sólido. (b) Los embriones somáticos
siguen una progresión de desarrollo similar en
óvulos) comparación con los embriones cigóticos. Hay etapas
globulares, cotiledonares y maduras reconocibles. (c) Un
- Hipocótilos o cotiledones grupo de embriones somáticos que muestran un
desarrollo asimétrico. Algunos aún tienen que llegar más
allá de la etapa en forma de corazón (flecha blanca),
mientras que otros están completamente desarrollados y
listos para la germinación (flecha roja).
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EMBRIOGÉNESIS
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.
Embriogénesis somática directa. Células
preembriónicas en hipocótilos o cotiledones
sin etapa previa de callo.

Embrión somático que se

forma directamente a partir
del tejido del cotiledón en
(Cercis canadensis). (ayb)
Embrión somático que
muestra apego al explante
original por la punta de la
radícula.
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EMBRIOGÉNESIS
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.
Embriogénesis somática indirecta. Etapa
previa de callo (concentrac. Hormonal por
ejemplo 1.2ppm/0.25ppm aux/cit, oscuridad
…) mayor uso

En un callo hay alta probabilidad de mutación

En caso de explantes duros aplicar N orgánico (caseína hidrolizada y glutamina), pero puede inhibir el desarrollo de
callos provenientes de anteras
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR

Inducción de embriones somáticos. (a) Las masas

poliembriogénicas son agregados de células organizadas que
continuarán produciéndose en un medio 2,4-D en un cultivo
líquido agitado. (b) Éstos formarán embriones somáticos
cuando se muevan a un medio de desarrollo estacionario
donde se ha eliminado el 2,4-D.

Dentro de un callo el destino de las células puede cambiar

dependiendo de su ubicación.
Lasa células de la periferie de un callo son pequeñas con
gránulos de almidón grandes, citoplasma denso, núcleo grande
y mucho ARN.
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR

EMBRIOGÉNESIS
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.
Condiciones ambientales.
- Para el proceso de dediferenciación se requiere oscuridad
- La fase de inducción requiere luz tenue (1000 lux por 12 – 16 h)
- Utilizar medios de cultivo frescos (máximo de una semana).Ξ
- La temperatura debe estar en 21 – 25°C.
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
EMBRIOGÉNESIS
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.
Formación de embrioides. Se forma al colocar los callos en un
medio sin auxina o con muy poca (no es cambio brusco), las
células se alargan, las vacuolas se alargan, sin gránulos de
almidón, y liberan embrioides (sólo algunas células …).
La sacarosa estimula… las condiciones ambientales: Primero
oscuridad, luego luz difusa (1000 lux), medios frescos,
temperatura…

Embriones
somáticos de
Swietenia
macrophylla (caoba)
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR

EMBRIOGÉNESIS
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.
Existen dos estadios críticos de la formación de embrioides
- Inducción de células preembriónicas
- Agrupamiento de células preembriónicas
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR

EMBRIOGÉNESIS
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.
- Baja concentración de auxina y elevada concentración de N
- Respecto a citocininas, en algunos casos se utiliza zeatina 0.1
mM, aunque en otros casos inhibe.
- La sacarosa estimula la embriogénesis
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EMBRIOGÉNESIS
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.
- El embrioide es un organismo.
- Los embrioides carecen de suspensor
- El embrioide o embrión somático no está vascularizado al
callo, es independiente.
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ORGANOGÉNESIS DE NOVO
- Origen de órganos con etapas previas de callo, luego meristemoides.
- Formación de tallos y raíces (estatolitos importante).
- Para la formación de flores se requiere de los estímulos ambientales …
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ORGANOGÉNESIS DE NOVO
FACTORES QUE INFLUENCIAN LA ORGANOGÉNESIS
- Regulación química
Los más importantes
- Efecto del explante
- Regulación física
- Factores ambientales
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ORGANOGÉNESIS DE NOVO
FACTORES QUE INFLUENCIAN LA ORGANOGÉNESIS
Regulación química
- Útil sólo para iniciar.
- Tener en cuenta que las auxinas exógenas tienden a generar raíces y bloquea la
formación de tallos.
- Si la concentración de auxinas utilizadas para la dediferenciación es muy alta,
puede no lograrse la organogénesis.
- La alta concentración de sacarosa bloquea a las auxinas.
- Considerar el balance A/C: una proporción general para tallos es 10:100 (recordar
la mayor efectividad de las citocininas).
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ORGANOGÉNESIS DE NOVO
FACTORES QUE INFLUENCIAN LA ORGANOGÉNESIS
Regulación química
- La vitamina más utilizada es la B1. A menor tamaño de explante, mayor contenido.
- Los ácidos fenólicos: Ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido vainilico; favorecen la
acción de las auxinas.
- Las giberelinas a veces estimulan la diferenciación y a veces la inhiben.
- El etileno forma tallos a partir de meristemoides, pero aplicado antes del momento
apropiado bloquea la organogénesis,
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ORGANOGÉNESIS DE NOVO
FACTORES QUE INFLUENCIAN LA ORGANOGÉNESIS
Efecto del explante
- Son mejores los que tienen 3 – 6 capas de células epidérmicas acompañadas de
colénquima.
- Edad fisiológica del explante tiende a prevalecer a pesar del callo intermedio
- Es posible que se traslapen la organogénesis y la embriogénesis (microscopía)
- Los meristemoides surgen de células parenquimatosas muy vacuoladas.
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ORGANOGÉNESIS DE NOVO
FACTORES QUE INFLUENCIAN LA ORGANOGÉNESIS
Regulación física
- Las heridas estimulan la organogénesis
Factores ambientales
- Luz: 1000 – 3000 lux (12 – 16 horas luz)
- Luz roja para raíces, luz azul para tallos
- Temperaturas bajas: (15 grados aprox.) para favorecer yemas adventicias
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APLICACIONES DE LA EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA Y LA ORGANOGÉNESIS DE NOVO

SISTEMAS DE CULTIVO CON ALTERACIÓN DEL
ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
SUSPENSIONES CELULARES Y CULTIVO DE PROTOPLASTOS
- Los protoplastos son carentes de pared celular y se comportan como células
embrionarias previa regeneración de pared celular, … producen embriogénesis
- Manitol (0.45 – 0.8 M) para que las células …
- Se suele usar el medio White + agua de coco
- Para suspensiones celulares se usan sistemas de agitación
- El cultivo de protoplastos permite fusionar 2 núcleos y 2 citoplasmas de especies
diferentes (hibridación somática).
SISTEMAS DE CULTIVO CON ALTERACIÓN DEL
ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
SUSPENSIONES CELULARES Y CULTIVO DE PROTOPLASTOS
SISTEMAS DE CULTIVO CON ALTERACIÓN DEL
ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
SUSPENSIONES CELULARES Y CULTIVO DE PROTOPLASTOS

Protoplastos de hojas de tulipán y

pétalos de flores. (a) En los protoplastos
de las hojas, las células epidérmicas
carecen de cloroplastos (flecha roja),
mientras que las de las células en
empalizada y mesófilo tienen
cloroplastos (flecha blanca). (b) En los
protoplastos de pétalos de flores, las
células rojas y azules contienen
antocianinas que dan su color a los
pétalos de las flores.
SISTEMAS DE CULTIVO CON ALTERACIÓN DEL
ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
OBTENCIÓN DE HAPLOIDES
- Su frecuencia en la naturaleza es baja, la producción artificial es más efectiva
GINOGÉNESIS. Desarrollo de un gameto femenino no fecundado. Se logra por:
1. Castración
2. Polinización retrasada. Polinización en el límite de la receptividad del estigma.
3. Utilización de células espermáticas con diferente velocidad de desarrollo (no
fertilización de la oosfera)
4. Polinización con polen inviable, polen extraño, polen irradiado
5. Cultivo de ovarios
SISTEMAS DE CULTIVO CON ALTERACIÓN DEL
ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
OBTENCIÓN DE HAPLOIDES
Cebolla
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OBTENCIÓN DE HAPLOIDES
ANDROGÉNESIS.
Cultivo de anteras
- Se logra líneas puras en una sola generación, comúnmente se requieren tres
generaciones para homocigosis 93.75%... Se disminuye tiempo y costos.
- En alógamas la consanguinidad puede evitar la consecución de líneas puras.
- Hay baja dificultad y buenos resultados
- Se trabaja con flores inmaduras, antes de que las microsporas se conviertan en
grano de polen.
- El haploide es de baja utilidad por ello importante la duplicación cromosómica
- Diferentes protocolos.
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ESTADO DE DIFERENCIACIÓN CELULAR
OBTENCIÓN DE HAPLOIDES
ANDROGÉNESIS.
Cultivo de anteras
GRACIAS