Instituto Tecnológico de Estudios Superiores de Occidente

Ingeniería en Biotecnología

PRE-REPORTE PRACTICA No.3:

“Técnicas de inoculación y siembra”

Laboratorio de microbiología
Isabella Aguilar Paz, Karla Sofía Padilla Hermosillo, Valeria
Preciado Lara

Profesora Xitlalli Desideria Hernández Mancillas

Jalisco, marzo de 2021
Cuestionario

1. ¿Cuál es la diferencia entre cultivo mixto y cultivo puro?

Un cultivo puro es un cultivo de un solo tipo de microorganismo, mientras que un cultivo
mixto es aquel que contiene ​ más de una especie/raza de microbio (Microbitos et al., 2010)

2. ¿Qué es una colonia microbiana?

Se entiende por colonia microbiana como la agrupación de un conjunto de
microorganismos de un mismo tipo(​Significado de Colonia​, 2018)

3. Elabore un cuadro comparativo de la morfología colonial de los

cultivos que utilizará en esta práctica. Incluya forma, elevación, margen y pigmentació

Forma Margen Pigmentación Elevación

Escherichia Circulares Entero Verde metálico Convexa

Coli

Pichia Esférica u Entero Grisáceo/blanco Elevada

pastoris oval
dependiendo
del medio de
cultivo

Aspergillus Elipsoidal Entero Amarillento que Convexa

niger se cubren con
puntos de color
oscuro

4. ¿Por qué se deben incubar las cajas Petri en posición invertida?

Para evitar contaminaciones y que el agua de condensación caiga sobre el medio.
(Tulio Rodríguez & Prado Cohrs, 2017, pp. 1-3)
5. ¿Qué aspecto presenta el crecimiento microbiano en
un medio de cultivo líquido de los siguientes microorganismos?

El aspecto de crecimiento de bacterias y hongos en un medio de cultivo líquido dependerá

del requerimiento de oxígeno de estos.(Lina Salazar, 2012, p. 94)
a)Bacterias
Ejemplos:
-Aerobios estrictos,requieren oxígeno para crecer: ​Mycobacterium tuberculosis.
-Anaerobios facultativos,pueden crecer en presencia o en ausencia de oxígeno: Enterobact
- Anaerobios estrictos,crecen en ausencia de oxígeno.En presencia de oxígeno
su crecimiento cesa, algunos mueren rápidamente: especies del género ​Clostridium.​
- Anaerobios aerotolerantes: crecen en ausencia de oxígeno,pero la presencia de
oxígeno no perjudica su crecimiento: Especies del género​ Lactobacillus.​
-Microaerofílicos: requieren pequeñas concentraciones de oxígeno para crecer:
Especies del género ​Spirillum.​
(Tulio Rodríguez & Prado Cohrs, 2017, pp. 1-3)
b)Hongos
La mayor parte de los hongos son aerobios y por lo tanto necesitan oxígeno para
el desarrollo de sus reacciones metabólicas.
Ejemplos:
-Aerobios estrictos,requieren oxígeno para crecer: Mohos y setas
-Anaerobios facultativos,pueden crecer en presencia o en ausencia de oxígeno: Levaduras
(Gimeno, s. f.)
Introducción

En la microbiología, es de suma importancia el cultivo de organismos para su

análisis y experimentación en los laboratorios; existen diversos medios de cultivo,
que son materiales nutritivos preparados para el crecimiento de microorganismos
(Tortora, 2013); sin embargo para elegirlo se deben considerar los factores más
importantes para la reproducción, tales como su desarrollo celular, su morfología,
requerimientos nutricionales, fuente de energía, entre otros.

Existen los cultivos los mixtos y los puros o axénicos; en los cultivos mixtos, hay
muchas especies diferentes que viven de forma conjunta y para la obtención de un
cultivo puro, se necesitan dos etapas; para que su siembra se considere exitosa, es
necesaria la esterilización del medio y de todos los instrumentos que se lleguen a
utilizar; ya sea que se lleve a cabo esterilización por calor, con el autoclave, por
filtración o con ayuda de compuestos químicos que no sean tóxicos ni
contaminantes para el medio; después de este proceso se lleva a cabo el
aislamiento y cultivo del organismo puro (Murray & Rosenthal, 2017).

A fin de estudiar las propiedades de un microorganismo dado, como se mencionó

anteriormente, es primordial manipularlo en cultivos puros sin otros tipos de
microorganismos. Para llevar a cabo esto, debe aislarse una sola célula de todas las
demás y cultivarse en un medio líquido o sólido, de forma tal que su reproducción
permanezca aislada para su multiplicación en condiciones favorables; un clon se
constituye por una población de células descendientes de un solo microorganismo y
cuando se forma una colonia, se considera un clon lo suficientemente grande para
ser visible en la superficie del medio y de esta forma se logra ser estudiada. Para
aislar células individuales, los microorganismos deben ser diluidos por el gran
número en que se presentan; el método de siembra por estrías en placa es el
método más común para obtener cultivos puros; con un asa esterilizada se toma
una muestra para luego realizar estrías en zigzag en la superficie de la placa Petri,
conforme se realiza este procedimiento, cada vez se van depositando menos
microorganismos, pues se vuelva a flamear el asa, se toca la región donde se
hicieron las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica,
separando así a las células individuales; a continuación se incuban las placas para
que se formen las colonias visibles, es recomendable realizar el método en una
segunda placa por si se llega a contaminar y aparece un cultivo mixto. (Ingraham,
1999).

En los métodos de vertido en placa y extensión en placa, las células microbianas se

diluyen antes de la siembra cuando las muestras tienen demasiados
microorganismos, un ejemplo son las diluciones seriadas en varias etapas,
añadiendo 1 ml de suspensión bacteriana a 9 ml de medio esteril, este proceso se
puede repetir tantas veces sea necesario. Estos métodos, permiten que las
muestras diluidas se incuben hasta obtener colonias. Es importante tomar en cuenta
los distintos medios de cultivo y su clasificación, los medios definidos; que se
preparan a partir de compuestos químicos puros, se utilizan en microorganismos
que se conoce exactamente su composición, otros medios complejos, que contienen
muchos nutrientes permite el crecimiento rápido de las muestras, porque se
preparan a partir de extractos de productos naturales como carne, sangre, proteínas
provenientes de la leche, levaduras o sojas; un ejemplo es el caldo nutritivo, que
cuando se solidifica con agar, se le llama agar nutritivo. Los medios selectivos
favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos e inhiben el crecimiento de
otros, son utilizados para aislar especies particulares a partir de una mezcla que se
puede considerar compleja y los medios diferenciales, también se usan para
identificar colonias de un determinado organismo suprimiendo el crecimiento de
aquellos indeseados. Finalmente los medios de enriquecimiento, tal como su
nombre lo describe, favorece el crecimiento de algunos microorganismos en una
población mixta, pues está destinado solamente a aumentar la cantidad del que se
requiere. (JAWETZ, 2016).

Para que sea posible el estudio de los microorganismos puros, es necesario seguir
los métodos adecuados para su siembra y crecimiento, a pesar de las distintas
técnicas, el propósito de esta práctica de laboratorio, consiste en utilizar dos
técnicas importantes, la inoculación microbiana en un medio líquido (Caldo nutritivo)
y la técnica de siembra microbiana en placa por medio de estría cruzada;
permitiendo analizar el crecimiento de diversas bacterias y levaduras en cajas Petri.
Quick Protocol
 Hoja de seguridad

Reactivo EPP/ Lineamientos ¿Qué hacer en Disposición final

Pictogramas de seguridad caso de
accidentes?

Agar Papa Producto -Tras contacto con Eliminarlos según

Dextrosa clasificado la piel: Lavar con normativa vigente en
como no abundante agua instalaciones
peligroso. No -Tras contacto con autorizadas
contiene los ojos: Lavar con
sustancias abundante agua,
corrosivas o manteniendo
explosivas. abiertos los
párpados

Agar Mac Este producto -Inhalación: Eliminarlos según

conkey no contiene Trasladar a la normativa vigente en
constituyentes persona donde instalaciones
que exista aire fresco. Si autorizadas
representen un respira
riesgo dificultosamente, se
debe suministrar
oxígeno.
 -Contacto con la
piel: quitar ropa
contaminada. Lavar
con abundante
agua corriente a lo
menos 15 minutos,
de preferencia en
ducha de seguridad.
-Contacto con los
ojos: Lavar con
abundante agua
corriente a lo menos
15 minutos.
-Ingestión: Lavar la
boca con agua
corriente y dar a
beber abundante
agua.

Caldo BHI No es una -Tras inhalación: Pequeñas cantidades

(Infusión sustancia o aire fresco. pueden ser
Cerebro mezcla -Tras contacto con desechadas con la
Corazón) peligrosa la piel: aclarar con basura doméstica
abundante agua.
Eliminar ropa
contaminada.
- Tras contacto con
los ojos: aclarar con
abundante agua.
-Tras ingestión:
hacer beber agu​a

Referencias
Gimeno, A. (s. f.). ​Principales factores condicionantes para el desarrollo de los
hongos y la producciÃ3​ ​n de micotoxinas (2-5)​. Engormix. Recuperado 15 de
marzo de 2021, de
https://www.engormix.com/micotoxinas/articulos/principales-factores-condicio
nantes-desarrollo-t26065.htm#:%7E:text=La%20mayor%20parte%20de%20l
os%20hongos%20son%20aerobios%20y%20por,producir%20la%20muerte%
20de%20%C3%A9stos​.

Ingraham, J. (1999a). ​Introduccion a la Microbiologia 1.​ Reverte.

JAWETZ. (2016). ​MICROBIOLOGIA MEDICA​ (27.​a​ ed.). McGraw-Hill.

Lina Salazar, C. (2012). Características morfológicas microscópicas de especies de

aspergillus asociadas a infecciones en humanos. ​Hechos Microbiologia,​
94-95. ​http://www.udea.edu.co/hm

Metodos.​ (s. f.). Aislamiento por siembra en estrías y obtención de un cultivo puro.
Recuperado 15 de marzo de 2021, de
https://www.ugr.es/%7Epomif/pom-bac/pb-iv/pb-iv-3-metodos.htm#:%7E:text
=Colocar%20siempre%20las%20placas%20en,condensaci%C3%B3n%20cai
ga%20sobre%20el%20medio.&text=1.6.,oC%2C%2024%20horas​).

Microbitos, G., Microbitos, G., & Microbitos, V. T. L. E. D. G. (2010, 15 junio).

Morfología colonial bacteriana en medios de cultivo. MICROBITOS.
http://microbitosblog.com/2010/06/14/morfologia-colonial-bacteriana/#:%7E:te
xt=Escherichia%20coli.&text=Se%20logran%20ver%20colonias%20aisladas,
coli%20en%20medio%20de%20cultivo​.

Murray, P. R., & Rosenthal, K. S. (2017). ​Microbiología médica (8a​ edición) (+

StudentConsult en español)​ (8.​a​ ed.). Elsevier España, S.L.U.

Significado de Colonia​. (2018, 2 agosto). Significados.

https://www.significados.com/colonia/#:%7E:text=En%20microbiolog%C3%A
Da%2C%20se%20denomina%20colonia,y%20los%20protozoos%20o%20pr
otozoario​.

Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. (2013). ​Introducción a la

microbiología​ (9.​a​ ed.). Editorial Médica Panamericana.

Tulio Rodríguez, J., & Prado Cohrs, D. (2017). ​Microbiología: Lo esencial y lo

práctico (1.​a ed.) [Libro electrónico].
https://iris.paho.org/bitstream/handle/10665.2/51601/MicrobiologiaPractico_s
pa.pdf?sequence=1&isAllowed=y