Guia Banco de Salgre

UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA
GUIAS DE LABORATORIO
DE BANCO DE SANGRE
VII- SEMESTRE
Elaborado por: ELIZABETH RODRÍGUEZ HERNÁNDEZ
BOGOTÁ, D.C.
2.013
1
GUÍA PRACTICA DE BANCO DE SANGRE
2
TODOS LOS DERECHOS RESERVADOS
Ni este libro, ni parte de él puede ser reproducido o transmitido

de alguna forma o por algún medio mecánico o electrónico,
incluyendo fotocopia o grabación, o por cualquier otro sistema de memoria
o archivo, sin permiso escrito
de la Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca
3
UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA
MISIÓN
Ofrecer diversas oportunidades de formación en educación superior a

través de procesos académicos tendientes a fortalecer los valores
humanos, patrios y ciudadanos: justicia, mística, lealtad, honestidad,
responsabilidad, respeto, solidaridad y paz, entre otros.
Mediante el desarrollo de actividades docentes e investigativas con

proyección social, se aspira a un continuo perfeccionamiento personal,
profesional y colectivo orientado hacia la formación integral de
profesionales con decidida voluntad de servicio a la comunidad,
capaces de generar dinámicas culturales, científicas y tecnológicas que
promuevan la dignidad de las personas, las implicaciones éticas del
conocimiento y el compromiso con el mejoramiento del medio ambiente
y las exigencias del entorno social para elevar la calidad de vida del ser
humano.
VISIÓN
Desde nuestra tradición de seriedad, calidad y eficiencia soñamos el

COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA del siglo XXI como
Universidad Pública líder en la búsqueda permanente de la excelencia
personal, profesional y colectiva y en la construcción de referentes
culturales para el desarrollo del país, a través de diversas modalidades
de educación superior, metodologías y jornadas adecuadas a las
expectativas del usuario y en relación directa con imperativos
axiológicos y necesidades sociales, científicas y educativas.
4
I. INTRODUCCION
En las diferentes prácticas de la siguiente guía se dan a conocer las condiciones y

técnicas fundamentales de la sección de Inmunohematología del Banco de Sangre
basadas en los adelantos científicos y técnicos que con el paso del tiempo van
apareciendo en la medicina transfusional.
II. OBJETIVOS GENERALES DE LA GUIA
- Identificar y examinar criterios, procedimientos y técnicas en el área de

Inmunohematología que permitan la adecuada estructura, organización y
funcionamiento de los Bancos de Sangre y Servicios de transfusión.
- Permitir mediante el conocimiento de los fundamentos teóricos, éticos,
normativos y administrativos del banco de sangre, la formación del criterio en el
estudiante para su desempeño en todas las áreas del mismo, como son:
promoción de la donación voluntaria de sangre, donación de sangre,
procesamiento de sangre (obtención de componentes, Inmunohematología),
almacenamiento, servicio de transfusión con calidad y eficiencia de acuerdo con
las necesidades de la población.
- Proteger a los donantes de sangre y a los usuarios de la transfusión de posibles
efectos adversos mediante practicas seguras en medicina transfusional.
- Conocer y aplicar las normas legales vigentes para el Banco de Sangre en cada
uno de los procedimientos.
- Incentivar en el estudiante la habilidad para cuestionarse permanente en su
práctica profesional; sobre nuevas estrategias y metodologías que le permitan
avanzar en el área de la Inmunohematología y proponer nuevos retos y desarrollos
que contribuyan en las Instituciones y organismos de carácter nacional e
internacional de desempeñe con el análisis y planteamiento de soluciones a los
problemas existentes.
III. NORMAS DE BIOSEGURIDAD
Es importante enfatizar en la necesidad de que el personal de los Bancos de

Sangre y servicios de transfusión revisen su actitud frente a las normas de
Bioseguridad y decidan hacerlas parte de la rutina diaria de trabajo,
observándolas con todo tipo de pacientes, recordándolas a los compañeros que
las incumplen y exigiendo al personal administrativo los elementos de protección
necesarios para cumplirlas.
La Bioseguridad en el Bando de Sangre concierne a todo el personal, las prácticas

incorrectas y los errores pueden invalidar todas las normas de Bioseguridad.
5
IV. PRECAUCIONES UNIVERSALES:
Las siguientes recomendaciones deben ser puestas en práctica por todos los
trabajadores de la salud y estudiantes de práctica:
 Deben usarse guantes cuando hay posible contacto con sangre y otros
líquidos corporales
 Las manos deben lavarse después de quitarse los guantes
 Debe usarse mascarilla y gafas protectoras cuando se prevé la
posibilidad de salpicaduras con sangre y otros líquidos corporales
 El equipo reutilizable contaminado debe ser sumergido en un líquido
desinfectante apropiado en un contenedor impermeable y enviado al
área de descontaminación.
 Agujas contaminadas y otros objetos agudos desechables deben ser
manejados cuidadosamente. Los objetos agudos contaminados deben
ser descartados inmediatamente después de su uso en contenedores
resistentes y diseñados para este propósito, los cuales se sellan y
descartan sin llenarlos completamente.
 Las agujas usadas nunca debe ser dobladas o re-tapadas.
 Salpicaduras de sangre o líquidos que contienen sangre deben ser
limpiadas usando guantes y otras barreras, si están indicadas, quitando
el exceso de material con toallas desechables, lavando con agua y
jabón y desinfectando con una solución de hipoclorito de sodio al 1:100
para superficies lisas y 1:10 para superficies rugosas en agua. El
hipoclorito diluido debe prepararse cada 8 horas
 Salpicaduras abundantes o que tienen vidrios quebrados u objetos
agudos, deben cubrirse con toallas desechables, agregar hipoclorito de
sodio 1:10, dejar actuar 10 minutos y limpiar como se describió
anteriormente
 Trabajadores de salud con lesiones abiertas, dermatitis, etc., deben
evitar el contacto directo con el paciente y la manipulación directa del
equipo contaminado.
 Está terminantemente prohibido ingerir alimentos o bebidas en los
laboratorios.
 No se deben contestar celulares cuando se están empleando guantes
por el riesgo de contaminación posterior con superficies que han
entrado en contacto con líquidos biológicos.
 No se debe tocar la cara, el pelo ni ningún área del cuerpo cuando este
usando los guantes.
 El pelo debe estar recogido y el gorro debe usarse durante todo el
desarrollo de la práctica.
6
V. REQUISITOS PARA EL DESARROLLO DE LAS
PRÁCTICAS
Los siguientes son los requisitos a tener en cuenta para facilitar el desarrollo de las
prácticas de laboratorio de Inmunohematología que conlleven a resultados
confiables.
1. Consulte previamente la bibliografía recomendada y relacionada con el tema de

la práctica, analice previamente la guía y prepare todos los materiales
necesarios para obtener el mejor desempeño en la misma.
2. Asista al laboratorio puntualmente, usando todos los elementos y medidas
necesarias para la protección personal, como son: blusa blanca, peto plástico,
guantes, cabello recogido, gorro, caretas para Bioseguridad o gafas.
3. Ingrese al laboratorio solamente: materiales, libros, cuadernos y guías
necesarias para la práctica.
4. Mantenga su celular en silencio con el fin de no interrumpir la clase, evitar
contaminaciones y distracciones que conlleven a errores en la misma. Durante
el tiempo de duración de la clase no puede contestar ni recibir llamadas.
5. Al ingresar al laboratorio, dispóngase rápidamente en los sitios asignados y
coloque bajo la mesa todos los libros y materiales no necesarios.
6. Traslade hacia su mesa una serófuga, una lupa y una lámpara visora de
aglutinación.
7. Realice su práctica en orden, desplazándose por el laboratorio solamente lo
estrictamente necesario.
8. Todo el material que se emplee debe ser dispuesto en el frasco de boca ancha
con hipoclorito de sodio (se mantendrá en cada mesa) para su inactivación
durante el tiempo de clase y enjuague al final de la práctica.
9. Esta terminantemente prohibido emplear el tiempo de clase en el lavado del
material (deberá realizarlo fuera de la clase)
10. Entregue los informes al docente en el momento que se soliciten.
11. Cuando el docente de la información final y señale que la clase a terminado,
recoja todos sus materiales y deje su puesto de trabajo en perfecto orden y
aseo. Deje la silla en su sitio bajo la mesa. Cerciórese de que su puesto quedo
en perfectas condiciones.
VI. CONDICIONES A TENER EN CUENTA PARA LA

REALIZACIÓN DE LAS PRUEBAS DE INMUNOHEMATOLOGÍA.
1. Todo el material a emplear debe de estar perfectamente limpio y seco.

2. Cada estudiante debe tener su gradilla para uso personal. No se permite el uso
de gradilla compartida, esto retraza el desarrollo de la práctica y aumenta la
posibilidad de error durante el desarrollo de los procedimientos.
3. Llene el frasco dispensador de solución salina al inicio de la clase.
7
4. Al usar la serófuga tenga en cuenta el tiempo establecido: 15 a 20 segundos a
3.400 r.p.m para centrifugación y 1 minuto a 3.400 r.p.m para lavado.
5. Marque perfectamente sus pruebas con marcador de vidrio indeleble.
6. Al realizar los lavados de G.R, tenga en cuenta al finalizar cada lavado, decantar
completamente la solución salina, agitar suavemente el tubo y posteriormente
agregar nuevamente solución salina por las paredes del tubo, sin introducir el
pitillo del frasco lavador en el mismo.
7. Al resuspender las células para obtener la solución final del 2 al 5 % tener en
cuenta realizar la misma agitación del paquete celular, con el fin de obtener una
suspensión de concentración homogénea.
8. Para el uso de los antisueros observe su apariencia antes del uso, revise los
lotes y fechas de vencimiento.
9. Cuando emplee células reactivas para la prueba inversa o rastreo de
anticuerpos, tenga en cuenta antes del uso, exprimir el gotero, con el fin de
mezclar todo el contenido con el del frasco y así obtener una suspensión
homogénea.
10. Siempre que realice pruebas de Inmunohematología, debe paralelamente
montar los controles de las mismas, con el fin de poder hacer la validación
correspondiente.
8
VII. PRACTICAS
INVESTIGACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO
1. OBJETIVO
Determinar el grupo sanguíneo, con relación al sistema ABH, mediante la identificación
de los aglutinógenos y las aglutininas principales que se encuentran en una muestra de
sangre y suero, utilizando antisueros y glóbulos rojos conocidos según lo indicado en
cada caso.
2. PRE-LABORATORIO
Las pruebas utilizadas para establecer la hemoclasificación sanguínea relacionada
con los diversos grupos sanguíneos, aprovechan las características inmunológicas
que expresa cada individuo, de acuerdo a su particular codificación genética.
En dichas pruebas se evidencian los antígenos y/o anticuerpos del grupo sanguíneo,
de acuerdo a su comportamiento in-vitro. En cuanto se refiere al sistema ABH se
investigan tanto los antígenos o aglutinógenos como los anticuerpos o isoaglutininas
naturales.
Los glóbulos rojos utilizados en estos procedimientos poseen en la membrana los

antígenos que al unirse (in vitro) con los anticuerpos específicos producen
reacciones que son fácilmente visibles, actuando como si fuesen los indicadores del
punto final de la hemoaglutinación.
La hemoaglutinación se considera la reacción de Ag-Ac de mayor utilidad en el

laboratorio de Inmunohematología, por lo cual se hace indispensable recordar las
características y las condiciones que modifican dicha reacción, para poder determinar
con claridad los requerimientos óptimos que permitan obtener la mayor constante de
equilibrio en cada prueba específica, y en esta forma se asegure la confiabilidad y
contribución exitosa de los procedimientos empleados en el estudio de los grupos
sanguíneos. También es necesario conocer las características específicas de
comportamiento de los aglutinógenos y aglutininas del sistema ABH.
Para la revisión de los aspectos mencionados tenga en cuenta los siguientes

parámetros:
1-Analice las fases o etapas de la reacción de hemoaglutinación.
2-Efectúe la representación esquemática de la reacción de hemoaglutinación

ejemplarizada con lo que ocurre en las pruebas de tipificación ABH. (Tenga en cuenta
9
que el anticuerpo que interviene es una molécula pentamérica y que la
hemoaglutinación se hace evidente cuando se unen muchos eritrocitos.
3-Seleccione las características específicas de los aglutinógenos y las isoaglutininas

ABH, que intervienen en la reacción de hemoaglutinación y/o hemólisis, que deben
tenerse en cuenta para la realización de cada prueba.
4-Para la tipificación sanguínea ABH, prueba globular se utilizan, reactivos que

contienen anticuerpos policlonales o anticuerpos monoclonales. Describa en forma
sintética y de manera comparativa las propiedades de los anteriores reactivos
teniendo en cuenta: métodos de obtención y usos.
5- Realice la revisión por medio de un mapa conceptual que incluya los principales
términos usados en las pruebas de hemoaglutinación como son: afinidad, avidez,
sensibilidad, especificidad.
6- Revise en el Manual de Normas Técnicas, Administrativas y de Procedimientos

para Bancos de Sangre el control de calidad que se debe realizar en
inmunohematología que incluye: aspecto, reactividad, especificidad, potencia y avidez.
7-Elabore una tabla comparativa, de las reacciones esperadas para cada uno de los
diferentes fenotipos del sistema ABO, teniendo en cuenta antígenos y anticuerpos
expresados y antisueros y células reactivas usadas.
8-Investigue la expresión genotípica y fenotípica, para cada uno de los principales

grupos sanguíneos del Sistema ABO.
3. PRACTICA No.1
IDENTIFICACION DE AGLUTINOGENOS. PRUEBA GLOBULAR, DIRECTA O DE

BETH- VINCENT
A. Método en tubo
3.1.MATERIALES Y REACTIVOS
Láminas porta-objeto. Tubos de 10 o 12 x 75 m y tubos de 13 x 10 mm. provistos
de tapones de caucho o en su defecto plástico adherente. Pipetas Pasteur
(plásticas), palillos, Tubos de sistema al vacío, para recolección de las muestras,
tapa roja y tapa lila, con sus respectivas agujas y guías, o sistemas de jeringa
hipodérmica, lupa para lectura, fuente de luz blanca.
Solución salina isotónica
Sueros anti-A, anti-B, anti-A, B.
10
Dibujos elaborados por Andrea Vallejo.
3.2 MUESTRAS
Obtener una muestra de sangre del paciente, anticoagulada (EDTA, CPDA-1).
3.3. PROCEDIMIENTO
1. Marcar cuatro tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 mm (con marcador de vidrio)
con el No. de la muestra y el nombre del antisuero correspondiente al antígeno
que se va a investigar y un tubo para el control con S.S al 0.85 %.
2. Tomar 2 a 3 gotas de los glóbulos rojos en estudio y lavarlos una vez con solución
salina fisiológica (SSF); centrifugando a 3.400 r.p.m. x 1 minutos.
3. Decantar completamente para eliminar el sobrenadante y preparar una suspensión
del 3-al 5% en SSF de los hematíes previamente lavados.
4. Seleccionar 4 tubos de, 12 x 75 mm e identificarlos con marcador como A, B, AB,
Control, respectivamente.
Nota: Leer y seguir las instrucciones del fabricante.
Continuar como sigue:
Anti-A Anti-B Anti A,B S.S 0.85
%
5. Antisuero correspondiente 1 gota(50 1 gota(50 1 gota(50 1 gota(50

ul) ul) ul) ul)
6. G.R del paciente lavados y 1 gota (50 1 gota (50 1 gota (50 1 gota(50
suspendidos del 2 al 5 % ul) ul) ul) ul)
7. Mezclar suavemente
8. Centrifugar a 3.400 r.p.m. x 15” o a 1.000 r.p.m. x 1 minuto.
9. Desprender el botón de células del fondo del tubo agitándolo suavemente;
inclinarlo hasta la posición horizontal para apreciar completamente la aglutinación
y cuantificar las cruces. Se debe usar siempre ayuda visual.
10. Anotar inmediatamente, tubo en mano, los resultados obtenidos de la
aglutinación o hemólisis.
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3.4 . INTERPRETACION
POSITIVO: Aglutinados de GR de diferentes grados de reacción según tabla.
NEGATIVO: Presencia de una suspensión uniforme de los Glóbulos rojos.
TABLA 1. GRADOS DE REACCIONES EN HEMAGLUTINACIÓN Y SCORE. (Marsh)
La siguiente tabla debe tenerse en cuenta para graduar todas las reacciones de
hemoaglutinación de pruebas realizadas por el método en tubo.
4 ++++ Un agregado sólido compacto. No se detectan

glóbulos rojos libres.
3 +++ Varios agregados grandes
2 ++ Agregados grandes en un mar de grumos más
pequeños, sin glóbulos rojos libres.
1+ Agregados pequeños, sobrenadante rojizo por
glóbulos rojos libres.
W o Granularidad débil en la suspensión de glóbulos rojos.
débil Pocos aglutinados macroscópicos pero muchos
microscópicos.
0 Suspensión de glóbulos rojos uniforme. No sedetectan
aglutinados.Negativo.
H Sobrenadante rojo brillante. Hemólisis
SCORE
Es la puntuación que corresponde según el grado de aglutinación. Es de gran importancia en pruebas de
titulación de anticuerpos.
4 ++++ 12
3 +++ 10
2 ++ 8
1+ 5
W o 2
débil
0 0
H Hemolisis
12
B. Método en portaobjetos.
3.1. REACTIVOS
1- Anti-A mono o policlonal
2- Anti-B mono o policlonal
3- Anti-A,B (opcional)
Nota: Todos los reactivos deben utilizarse de acuerdo a las instrucciones del
fabricante.
4- Solución Salina Fisiológica (0.85 %)
3.2 MUESTRAS
Antes de realizar pruebas en lámina portaobjetos, es preciso consultar las instrucciones
del fabricante de los reactivos, algunos recomiendan efectuarlas con sangre entera y otros
con suspensiones de glóbulos rojos poco concentradas, preparadas en solución salina,
suero o plasma.
3.3. PROCEDIMIENTO
1. Marcar apropiadamente la lámina con A, B, AB y control.
2. Agregar una gota de anti-A, anti-B, anti-AB y solución salina en el sitio
correspondiente.
3. Colocar las cuatro gotas de sangre con la pipeta de transferencia o Pasteur y mezclar
con un palillo limpio y diferente para cada antisuero, extendiendo la mezcla en un área
de aproximadamente dos centímetros por cuatro centímetros.
13
4. Inclinar el portaobjetos con suavidad por 2 minutos. No colocar en superficie caliente.
constantemente y observar por aglutinación.
5. Leer interpretar frente a una buena fuente de luz blanca antes de dos minutos,
interpretar frente a una buena fuente de luz blanca (lámpara lectora)
6. Anotar los resultados de acuerdo al siguiente formato.
Tomado de Dia-Med
3.4. NTERPRETACION
POSITIVO: Aglutinados de GR máximo después de 2 minutos de la mezcla.
NEGATIVO: Presencia de una suspensión uniforme de los Glóbulos rojos.
TABLA DE REGISTRO DE RESULTADOS
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Nombre Paciente: No. Identificación Muestra:
Prueba Directa en Lámina

Rechequeo
Anti-A Anti-B Anti A,B Control
Nombre Paciente:_________________________________________
Interpretación
Prueba Directa en Tubo Prueba Inversa
Anti-A Anti-B Anti-A,B Control Gr A1 Gr A2 Gr B Gr O Grupo ABO
Grupo: _____________ Fecha: ____________________ Firma: ________________
Lote de Reactivos. Anti-A:___________ Anti-B:____________ Anti-A,B:____________
Fecha de Expiración: ___________ ___________ ____________
PRACTICA No 2
IDENTIFICACION DE AGLUTININAS. PRUEBA SERICA, INVERSA O DE
SIMONIN-MICHON
3..1. REACTIVOS
Para esta prueba se debe disponer de hematíes A 1, A2, B y O, preferiblemente Rh o D

negativo suspendidos en una solución del 3-5% en solución salina fisiológico (las pruebas
con hematíes A2 pueden ser opcionales).
3.2.. MUESTRAS
1. Tomar una muestra de sangre total en tubo seco.
2. Esperar 10 minutos para que se retraiga el coagulo, centrifugar 7 minutos a 1.500
r.p.m.
3. Separar el suero en tubo perfectamente marcado.
3..3. PROCEDIMIENTO
1. Identificar apropiadamente cuatro tubos de vidrio de 12 x75 mm, por ejemplo: A 1, A2, B
y O.
Continuar como sigue:
15
G.R A 1 G.R A2 G.R B G.R O
2. Suero en estudio
2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas
3. Hematíes grupo sanguíneo
específico 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota
4. Mezclar, agitando el tubo. Si desea potenciar la aglutinación los tubos pueden ser
incubados durante 5 minutos a temperatura ambiente.
5. Centrifugar a 3.400 r.p.m. x 15 “o a 1.000 r.p.m. x 1 minuto
6. Observar el sobrenadante contra un fondo blanco bien iluminado para detectar
hemólisis.
7. Desprender el botón de células del fondo del tubo agitándolo suavemente; inclinarlo
hasta la posición horizontal y leerlo contra un fondo bien iluminado para apreciar
completamente los aglutinados dispersos. Emplear siempre ayuda visual.
8. Anotar inmediatamente tubo en mano los resultados de la aglutinación.
3..4. INTERPRETACION
POSITIVA: Aglutinados de G.R en grado variable. Graduarla de acuerdo a la Tabla #1.

NEGATIVA: Suspensión homogénea de G.R.
4. ANALISIS DE RESULTADOS
Después de observar aguzadamente como se evidencia la reacción de
hemoaglutinación positiva y diferenciarla de la reacción negativa, efectúe la
interpretación de las lecturas obtenidas en cada tubo o lámina teniendo en cuenta que
usted investiga los aglutinógenos presentes en los glóbulos rojos y las aglutininas
presentes en el suero. Haga el análisis correlacionado de lo efectuado en el
laboratorio.
Resultado: El grupo sanguíneo ABO corresponderá al resultado tanto de la prueba
directa o de detección de antigenos como a la de detección de aglutininas o
anticuerpos.
Será el producto del análisis comparativo y correlacionado de las dos pruebas y el
cual definirá el fenotipo ABO del paciente.
En caso de existir alguna discrepancia tendrá que resolverse antes de informar el
grupo del paciente.
16
Tomado Imágenes internet
5. AUTO EVALUACION
 Describa las debilidades y fortalezas personales que reconoció con la práctica.
6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Como fruto del análisis del trabajo realizado en el laboratorio consigne sus
conclusiones personales.
7. POST LABORATORIO
 Analice las dificultades en determinación de la tipificación sanguínea ABH debidas
a discrepancias que se pueden presentar en las pruebas efectuadas realizando
un cuadro sinóptico.
 ¿Cómo complementa las pruebas anteriores para la detección de los subgrupos
sanguíneos?. Elabore una tabla.
 Explique los métodos que se pueden utilizar para detectar antígenos A, B, H, y los
antígenos Lewis en secreciones y tejidos.
 Investigue la frecuencia en porcentaje de cada uno de los diferentes fenotipos de
los hematíes en el sistema A, B, O en Colombia consígnelo en un cuadro
comparativo o en gráficos con la frecuencia en dos países de diferentes
continentes.
 Investigue fundamento, procedimiento y lectura de las técnicas en microplaca y en
Gel para determinación del Sistema ABO.
Tomado de Internet. Grupos sanguíneos Bahía blanca Argentina.
17
8. INFORME
Consigne los resultados por cada uno de los estudiantes que conforman el grupo de
trabajo en el laboratorio y /o el de las muestras asignadas por el docente para estudio.
9. BIBLIOGRAFIA
Realice mínimo tres revisiones de diferentes autores
ANTICUERPOS ABH
1. OBJETIVOS
Determinar el comportamiento serológico de los anticuerpos relacionados al
sistema ABH, efectuando pruebas para detectar anticuerpos naturales y
anticuerpos inmunes y diferenciar macroscópicamente con ayuda de la lupa, las
variaciones cuantitativas de la reacción de la hemoaglutinación calificando los
diversos grados de reacción de acuerdo a la escala de valores estandarizadas
internacionalmente
2. PRE-LABORATORIO
La clasificación de los anticuerpos de grupo sanguíneo por su comportamiento
serológico se basa en los patrones de reacción Ag-Ac frecuentemente observada
con los anticuerpos ABH, mediante la reacción de la hemoaglutinación.
Los anticuerpos hemolíticos, en presencia de complemento, por lo general
aglutinan o sensibilizan las células. La cantidad del complemento del suero fresco
de un donante o paciente, suele ser suficiente para que se produzca una hemólisis
visible, se puede añadir complemento exógeno (suero humano AB) para aumentar
la sensibilidad. Las cantidades relativas de antígeno, anticuerpo y complemento
son críticas para producir un nivel adecuado de hemólisis.
Existe cierta correlación entre las propiedades físico-químicas y la actividad

serológica de la mayoría de anticuerpos de grupo sanguíneo; por lo tanto es
indispensable para analizar la variedad de reacciones tener en cuenta las
características de los anticuerpos y en este caso específicamente los relacionados
con el sistema ABH, por tanto se deben revisar los siguientes aspectos:
1. Condiciones de reacción de acuerdo a las propiedades físico-químicas de los

anticuerpos del sistema ABH
2. Condiciones de las muestras utilizadas para investigar y cuantificar anticuerpos ABH
3. Determine los elementos indispensables para que ocurra el mecanismo de lisis de
glóbulos rojos mediado por anticuerpos de grupo sanguíneo
3. PRACTICA No. 2
18
DETECCION SEMICUANTITATIVA DE ANTICUERPOS AGLUTINANTES.
TITULACION DE ISOAGLUTININAS NATURALES
3.1. MATERIALES
Tubos de 12 x 75 mm (12) , provistos de tapones de caucho o en su defecto de papel
adherente. Suero problema fresco (grupo sanguíneo A, B u O), GR A 1 y B. Pipeta Pasteur
(plásticas). Pipetas automáticas con sus respectivas puntas. Suero AB y/o albúmina
bovina. Solución salina fisiológica.
3.2. PROCEDIMIENTO
Colocar en la gradilla 10 tubos de 12 x 75 mm. (para cada titulación). Realizar nueve
diluciones en base dos a partir de ½ hasta 1/512.
1. De izquierda a derecha colocar: Suero fresco del paciente a titular: 0.1 ml en el
primer y segundo tubo.
2. Solución salina 0.85 % 0.1 ml desde el segundo tubo hasta el tubo 12; mezclar
bien el segundo tubo (que corresponde a dilución ½) y pasar 0.1 ml de la
mezcla al tercero (cambiar la punta y mezclar), y continuar así sucesivamente
hasta el último tubo (cambiando siempre la punta después de dispensar la
dilución anterior al siguiente tubo y antes de hacer la mezcla de la dilución).
Retirar 0.1 ml de la mezcla del último tubo (en otro tubo aparte debidamente
marcado) para posibles diluciones posteriores Cada tubo debe contener 0.1 ml
de diluciones dobles de suero, desde suero concentrado hasta dilución 1/512.
Nota: Si se va a titular un suero grupo O para anti A y anti-B, las diluciones

deben realizarse al doble, para separar 0.1 ml en un tubo adicional
debidamente marcado de cada una de las diluciones para su análisis.
Dibujo Elaborado por Andrea vallejo. 2006

3. Agregar GR suspensión al 5% 0.1 ml (2 gotas) a cada tubo (glóbulos rojos A, si
se están titulando anticuerpos anti-A, glóbulos rojos B, si se está titulando
anticuerpos anti-B).
4. Incubar 60' a 22 º C.
19
5. Centrifugar todos los tubos a 3.400 r.p.m. x 15”.
6. Observe los sobrenadantes para detectar hemólisis.
7. Desprenda los botones de células del fondo de los tubos, e incline los tubos en
posición horizontal para observar sobre un fondo bien iluminado, la
aglutinación.
8. Anote los resultados de cada reacción tubo en mano.
NOTA: Observe con detenimiento las variaciones en la calidad de la aglutinación
empezando por las diluciones más débiles (mayor título) y terminando con las más
concentradas (título más bajo). Califique la calidad de la reacción de acuerdo a la Tabla
#1.(Grados de reacciones de hemoaglutinación).
- Después de calificar las reacciones obtenidas en los tubos establezca el titulo de la
isoaglutinina natural A y/o B e informe el resultado de su prueba.
- Causas de error: El uso de material sucio o inadecuado induce a error.
- Enumere las causas de error inherentes a la muestra, reactivos y procedimientos.
5. AUTO EVALUACION
 Describa las debilidades y fortalezas que encontró en la práctica
 Qué aportó usted para el desarrollo de la práctica
7. POST LABORATORIO
 Determine la utilidad de la investigación y cuantificación de las aglutininas
naturales y los anticuerpos inmunes
 Cuál es la contribución de estas prueba en la determinación de donantes
peligrosos?
 Cómo se define el título de un anticuerpo?
8. INFORME
9. BIBLIOGRAFÍA
Realice mínimo tres revisiones bibliográficas.
20
PRACTICA No. 3
USO DE LECTINAS PARA DETERMINACIÓN DE SUBGRUPOS
Los extractos salinos de semillas reaccionan con carbohidratos específicos de las

membranas celulares y los convierten en reactivos muy útiles para tipificación
especialmente para los subgrupos del Sistema ABO. Es muy usada la lectina extraída
del Dolichos biflorus, ya que aglutina los glóbulos rojos A1 pero no los A2. La Lectina
Dolichus biflorus debe aglutinar los G.R A1 y A1B, pero no debe aglutinar las A2, A2B,
B y O.
El extracto del Ulex europaeus reacciona con el determinante H; lo aglutina en forma
proporcional a la cantidad de H presente (glóbulos rojos O> A2> B > A2B> A1> A1B)
Leer instrucciones del fabricante.
3..1. MATERIALES Y REACTIVOS

1. 10 Tubos de 12 x 75 mm.
2. Gradilla
3. Pipetas Pasteur o de transferencia
4. Solución Salina 0.85 %
5. Lectina Anti-A1
6. Lectina Anti- H
3..2. PROCEDIMIENTO:
1. Marcar un tubo por cada muestra de glóbulos rojos que se deseen probar, con el #
de identificación y la Lectina a realizar.
2. Lavar los glóbulos rojos a analizar durante 3 veces con S.S.F y suspender del 2 al
5 % en S.S.F,
Continuar con el siguiente procedimiento:
Muestra C Positivo C
Negativo
3. G.R. lavados y suspendidos del 2 al 5 1 gota ___ ___
% del paciente.
4. G.R positivos para la Lectina a evaluar. ___ 1 gota ___
5. G.R negativos para la Lectina a evaluar ___ ___ 1 gota
6. Lectina correspondiente 1gota 1 gota 1 gota
7. Centrifugar a 3.400 r.p.m x 15 segundas.
8. Leer y registrar con la lupa la presencia de aglutinación en la fuente de luz y
registrar los resultados tubo en mano.
La lectina Dolichus biflorus debe aglutinar los glóbulos rojos A1 y A1 B, no debe aglutinar
los A2, A2 B, B y O.
La Lectina Ullex europaeus , debe aglutinar los glóbulos rojos de acuerdo al siguiente
diagrama (Glóbulos rojos O > A2 > B > A2B > A 1> A1B).
21
CONTROLDE CALIDAD DE LOS REACTIVOS CELULARES
1. Aspecto:
Realizar una inspección visual a los reactivos celulares en busca de hemòlisis o turbidez.
Frecuencia: Diaria.
2. Reactividad y Especificidad
Reacciones netas con los antisueros seleccionados frente a hematíes conocidos.
Frecuencia: Con cada lote el primer y ùltimo dìa del periodo de caducidad.
Procedimiento:
Marcar nuevos tubos: tres marcados como cèlulas A, tres como cèlulas B y otros tres como cèlulas
O.
Adicionar:
Cèlulas A Cèlulas B Cèlulas O

Tubo 1 Anti- A Anti-A Anti- A
Tubo 2 Anti-B Anti-B Anti- B
Tubo 3 Anti- A, B Anti, A,B Anti, A,B
Mezclar cada tubo y centrifugar en seròfuga por 15-30 segundos.

Resuspender los botones celulares y observar aglutinación.
POSITIVO. Aglutinación y/o hemólisis

NEGATIVO: Una suspensión uniforme de glóbulos rojos.
Interpretación: Cada antisuero debe reaccionar específicamente solamente con las células que
poseen el antìgeno correspondiente y no deben reaccionar con células que posean antìgenos
diferentes.
CONTROL DE CALIDAD DE LOS ANTISUEROS

Células D Positivo Células D Negativo
Anti-D
Antisuero Control Rh
CONTROL DE CALIDAD DE LOS ANTISUEROS ABO Y Rh
1. Aspecto:
Ausencia de hemólisis, precipitado, partìculas o formación de Gel a la inspección visual.
Frecuencia: Diaria
2. Reactividad y Especificidad: Descrito en el segundo punto del control de calidad de reactivos

celulares.
3. Potencia
El antisuero no diluido debe dar una reacción de tres a cuatro cruces en tubo utilizando una
suspensión salina de hematíes a temperatura ambiente.
Frecuencia:
Cada nuevo lote.
22
Procedimiento.
1) Marcar Diez tubos asì: No.1. (1/ 1), No. 2. (½), No.3. (¼), No. 4(1/8), No. 5(1/16), No.6(1/32),
No. 7(1/64), No. 8(1/128). No. 9(1/256), No.10(1/512)
2 )Agregar en todos los tubos excepto en el primero 50 microlitros de soluciòn salina al 0,85 a 0,9
% en agua destilada.
3) Adicionar al primero y segundo tubo 50 microlitros de antisuero al que se le va a determinar la
potencia ( anti-A, anti, B, anti-D), cambiar la punta y mezclar el segundo tubo. Transferir 50
microlitros del segundo tubo al tercero y asì sucesivamente(cambiando la punta de la pipeta antes
de mezclar cada diluciòn) hasta el ùltimo tubo el No, 10
4) Adicionar cèlulas que contengan el antìgeno correspondiente al antisuero que se va a titular
( Cèlulas A1, A2, B, Cèlulas D positivas)
5) Mezclar cada tubo y centrifugar por 15-30 segundos en seròfuga.
6) Al terminar la centrifugciòn observar el sobrenadante para detectar la presencia de hemòlisis.
7) Resuspender los botones celulares y observar aglutinación.
8) Observar hasta la diluciòn en que se observe aglutinación.
POSITIVO: aglutinación y/o hemòlisis

NEGATIVO: Una suspensión uniforme de glóbulos rojos.
Interpretación:
Los tìtulos obtenidos a partir de diluciones seriadas de los antisueros deben ser de : 1/128 para
anti-A, anti-B y anti A,B usando cèlulas A1 y B y de 64 con cèlulas A2 y A2B.
Para los antisueros Rh:
El suero no diluìdo debe dar una reacción de 3 a 4 ++++ en la prueba designada para cada suero y
un título de 16 para anti-D, anti-C, anti-E, anti- CD, anti- DE y anti-CDE
4. Avidez:
Aglutinación macroscòpica con una suspensión de Hematíes al 50 % en una prueba en
portaobjetos, en un tiempo de 5 segundos para anti- A, anti_ B y anti-A,B con cèlulas A1 y B
Para Rh : Usar suspensión al 40 % en suero homòlogo en portalàmina a 40 ªC, la aglutinación

macroscòpica debe aparecer a los 30 segundo frente a hematíes del fenotipo adecuado
Frecuencia:
Cada nuevo lote
CONTROL DE CALIDAD DE LOS ANTISUEROS DEL SISTEMA ABO
REQUISITOS MUESTRAS DE FRECUENCIA CONTROL

MÌNIMOS PARA CONTROL S EJECUTAD
ELANALISIS O POR
Tipificación O, A, A1B, B y A2B
ABO
23
Tipificación Uso de cèlulas A y B
inversa ABO
Tipificación Rh Tipificaciòn por Una muestra Rh Cada serie de
(D) duplicado utilizando ( D ) positiva, y una pruebas o al
dos sueros muestra Rh(D) menos una vez
diferentes de anti-D, negativa al dìa siempre
utilización de la AGH que se usen los
para confirmaciòn mismos
del D dèbilen los reactivos
donantes Si se
utilizan dos anti- D
monoclonales debe
comprobarse que el
sistema reconozca
las variantes del D.
Fenotipo Rh Tipificación por Para un fenotipo Rh
duplicado utilizando completo: una
dos antisueros por muestra de cada uno
cada factor Rh de los tipos
Reactividad y Especificidad:
Reactivo Cèlulas A Células B Células O

Lote Lote Lote
F. Exp. F. Exp F. Exp
Anti- A
Anti-B
Anti-D
Potencia:
Anti- A 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/51
Lote No 2
F.Exp
Células
A1
Células
A2
Anti- B
Lote
No.
F.Exp
Células
B
Anti- D
Lote.No
F. Exp
Anti-D
24
Avidez:
Antisuero Cèlulas Tiempo de reacciòn
Anti- A A1
Anti- B B
Anti- A1B A1B
Anti- A2B A2B
Anti-D D
CONTROL DE CALIDAD EM LA DETECCIÒN DE ANTICUERPOS ERITROCITARIOS

TIPO DE REQUISITOS MÌNIMOS MUESTRAS DE FRECUENCIA CONT
PRUEBA DE LAS PRUEBAS CONTROL S ROL
EJECU
TADO
POR
a) pruebas uso de hematies a y b muestras de suero cada serie de
para anti-a y con una cantidad de pruebas
anti-b anti-a y anti-b
inmunes (en inmunes
donantes) respectivamente
superior e inferior al
tìtulo de aglutinaciòn
directa en salina para
anti a y anti b
b9 pruebas uso de la prueba muestras de suero ocasional por
para mediante con aloanticuerpos parte del
anticuerpos la cual se detectan los eritrocitarios superisor del
irregulares en anticuerpos con conocidos laboratorio y
donantes importancia clìnica y que participaciòn
reaccionan fuertemente en ejercicios
externos de
comprobaciòn
c) pruebas de uso por lo menos de: lo mismo que para (b) lo mismo que
anticuerpos -una prueba salina a para (b)
irregulares( e 37ºc
n pacientes) - un test enzimàtico
-la prueba agh indirecta
-o una prueba
manualoautomatizada
con sensibilidad
equivalente
d) pruebas de uso por lo menos de: lo mismo que (c) lo mismo que
compatibilidd -una prueba salina a (c)
d 37ºc
-laprueba antiglobulina
indirecta
-o una prueba manualo
automatizada con
sensibilidad equivalente
25
PRACTICA No. 4
TIPIFICACION SANGUINEA Rh
1. OBJETIVO
Determinar la clasificación sanguínea, en relación al sistema Rh, segundo Sistema
sanguíneo en importancia después del ABO, efectuando pruebas que identifiquen los
principales antígenos del sistema que se encuentran presentes en una muestra de
sangre dada.
La práctica incluye la Determinación del Antígeno D presente en los Glóbulos rojos por
diferentes métodos, la investigación de los cinco principales antígenos del Sistema
exceptuando el D, como son: C, c, E, e. Reconocer el interés e importancia clínica de su
determinación. Identificar las características de los antígenos del sistema y los diferentes
reactivos y métodos existentes para la determinación de los fenotipos relacionados.
Identificar los Genotipos más probables de acuerdo a los resultados de la fenotipificación
realizada.
Analizar las opciones de transfusión para los diferentes componentes sanguíneos de
acuerdo al Rh de los receptores.
2. INTRODUCCIÓN
El sistema del grupo sanguíneo Rhesus es de gran importancia en biología humana. Es el
más importante después del Sistema ABO. Su conocimiento permitió lograr transfusiones
exitosas después de la segunda guerra mundial. Su descubrimiento permitió comprender
el mecanismo de la enfermedad hemolítica del recién nacido por inmunización feto -
materna. Dado que la mayor parte de la población es Rh positivo, es indispensable que
en el laboratorio de Inmunohematología se utilicen los procedimientos adecuados para
establecer la correcta clasificación para el antígeno D, incluyendo las variantes débiles y
el fenotipo Rh, para lograr disminuir la sensibilización eritrocitaria por transfusión o
embarazo asociada con este sistema.
Los antígenos Rhesus fueron identificados por anticuerpos descubiertos en el suero de

sujetos transfundidos o mujeres embarazadas. Estos anticuerpos en su mayoría
anticuerpos inmunes, que pertenecen a la IgG y son incapaces de aglutinar in-vitro los
hematíes portadores del antígeno correspondiente, se les denominó anticuerpos
bloqueadores o incompletos.
Por esta razón se utilizan corrientemente técnicas de aglutinación “in vitro” para
comprobar la fijación del anticuerpo al antígeno específico mediante modificación del
medio de suspensión de los hematíes mediante macromoléculas o altas concentraciones
de proteínas (albúmina bovina) o utilización de hematíes tratados con enzimas; bromelina,
papaina, ficina.
El antígeno D es el más importante en transfusión e incompatibilidad feto-materna, dada

su gran inmunogenicidad, los restantes antígenos del Sistema pueden también ser causa
de inmunización.
26
La rutina en el laboratorio de Inmunohematología incluye la determinación del antígeno D
y la detección del antígeno D débil, confirmación del antígeno D negativo en todos
aquellos individuos susceptibles de recibir transfusiones repetidas o en posibles futuras
embarazadas a quienes también deben identificárseles los 5 antígenos principales del
sistema Rhesus.
Para la determinación del antígeno D se utilizan variedades de antisueros cada una de

ellas tiene modificaciones o indicaciones específicas para sus uso, para lo pertinente se
revisarán algunos aspectos de comportamiento y actividad de dichos antisueros y la
utilidad práctica de cada uno de ellos.
3. PRE- LABORATORIO
1. Teniendo en cuenta las variedades de antisueros anti-D que existen comercialmente;
explique comparativamente las diferencias existentes y sus diversas aplicaciones.
2. En relación a la variante débil del D analice el comportamiento variable frente a los
anticuerpos anti-D (Rh).
3. Destaque las condiciones de reacción indispensables para detectar antígenos Rh.
4. Explique porque se deben emplear en las pruebas de tipificación Rh controles con
sueros inertes.
5. Que tipo de antisuero debe de usarse en la determinación del antígeno D en caso de
pruebas en tubo con resultado positivo en el control de prueba.
6. Revise y analice a fondo las expresiones D débil y D parcial y explique en un cuadro
las diferencias.
7. Investigue los diferentes tipos de suero de de Coombs existente y los métodos de
obtención.
8. Revise el fundamento de las pruebas de Coombs, su aplicación para la detección de
antígenos débiles y la aplicación en la determinación de la variante D débil. Explique el
fundamento de la prueba.
4. LABORATORIO
DETERMINACION DEL FACTOR Rh(D)
a. Método en Lámina
4.1. MATERIALES Y REACTIVOS

Láminas portaobjetos, palillos, sangre total. suero anti-D y reactivo control Rh,
lámpara con visor de aglutinación, lupa, pipetas Pasteur.
4.2. PROCEDIMIENTO
Leer siempre las instrucciones del fabricante sobre el uso de los reactivos para
pruebas en tubo o lámina,
Colocar sobre una lámina de vidrio previamente calentada a 40C, una gota de suero anti-
D, en otra lámina una gota de control Rh o en su defecto albúmina bovina al 22%,
agregar a cada lámina una gota de sangre ó una suspensión de hematíes en su propio
27
suero al 50%. Mezclar circularmente y extender sobre una superficie de 22 mm x 40 mm
utilizando un palillo de madera, dentro de los 2 minutos siguientes oscilando la lámina
observar presencia o ausencia de aglutinación
Nota: Siempre debe usarse un control con el fin de que GR sensibilizados con anticuerpos de tipo
IgG(incompletos) o procedentes de pacientes cuyo suero posea globulinas sericas anormales, anticuerpos
autoinmunes, aglutininas frías o proteínas que causen rouleaux, y que pueden agregarse espontáneamente
sean detectados.
4.3 INTERPRETACION
POSITIVO: Aglutinación de los glóbulos rojos.
NEGATIVO: Suspensión uniforme de glóbulos rojos.
Observaciones:
Si la preparación de glóbulos rojos en el tubo control presenta aglutinación; la prueba no
se logra interpretar (Esto puede suceder con antisueros de alta concentración proteica
caso en el cual se usa un antisuero salino)
Se debe tener cuidado en no leer pasado el tiempo indicado ya que la desecación en los
bordes de la preparación se puede confundir con aglutinación.
b. Método En Tubo
4.1 MATERIALES
Tubos de 12 x 75 mm, suspensión de glóbulos rojos 3 - 5%, baño serológico, anti-D,
reactivo control Rh, Pipetas Pasteur.
4.2 PROCEDIMIENTO
1. Lavar los glóbulos rojos del paciente con S. S 0.85 % y preparar una suspensión de
glóbulos rojos a examinar al 3 - 5 % en solución salina fisiológica.
2. Identificar apropiadamente dos tubos de 12 x 75 mm (para la prueba y su control) y el
número de identificación de la muestra.
Anti-D Control-Rh
3. Dispensar 1 gota o 50 ul ____
4. Agregar ____ 1 gota o 50 ul
5. GR en estudio lavados y 1 gota o 50 ul 1 gota o 50 ul
suspendidos del 2 al 5 %
6. Mezclar y Centrifugar a 3.400 r.p.m. (serófuga) por 15”, o a 1.000 r.p.m. por 1
minuto.
7 .Resuspender suavemente el botón de las células del fondo del tubo y leer la
aglutinación en cruces
8. Si no se observa aglutinación incubar 15 a 30 minutos a 37 C.
9 .Centrifugar, leer y registrar.
28
4.3 INTERPRETACION
POSITIVO. Aglutinación superior a 2 + antes o después de incubación.
NEGATIVO. Suspensión uniforme de G.R o aglutinación débil o dudosa. En este caso
continuar con procedimiento para variante débil.
PRACTICA No. 5
DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO Rh
3.1 MATERIALES Y REACTIVOS

6 Tubos de 12 x 75 mm, Baño de María, Serófuga, Lámpara, Lupa.
Antisueros: Anti- C, anti – E, Anti- c, Anti- e.
Solución salina 0.85 %.
3.2 PROCEDIMIENTO
1. Lavar los glóbulos rojos 3 o 4 veces y suspender del 2 al 5 %.

2. Marcar un tubo por cada antígeno a determinar, con la letra correspondiente al
antígeno y el # de identificación de la muestra.
4, INTERPRETACIÓN
POSITIVO: Se observa aglutinación en grado variable.

NEGATIVO: Suspensión homogénea de los glóbulos rojos
5. POS LABORATORIO
1. Para la tipificación Rh se pueden emplear antisueros monovalentes y polivalentes,
específicamente determine la importancia de utilizar sueros anti-CD, y anti-CDE.
2. ¿Considera usted que en un paciente D negativo que va a recibir una transfusión
sanguínea es importante realizar el fenotipo Rh y porque?
3. ¿Por qué se debe determinar el fenotipo del sistema Rh en todas las personas Rh
D: Negativo?
4. Revise las principales nomenclaturas internacionales para identificar los diferentes
fenotipos del sistema Rh
PRACTICA No. 6
DETERMINACION DE LA EXPRESIÓN DÉBIL DEL ANTIGENO D.

Tubos de 12 x 75 mm, Antisuero anti-D (Rh), suero de Coombs, Albúmina bovina al 30%
control de Coombs.
3.2. PROCEDIMIENTO
29
1. Lavar los glóbulos rojos del paciente con S. S 0.85 % y preparar una suspensión de
glóbulos rojos a examinar al 3 - 5 % en solución salina fisiológica.
2. Identificar apropiadamente dos tubos de 12 x 75 mm (para la prueba y su control) y el
número de identificación de la muestra.
Anti-D Control-Rh
3. Dispensar 1 gota ____
4. Agregar ____ 1 gota
5. GR en estudio lavados y 1 gota 1 gota
6. Incubar a 37°C por 30 minutos
7. Centrifugar y leer. Si el resultado es positivo no continuar. Si es Negativo o dudoso
continuar con el siguiente paso.
8. Lavar 3 ó 4 veces en solución salina
6. Agregar suero de Coombs 1 a 2 gotas 1 a 2 gotas
poliespecífico
7. Centrifugar a 3.400 r.p.m. x 15”
8. Leer por aglutinación
9. Si es negativa la prueba añadir solo una gota de control de Coombs. Mezclar,
centrifugar, leer por aglutinación.
4. INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO

1. La presencia de aglutinación en el tubo con anti- D, pero no en el de Control,
constituye un resultado positivo. La sangre debe clasificarse como D positivo ya
que tiene una expresión Débil del Antígeno D.
2. La ausencia de aglutinación en el tubo con anti- D constituye un resultado negativo
e indica que las células no expresan D y deben clasificarse como D negativo.
30
6. AUTO EVALUACIÓN
8. POST LABORATORIO
 ¿Cómo se rotulan las bolsas de sangre obtenidas de donantes con prueba de
expresión Débil del Ag D: positiva?
 Revisar los criterios de transfusión en donantes y receptores que presentan una
expresión débil del Ag D Positiva.
 Analice la importancia de determinar la presencia de un antigeno D débil en una
materna y explique?.
9. INFORME
Relacione los resultados obtenidos por cada uno de los integrantes del equipo del
laboratorio
10. BIBLIOGRAFIA Tres revisiones
PRACTICA No. 7
DETERMINACIÓN DE FENOTIPO EXTENDIDO
1. OBJETIVOS
Determinar la presencia de los antígenos eritrocitarios más importantes de los
Sistemas de Grupos sanguíneos principales.
2. PRE LABORATORIO
1. Defina fenotipo eritrocitario.

2. Investigue tipo de muesrtra que se emplea para determinación del fenotipo
eritrocitario y condiciones de las mismas.
3. Revise la frecuencia de los fenotipos en raza blanca y raza negra para los
siguientes Sistemas:
Kell ( K+ k-), (K-k+), (K+k+), (K-k-).
Duffy (Fya + Fyb-), (Fya – Fyb+), (Fya + Fyb+), (Fya- Fyb-).
Kidd (Fya + Fyb-), (Fya – Fyb+), (Fya + Fyb+), (Fya- Fyb-).
MNSsU: Principales combinaciones
Lewis (Lea+Leb-), (Lea-Leb+), (Lea+Leb+), (Lea-Leb-).
Lutheran (Lua+Lub-), (Lua-Leb+), (Lua+Lub+), (Lua-Lub-).
31
4.Revisar el fundamento de la prueba de antiglobulina indirecta aplicada a la
determinación de antígenos eritrocitarios.
3. LABORATORIO

 Tubos de 12 x 75 mm de fondo redondo.
 Suero de Coombs poliespecífico (Anti- IgG y anti- complemento)
 Solución salina.
 Muestra de sangre anticoagulada del paciente.
3.2. PROCEDIMIENTO PARA DETECCIÓN DE FENOTIPOS EN FASE DE

ANTIGLOBULINA
Casa comercial Sanquin .Reactivo para raros grupos sanguíneos. Método AGT
(k, Kpa, Kpb, Fya, Fyb, Lua. Lub, s, Wra)
Muestra Controles
1. Agregar reactivo policlonal correspondiente. Leer 1 gota 1 gota

instrucciones del fabricante.
2. Preparar una suspensión de G.R del paciente del 3 1 gota 1 gota

al 5 % previamente lavados en S.S al 0.85 %
Mezclar suavemente
Incubar de 15 a 20 minutos a 37o C
3. Lavar las células en solución salina tres o cuatro veces. Centrifugar y decantar
muy bien después de cada lavada. Eliminar completamente el sobrenadante final.
4.. Suero de Coombs (una o dos gotas, según Según ________

recomendación del fabricante). fabricante
5. Mezclar. Centrifugar (30" en serófuga a 3.400 r.p.m)
6. Leer por aglutinación y registrar.
7. Si no se observa aglutinación en los tubos añadir 1 gota 1 gota

control de Coombs.
8. Centrifugar. Examinar por aglutinación, si la prueba fue realizada correctamente

debe dar 2+ a 3+ de aglutinación.*
4. INTERPRETACION
32
POSITIVA: Aglutinación. Indica la presencia del antígeno correspondiente.( Se debe
reportar la afinidad de la reacción. (Escala de Cruces)
NEGATIVA: Suspensiones homogéneas. Indica la ausencia del antígeno
correspondiente.
Nota: Probar siempre los resultados negativos con células control de Coombs Para
validar la prueba debe existir aglutinación al agregar las células, centrifugar y leer,
5. LIMITACIONES DE LA PRUEBA
Resultados positivos inesperados a causa de: poliaglutinación, autoaglutinación,

reacción de aglutinación mixta.
Resultados negativos o débiles a causa de antígenos débiles, reacción de
aglutinación mixta, actividad reducida del reactivo.
Células rojas con PAD Positiva producen un ressultado Falso positivo.
3.2. PROCEDIMIENTO PARA DETECCIÓN DE FENOTIPOS POR AGLUTINACIÓN EN

PRUEBA DIRECTA
Casa comercial Sanquin (M, N) IgG y (S, P1, Lea, Leb) IgM monoclonales
Muestra Controles
1. Agregar el reactivo monoclonal (IgM) 1 gota 1 gota

correspondiente. Leer instrucciones del fabricante.
2. Preparar una suspensión de G.R del paciente del 2 1 gota 1 gota

Mezclar suavemente
Incubar de 5 a 15 a temperatura ambiente( 18 a 25 oC)
3. Centrifugar (30" en serófuga a 3.400 r.p.m)
4. INTERPRETACION

reportar la afinidad de la reacción. (Escala deCruces)
correspondiente.
33
Resultados positivos inesperados a causa de: pseduiaglutinación, autoaglutinación,
reacción de aglutinación mixta, presencia de gelatina de Wharton en las células de
cordón umbilical.
Células rojas con PAD Positiva pueden producir un ressultado Falso positivo. Para
estos casos se recomienda usar un control monoclonal inerte.
3.3 DETERMINACIÓN DE FENOTIPOS JKa y JKb (IgM) con antisuero Monoclonal.

Casa comercial Sanquin
Muestra Controles

2. Preparar una suspensión de G.R del paciente del 3 50 ul 50 ul

Mezclar suavemente
Incubar de 5 a 15 minutos a temperatura ambiente( 37oC)
4. INTERPRETACION

reportar la afinidad de la reacción. (Escala deCruces)
correspondiente.
Resultados positivos inesperados a causa de: pseudoaglutinación, autoaglutinación,

reacción de aglutinación mixta, presencia de gelatina de Wharton en las células de
cordón umbilical.
Células rojas con PAD Positiva pueden producir un resultado Falso positivo. Para
estos casos se recomienda usar un control monoclonal inerte.
3.4. PROCEDIMIENTO PARA DETERMINACIÓN DE FENOTIPOS Cw, Jka, Jkb, M y

anti N.
34
Casa Comercial Diagast ( Reactivos con anticuerpos monoclonales de tipo IgM obtenidos a partir de
sobrenadantes de cultivos in vitro de hibridomas de origen humano)
Muestra Controles

2. En tubo plástico preparar una suspensión al 5 % 50 ul 50 ul

en S.S isotonica de los G.R sin lavar del paciente.
Mezclar suavemente
4. INTERPRETACION
POSITIVA: Aglutinación. Indica la presencia del antígeno correspondiente.

NEGATIVA: Suspensiones homogéneas, indican la ausencia del antígeno
correspondiente.
3.4.PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE FENOTIPO Lea

Diagast
Muestra Controles


3. Agregar PALERM( PAPAINA) 1 gota 1 gota
Incubar los tubos 5 minutos entre 18 y 25 oC
4. Mezclar por agitación suave y centrifugar (30" en serófuga a 3400 r.p.m)
4. Leer por aglutinación inmediatamente y registrar.
4. INTERPRETACION

correspondiente.
35
3.5. ROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE FENOTIPO Leb
Diagast
Muestra Controles


3. incubar los tubos 15 minutos entre 18 y 25 oC
4. Mezclar por agitación suave y centrifugar (30" en serófuga a 3400 r.p.m)
4. INTERPRETACION

correspondiente.
3.6. ROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE FENOTIPO P1. Diagast
Muestra Controles
1. Agregar el reactivo monoclonal correspondiente. 1 gota 1 gota

Leer instrucciones del fabricante.

3. Mezclar por agitación suave y centrifugar (30" en serófuga ó a 3.400 r.p.m).
5. Si no se observa aglutinación, incubar los tubos de 2 a 8º C por 30´.
6. Mezclar por agitación suave y centrifugar (30" en serófuga ó a 1.500 r.p.m).
4. INTERPRETACION

correspondiente.
36
6. AUTO EVALUACION

8. POST LABORATORIO
1. Cuales son las aplicaciones en la clínica del fenotipaje extendido.

2. De acuerdo a los resultados obtenidos, compare su fenotipo con los conocidos
para cada una de las razas.
3. Determine cuales son los principales antígenos teniendo en cuenta su
naturaleza química y su capacidad para que los anticuerpos correspondientes
se encuentren involucrados en E.H.R.N y R.T inmunes.
9. INFORME
Presente los resultados obtenidos por el grupo de trabajo en el laboratorio
10. BIBLIOGRAFIA
Tres revisiones diferentes
PRACTICA No. 8
PRUEBA DE COOMBS DIRECTA (D.A.T.)
1. OBJETIVOS
Demostrar glóbulos rojos sensibilizados in-vivo al poner en evidencia globulinas
anticuerpos que se han adherido a los eritrocitos in-vivo mediante el empleo de la
antiglobulina humana.
Es útil en anemias hemolíticas autoinmunes, enfermedad hemolítica del recién
nacido, hemólisis inducida por drogas, reacciones aloinmunes contra eritrocitos
recientemente transfundidos.
1. PRE LABORATORIO
1. Defina un GR sensibilizado
2. Analice los diferentes grados de sensibilización de un GR y las concentraciones o
proporciones de anticuerpos que pueden evidenciarse con el suero Coombs.
3. Referente al suero de Coombs; detalle el procedimiento de obtención y preparación del
suero de Coombs.
4. Describa las variedades del suero de Coombs y establezca las diferencias entre dichas
variedades.
5. Analice las aplicaciones y utilidad del suero de Coombs
6. Determine las variedades y condiciones de las muestras que se emplean.
7. Fundamentos de la prueba de Coombs directo.
8. Función del suero de Coombs y la reacción de hemoaglutinación.
37
3. LABORATORIO

 Tubos de 12 x 75 mm
 Suero de Coombs poliespecífico (Anti- IgG y anti- complemento)
 Solución salina.
 Muestra de sangre anticoagulada del paciente.
 Albúmina bovina al 6 % en suspensión que se prepara diluyendo albúmina bovina al
22 % o 30 % en solución salina.
3.2. PROCEDIMIENTO
Muestra Control
1. Suspensión de G.R del paciente del 2 al 5 % 1 gota 1 gota
2. Lavar las células en solución salina tres o cuatro veces. Centrifugar y decantar
muy bien después de cada lavada. Eliminar completamente el sobrenadante final.
3. Albúmina bovina al 6 % 2 gotas
4.. Suero de Coombs (una o dos gotas, según Según ________

recomendación del fabricante). fabricante
5. Mezclar. Centrifugar (30" en serófuga ó en centrifuga a 1.500 r.p.m. por 1-2

minutos)
6. Leer por aglutinación o hemólisis y registrar.
7. Si no se observa aglutinación en el tubo Muestra 1 gota

añadir control de Coombs.
8. Centrifugar. Examinar por aglutinación, si la prueba fue realizada correctamente

debe dar 2+ a 3+ de aglutinación.*
* Si el Coombs es poliespecifico o C3d incubar 5 minutos a Tº ambiente, centrifugar y leer.
4. INTERPRETACION
PAD POSITIVA: Aglutinación. Se debe reportar el grado de aglutinación (Escala de

Cruces)
PAD NEGATIVA: Suspensiones homogéneas
Probar siempre los resultados negativos con células control de Coombs Para validar
la prueba debe existir aglutinación al agregar las células, centrifugar y leer,
38
5. ANALISIS Y RESULTADOS
Analice detalladamente el papel de control de Coombs que se utilizó en la prueba.
Describa otras formas de controlar las pruebas. Identifique las causas de error
6. AUTO EVALUACION
8. POST LABORATORIO
4. Determine las causas de una prueba antiglobulina Directa Positiva.

5. ¿Cual es el resultado de las pruebas De Coombs Directo en las E.H.R.N por
ABO y en la E.H.R.N por Rh.
6. ¿En qué consiste la prueba de Coombs Fraccionado? y explique cual es su
valor diagnóstico.
7. Explique si es posible encontrar PAD Negativo en pacientes con AHAI y
porqué?
9. INFORME
Presente los resultados obtenidos por el grupo de trabajo en el laboratorio
10. BIBLIOGRAFIA
PRACTICA No. 9
PRUEBA DE COOMBS INDIRECTO (I.A.T. o PAI o RAI)
1. OBJETIVOS
Detectar en el suero del paciente la presencia de Anticuerpos incompletos de diversos
grupos sanguíneos diferentes a los del Sistema ABO, incapaces de aglutinar
directamente los hematíes pero capaces de adherirse (sensibilizar) a los GR in- vivo o
in-vitro, y posteriormente demostrarse con la adición del suero de Coombs.
Está prueba tiene gran utilidad en la detección e identificación de anticuerpos
irregulares, agrupación de la sangre y pruebas de compatibilidad.
2. PRE LABORATORIO
SENSIBILIZACION IN-VITRO
En un primer tiempo se ponen los hematíes lavados que poseen el antígeno
correspondiente a los anticuerpos a investigar con el suero del paciente, Si el suero
contiene anticuerpos irregulares estos se fijaran sobre los hematíes que poseen el
39
antígeno correspondiente. Los hematíes sensibilizados al adicionar el suero de
Coombs se evidenciarán mediante aglutinación.
Revise:
1. Clases de anticuerpos que se detectan con la prueba del Coombs Indirecto.
2. ¿En que casos se debe utilizar la prueba de Coombs a diferentes temperaturas?
3. ¿Cuál es el valor diagnóstico de la prueba I.A.T?
3. LABORATORIO
- Tubos de 12 x 75 mm.
- Suero de Coombs de amplio espectro.
- Solución salina fisiológica.
- Suero del paciente fresco.
- Glóbulos rojos reactivos o Glóbulos rojos O Positivo
- Albúmina bovina al 6% o Solución de baja fuerza iónica.
- Pipetas de transferencia
3.2. PROCEDIMIENTO
Se emplean glóbulos rojos comerciales existen en diferentes presentaciones, tres

células, dos células o una célula. La presentación en varias células permite tener
mayor número de células con antígenos de expresión homocigota lo cual facilita la
detección de anticuerpos.
Las células deben ser del grupo 0 y expresar los antígenos de grupos sanguíneos
principales como son: D, C, E, c, e, f, Cw, K, k, Fya, Fyb, Jka, Jkb, Xg, Lea, Le, S, s,
M, N, P, Lua.
Estos dos grupos de glóbulos rojos son provenientes de dos donantes con los
siguientes fenotipos de Rh: Rh1 (Dce) y Rh2 (DcE) y vienen suspendidos al 3% en una
solución de Alsevers modificada.
Únicamente en caso de investigación de anticuerpos Rho D se pueden utilizar en lugar

de glóbulos rojos comerciales; glóbulos rojos O Rho D positivos lavados tres veces y
suspendidos del 2 al 5 % en S.S. fisiológica.
El suero del paciente a investigar debe ser fresco, nomás de 24 horas después de la
recolección. Debe estar libre de hemólisis y separado prontamente después de
recolectado. Hasta el momento del análisis congelar para preservar el complemento.
En toda investigación de anticuerpos irregulares es importante la Historia del paciente

como:
1. Historia de embarazos y abortos.
2. Transfusiones anteriores.
40
1- Marcar el número de tubos de acuerdo a las células a usar. Se debe emplear un
tubo por célula y un autocontrol.
Continuar el procedimiento de aciuerdo al cuadro que sigue:
I II Autocontrol
2. Suero del paciente 2 gotas 2 gotas 2 gotas
3. G.R reactivos del 2 al 5 % 1 gota 1 gota --------
4. G.R del paciente lavados y -------- ------- 1 gota
5. Centrifugar, leer y registrar.
6. albúmina bovina o solución 2 gotas 2 gotas 2 gotas
de baja fuerza iónica
7. Incubar a 37C por 30´ en el caso de usar albúmina y 10 a 15 minutos para solución
de baja fuerza iónica.).
8. Centrifugar de 15 a 45 segundos.
9. Leer*
10. Lavar tres a cuatro veces con solución salina fisiológica.
11.Decantar perfectamente los tubos.
12. Suero poliespecífico de 2 gotas 2 gotas 2 gotas

Coombs
13. Centrifugar a 3.400 r.p.m. x 15 “o a 1.000 r.p.m. x 1 minuto
14. Leer desprendiendo el botón de células del fondo del tubo observando
la aglutinación por cruces y registrarlo.
Nota: A los tubos con resultado negativo agregar 1 gota de Control de

Coombs, centrifugar y leer. Debe producirse una aglutinación de 2 + a 3+
para validar la prueba,
* Observar la presencia de hemólisis en el sobrenadante, resuspender sobre la

lámpara y usando la lupa para observar la aglutinación. Registrar los resultados. Si
hay aglutinación graduarla según escala.
Analice detalladamente el papel de control de Coombs que se utilizó en la prueba.
Describa otras formas de controlar las pruebas. Identifique las causas de error
5. AUTO EVALUACION
Describa las debilidades y fortalezas que encontró en la práctica
- Siempre que tengamos un resultado positivo se debe identificar el anticuerpo.
- El suero debe ser congelado para investigaciones posteriores.
41
- En caso de que el paciente sea una mujer embarazada se debe realizar la cuantificación
del anticuerpo.
7. POST LABORATORIO
 Identifique los resultados falsos positivos y falsos negativos de las pruebas de
Coombs.
 ¿Cuál es el valor Crítico de las pruebas de Coombs indirecto cuantitativo en la
Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido?
 ¿En que se diferencia una prueba de Coombs Indirecto y un Rastreo de Anticuerpos
Irregulares (RAI)
8. INFORME
Presente los resultados obtenidos por todos los integrantes del equipo de laboratorio
9. BIBLIOGRAFIA
PRACTICA No.10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS
1. OBJETIVO
Determinar la especificidad y el significado clínico de los anticuerpos irregulares
presentes en una muestra de suero.
2. PRE- LABORATORIO
La identificación de anticuerpos se realiza utilizando un panel de células obtenidas de
11 donantes envasadas individualmente y organizadas de tal forma que la
combinación de reacciones positivas o negativas puedan dar perfectamente clara la
identificación del anticuerpo problema. Cada uno de estos donantes ha sido
fenotipado para los principales antígenos de los más importantes grupos sanguíneos
menores y su fenotipo viene especificado en la tabla anexa al reactivo.
El principio de esta prueba, es el de hacer reaccionar el suero del paciente a

investigar, con cada una de las células a TC ambiente, a 37C y Coombs, esto
dará mayor seguridad de identificación.
Está identificación tiene gran valor en pacientes que van a ser transfundidos y tienen
un rastreo de anticuerpos positivo, maternas con rastreo de anticuerpo positivo y
pacientes con enfermedad hemolítica autoinmune.
42
3. LABORATORIO
3.1. MATERIALES
12 tubos de 10 x 75 mm, pipetas de Pasteur, serófuga, calentador seco o baño

María, albúmina bovina o solución de baja fuerza iónica, solución salina, control de
Coombs, suero del paciente en congelación, panel de células,.
3.2 TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS

1. Marcar los tubos de 1 a 11 el último es auto control
2. Colocar dos gotas de suero para investigar en cada uno
3. Colocar en cada uno una gota de la célula correspondiente, el auto control (tubo No.
12) lleva células del propio paciente, lavadas y suspendidas al 3%
4. Dejar los tubos a T ambiente 10', antes de centrifugar
5. Centrifugar siguiendo las instrucciones dadas en las investigaciones de anticuerpos
6. Observar microscópicamente por aglutinación o hemólisis. Anotar los resultados en
hojas especiales que vienen con el panel (Solución Salina a T ambiente)
7. Agregar dos gotas de albúmina bovina o LISS en cada tubo. Centrifugar, leer y anotar
8. Incubar todos los tubos a 37C x 15 a 30' si se usa albúmina o 10 a 15’ si se usa LISS.
9. Centrifugar a 3.400 r.p.m. (serófuga) 30", leer y anotar resultados.
10. Lavar tres o cuatro veces. Agregar 1-2 gotas (depende del fabricante) de suero de
Coombs a todos los tubos.
11. Centrifugar, leer y anotar. Determinar mediante la exclusión de posibilidades, el
anticuerpo presente.
12. Confirmar mediante tipificación para el antígeno correspondiente, que el paciente es
negativo para el antígeno.
NOTA:
En algunos casos, no pueden encontrarse la especificidad del anticuerpo
usando este panel, pero las casas comerciales están en capacidad de
suministrar otro panel (panel raro) para la identificación de estos anticuerpos
menos comunes
Existe además, la posibilidad de encontrar múltiples anticuerpos en un solo

paciente, cuando esto se presenta, hay necesidad a veces de utilizar células
adicionales.
5. AUTO EVALUACION
43
7. POST LABORATORIO
Defina:
 Anticuerpo clínicamente significativo.
 Qué valor tiene esta prueba de identificación de Acs irregulares en estudio prenatales?
 Explique la importancia de identificar el anticuerpo irregular presente en el suero de
un paciente que va a ser transfundido.
 Después de realizar la Identificación del o los anticuerpos irregulares por medio del
panel de células como podría corroborar su especificidad.
8. INFORME
BIBLIOGRAFÍA Tres revisiones diferentes
PRACTICA No. 11
TITULACIÓN DE ANTICUERPOS PARA LA DETECCIÓN PRECOZ DE LA E.H.R.N
1. INTRODUCCIÓN
La titulación es un método semicuantitativo para la determinación de la concentración de
anticuerpos. Se preparan diluciones seriadas de suero y se evalúa la actividad de los
anticuerpos. El título es la inversa de la dilución más alta de plasma o suero que exhibe
una reacción de 1 +.Ej: Dilución de 1 en 128, título = 128.
Durante el embarazo, la titulación de anticuerpos se realiza para identificar las mujeres
con niveles significativos de anticuerpos que podrían llevar a enfermedad hemolítica del
recién nacido (E.H.R.N) y, en el caso de los anticuerpos en títulos bajos, establecer un
valor basal para compararlos con los de titulaciones posteriores.
2. OBJETIVO
Determinar la concentración de anticuerpos de importancia clínica en muestras de suero
con el fin de que sirvan para el pronóstico clínico de la posible E.H.R.N, siendo de gran
ayuda para el seguimiento y manejo de la misma desde la etapa gestacional.
3. PRE LABORATORIO
Los anticuerpos presentes en una muestra de suero fresca, se encuentran en
concentraciones desconocidas, por lo cual se requiere de la realización de técnicas que
incluyen la dilución del suero y posterior unión con los G. R reactivos y posterior uso de la
antiglobulina humana, para encontrar el título máximo en que es capaz de aglutinarlos. De
igual manera es importante conocer la potencia (score) del anticuerpo para lo cual está
prueba es de gran valor.
Responda las siguientes preguntas:

1. Cuales serian los criterios para seleccionar las células que se deben usar para la
cuantificación de anticuerpos irregulares?
2. Que tipo de anticuerpos presentes en una madre gestante tendrían importancia
clínica para ser cuantificados?
44
4. LABORATORIO
4.1 REACTIVOS
1. Anti- inmunoglobulina humana.

2 Albúmina bovina diluida ( al 6 % p / v); opcional albúmina bovina al 22 %(p / v), 1 ml;
solución salina isotónica, 3 ml.
3 Pipetas: de 0,1- 0,5 ml, con extremos descartables.
4 Glóbulos rojos (GR): GR reactivos del grupo O, con doble dosis de los antígenos
pertinentes ( para titulación de anti- D, usar GR R2R2); lavar tres veces y suspender al
2 % en solución salina isotónica.
5. Solución salina. ( Nota: si se desea las diluciones pueden realizarse con albúmina.)
4.2 MUESTRAS
Suero para titulación (con potenciales anticuerpos irregulares significativos, contra
antígenos eritrocitarios), 1ml. Si es posible, analizar la muestra actual en paralelo con el
suero previo más reciente del embarazo en curso( el cual debe mantenerse en
congelación -30ºC).
4.3. CONTROL DE CALIDAD

1. Evaluar una muestra previa en paralelo con la actual.
2. Preparar las diluciones utilizando una pipeta separada para cada tubo. En caso
contrario, podrían registrarse títulos altos falsos.
3. Confirmar las reacciones negativas con GR recubiertos con IgG ( véase el paso 9).
4. 4. PROCEDIMIENTO
1. Colocar en la gradilla 12 tubos de 12 x 75 mm. (para cada titulación). Realizar
nueve diluciones en base dos a partir de ½ hasta 1/2048.
2. De izquierda a derecha colocar: Suero: 0.1 ml en el primer y segundo tubo. El
primer tubo corresponde a una dilución 1/1 o suero sin diluir; la dilución ½
significa un volumen de suero en un volumen final de dos o una solución al 50
% de suero en el diluyente.
3. S.S.*. 0.1 ml desde el segundo tubo hasta el tubo 12; mezclar bien el segundo
tubo (que corresponde a dilución ½) y pasar 0.1 ml de la mezcla al
tercero( cambiar la punta y mezclar), continuar así sucesivamente hasta el
último tubo ( cambiando siempre la punta después de dispensar la dilución
anterior al siguiente tubo y antes de hacer la mezcla de la dilución). Retirar 0.1
ml de la mezcla del tubo(en otro tubo) para posibles diluciones posteriores
Cada tubo debe contener 0.1 ml de diluciones dobles de suero, desde suero
concentrado hasta dilución 1/2048. Tomar 0.1 ml de la ultima dilución a un
tubo limpio marcado y reservarla.
4. Agregar 0.1 ml de GR de expresión homocigota para el antígeno
correspondiente al anticuerpo a titular en suspensión del 2 al 5 %. Agitar
suavemente.
5. Incubar 1 hora a 37 C.
45
6. Lavar cuatro veces con S.S.F. Decantar completamente el sobrenadante.
7. Agregar suero de Coombs de acuerdo a recomendaciones del fabricante.
8. Centrifugar a 3.400 r.p.m x 15 “.
9. Leer y registrar las reacciones. La lectura debe iniciarse por el tubo con el
suero más diluido y continuar con los más concentrados.
10. A los tubos negativos agregarles control de Coombs para evidenciar la
actividad del suero de Coombs.
Nota: Cuando los G.R recubiertos con IgG son negativos; se deben repetir las
pruebas.
* Se pueden realizar las diluciones en albúmina al 6 %
5. INTERPRETACIÖN
1) Observar la dilución más alta que produce aglutinación
macroscópica de 1+.
2) El título es la inversa de la dilución y se informa como, por
ejemplo, 32 y no 1 en 32 ni 1:32
3) Se considera que los títulos > o = a 16 son significativos y
podrían señalar la necesidad de monitorear la EHRN por cordocentesis,
ecografía o espectofotometría del líquido amniótico para identificar la presencia
de bilirrubina.
4) Cuando el título es < de 16 y la específicidad de los
anticuerpos se asocia con EHRN, es aconsejable repetir la titulación cada 2 a 4
semanas, a patir de la semana 18 de gestación; conservar una alícuota de
suero ( congelada a -20 ªC o menos ) para realizar estudios comparativos con
la próxima muestra.
5) Si se advierte aglutinación en el tubo con el suero más diluido, no se alcanzo el
punto final y se debe continuar con diluciones adicionales a partir del tubo
de dilución que se había reservado.
6) Se debe obtener el Score o puntaje a la afinidad de las reacciones.
Nota: Está prueba es semicuantitativa y muchos factores intervienen en sus resultados.
6. POS LABORATORIO
¿Cual es el valor clínico de los estudios de titulación de anticuerpos en mujeres
embarazadas?
¿Cuales son las variables que afectan los resultados en las pruebas de Titulación de
anticuerpos?
¿Cuales son los títulos que podrían considerarse con significado clínico y podrían señalar
la necesidad de monitorear la E.H.R.N?
PRACTICA No. 12
PRUEBAS CRUZADAS
1. OBJETIVO
Establecer la compatibilidad entre el donador y el receptor, mediante la utilización de
procedimientos que permitan detectar los anticuerpos presentes en el receptor, que
46
puedan lesionar GR del donador en el momento de ser transfundidos; y detectar los
anticuerpos que se encuentren en el donador y puedan ser perjudiciales al receptor.
2. PRE LABORATORIO
1. Explique en que consiste la prueba cruzada mayor
2. Explique en que consiste la prueba cruzada menor
3. Determine la importancia y la utilidad de estas pruebas
4. Precise las limitaciones de las pruebas para detectar todos los errores relacionados a
la clasificación sanguínea
5. Relacione los requerimientos de los diferentes anticuerpos con la ejecución de las
pruebas en diferentes condiciones de reacción
3. LABORATORIO

Tubo de 12 x 75 mm, gradilla, pipetas, solución salina, albúmina bovina al 30%, suero
de Coombs, sangre del donador con anticoagulante y coagulada, sangre del receptor
anticoagulante y coagulada.
3.2. PROCEDIMIENTO
Mayor Menor
Suero del receptor 2 gotas ____
Suero del donador ____ 2 gotas
GR del donador lavados y suspendidos de 2 al 5 1 gota ____
%
GR del receptor lavados y suspendidos del 2 al 5 ____ 1 gota
%
Mezclar. Centrifugar a 3.400 r.p.m x 15”*
Leer. Registrar. Si no observa aglutinación agregar:
Albúmina bovina al 22 % 0 30 % o LISS 1 gota 1 gota
Incubar 10 a 15’ en caso de usarse LISS y 15 a 30 ‘ si se usa albúmina.
Centrifugar 30’’ a 3.400 r.p.m y leer. Registrar.
Si no hay aglutinación lavar tres veces con S.S. al 0.85 %.
Suero de Coombs 2 gotas 2 gotas
Centrifugar, leer y registrar.
Si no observa aglutinación adicione una gota de células control de Coombs al tubo
muestra y valide la prueba.
 * Si se observa aglutinación en este paso se demuestra incompatibilidad ABO por
centrifugación inmediata o presencia de anticuerpos irregulares contra los antigenos
eritrocitarios.
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS
47
Después de determinar la lectura de las pruebas, determine los resultados que
indiquen compatibilidad y los que indiquen incompatibilidad
5. AUTO EVALUACION.
7. POST LABORATORIO
1. Aplique un método de
SELECCIÓN EFECTIVA de las PRUEBAS MINIMAS que deben efectuarse en el
laboratorio de Inmunohematología justificando la necesidad de efectuar dichas
pruebas. (Tenga en cuenta que pueden existir reacciones dependiendo del
componente que se transfunde)
2. Realice un cuadro que defina los criterios de transfusión teniendo en cuenta
los resultados obtenidos en la prueba cruzada entre donante y receptor y el rastreo
de anticuerpos de los receptores, en cada caso en particular.
3. Realice los algoritmos correspondientes a las pruebas de compatibilidad
obligatorias a realizar en caso de a. Emergencia.
b. Urgencia
c. Reserva de
sangre
8. INFORME
9. BIBLIOGRAFÍA
PROCEDIMIENTOS EN GEL CENTRIFUGACIÓN Dia-med
Los procedimientos en Gel Centrifugación de la casa comercial Dia-Med utilizan dos

diluyentes el Diluyente 1 que es Bromelina y el Diluyente 2 Liss.
Según el procedimiento a realizar se utilizan el diluyente 1 o el 2.
Clasificación ABO y D
Prueba directa
Se realiza una dilución como sigue:

 500 micolitros de Diluyente 2
 5 microlitros de GR
1. Se agregan 10 microlitros de la dilución anterior a cada columna según corresponda.
2. Centrifugar
3. Leer
48
4. Registrar
Prueba inversa
Se agregan 50 microlitros de las células A1 y B al pozo correspondiente.

50 microlitros del suero del paciente o donante.
Centrifugar
Leer
Registrar
Prueba Cruzada
Se realiza dilución de las células del donante:

 1000 micolitros de diluyente 2
 10 Microlitros de paquete globular
Dispensar en una columna de reacción
1. 50 microlitros de la dilución de los G.R del donante
2. 25 microlitros de suero del receptor
3. Incubar a 37 oC
4. Centrifugar
5. Leer
6. Registrar
D Confirmatorio
Realizar la siguiente dilución de la muestra a confirmar

1. 500 microlitros Diluyente 1 Bromelina
2. 25 micolitros paquete globular
3. Incubar 10 minutos a Temperatura ambiente.
4. 10 microlitros en la tarjeta correspondiente
5. Centrifugar 10 minutos
6. Leer
7. Registrar
Rastreo de anticuerpos

1. 50 microlitros de células pantalla.
2. 25 micro de suero
3. 25 microlitros de bromelina. Diluyente 1
4. Incubar 15 minutos a 37 oC
5. Centrifugar
6. Leer
7. Registrar
8. Analizar con el inserto correspondiente.
49
Identificación de anticuerpos
1. Dispensar 50 microlitros de las células pantalla en una columna de reacción.

2. Agregar 25 microlitros del suero del paciente o donante.
3. Incubar 15 minutos a 37oC
4. Centrifugar
5. Leer
6. Registrar
7. Analizar de acuerdo al inserto de las células del lote correspondiente.
50
MICROPLACAS
51
52
53
ANEXO N 1
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN SALINA 0.85 %
REACTIVOS
1. Cloruro de Sodio (NaCl)

2. Agua destilada
PREPARACIÓN
La Solución salina se prepara P/V en agua destilada de acuerdo a la concentración y

volumen requeridos.
Para preparar 1000 ml de solución salina al 0.85 %: se pesan 8.5 gr de cloruro de sodio
Y se disuelven en 1000 ml de agua destilada.
ANEXO # 2
PREPARACIÓN DE LOS GLÓBULOS ROJOS LAVADOS DEL 2 – 5 %
REACTIVOS
54
1. Solución salina 0.85 %.
2. Glóbulos rojos tomados con E.D.T.A
PREPARACIÓN
1. Dispensar 2 a 3 gotas de glóbulos rojos en un tubo de 12 x 75 mm.

2. Agregar solución salina hasta máximo tres cuartas parte del mismo.
3. Colocar los tubos en la serófuga y equilibrarlos con un tubo
correspondiente.
4. Tapar perfectamente la serófuga.
5. Centrifugar durante 45’’ o 1 ‘ a 3.200 r.p.m.
6. Esperar que se detenga completamente la serófuga.
7. Sacar los tubos.
8. Decantar completamente la solución salina.
9. Agitar suavemente los tubos para resuspender el contenido.
10. Agregar nuevamente salina como en el paso 2 y continuar de acuerdo
al número de lavados que se deseen.
11. Tomar 1 gota(50 ul) de hematíes lavados y concentrados + 1 c.c(1000
ul) de S.S al 0.85 %.La suspensión de G.R obtenida, será color rojo
salmón. %.
ANEXO # 3
PREPARACION DEL CONTROL DE COOMBS
El control de Coombs se obtiene tomando células del grupo "O" Rho D positivo y
añadiéndole antisuero anti-D con el fin de recubrirlas de Inmunoglobulina para que
puedan reaccionar a su vez con la Inmunoglobulina presente en el suero de
Coombs y de está manera servir de control de calidad de las pruebas de Coombs
con resultado negativo.
REACTIVOS
1. Anti- D
2. Solución salina 0.85 %
3. Glóbulos rojos O positivos lavados y concentrados.
PREPARACION
Las cantidades pueden doblarse de acuerdo a las necesidades del banco de

sangre. La siguiente fórmula produce aproximadamente 10 ml de control de
Coombs.
1. Colocar en un tubo de 12 x 75 mm o 13 x 75 mm 2 gotas de anti-D
55
2. 4 gotas de solución salina
3. 4 gotas de células de grupo "O" Rh D positivos.
4. Mezclar. Incubar por 30' a 37 ºC.
5. Lavar 4-5 veces en solución salina.
6. Hacer dilución al 5%
ANEXO # 4
PREPARACIÓN DE LA ALBÚMINA BOVINA AL 6 %
REACTIVOS
1. Albúmina bovina al 22 %
2. Solución salina 0.85 %
PREPARACIÓN
1. De acuerdo al volumen de albúmina al 6 % requerido, realizar los cálculos
correspondientes, empleando la siguiente fórmula V1x C1 = V2 x C2.
Para preparar 2 c.c de albúmina al 6 % a partir de albúmina al 30 %, tomar 0,4 c.c de

albúmina al 30 % y diluir con 1,6 c.c de solucióan salina al 0,85 %
BIBLIOGRAFÍA
 LINARES S.G, Principios de Inmunohematología y transfusión. Caracas 1986. 2ª.

Edición
 GENETET B., La Transfusión 1ª. Edición 1980. Editorial Toray S.A. Barcelona
 HUESTIS D.,Transfusión Sanguínea. 2ª. Edición 1987 . Salvat Barcelona
 LUQUE A., Manual de Bancos de Sangre 1980, Rodríguez. Quito de American,

Association of Blood Banks, Technical Manual, 1993; Edition II.
 CORTES A., Garcia M., Manual interno de enfermería, Cruz Roja Colombiana.
1989
 CORTES, ARMANDO: ABC de la Medicina Transfusional. Cruz Roja Colombiana.

1ª. Edición 1994, Cali Colombia
 Ministerio de Salud o República de Colombia; Manual de Normas Técnicas,

administrativas y de procedimientos para Bancos de Sangre, 1ª. Edición. Santafé
de Bogotá D.C., 1986.
 MOLLISON, P.L. transfusión de Sangre en Medicina Clínica.
56
 Ministerio de Salud. Decreto 1571 de 1993. Bogota, Colombia.
 Asociación Americana de Bancos de Sangre; Manual Técnico, 13° Edición. 1.996.
 MARTÍN C., Montoro J.A , Manual de Medicina Transfusional. Sociedad Española

de Transfusión Sanguínea. Mosby /Doyma Libros .2.000.
 RODRÍGUEZ MOYADO H, Quintanar E, Mejía M. Editorial Panamericana. 2004.
57

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Ofrecer diversas oportunidades de formación en educación superior a

Mediante el desarrollo de actividades docentes e investigativas con

Desde nuestra tradición de seriedad, calidad y eficiencia soñamos el

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VI. CONDICIONES A TENER EN CUENTA PARA LA

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INVESTIGACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO

Los glóbulos rojos utilizados en estos procedimientos poseen en la membrana los

La hemoaglutinación se considera la reacción de Ag-Ac de mayor utilidad en el

Para la revisión de los aspectos mencionados tenga en cuenta los siguientes

1-Analice las fases o etapas de la reacción de hemoaglutinación.

2-Efectúe la representación esquemática de la reacción de hemoaglutinación

3-Seleccione las características específicas de los aglutinógenos y las isoaglutininas

4-Para la tipificación sanguínea ABH, prueba globular se utilizan, reactivos que

6- Revise en el Manual de Normas Técnicas, Administrativas y de Procedimientos

8-Investigue la expresión genotípica y fenotípica, para cada uno de los principales

IDENTIFICACION DE AGLUTINOGENOS. PRUEBA GLOBULAR, DIRECTA O DE

5. Antisuero correspondiente 1 gota(50 1 gota(50 1 gota(50 1 gota(50

TABLA 1. GRADOS DE REACCIONES EN HEMAGLUTINACIÓN Y SCORE. (Marsh)

4 ++++ Un agregado sólido compacto. No se detectan

TABLA DE REGISTRO DE RESULTADOS

Prueba Directa en Lámina

Grupo: _____________ Fecha: ____________________ Firma: ________________

Lote de Reactivos. Anti-A:___________ Anti-B:____________ Anti-A,B:____________

Fecha de Expiración: ___________ ___________ ____________

Para esta prueba se debe disponer de hematíes A 1, A2, B y O, preferiblemente Rh o D

POSITIVA: Aglutinados de G.R en grado variable. Graduarla de acuerdo a la Tabla #1.

Tomado de Internet. Grupos sanguíneos Bahía blanca Argentina.

Existe cierta correlación entre las propiedades físico-químicas y la actividad

1. Condiciones de reacción de acuerdo a las propiedades físico-químicas de los

Nota: Si se va a titular un suero grupo O para anti A y anti-B, las diluciones

Dibujo Elaborado por Andrea vallejo. 2006

Realice mínimo tres revisiones bibliográficas.

Los extractos salinos de semillas reaccionan con carbohidratos específicos de las

3..1. MATERIALES Y REACTIVOS

Cèlulas A Cèlulas B Cèlulas O

Mezclar cada tubo y centrifugar en seròfuga por 15-30 segundos.

POSITIVO. Aglutinación y/o hemólisis

CONTROL DE CALIDAD DE LOS ANTISUEROS

CONTROL DE CALIDAD DE LOS ANTISUEROS ABO Y Rh

2. Reactividad y Especificidad: Descrito en el segundo punto del control de calidad de reactivos

POSITIVO: aglutinación y/o hemòlisis

Para los antisueros Rh:

Para Rh : Usar suspensión al 40 % en suero homòlogo en portalàmina a 40 ªC, la aglutinación

Cada nuevo lote

CONTROL DE CALIDAD DE LOS ANTISUEROS DEL SISTEMA ABO

REQUISITOS MUESTRAS DE FRECUENCIA CONTROL

Reactivo Cèlulas A Células B Células O

CONTROL DE CALIDAD EM LA DETECCIÒN DE ANTICUERPOS ERITROCITARIOS

Los antígenos Rhesus fueron identificados por anticuerpos descubiertos en el suero de

El antígeno D es el más importante en transfusión e incompatibilidad feto-materna, dada

Para la determinación del antígeno D se utilizan variedades de antisueros cada una de

4.1. MATERIALES Y REACTIVOS

Continuar con el siguiente procedimiento:

Grupo: _ Fecha: Firma: ____

Lote de Reactivos. Anti-A:_ Anti-B: Anti-A,B:__

Fecha de Expiración: _____ _ ________