Protocolo Lab 1 Winogradsky

Universidad Católica Boliviana “San Pablo” Regional Santa Cruz
Carrera de Ingeniería en Biotecnología Biotecnología Ambiental y Vegetal (BTC-142)

Protocolos de Prácticas de Laboratorio Sergio Daniel Moreira Ascarrunz Ph.D.
Columnas de Windogradsky:
Ecología Microbiana
Introducción
Las bacterias y las arqueas no solo son las formas de vida más antiguas, que se remontan al menos a
3.500 millones de años, sino que también son los organismos más diversos y numerosos de la Tierra.
Durante los primeros 2000 millones de años de la historia de la Tierra, fueron los únicos seres vivos del
planeta. Estos microorganismos exhiben una asombrosa diversidad en los mecanismos metabólicos, como
la fotoautotrofia oxigénica y anoxigénica, la quimioautotrofia y la fotoheterotrofia, por nombrar algunos.
También juegan un papel esencial en el ciclo de elementos que hacen que el planeta sea habitable para
todos los demás tipos de organismos. La diversidad de estas formas de vida simples es evidente en la
miríada de nichos ecológicos que habitan, desde respiraderos hidrotermales hasta el revestimiento ácido
del estómago humano.
En esta práctica, se observará una muestra de los diversos microorganismos que viven en el ambiente
local. Se instalarán columnas de Winogradsky, unos dispositivos simples para construir un ecosistema
estratificado, que ilustran diferentes tipos de metabolismo microbiano.
La práctica toma de 6 a 8 semanas en completarse. Tomará un par de horas obtener las muestras y
configurar el experimento, y luego se deberá registrar las observaciones durante unos minutos
aproximadamente una vez por semana.
Materiales
• 4 botellas de plástico transparentes de 500 ml con sus tapas. Botellas más grandes también pueden
servir pero se debe ajustar los volúmenes de sedimento en consecuencia.
• 1 a 4 recipientes desechables (por ejemplo, recipientes de plástico desechables o bolsas de
plástico) para mezclar los sedimentos
• 1 pala pequeña de jardinería para excavar una muestra de sedimento
• Marcador permanente
• Cinta masking para las etiquetas (1 etiqueta para cada botella)
• Agua de grifo
• 1 balde o recipiente lo suficientemente grande para contener de 6 a 10 tazas de sedimento
• Un lugar bien iluminado donde las columnas puedan permanecer sin alteraciones durante 6 a 8
semanas
• Cámara digital o cámara de teléfono celular
• Taza medidora grande u otro recipiente para medir sedimentos y mezclas
• Aproximadamente 1 taza de papel periódico picado como fuente de carbono
1
• 6 a 10 tazas de sedimento (lodo)
• 2 yemas crudas de huevos grandes como fuente de azufre
• Film o envoltura plástica para alimentos (opcional)
• 4 bandas de goma que se ajusten al tamaño de las botellas (opcional)
• Cuchara grande para mezclar (opcional)
• 1 embudo (opcional)
Procedimiento
Planificación de la práctica
Se van a configurar cuatro (4) columnas de Winogradsky: una columna de control, una columna que
contiene carbono añadido, una columna que contiene azufre añadido y una columna que contiene carbono
y azufre añadidos. Los estudiantes deben leer todo este protocolo previamente para estar al tanto de lo
que se espera. También deberán salir al campo para recolectar su muestra de sedimento (lodo). Una vez
que tengan el sedimento, utilizarán aproximadamente una hora para configurar las cuatro (4) columnas.
Además, deben destinar unos minutos una vez a la semana durante el período experimental de 6 a 8
semanas para hacer observaciones y tomar fotografías de sus columnas.
Las columnas pueden dejarse durante más de 8 semanas e inclusive se pueden analizar durante varios
meses y pueden revelar otros cambios cuanto más tiempo estén en observación.
Recolección de la muestra de sedimento
1. Identificar una fuente de sedimentos. Cualquier lugar con tierra y agua es apropiado, como un
arroyo, riachuelo, pantano, estanque o incluso un charco.
2. Recolectar la muestra utilizando un balde de plástico u otro recipiente (con tapa, si es posible),
una pala pequela de jardinería y una cámara (digital o de teléfono).
3. Tomar 2 o 3 fotografías del sitio de muestreo para ilustrar el lugar donde se recogió el sedimento.
4. Recojer aproximadamente 10 tazas (2.5 litros) de sedimento en el balde de plástico. La muestra
debe estar húmeda. Se debe evitar o eliminar rocas, palos y hojas. Incluir en la muestra algo de
agua adicional del sitio de muestreo.
Montaje de las columnas de Winogradsky
5. Si no se tiene un embudo, se puede hacer uno cortando los 8 cm superiores de una de las botellas
de plástico.
6. Escribir "control" en la cinta masking para tener la primera etiqueta. En las otras tres (3) etiquetas,
escribir "carbono", "azufre" y "carbono + azufre". Pegar las etiquetas a los lados de las cuatro
botellas de plástico de 500 ml, cerca del fondo.
7. Etiquetar cuatro recipientes desechables: “control”, “carbono”, “azufre” y “carbono + azufre”.
Agregar aproximadamente 1.5 tazas (375 ml) de la muestra de sedimento que se recolectó a cada
uno de los recipientes desechables (o bolsa de plástico).
2
8. Para la columna de control, ir directamente al paso 10.
9. Para las otras tres (3) columnas, seguir las instrucciones a continuación para cada columna:
a) Para la columna con “carbono”: Agregar ½ taza (125 ml) de periódico picado (sin compactar)
al sedimento (paso 7 arriba) y mezclar con una cuchara mezcladora. (El periódico contiene
celulosa, una fuente de carbono).
b) Para la columna con “azufre”: Agregar la yema cruda de un huevo al sedimento en el
recipiente etiquetado como “azufre” y mezclar con una cuchara mezcladora. (La yema de
huevo es una fuente de CaSO4 en la columna).
c) Para la columna con “carbono y azufre”: Agregar ambos nutrientes como se describe en los
pasos a y b.
10. Mezclar bien cada una de las muestras. Se debe eliminar cualquier residuo grande como hojas,
rocas o palos. Añadir lentamente agua (ya sea agua del sitio de muestro o agua de grifo) hasta que
la mezcla tenga una consistencia cremosa (no muy fluida ni muy solida).
11. Con una cuchara grande, agregar lentamente aproximadamente 1 taza (250 ml) de la mezcla a
cada columna de plástico (botella) debidamente etiquetada. Es posible utilizar un embudo o la
punta de una botella cortada invertida para agregar la mezcla de sedimentos. A medida que se
agrega la muestra, se debe golpear suavemente la columna en un mesón para liberar el aire
atrapado en la columna. El sedimento debe llenar de ½ a ¾ de la columna.
12. Agregar agua de la fuente de recolección de sedimentos (o agua del grifo) encima del sedimento
hasta que haya una capa de agua de 2 cm en la superficie. (Debe haber aire en la parte superior de
la columna).
13. Colocar la tapa en cada columna y girar la tapa ½ vuelta. ¡NO se debe apretar la tapa al máximo
para permitir el ingreso de aire! Si se utilizan botellas con la parte superior cortada, se debe
colocar film o envoltura de plástico sobre las columnas y fijarlas en su lugar con bandas de goma.
14. Colocar las cuatro columnas en un espacio bien iluminado (p. ej. cerca de una ventana).
15. Con una cámara o un teléfono, tomar una fotografía de las columnas para documentar la semana 0
del experimento.
16. Al final del período de observación, preparar montajes húmedos de las porciones púrpuras o
verdes de las columnas para su inspección bajo el microscopio. Registrar la apariencia
microscópica de las bacterias.
Registro de observaciones
Los siguientes elementos explican las partes de observación y recopilación de datos de esta práctica.
A. Observaciones semanales
Se deben observar las columnas de Winogradsky durante al menos 8 semanas. Se debe dedicar unos
minutos cada semana a registrar las observaciones visuales de las columnas. De ser posible se debe tratar
de hacer observaciones el mismo día cada semana. Por ejemplo, si se montan las columnas un martas, se
deberían revisar todos los martes.
En este protocolo se proporciona una tabla modelo para registrar las observaciones.
3
Las siguientes preguntas se deben tener en cuenta cuando se registren las observaciones:
• ¿Ha cambiado el color del sedimento? Si es así, anotar los colores.

• ¿Ha cambiado el color del agua? Si es así, anotar los colores.
• ¿Qué diferencias se observan entre las columnas? Anotar las diferencias por columna.
• ¿Parece que el sedimento se ha asentado? ¿O se ha desplazado?
• ¿Se ve que se forman capas en el sedimento? ¿En el agua?
• ¿Cómo cambia el espezor de las capas de una semana a otra?
• ¿Hay diferencias entre el lado que mira hacia la luz y el lado que está alejado de la luz?
B. Fotografías semanales
Con una cámara digital o un teléfono celular, se debe tomar fotografías semanales de las columnas
mostrando cada columna completa y de manera que su etiqueta sea visible. Al guardar las fotografías, se
recomienda que los nombres de los archivos incluyan el identificador del grupo de trabajo y la semana en
que se tomó la fotografía. La persona que tome la fotografía debe asegurarse de que las etiquetas de las
columnas sean claramente visibles en las fotografías.
Las columnas siempre deben estar orientadas en la misma dirección en relación con la fuente de luz. El
ángulo para las fotografías deberá ser paralelo a la horizontal y el fondo para las fotografías deberá ser lo
más blanco posible. Si se debe mover las columnas para tomar las fotografías, se deben volver a colocar
las columnas en la misma orientación con respecto a la luz.
C. Dibujos esquemáticos de las columnas
Realizar dibujos esquemáticos de las columnas, en color, 3 veces durante el transcurso del experimento de
8 semanas (aproximadamente una vez cada 3 semanas). Los dibujos fomentarán una observación más
profunda de las columnas.
Preguntas
El informe final de la práctica deberá considerar las siguientes preguntas. Algunas de las preguntas
pueden requerir una investigación bibliográfica adicional. Estas referencias bibliográficas se deberán citar
y listar de acuerdo a las normas académicas APA.
1. ¿En qué se diferencian las columnas? ¿En qué se parecen? Explicar las diferencias observadas.
2. ¿Se observaron cambios en la columna de control? Si es así, explicar por qué ocurrieron.
3. Las columnas de Winogradsky forman gradientes de concentración de oxígeno. Indicar la
distribución de oxígeno relativa a lo largo de la columna. (Considerar toda la columna: el
sedimento, el agua y el aire).
4
4. Las columnas de Winogradsky también forman gradientes de concentración de azufre. En las
columnas que contienen yema de huevo, indicar cómo se distribuiría el azufre en toda la columna.
(Considerar toda la columna: el sedimento, el agua y el aire).
5. La reducción de azufre es una forma de respiración anaeróbica. Las bacterias del género
Desulfovibrio son un ejemplo de bacterias que reducen el sulfato (SO42-) como forma de
respiración en ausencia de oxígeno y liberan sulfuro (S2-). ¿En qué lugar de las columnas se
esperaría encontrar a estas bacterías?
6. Las bacterias púrpura del azufre y las bacterias verdes del azufre son dos tipos de bacterias que
utilizan sulfuro para ayudar a su fotosíntesis. En general, las bacterias verdes del azufre toleran
niveles más altos de azufre que las bacterias púrpuras del azufre. Indicar dónde se encontrarían las
bacterias verdes y púrpuras del azufre en relación las unas con las otras. Indicar en qué parte de la
columna estarían las bacterias púrpuras del azufre en relación con las bacterias Desulfovibrio.
7. Si se extrajeran muestras de las distintas capas de todas las columnas, ¿dónde se encontrarían
organismos fotosintéticos como cianobacterias y algas? Explicar por qué.
8. Explicar cómo las columnas de Winogradsky ilustran la diversidad de microorganismos que se
encuentran hoy en la Tierra en términos de la diversidad de nichos que ocupan.
9. Explicar lo que ilustran las columnas de Winogradsky sobre la historia evolutiva de la vida en la
Tierra primitiva.
10. Diseñar un experimento que podría determinar el efecto del calor producido por la fuente de
iluminación sobre el crecimiento de las bacterias en las columnas de Winogradsky.
5
Observaciones Columna
Columna Control Columna Carbono Columna Azufre
semanales Carbono+Azufre
Semana 0
Fecha:__________
Semana 1
Fecha:__________
Semana 2
Fecha:__________
Semana 3
Fecha:__________
Semana 4
Fecha:__________
Semana 5
Fecha:__________
Semana 6
Fecha:__________
Semana 7
Fecha:__________
Semana 8
Fecha:__________

Protocolo Lab 1 Winogradsky

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Protocolo Lab 1 Winogradsky

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Universidad Católica Boliviana “San Pablo” Regional Santa Cruz

Carrera de Ingeniería en Biotecnología Biotecnología Ambiental y Vegetal (BTC-142)

Recolección de la muestra de sedimento

Montaje de las columnas de Winogradsky

• ¿Ha cambiado el color del sedimento? Si es así, anotar los colores.

C. Dibujos esquemáticos de las columnas

También podría gustarte